CN108027375A - 利用双试剂的生物样品发光测量 - Google Patents

Abstract

在利用两种不同的发光试剂测量生物样品的发光的方法中，晃动样品以改善与第二发光试剂的混合，允许注入第二试剂和测量所得发光活性之间的延迟时间缩短。改善的混合也可以缩短测量时间，从而在测定大量样品时提高了产量。

Description

利用双试剂的生物样品发光测量

相关申请

本申请要求于2015年7月24日提交的美国专利申请No.14/808,593的优先权，该美国专利申请的内容通过引用方式整体并入本文。

技术领域

本发明一般涉及用于测量生物样品的发光的方法，特别是使用如萤火虫萤光素酶底物和海肾荧光素酶底物等两种不同的发光试剂，并且涉及用于实施这种方法的部件、设备和系统。

背景技术

用于分析许多类型的样品的有用模式是样品的发光(光发射)的测量。例如，在生物样品的情况下，发光在生物化学反应、细胞生理学、基因表达等的研究中是有用的。样品中的发光可以因称为萤光素酶的报告酶(reporter enzyme)类型的活性而产生，其随着根据特定应用的需要注射另一种试剂、辅酶和/或催化剂而产生。发光测量可能涉及使用单一类型的萤光素酶。然而，经常期望需要使用两种不同类型的萤光素酶(例如萤火虫萤光素酶和海肾荧光素酶)的所谓的双报告测定法，这是由于该测定法能够使实验变异性最小化从而提高所获得的数据的可靠性。在猝灭剂抑制或消除与第一类荧光素酶反应所产生的信号的同时，第二类萤光素酶产生随后的信号。

在双报告测定方案的一个实例中，第一类荧光素酶存在于注射前样品中，然后将产生第一信号的试剂加入到样品中。在通常为几秒钟(例如2秒)的延迟时间段之后，在一段时间段(例如十秒)上测量所得到的发光活性。然后将从第二类萤光素酶产生第二信号的试剂与猝灭剂一起分配到样品中。在同样通常为几秒钟的第二延迟时间段之后，在一段时间段(例如十秒)上测量所得的发光活性。可以使用单管光度计或微孔板(多孔光学读取板)光度计来执行该双报告测定方案。

双报告测定的一个重要方面是猝灭剂与样品的混合。在混合过程(在试剂注射之后且在测量第二萤光素酶的活性之前)所分配的时间段上，混合需要足够有效，以提供由第一萤光素酶产生的信号的有效猝灭，从而允许从第一信号中分离出第二信号，从而获得高质量的数据。例如，在测量第二信号之前，该过程可以要求第一信号被抑制4log(对数)(超过10,000倍)。当使用常规的相对高的试剂注入速度操作单管或微孔板光度计时，上述的约2秒的延迟(混合)时间段常常足以有效地混合。高的注射速度，例如几百微升每秒(μL/sec)量级的流量，经常赋予样品管或井穴足够的浊度，以在短时间段内产生有效的混合。然而，对于许多微孔板应用来说，由于例如确保高分配精度，例如低至1-μL的增量，期望的是较低的注射速度。由于较低的注射速度所导致的较低的浊度，短的延迟时间段可能不能提供足够的时间进行有效的混合，因此可能无法提供足够的时间来进行适当的猝灭。因此，需要提供一种在某些应用中增强或加速混合的方法，例如那些利用低注射速度和/或受限于短混合时间段的应用。

此外，当使用微孔板对大量样品进行测定时，在长积分时间(例如10秒)内对每个样品进行发光测量可能需要大量的总读板时间。加速混合可以减少在每个样品上进行发光测量所需的时间量。因此，需要提供一种在期望更高产量的应用中增强或加速混合的方法。

发明内容

为了全部或部分地解决上述问题和/或本领域技术人员可能已经观察到的其他问题，本公开提供了如在下面阐述的实施方式中通过示例的方式所描述的方法、过程、系统、设备、仪器和/或装置。

根据一个实施例，一种用于测量生物样品的发光的方法包括：将生物样品分配到井穴中；将第一试剂分配到井穴中，其中样品与第一试剂反应以发射第一发光；在第一延迟时间段之后，在第一测量时间段上在发光检测器处测量第一发光；将第二试剂分配到井穴中，其中样品与第二试剂反应以发射第二发光；在第二延迟时间段之后，在第二测量时间段上在发光检测器处测量第二发光；以及晃动井穴以增强第二试剂与样品的混合，其中在选自由以下时间构成的组的时间开始晃动：在分配第二试剂时；在第二延迟时间段期间；以及在测量第二发光时。

在一些实施例中，第一试剂和第二试剂以500μL/sec或更低、或50-500μL/sec的范围、或100μL/sec或更低、或50-500μL/sec的范围或者大约100μL/sec的流量进行分配。

根据另一个实施例，一种样品分析设备包括：样品载体，其被配置用于晃动生物样品；液体分配系统，其被配置用于分配选定的试剂以与所述生物样品接触；发光检测器，其被配置用于测量从样品发射的发光；以及计算装置，其被配置用于控制样品载体、液体分配系统和液体分配系统以执行本文公开的任一方法。

本发明的其它装置、设备、系统、方法、特征和优点对于本领域技术人员来说在研究以下附图和详细描述后将会或将变得显而易见。所有这些附加的系统、方法、特征和优点旨在被包括在本说明书内，在本发明的范围内，并由所附权利要求书保护。

附图说明

参考以下附图可以更好地理解本发明。附图中的部件不一定按比例绘制，而是将重点放在说明本发明的原理上。在附图中，贯穿不同的视图，相似的附图标记表示相应的部分。

图1是根据一些实施例的样品分析设备的实例的示意图。

图2是根据一些实施例的样品分析系统或设备的实例的示意图。

图3是根据一些实施例的注射器或注射器/读取器组件的实例的透视图。

图4是根据一些实施例的绘制出在五个实验期间获得的发光信号的曲线图，其中将LAR II试剂添加到样品中，随后将STOP&试剂添加到样品中，并晃动样品。

具体实施方式

图1是根据一些实施例的样品分析设备或系统100的实例的示意图。样品分析设备100被配置用于对例如化学化合物、生物化合物、生物细胞或它们的组分等样品进行光学测量。在本文公开的具体实施例中，光学测量基于发光。如本文所用，术语“发光”可以包括化学发光或生物发光。

