CN108025065A - 与cd123结合的抗体治疗方法 - Google Patents

与cd123结合的抗体治疗方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108025065A
CN108025065A CN201680033397.1A CN201680033397A CN108025065A CN 108025065 A CN108025065 A CN 108025065A CN 201680033397 A CN201680033397 A CN 201680033397A CN 108025065 A CN108025065 A CN 108025065A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
ser
antibody
gly
chain variable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201680033397.1A
Other languages
English (en)
Inventor
约翰·迪克森·葛雷
周贺钺
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sorrento Therapeutics Inc
Original Assignee
Sorrento Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sorrento Therapeutics Inc filed Critical Sorrento Therapeutics Inc
Publication of CN108025065A publication Critical patent/CN108025065A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本申请公开了涉及或源自抗CD123抗体的组合物和方法。更具体地，本申请公开了与CD123结合的全人抗体、所述抗体的与CD123结合的抗体片段和所述抗体的衍生物，以及含有所述片段并与CD123结合的多肽。进一步地，本申请公开了：编码所述抗体、抗体片段和衍生物及多肽的核酸；包含所述多核苷酸的细胞；制备所述抗体、抗体片段和衍生物及多肽的方法；以及使用所述抗体、抗体片段和衍生物及多肽的方法，包括治疗疾病的方法。

Description

与CD123结合的抗体治疗方法
相关申请：
本申请要求2015年4月8日提交的美国临时申请62/144,899的优先权，其内容在此以引用方式全文并入本文。
技术领域
本公开提供涉及或源自抗CD123抗体的组合物及方法。更具体地，本公开提供与CD123结合的全人抗体、所述抗体的与CD123结合的抗体片段和衍生物，以及含有所述片段并与CD123结合的多肽。进一步地，本公开提供编码所述抗体、抗体片段和衍生物及多肽的核酸；包含所述多核苷酸的细胞；制备所述抗体、抗体片段和衍生物及多肽的方法；以及使用所述抗体、抗体片段和衍生物及多肽的方法，包括治疗疾病的方法。
背景技术
血液癌症疾病是一种癌症类型，如影响血液、骨髓和淋巴系统的白血病和恶性淋巴细胞增生症。白血病可分为急性白血病和慢性白血病。急性白血病可进一步分为急性骨髓细胞白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)。慢性白血病包括慢性骨髓细胞白血病(CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)。其他相关疾病包括骨髓增生异常综合征(MDS，以前称为“白血病前期”)，这是一种由骨髓细胞的无效生产(或发育不良)和向AML转化的风险引起的多样化血液病集合。白血病干细胞(LSCs)是具有与正常干细胞相关特征的癌细胞，即具有自我更新的性质和发展多种血系的能力。该细胞被认为是作为不同的群体持续存在于血液癌症如AML中。
急性骨髓细胞白血病(AML)是一种克隆性疾病，临床表现为异质性和未分化的骨髓细胞增生增加。
白血病等级由少量LSCs维持，其具有独特的自我更新能力，且能够分化为白血病祖细胞。这些祖细胞产生大量在诊断和复发中容易检测到的白血病细胞，最终导致死亡。相比于快速分裂的克隆型祖细胞，AML-LSC通常被报道为休眠细胞。
LSCs的这一特性使传统的化学治疗法对靶向增殖细胞的效果不佳，潜在地解释了目前大部分AML患者进入完全缓解期，经常复发，小于30％的成年人存活超过4年的、。
此外，微小残留病的发生和低生存率归因于在AML患者中诊断出LSC的频率高。
AML-LSCs和正常造血干细胞(HSCs)具有慢分裂、自我更新能力和表面标志物如CD34+CD38“表型的共同特征。
尽管如此，据报道，LSCs除其他细胞表面标志物的异常表达外，还具有增强的自我更新活性，两者都是治疗性开发的目标，白细胞介素-3(IL-3)通过与由2个亚基、一个α亚基(CD123)和β共同(βc)链(CD 131)组成的细胞表面受体相互作用来介导其作用。α链与β链的相互作用形成IL-3的高亲和力受体，βc链介导随后的信号传导。相对于正常造血细胞，CD123在AML未成熟细胞，CD34+白血病祖细胞和LSCs中的过度表达已经被广泛报道，并且在一些研究中被提出作为LSCs的标记物。也有报道称，CD131在AML未成熟细胞上表达，但是关于其在AML-LSCs上的表达存在相互矛盾的报道。
CD123在AML细胞上的过度表达与正常造血细胞相比具有许多生长优势，据报道，大量AML细胞在培养中响应于IL-3而增殖。此外，AML细胞上的高水平的CD123表达与如下相关：IL-3刺激的STAT-5活化水平；循环细胞的比例；更原始的细胞表面表型；以及抗细胞凋亡。临床上，AML中的高CD123表达与较低的存活时间，较低的完全缓解率和诊断时较高的细胞计数相关。
美国专利6,177,078公开了抗TL-3受体α链(IL-3Rα)单克隆抗体7G3，以及7G3与IL-3Rα的N-末端区，特别是与氨基酸残基19-49结合的能力。美国专利6,733,743公开了通过使细胞与抗体和细胞毒性剂的组合物(选自化疗剂，毒素或α射线放射性同位素)接触来损害表达CD123但不显著表达CD131的血液癌症祖细胞的方法，由此该组合物以有效引起细胞死亡的量选择性地结合CD123。血液癌症可以是白血病或恶性淋巴细胞增生性疾病如淋巴瘤。
发明内容
本发明涉及能够结合CD123的蛋白质，例如人CD123，包括抗CD123抗体及其抗原结合片段。
本公开提供一种与CD123表位结合的IgG类分离全人抗体，其中所述抗体包括，与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ IDNO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的重链可变区序列,和与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的轻链可变区序列。