在一些实施例中，样品分析设备100配置为专用光度计。然而，在其他实施例中，样品分析设备100也可以配置为基于例如荧光、吸光度、光谱、例如细胞成像等显微镜成像来执行光学测量。例如，样品分析设备100配置为使得用户能够选择要执行的期望类型的光学测量。用户能够重新配置样品分析设备100的光学器件以执行期望类型的发光、荧光或吸光度测量。因此，在一些实施例中，样品分析设备100可以是多模式读取器。如本领域技术人员所理解的，通过使得用户能够从大量可用的不同盒中选择应用特定盒，并且将所选择的盒加载到多模式读取器中以便建立针对所需应用的光学和电气电路来重新配置多模式读取器。将所选择的盒与仪器联接，由此仪器被适当地配置用于执行所选择的实验。盒可以容纳针对特定类型应用或为特定类型应用优化的光学器件。容纳在盒内的内部光学器件可以通过盒的壳体的光学端口与容纳在仪器内的外部光学器件进行通信。取决于与这种盒相关联的光学测量的类型，一些盒可以附加地包括内部光源和/或光检测器。基于盒的多模式读取器的实例在以下文献中进行了描述：美国专利No.8,968,658；8,496,879；8,119,066；和6,891,618；以及美国专利申请No.2014/0191138；2013/0119277；2011/0278472；2005/0105080；和2005/0012929，它们的全部内容通过引用方式整体并入本文。

通常，基于光学的样品分析仪器中提供的各种部件的结构和操作是本领域技术人员了解的，因此在本文中仅简要描述以便于理解本公开的主题。在所示的实施例中，样品分析设备100包括配置用于支持(或保持)一个或多个待分析样品的样品支撑件104以及配置用于接收并测量从样品发射的发射光112的光检测器108。处于对样品进行光学测量的操作位置的样品支撑件104、以及图1中所示的光检测器108和其他部件可以封装在样品分析设备100的设备壳体106中。设备壳体106可以包括用于加载样品支撑件104和盒(如果提供的话)并用于访问样品分析设备100的内部区域和部件等的一个或多个面板、门、抽屉等。

通常，样品支撑件104可以是被配置用于在分析期间保持一个或多个样品的一个或多个容器。在本文公开的主题的典型实施例中，样品支撑件104是含有井穴的二维阵列的多孔板(也称为微量滴定板、微孔板或光学板)。多孔板可以具有诸如96井穴或384井穴规格的标准规格，具有诸如100微升(μL)的标准井穴尺寸。在其它非限制性的实例中，样品支撑件104可以是一个或多个管、小瓶(vial)、比色皿等，并且可以包括支撑框架或机架，其中这种容器可移除地定位在该支撑框架或机架中。如本文所使用的，术语“井穴”通常是指保持要进行光学测量的单个样品的任何容器。因此，可以提供多个井穴以收容可以进行相应的光学测量的不同的单个样品。取决于所进行的分析，样品可以相同或不同和/或可以在相同或不同的条件下测量。例如，可以将不同的试剂或不同量的试剂添加到不同的样品中。

样品支撑件104可以设置在被配置为沿着一条或多条轴线移动样品支撑件104的样品载体(或样品支撑载体)110上。例如，样品载体110可以是手动致动的或自动的(例如机动的)载物台或平台。如图1中的箭头所示，样品载体110可以移入和移出设备壳体106。可以在样品载体110处于外部位置，例如，样品载体110至少部分地位于设备壳体106的外部时，将样品或容纳一个或多个样品的样品支撑件104安装到样品载体110上。样品载体110因此也可以被认为是样品支撑件。样品载体110然后可以被移动到样品载体110完全位于设备壳体106内的内部位置，以便将样品与样品分析设备100的光学部件和/或液体处理部件对准(或顺序地对准多个样品)。在进一步的实施例中，样品载体110被配置为晃动或摇动样品支撑件104，从而晃动或摇动容纳在样品支撑件104的井穴中的样品。在一些实施例中，晃动模式是回转式摇动，从而使旋转运动被施于样品。

对于发光检测，光检测器108通常是光电倍增管(PMT)。在其他实施例中，根据需要，光检测器108可以具有不同类型，例如光电二极管、电荷耦合器件(CCD)、诸如互补金属氧化物半导体(CMOS)器件的有源像素传感器(APS)等，以优化待检测发射波长的灵敏度。光检测器108的光学输入端通常包括透镜。输出端可以包括电连接器(例如，触点、端子、引脚、导线支撑件等)以提供电力，并且使得光检测器108所产生的测量信号能够输出到与样品分析设备100一起提供或在样品分析设备100外部提供的信号处理电路(例如，数据采集电路)。

在典型的实施例中，样品分析设备100还包括发射光学器件116，发射光学器件116被配置用于将来自样品的发射光112发射到光检测器108。发射光学器件116还可以被配置用于处理发射光112。处理的实例包括，但不限于收集、聚焦、准直、滤波、波束控制、分束和光路切换。因此，取决于实施例，发射光学器件116可以包括一个或多个透镜、读取头、光圈、滤波器、光导、反射镜、分束器、单色器、衍射光栅、棱镜、光路开关等。发射光学器件116可被配置为从样品上方(例如，顶部读取头)和/或样品下方(例如底部读取头)接收发射光112。

在典型的实施方案中，样品分析设备100进一步包括液体分配系统120(例如，注射器针(一个或多个)、管子、泵(一个或多个)等)，液体分配系统120配置用于在样品已经被可操作地定位在样品分析设备100中之前或之后，将液体添加到样品中(例如，添加到样品支撑件104的选定井穴中)。例如，如本领域技术人员所理解的，试剂可以被添加到样品中以诱导发光。试剂可以是例如闪光发光试剂(例如水母发光蛋白或其它发光蛋白)或辉光发光试剂(例如萤光素酶、萤光素)。在一些实施方案中，可以添加两种或更多种不同类型的试剂。例如，可首先添加萤火虫萤光素酶(北美萤火虫(Photinis pyralis))底物，随后添加海肾荧光素酶(海肾(Renilla reniformis)，也称为海堇)底物。在一些实施方案中，第二试剂可以包括猝灭由先前添加的第一试剂产生的信号的猝灭剂。作为另一个实例，可以加入标记试剂用于荧光测量或其他类型的测量。

对于样品分析设备100也能够通过诸如荧光测量等光子照射来执行需要激发样品的分析的实施例，样品分析设备100包括一个或多个光源124，一个或多个光源124用于产生被导向样品的期望波长的激发光128。取决于实施例，光源124可以包括宽带光源(例如，闪光灯)或一个或多个发光二极管(LED)、激光二极管(LD)等。可以提供多个光源124以使得用户能够选择所需的激发波长。在典型的实施例中，样品分析设备100还包括激发光学器件132，激发光学器件132被配置用于将来自光源124的激发光128传输到样品。如上所述，激发光学器件132可以包括例如一个或多个透镜、读取头、光圈、滤波器、光导、反射镜、分束器、单色器、衍射光栅、棱镜、光路开关等。

也如图1中示意性所示，样品分析设备100还可以包括计算装置(或系统控制器)136。如本领域技术人员所理解的，计算装置136可以表示一个或多个模块，模块被配置用于对样品分析设备100的各种功能方面进行控制、监测和/或计时。因此，计算装置136可以被配置为从样品分析设备100接收数据或其它信号(诸如来自光检测器108的测量信号)和/或将控制信号发送到光检测器108、样品载体110和液体分配系统120。特别地，计算装置136可以控制样品载体110的致动或移动，以用于例如移动样品支撑件104(调整其位置)和晃动样品支撑件104，并且还可以控制液体分配系统120的操作，以用于例如选择待分配(注入)到井穴或其他样品容器中的试剂，控制将试剂分配(注入)到井穴和分配的体积中的定时，控制流量(注射速度)等。为了所有这些目的，计算装置136可经由有线或无线通信链路与样品分析设备100的各种部件进行通信，如计算装置136与光检测器108之间的虚线所描绘。为简单起见，未示出可存在于样品分析设备100的计算装置136和其他部件之间的其他通信链路。在典型实施例中，计算装置136包括提供总体控制的主电子处理器，并且可以包括被配置用于专用控制操作或特定信号处理任务的一个或多个电子处理器。计算装置136还可以包括用于存储数据和/或软件的一个或多个存储器和/或数据库。计算装置136还可以包括计算机可读介质136，计算机可读介质136包括用于执行本文公开的任何方法的指令。计算装置136的功能模块可以包括电路或其他类型的硬件(或固件)、软件或两者。例如，模块可以包括用于从光检测器108接收测量信号的信号处理(或数据采集)电路和用于处理测量信号(例如用于生成图形数据)的软件。计算装置136还可以表示一种或多种类型的用户接口装置，诸如用户输入装置(例如，键盘、触摸屏、鼠标等)、用户输出装置(例如显示屏、打印机、视觉指示器或警报、听觉指示器或警报等)、由软件控制的图形用户界面(GUI)以及用于加载电子处理器可读的介质(例如体现在软件中的逻辑指令、数据等)的装置。计算装置136可以包括用于控制和管理计算装置136的各种功能的操作系统(例如，Microsoft软件)。

现在将描述用于分析样品的一般方法的示例。将样品引入到样品分析设备100中并且相对于样品分析设备100的光学器件、射流装置和其他部件适当地放置在合适的操作位置。通常，样品的“操作”位置是“光学对准”位置，即建立足以从样品获取光学数据的光路的位置。取决于实验，操作位置还可以对应于与样品分析设备100“流体地对准”的样品，即，定位成能够例如通过操作液体分配系统120将流体分配到样品上。样品的引入可能需要将一个或多个样品加载或分配到微孔板的一个或多个井穴或其他类型的样品支撑件104中，并且将样品支撑件104装载或安装在样品分析设备100中，例如借助如上所述的样品载体110。取决于样品和要进行的测量类型，样品可以在被定位在样品分析设备100中之前经过制备或处理(温育、混合、均化、离心、缓冲、试剂添加等)，如本领域技术人员所了解的那样。

除了样品引入之外，取决于设计，样品分析设备100或其某些部件(光学器件、电子器件等)可能还需要被配置为用于实施要进行的特定类型的测量。例如，如果基于盒，则可以将合适的盒安装在样品分析设备100中。在安装盒之后，设置在盒中的光学器件成为样品分析设备100的壳体106内的光路的一部分。例如，盒光学器件可以与发射光学器件116和光检测器108对准(光学地连通)，并且在一些实施例中也可以与激发光学器件132和光源124对准。安装盒导致建立用于向盒传输电力、数据和控制信号和/或从盒传输电力、数据和控制信号的电路径。

然后根据需要处理样品以诱导从样品发射光子，取决于实验(例如发光)，可以使用液体分配系统120进行试剂添加和/或使用光源124和关联的激发光学器件132进行照射/激发(例如，荧光、吸光度等)。发射光学器件116收集来自样品的发射光112并将发射光112引导至光检测器108。光检测器108将这些光信号转换成电信号(检测信号或“测量”信号)，并将电信号传输到信号处理电路，信号处理电路例如可以如上所述由样品分析设备100的计算装置136提供。在多个样品的情况下，可以移动样品支撑件104(例如通过使用如上所述的样品载体110)以顺序地将每个附加样品与用于实验的光学器件对准，由此从所有样品顺序地进行测量。

图2是根据一些实施例的样品分析系统或设备200的另一实例的示意图。一般而言，样品分析设备200的任何或所有部件的结构和操作可以与结合本文公开的其他实施例进行描述的那些一致。在图2中具体示出的实施例中，样品分析设备200是多模式读取器。

样品分析设备200通常可以包括设备壳体，设备壳体封装有样品分析设备200的各种部件。图2示出了设备壳体的前壁206(或其一部分)和底壁208(或其一部分)。样品分析设备200通常还可以包括可移动的盒支撑件212和可移动的样品载体214，盒支撑件212构造成用于支撑一个或多个盒，样品载体214用于支撑正在研究的一个或多个样品216或用于支撑保持或容纳这种样品216的样品支撑件218。如上所述，样品支撑件218通常是提供容纳单独样品216的多个井穴220的光学板。盒支撑件212可以在盒支撑件212完全定位在设备壳体中的内部盒支撑位置(如图所示)与盒支撑件212至少部分地定位在设备壳体外的外部盒支撑位置之间移动，以便于在盒支撑件212上装载一个或多个盒。类似地，样品载体214可以在样品载体214完全位于设备壳体内的内部样品载体位置(如图所示)和样品载体214至少部分地位于设备壳体外的外部样品载体位置之间移动，以便于在样品载体214上装载一个或多个样品216(或保持一个或多个样品216的样品支撑件218)。如上所述，样品载体214还可以被配置用于通过机械地晃动样品支撑件218来晃动样品216。样品分析设备200通常还可以包括一个或多个光学检测器224，光学检测器224被配置用于收集来自可操作地装载在盒支撑件212上的一个或多个不同类型的盒的光学检测信号。

图2还图示了根据一些实施例的发光盒228的实例。像可以与样品分析设备200一起提供的其他盒一样，发光盒228的尺寸和构造被设计成可移除地装载(即安装或安置)在盒支撑件212上，并且可以根据需要替换或更换成其他相同或不同类型的盒。盒支撑件212可以被配置为同时支撑多个盒，并且可以相对于样品分析设备200的内部部件移动，从而使选定的盒能够可操作地定位以用于选定类型的样品分析。发光盒228包括盒壳体232和注射器组件236，注射器组件236至少部分地设置在盒壳体232中并且可以通过盒壳体232的开口238移动。在典型的实施例中，注射器组件236可以以往复方式线性移动，即，注射器组件236可以交替地伸出和缩回。因此，注射器组件236可以交替地朝向和远离盒壳体232移动，并且因此交替地朝向和远离样品载体214以及与注射器组件236可操作地对准的任何样品216移动。取决于盒支撑件212的设计和位置，盒支撑件212还可以包括开口以适应注射器组件236的移动。