本公开进一步提供一种以至少10-6M的结合亲和力与CD123表位结合的IgG类全人抗体，其中所述抗体包括，与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的重链可变区序列,和与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ IDNO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ IDNO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的轻链可变区序列。
在一方面，本公开提供一种分离全人抗CD123抗体，其包含选自SEQ ID NO.1,SEQID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ IDNO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ IDNO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ IDNO.25,和SEQ ID NO.27的氨基酸序列所述的重链区序列；并包含选自SEQ ID NO.2,SEQ IDNO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ IDNO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,和SEQID NO.28的氨基酸序列所述的轻链可变区序列。
在一个实施方式中，该全人抗体包括重链和轻链，其中所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(此处称为LAA3),SEQ ID NO.3/SEQ IDNO.4(此处称为LAA4),SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(此处称为LAA6),SEQ ID NO.7/SEQ IDNO.8(此处称为LAA8),SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(此处称为LAB11),SEQ ID NO.11/SEQID NO.12(此处称为LAB2),SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(此处称为LAC11),SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16(此处称为LAC12),SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(此处称为LAE4),SEQ IDNO.19/SEQ ID NO.20(此处称为LAF5),SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(此处称为LAF7),SEQID NO.23/SEQ ID NO.24(此处称为LAG12),SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26(此处称为LAH3),SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28(此处称为LAH5)，及其组合。
在一个实施方式中，本公开提供一种包括来自重链的可变区和来自轻链的可变区的抗CD123全人抗体Fab片段，其中所述重链可变区序列与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同，且所述轻链可变区序列与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ IDNO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ IDNO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同。在一个实施方式中，全人抗体Fab片段包括重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ IDNO.4,SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ IDNO.10,SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ IDNO.16,SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQ IDNO.22,SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQ IDNO.28，及其组合。
在一个实施方式中，本发明的特征在于，全人抗体Fab片段包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链区包括选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,和SEQ ID NO.27的氨基酸序列；所述轻链可变区包括选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,和SEQ ID NO.28的氨基酸序列。
在另一方面，本公开提供一种抗CD123单链人抗体，其包括来自重链的可变区和来自轻链的可变区和连接重链和轻链可变区的连接肽，其中所述重链可变区包括与选自SEQID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ IDNO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ IDNO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同的氨基酸序列，其中所述轻链可变区包括与选自SEQID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ IDNO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ IDNO.26,SEQ ID NO.28,SEQ ID NO.30及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的氨基酸序列。
在一个实施方式中，本发明包括一种包含重链可变区和轻链可变区的全人单链抗体，其中该单链全人抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ IDNO.2,SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ IDNO.20,SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ IDNO.26,SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28，及其组合。