为了致动和控制注射器组件236的移动，发光盒228包括联接到注射器组件236的驱动器242(或驱动机构或驱动组件)。驱动器242可以以任何适合的方式安装在盒壳体232处，并且在典型的实施例中被容纳在盒壳体232的内部。如本领域技术人员所理解的，驱动器242可以具有适于将注射器组件236相对于盒壳体232(并且因此相对于样品载体214和支撑在样品载体214上的任何选定样品216)移动(即缩回和伸出)到任何选定位置的任何构造。在典型的实施例中，驱动器242包括联接到联动装置或传动装置的马达(例如，微型马达)，该联动装置或传动装置又联接到注射器组件236。驱动器242可以包括轴承或便于可靠和准确地致动注射器组件236的其它适合的部件。联动装置或传动装置可以具有适于将马达的旋转运动转换成注射器组件236的线性运动的任何构造。例如，联动装置或传动装置可以包括一组齿轮，例如齿条和小齿轮、一套伞齿轮、蜗杆蜗轮等。

为了便于将发光盒228装载到盒支撑件212上以及随后从盒支撑件212上移除，并且为了防止在装载和移除期间对注射器组件236造成损坏，注射器组件236可以借助驱动器242完全缩回到盒壳体232内使得注射器组件236的任何部分都不延伸到盒壳体232的外部。在盒支撑件212正在将注射器组件236(以及装载在盒支撑件212上的任何其他盒)移动到设备壳体内的不同位置时，注射器组件236也可以移动到完全缩回位置。然而，当从多个样品获取发光数据时，通常不移动注射器组件236。也就是说，如其他地方所提到的，可以在样品支撑件218的各个位置处提供多个样品，诸如在支撑在样品载体214上的多孔板的不同的井穴220中。可以将注射器组件236移动到距第一样品216的期望距离处，在所示的“顶部读取”实例中是在第一样品216上方的期望高度。对于容纳在样品支撑件218上的所有样品，该期望距离通常是相同的。因此，当样品载体214移动样品支撑件218以使得将样品依次逐个与注射器组件236对准以获取连续的发光读数时，通常不需要调整注射器组件236的位置。

在一些实施例中，样品分析设备200还可以包括底部读取头215，该底部读取头215可以适当地联接到光学器件并且如在本公开内容中其它地方一般地描述的那样操作。底部读取头215可以与注射器组件236光学对准。该配置使得能够进行同时顶部和底部的荧光读取的注射。

图3是根据一些实施例的注射器组件236的实例的透视图。注射器组件236包括通常在壳体246的近端348和远端350之间延伸的注射器壳体246。在典型的实施例中，注射器壳体246是具有圆形横截面的圆筒形，但是在其他实施例中可以具有多边形横截面。注射器组件236包括大体彼此平行地穿过注射器壳体246延伸的一个或多个注射器针356和358(在图示的实施例中为两个)。在一些实施例中，注射器组件236还包括光导354，光导354与注射器针356和358大体平行地延伸穿过注射器壳体246。在这样的实施例中，注射器组件236用作顶部读取器和液体分配器并且因此也可以被称为注射器/读取器组件。光导354以及注射器针356和358可以一直向下延伸到远端350或者可以在距远端350的一小段距离处终止。光导354被配置用于将从样品216(图2)发射的发光传输到发光检测器，例如图2所示的光学检测器224。为此目的，光导354可以是光纤、光管等。注射器针356和358被配置为可以将流体(例如如本领域技术人员所理解的可用于辉光发光或闪光发光的试剂)分配到样品216上(例如，分配到样品载体218的选定井穴220中)。光导354以及注射器针356和358集成为单个注射器组件236特别有利于闪光发光。而且，提供两个或更多个注射器针356和358便于使用不同类型的试剂。例如，第一注射器针356可分配第一试剂，而第二注射器针358可分配第二试剂，如本文所述的萤火虫萤光素酶底物，接着是海肾荧光素酶底物。因此，注射器组件236的远端350可以用作注射器组件236的光学输入和流体输出这二者。

返回参照图2，由虚线箭头262示出从样品216引导到注射器组件236中的发光(luminescent light)，并且从第一注射器针356和第二注射器针358(图3)引出的来自注射器组件236的流体流分别由实线箭头264和266表示。还如图2所示，盒壳体232可以包括与发光检测器224对准的光学端口268，以使得发光能够被传输到发光检测器224。从注射器组件236引向发光检测器224的虚线可代表光导354(图3)，光导354从注射器组件236的近端延伸出并延伸到光学端口268或穿过光学端口268延伸。可替代地，光导354可终止于盒壳体232中的某点处，在这种情况下注射器组件236与发光检测器224之间的虚线可以至少部分地表示被配置用于将发光引导至发光检测器224的一个或多个其他类型的光学部件(光纤、反射镜等)。作为利用外部发光检测器224的替代方案，发光盒228可以包括位于盒壳体232中的内部检测器(未示出)，该内部检测器与发光盒228外部的样品分析设备200的电子器件进行通信。

如图2进一步所示，发光盒228包括一个或多个液体储器(例如瓶子)，例如试剂储器272和274。试剂储器272和274可以设置在储器支撑件276上，储器支撑件276可以交替地移入和移出盒壳体232，以便帮助进行诸如重新填充试剂储器272和274、冲洗或灌注液体分配系统等等操作。试剂储器272和274可以经由泵278(例如泵组件或泵系统)与注射器组件236流体连通。泵278可以表示一个或多个泵(或泵单元)。例如，第一试剂储器272可以经由第一流体管线282(例如管)和第一泵与第一注射器针356(图3)连通以供应第一试剂，并且第二试剂储器274可以经由第二流体管线284和第二泵与第二注射器针358(图3)连通以供应第二试剂。流体管线282和284以及光导354应具有足以适应注射器组件236的交替延伸和缩回的长度和柔性。

参考图3，在一些实施例中，注射器组件236不包括光导354。在这样的实施例中，从样品216发射的发光可以例如被传输到位于样品216下方(即，在图2所示的样品载体214和样品支撑件218下方)的底部读取头215并且经由适当的光学器件(例如，诸如光纤等光导)发送到发光检测器224。可替代地，发光可以直接传输到位于样品216下方的发光检测器(未示出)，而不利用底部读取头215或其他传输光学器件。

发光盒228还可以包括被配置为与发光盒228的各种部件通信和/或控制发光盒228的各种部件的电子器件(电路)288。电子器件288可以包括安装在一个或多个支撑基板(例如印刷电路板(PCB))上的一个或多个电路和其它电气硬件。除了包括电子器件288之外或者作为电子器件288的一部分，发光盒228可以包括电连接器，该电连接器被配置为可拆卸地联接到样品分析设备200(例如，样品分析设备200的互补电连接器)以接收来自样品分析设备200的电力以及向样品分析设备200传输信号或从样品分析设备200传输信号。电联接可以通过插头和插座、阳性和阴性连接器等来实现，由此发光盒228的某些部件被适当地设置为与样品分析设备200的电源或系统控制器(例如，上述和图1中所示的计算装置136)进行信号通信。在一些实施例中，电子器件288(如果提供的话)可以被配置为直接控制样品分析设备200的一个或多个部件的操作，或者与上述实现这种控制的计算装置136(图1)协调，而不是由上述计算装置136(图1)单独控制这种操作。为了方便起见，除非另有规定或上下文另外表明，否则术语“计算装置”包含图1所示的计算装置136和图2所示的电子器件288。

现在将参考图2和图3描述用于使用样品分析设备200分析样品216的一般方法的实例。把发光盒228装载(或安装)在盒支撑件212上以将发光盒228设置在样品分析设备200的设备壳体中。装载可以包括打开例如可以位于设备壳体的前壁206处的面板或门，以访问盒支撑件212。盒支撑件212可以首先移动到至少部分地位于设备壳体外部的位置，并且在将发光盒228装载在盒支撑件212上之后，装载有发光盒228的盒支撑件212可以随后移回设备壳体中。装载也可能需要经由如上所述的电连接器将发光盒228与样品分析设备200联接以建立用于传输电力、数据和控制信号的路径。在装载发光盒228之前或之后，通常通过首先将样品216装载在样品支撑件218上并随后将样品支撑件218装载在样品载体214上而将样品216装载在样品载体214上。可以将多个样品216一起装载在适当的样品支撑件218(例如多孔板)上。最终，盒支撑件212和样品支撑件218将相对于彼此定位，使得样品216将与注射器组件236对准。在本文中，“对准”是指光学对准，即定位成建立足以从样品216采集发光数据的光路。术语“对准”还可以意指流体地对准，即，定位成能够将流体分配到样品216上。

然后将注射器组件236移向目标样品216(待质询的样品)，直到注射器组件236的光学输入端达到距样品216的期望距离(读取位置)处。注射器组件236可以移动得非常靠近样品216，从而使来自样品216的光收集最大化并且使来自相邻样品的杂散光收集最小化。在读取位置处，操作泵278以建立从试剂储器272或274之一到相应的注射器针356或358(图3)的选定试剂的流动，由此选定的试剂通过注射器针356或358注入样品216以引起样品216中的发光。注射器组件236的光导354(图3)接收(收集)从样品216发射的所得到的发光262，并将发光262传输到发光检测器224(或者可替代地，传输到设置在盒壳体232中的内部检测器，未示出)。发光检测器224将这些光信号转换成电信号(检测信号或测量信号)并且将电信号传输到信号处理电路，信号处理电路诸如可以由样品分析设备200的系统控制器(诸如如上所述并在图1中示出的计算装置136)提供。在多个样品216的情况下，样品载体214可被移动以顺序地将每个附加样品216与光导354对准，由此从所有样品216顺序地获取发光测量结果。在一些实施例中，样品载体214可以快速(例如，在短于一秒内)将样品支撑件218在分配试剂和接收发光262之间平移小的距离，以便在分配试剂时使注射器针356或358在井穴220上方居中，并随后在接收发光262时使光导354在井穴220上方居中。

如本文所述，在一些实施例中，对于每个样品216可以使用多于一种的试剂，例如当进行如本领域技术人员所理解的双报告测定时。例如，泵278可以建立从第一试剂储器272到第一注射器针356(图3)的第一试剂的流动，之后，光导354(图3)接收响应于注入第一试剂而从样品216发射的(第一)发光262。随后，泵278可建立从第二试剂储器274到第二注射器针358(图3)的第二试剂的流动，之后，光导354接收响应于注入第二试剂而从样品216发射的(第二)发光262。在一些实施例中，第二试剂可以包括猝灭剂，猝灭剂猝灭由第一试剂产生的信号，即，第二试剂可以是第二发光试剂和猝灭剂的混合物，有效用于猝灭第一发光试剂。作为一个非限制性实例，第一试剂可以是包含萤火虫萤光素酶底物的萤光素酶测定试剂II(LAR II)，第二试剂可以是包括海肾荧光素酶底物和猝灭剂的STOP&GLO试剂，两种试剂均在可从美国威斯康星州麦迪逊市的Promega(普洛麦格)公司购得的Reporter(DLR^TM)测定系统中提供。

在完成发光测量时，发光盒232(如本文所述的模块化或可移除的盒)随后可从盒支撑件212移除，且此后根据需要用另一发光盒232或不同类型的可移除的盒替换。在根据需要移动盒支撑件212穿过设备壳体以移除发光盒232之前，注射器组件236可缩回到完全在盒壳体232内的位置以在移动期间保护注射器组件236。

在发光测量已经完成之后，可以根据需要冲洗并且可能净化样品分析设备200的注射器系统(即，泵278、注射器针356和358、以及相关联的流体管线、以及储器272和274(如果它们随后要收容不同类型的液体))以在实验之间清洁注射器系统以及防止诸如泵278和流体管线等流体部件的堵塞。为此目的，可以通过注射器系统泵送合适的冲洗液体。另外，作为在启动发光测量之前准备使用注射器系统的一部分，注射器系统可能需要通过将少量的每种试剂泵送通过注射器系统的相应流体管线来进行灌注。

在一些实施例中，为了启动冲洗和/或灌注操作，盒支撑件212被操作以使发光盒228相对于设备壳体移动到外部位置。一旦盒支撑件212和发光盒228处于外部位置，通过滑动储器支撑件276，可将储器支撑件276以及支撑在其上的试剂储器272和274相对于发光盒228移动到外部位置。为了这个目的，如本领域技术人员所理解的，储器支撑件276可以通过线性引导件或轨道等可移动地安装到盒壳体232。在外部位置，试剂储器272和274可以根据需要进行更换。另外，在盒支撑件212和发光盒228已经移动到外部位置之后，可以将外部冲洗/灌注台(未示出)安装到盒支撑件212和/或发光盒228上。冲洗/灌注台可以包括外部液体容器(或罐)。在一些实施例中，冲洗/灌注台还可以包括用于保持一个或多个冲洗/灌注储器(例如瓶子)的外部储器支撑件。外部液体容器可以包括当处于安装位置时与注射器组件236对准的端口。因此，在安装冲洗/灌注台之后，注射器组件236可以下降进入或通过端口，使得注射器组件236与外部液体容器的内部流体连通。通过这种构造，在冲洗或灌注期间流过注射器系统的过量液体被收集在外部液体容器中。在2015年2月3日提交的标题为“LIQUID AND PLATE SENSORS FOR MICROPLATE INJECTOR SYSTEM(用于微孔板注射器系统的液体和板传感器)”的美国专利申请No.14/566,708中描述了在设备壳体外部进行的冲洗和灌注操作的实例，该美国专利申请全部内容通过引用方式并入本文。

根据其他实施例，图2中所示的样品分析设备200或图1中所示的样品分析设备100是不使用盒的光学读取器系统，即，样品分析设备是非基于盒的样品分析设备。这种样品分析设备的配置可以专用于基于发光的测量技术。可替代地，样品分析设备可以重新配置为实现不同类型的测量技术(例如，发光、吸光度、荧光等)。对于需要使用如上所述的液体注射器系统的发光测量，液体注射器系统的一个或多个部件可以可移除地安装在样品分析设备的设备壳体中。为此目的，使用者可以经由设备壳体的顶部面板(盖)或其他面板或门进入设备壳体的内部。在这样的实施例中，代替设置盒支撑件，样品分析设备可以包括设备壳体中用于安装注射器系统的部件的安装特征，包括注射器组件(诸如图2所示的注射器组件236，如上所述可以配置有或没有一体式光导)、一个或多个泵、液体管线和试剂储器。通常，样品分析设备的任何或全部前述部件的结构和操作可以与以上结合本文公开的其他实施例描述的那些一致。例如，图1和/或图2可以被认为基本上代表了这种样品分析设备，应理解，各种部件将直接定位在设备壳体中而不是在盒中。在这样的实施例中，注射器组件可以被安装在固定位置，并且样品载体可以被移动以相对于注射器组件正确地定位样品。因此，不需要提供如上所述的用于移动注射器组件的驱动器。在注射器组件不包括光导的实施例中，可以使用如上所述的底部读取头。

在根据非基于盒的样品分析设备的实施例中，可以通过根据需要移除注射器系统的注射器组件和其他部件来再次在设备壳体的外部执行冲洗和灌注以避免将液体或液体/空气混合物分配到设备壳体内部的敏感部件上。在注射器组件已经移动到外部位置之后，可以以类似于上述基于盒的实施例的方式使用包括外部液体容器的外部冲洗/灌注台。

现在将描述根据一些实施例的利用两个顺序发光试剂(即，双报告测定)来测量生物样品的发光的方法的实例。在一些实施例中，该方法可以通过操作上文所述并在图1或图2和图3中示出的样品分析设备来实现。此外，计算装置(图1所示的计算装置136和/或图2所示的电子器件288)可以被配置用于通过如上所述的样品分析设备的部件的适当控制来实施该方法的一个或多个步骤。

根据该方法，将样品分配到例如阱等样品支撑件中。然后将第一试剂分配(例如注射)到井穴中，使得第一试剂接触样品。第一试剂分配发生的时间段可以被称为第一试剂分配时间段(或第一注射时间段)。样品与第一试剂反应而发出第一发光。在第一延迟时间段之后，在第一测量时间段上在发光检测器处测量第一发光。第一延迟时间段可以被认为是在第一试剂分配时间段结束时开始，并且在第一测量时间段开始时结束。然后，将第二试剂分配(例如注射)到井穴中，这发生在第二试剂分配时间段(或第二注射时间段)上。样品与第二试剂反应而发出第二发光。如上所述，在典型的实施例中，第二试剂包括有效用于猝灭与先前添加的第一试剂的反应的猝灭剂。在第二延迟时间段之后，在第二测量时间段上在发光检测器处测量第二发光。第二延迟时间段可被认为是在第二试剂分配时间段结束时开始，并在第二测量时间段开始时结束。

在本方法的一个具体但非限制性的实例中，样品可以是一种或多种生物细胞(或细胞裂解物)和液体(例如缓冲溶液)的组合或混合物。第一试剂可以是或包括萤火虫萤光素酶底物。分配到井穴中的第一试剂的体积可以是大约100μL。第二试剂可以是或包括海肾荧光素酶底物以及有效猝灭萤火虫荧光素酶活性的淬灭剂。分配到井穴中的第一试剂的体积可以是大约100μL。应该理解，取决于如大小、待测样品的数量、产量要求等因素，可以使用其它液体体积。另外，可以根据所进行的具体实验或测定来使用其他试剂。在一些实施例中，第一延迟时间段和第二延迟时间段可以在从大约1秒到2秒的范围内。在一些实施例中，第一测量时间段和第二测量时间段可以在从大约5秒到10秒的范围内。

根据该方法的一个方面，晃动容纳样品的井穴以增强第二试剂与样品的混合(即，加速混合过程)。这样的晃动可以在以下时间点之一开始：在分配第二试剂时；在第二延迟时间段期间；或者在测量第二发光时。晃动终止的时间点可以根据实施例而变化。因此，如果在分配第二试剂时开始晃动，则晃动可以在第二延迟时间段开始之前终止，或者可以在第二延迟时间段期间终止，或者可以在第二延迟时间段继续并且在测量第二发光的同时或之后终止。如果在第二延迟时间段期间开始晃动，则可以在开始测量第二发光之前或者在开始测量第二发光之后终止晃动。已经发现通过回转式摇动(或旋转)进行的晃动对于增强第二试剂和样品的混合是特别有效的，尽管其他晃动模式(例如，沿着一个或两个轴线的左右晃动、摇动等)也可能是合适的。如上所述，诸如图1中所示的样品载体110或图3中所示的样品载体214等平台或载物台可以以本领域技术人员所理解的方式被配置和自动化，以实现机械晃动。

上述步骤可以在多个样品上重复，例如可以如上所述设置在多孔板中。因此，在对一个样品进行的第二测量结束时，可以移动多孔板或注射器组件(和读取头，如果适用的话)，以便将下一个井穴与光学器件和流体装置对准，然后在下一个样品上实施该方法。

晃动以增强混合在各种应用中都可以是有益的。一个实例是当将液体体积分配到样品井穴中时需要或期望高精度的应用，例如允许以小增量(例如，低至约1μL)选择精确的体积。实现高精度的一种方法是以小体积液滴分配液体，例如具有低至约1μL体积的液滴。通过使用合适的低流量泵(例如蠕动泵)和小孔管(如本文所述可以终止于注射器针)使要分配的液体以低流量(低注射速度)流动，可以实现小体积液滴的分配。作为非限制性实例，在本公开的上下文中，低流量为500μL/sec或更低，或者在50至500μL/sec的范围内，或者100μL/sec或更低，或者在从50至500μL/sec的范围内，更具体的实例为约100μL/sec。在低流量下分配也可降低如下的风险：气泡形成、目标井穴外液体溢出以及目标井穴中粘附细胞层的损害。然而，如上文在本公开的背景技术部分中所指出的那样，低流量在样品井穴中引起较低的浊度，与数百μL/sec量级的较常规的较高流量相比，会降低在井穴中混合的有效性。如本文所公开的晃动作用对于促进混合并由此抵消在以低流量分配时可能发生的任何减少的混合是有用的。由晃动引起的增强的混合可以使得能够在较短的延迟时间段(即，较短的第二延迟时间段)内更有效地抑制第一发光信号。因此，根据用于测量生物样品的发光的方法的一些实施例，如上所述以低流量执行分配第一试剂和分配第二试剂。

由晃动引起的增强的混合还可以实现更短的第二测量时间段，这对于在大量样品上进行发光测量时(使用例如多孔板)提高产量(总读板时间)是特别有利的。因此，根据用于测量生物样品的发光的方法的一些实施例，第二延迟时间段和/或第二测量时间段短于约2秒，或约1秒。在进一步的实施例中，第二延迟时间段可以短于1秒。在第二试剂分配时间段足够长以使得第二发光信号能够达到可接受幅度的应用中，第二延迟时间段甚至可以缩短到零秒(即，没有延迟)。

图4是绘制在五个实验期间获得的发光信号的曲线图，其中将LAR II试剂加入到样品中，随后向样品中加入STOP&试剂，并根据本文所述的双发光方法晃动样品。图4绘制了作为时间的函数的以log10标度或log₁₀(x)表示的第一测量信号的强度。在每个实验中，第二试剂的注射时间段是1秒，从时间t＝-1秒开始到时间t＝0秒结束，并且获得数据点的积分时间段是10秒，结束于时间t＝10秒。除非另有说明，否则每个实验的方案如下：向样品中加入20μL萤火虫萤光素酶底物(原液稀释100倍)；注入100μL的LAR II试剂；并注入100μL的STOP&试剂。流量(注射速度)为100μL/sec。

图4中所示的五个实验是上述方法的变型，并分别标记为O模式、U模式、V模式、W模式和U-2x模式。在O模式中，第二延迟时间段(第二次注射和测量之间的时间)为2秒，并且在第二延迟时间段上执行回转式摇动。如图4所示，读数从t＝2开始，这与其他模式不同。在U模式中，在第二次注射期间执行回转式摇动并在测量信号时停止。在V模式中，第二延迟时间段短于1秒，使得几乎紧接在第二次注射之后开始测量。几乎紧接在第二次注射后开始回转式摇动，并在进行测量时继续。可以看出，当在读取阶段(V模式)继续摇动时，数据曲线比其他情况(O模式)下降得更快，因此在更早的时间内实现猝灭剂的渐近效应。在W模式下，在第二次注射期间开始回转式摇动，并在进行测量时继续。可以看出，当注射过程中(U模式和W模式)完成摇动时，数据曲线下降得更快，在注射完成(t＝0)后第一秒超过5对数。在U-2x模式下，过程与U模式相同，但STOP&试剂稀释两倍，注射量增加一倍。可以看出，所有模式都达到了4对数以上的抑制。而且，图4所示的实验表明，摇动可以使延迟时间段缩短到一秒或更短(甚至降到零)，并且进一步使测量(或积分)时间段缩短到一秒。当使用96井穴微孔板等规格时，这些缩短可以导致总测定时间的显著减少。

应该理解的是，可以利用硬件、固件、软件或者前述中的两个或更多个的组合来在一个或多个电子装置或数字控制装置上执行本文描述的过程、子过程和过程步骤中的一个或多个。软件可以驻留在合适的电子处理部件或系统(例如图1中示意性描绘的计算装置136)中的软件存储器(未示出)中。软件存储器可以包括用于实现逻辑功能(即，可以以数字形式(例如数字电路或源代码)或以模拟形式(诸如模拟电、声音或视频信号之类的模拟源)来实现的“逻辑”)的可执行指令的有序列表。指令可以在包括例如一个或多个微处理器、通用处理器、处理器的组合、数字信号处理器(DSP)或专用集成电路(ASIC)的处理模块内执行。此外，示意图描述了具有不受体系结构或功能的物理布局限制的物理(硬件和/或软件)实施方式的功能的逻辑划分。这里描述的系统的实例可以以各种配置来实现，并且可以作为单个硬件/软件单元中的硬件/软件部件或者单独的硬件/软件单元来操作。

可执行指令可以被实现为存储有指令的计算机程序产品，当由电子系统(例如，图1中的计算装置136)的处理模块执行时，指令引导电子系统执行指令。计算机程序产品可以选择性地体现在任何非暂时性计算机可读存储介质中，以供指令执行系统、设备或装置(例如基于电子计算机的系统，包含处理器的系统或者其他可以选择性地从指令执行系统、设备或装置获取指令并执行指令的系统)使用或与指令执行系统、设备或装置结合使用。在本公开的上下文中，计算机可读存储介质是可存储由指令执行系统、设备或装置使用或与指令执行系统、设备或装置结合使用的程序的任何非暂时性装置。非暂时性计算机可读存储介质可以选择性地例如是电子、磁性、光学、电磁、红外或半导体系统、设备或装置。非暂时性计算机可读介质的更具体实例的非穷尽列表包括：具有一个或多个导线的电连接器(电子)；便携式计算机磁盘(磁性)；随机存取存储器(电子)；只读存储器(电子)；可擦除可编程只读存储器，例如闪存(电子)；诸如例如CD-ROM，CD-R，CD-RW等光盘存储器(光学)；以及数字多功能盘存储器，即DVD(光学)。注意，非暂时性计算机可读存储介质甚至可以是纸张或打印有程序的另一合适的介质，因为程序可以通过例如纸张或其他介质的光学扫描被电子地捕获，然后被编译、解释或在必要时以其他方式以适当的方式处理，然后存储在计算机存储器或机器存储器中。

还将理解的是，这里使用的术语“进行信号通信”是指两个或更多个系统、装置、部件、模块或子模块能够经由在某种类型的信号路径上传播的信号彼此通信。信号可以是通信、电力、数据或能量信号，可以将来自第一系统、装置、部件、模块或子模块的信息、电力或能量沿着第一和第二系统、装置、部件、模块或子模块之间的信号路径传送到第二系统、装置、部件、模块或子模块。信号路径可以包括物理的、电的、磁的、电磁的、电化学的、光学的、有线的或无线的连接。信号路径还可以包括第一和第二系统、装置、部件、模块或子模块之间的附加系统、装置、部件、模块或子模块。

更一般地，在本文中使用诸如“通信”和“与......通信”(例如，第一部件“与第二部件通信”或“在与第二部件通信中”)的术语来指示两个或更多个部件或元件之间的结构、功能、机械、电、信号、光学、磁性、电磁、离子或流体关系。因此，一个部件被认为与第二部件通信的事实并不意图排除附加部件可能存在于第一部件和第二部件之间和/或与第一部件和第二部件可操作地关联或接合的可能性。

应该理解，在不脱离本发明的范围的情况下，可以改变本发明的各个方面或细节。此外，前面的描述仅用于说明的目的，而不是为了限制的目的，本发明由权利要求书限定。

Claims (29)

1.一种用于测量生物样品的发光的方法，所述方法包括：

将生物样品分配到井穴中；

将第一试剂分配到所述井穴中，其中所述生物样品与所述第一试剂反应以发射第一发光；

在第一延迟时间段之后，在第一测量时间段上在发光检测器处测量所述第一发光；

将第二试剂分配到所述井穴中，其中所述生物样品与所述第二试剂反应以发射第二发光；

在第二延迟时间段之后，在第二测量时间段上在所述发光检测器处测量所述第二发光；以及

晃动所述井穴以增强所述第二试剂与所述生物样品的混合，其中在选自由以下时间构成的组的时间开始晃动：在分配所述第二试剂时；在所述第二延迟时间段期间；以及在测量所述第二发光时。

2.如权利要求1所述的方法，包括以选自由以下流量构成的组的流量分配所述第一试剂和分配所述第二试剂：500μL/sec或更小；从50到500μL/sec的范围；100μL/sec或更小；从50到500μL/sec的范围；以及约100μL/sec。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一延迟时间段和所述第二延迟时间段各自在大约1秒到2秒的范围内。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述第一测量时间段和所述第二测量时间段各自在大约5秒到10秒的范围内。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述第二延迟时间段和所述第二测量时间段中的至少一者短于约2秒，或短于约1秒。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述第二测量时间段是大约1秒。

7.如权利要求1所述的方法，其中在所述第二延迟时间段之后开始测量所述第二发光。

8.如权利要求1所述的方法，其中在所述第二延迟时间段期间并且在晃动所述井穴的同时开始测量所述第二发光。

9.如权利要求8所述的方法，包括在所述第二延迟时间段之后继续晃动所述井穴。

10.如权利要求1所述的方法，包括在所述第二延迟时间段期间继续晃动所述井穴。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述第二试剂包括有效诱导所述第二发光的发射的发光试剂和有效抑制所述第一发光的发射的猝灭剂。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述第一试剂包含萤火虫萤光素酶底物，且所述第二试剂包含海肾荧光素酶底物。

13.如权利要求1所述的方法，其中晃动所述井穴包括以回转方式摇动所述井穴。

14.如权利要求1所述的方法，其中晃动所述井穴包括操作支撑所述井穴的机动的样品载体。

15.如权利要求1所述的方法，其中所述井穴是多孔板的多个井穴中的一个井穴，并且所述方法进一步包括对于分别容纳在所述多孔板的一个或多个其他井穴中的一个或多个其他样品重复权利要求1的步骤。

16.如权利要求1所述的方法，其中分配所述第一试剂的步骤包括从与第一试剂储器连通的第一注射器针注射所述第一试剂，并且分配所述第二试剂的步骤包括从与第二试剂储器连通的第二注射器针注射所述试剂。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述第一注射器针和所述第二注射器针彼此邻近地安装在注射器组件中，并且所述方法还包括在分配所述第一试剂之前，将所述注射器组件定位成与所述井穴对准。

18.如权利要求17所述的方法，其中，所述注射器组件包括与所述发光检测器连通的光导，并且测量所述第一发光和所述第二发光的步骤包括使所述第一发光和所述第二发光透射通过所述光导。

19.如权利要求17所述的方法，其中所述井穴是多孔板的多个井穴中的第一井穴，并且所述方法还包括在测量从所述第一井穴中的所述生物样品发射的所述第二发光之后，将所述注射器组件定位成与所述多孔板的一个或多个其他井穴对准，并且在所述一个或多个其它井穴的每一个处，对分别容纳在所述一个或多个其它井穴中的一个或多个其他样品重复权利要求1的步骤。

20.如权利要求16所述的方法，包括：在分配所述第一试剂之前，将所述生物样品定位在样品分析设备中，其中，所述发光检测器、所述第一注射器针和所述第二注射器针安装在所述样品分析设备中。

21.如权利要求20所述的方法，其中将所述生物样品定位的步骤包括将所述生物样品定位在样品载体上，并且还包括移动所述样品载体以将所述注射器组件与所述生物样品对准。

22.如权利要求20所述的方法，其中将所述第一注射器针和所述第二注射器针安装在发光盒中，并且所述方法还包括在分配所述第一试剂之前，将所述发光盒移动到所述样品分析设备中。

23.如权利要求22所述的方法，其中：

将所述第一注射器针、所述第二注射器针、所述第一试剂储器和所述第二试剂储器设置在所述发光盒中；

所述发光盒包括泵单元，所述泵单元将所述第一试剂储器与所述第一注射器针流体联接并将所述第二试剂储器与所述第二注射器针流体联接；以及

分配所述第一试剂和分配所述第二试剂的步骤包括操作所述泵。

24.如权利要求22所述的方法，包括：在分配所述第一试剂之前，操作所述发光盒的驱动器以调节所述第一注射器针和所述井穴之间的距离。

25.一种样品分析设备，包括：

样品载体，其被配置用于晃动生物样品；

液体分配系统，其被配置用于分配选定的试剂以与所述生物样品接触；

发光检测器，其被配置用于测量从所述生物样品发射的发光；以及

计算装置，其被配置用于控制所述样品载体、所述液体分配系统和所述液体分配系统以执行根据权利要求1所述的方法。

26.如权利要求25所述的样品分析设备，其中所述液体分配系统包括与第一试剂储器连通并构造成用于分配所述第一试剂的第一注射器针以及与第二试剂储器连通并且构造成用于分配所述第二试剂的第二注射器针。

27.如权利要求26所述的样品分析设备，包括注射器组件，所述注射器组件包括注射器壳体，其中所述第一注射器针和所述第二注射器针定位在所述注射器壳体中。

28.如权利要求27所述的样品分析设备，包括定位在所述注射器壳体中并与所述发光检测器连通的光导。

29.如权利要求25所述的样品分析设备，包括：

设备壳体，其中所述样品载体能够移动到所述设备壳体中并到达试剂被分配并且进行发光测量的操作位置；以及

发光盒，其能拆卸地安装在所述设备壳体中，其中所述液体分配系统定位在所述发光盒中。