在另一方面，本公开提供一种抗CD123单链人抗体，其包括来自重链的可变区、来自轻链的可变区和连接重链和轻链可变区的连接肽，其中所述重链可变区包括选自SEQ IDNO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ IDNO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ IDNO.23,SEQ ID NO.25,和SEQ ID NO.27的氨基酸序列，其中所述轻链可变区包括选自SEQID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ IDNO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ IDNO.26,和SEQ ID NO.28的氨基酸序列。
还包括分离抗CD123抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区，该重链可变区包括选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ IDNO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ IDNO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,和SEQ ID NO.27的重链可变区氨基酸序列所述的互补决定区(CDRs)；并包含轻链可变区，该轻链可变区包括选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,和SEQ IDNO.28的轻链可变区氨基酸序列所述的互补决定区(CDRs)。
在一个实施方式中，所述抗CD123全人抗体或抗体片段，包括与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ IDNO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同的重链可变区，且包括含有与选自SEQ ID NO.2,SEQ IDNO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ IDNO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ IDNO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，所述全人抗体或抗体片段，包括含有选自SEQ ID NO.1,SEQID NO.3,SEQID NO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ IDNO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ IDNO.27及其组合的氨基酸序列的重链可变区，且包括含有选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方式中，所述抗CD 123全人抗体包括重链和轻链，其中所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(此处称为LAA3),SEQ IDNO.3/SEQ ID NO.4(此处称为LAA4),SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(此处称为LAA6),SEQ IDNO.7/SEQ ID NO.8(此处称为LAA8),SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(此处称为LAB11),SEQ IDNO.11/SEQ ID NO.12(此处称为LAB2),SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(此处称为LAC11),SEQID NO.15/SEQ ID NO.16(此处称为LAC 12),SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(此处称为LAE4),SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20(此处称为LAF5),SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(此处称为LAF7),SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24(此处称为LAG12),SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26(此处称为LAH3),SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28(此处称为LAH5)，及其组合。在其他实施方式中，全人单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中该单链全人抗体含有选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4,SEQ IDNO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10,SEQ IDNO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16,SEQ IDNO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22,SEQ IDNO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28，及其组合。
本公开进一步提供一种治疗广谱哺乳动物癌症的方法，其包括抗CD123多肽，例如抗人CD123抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方式中，待治疗的广谱哺乳动物癌症选自非霍奇金淋巴瘤(NHL)，伯基特淋巴瘤(BL)，多发性骨髓瘤(MM)，B型慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)，B和T型急性淋巴细胞白血病(ALL)，T细胞淋巴瘤(TCL)，急性骨髓细胞白血病(AML)，毛细胞白血病(HCL)，霍奇金淋巴瘤(HL)和慢性骨髓细胞白血病(CML)。
在一些实施方式中，本发明的抗CD 123抗体或其抗原结合片段的KD至少为1x 10- 6M。在其他实施方式中，本发明的抗CD 123抗体或其抗原结合片段的KD至少为1x 10-7M。在其他实施方式中，本发明的抗CD 123抗体或其抗原结合片段的KD至少为1x 10-8M；至少为1x10-9M；至少为1x 10-10M。
在一个实施方式中，抗CD123抗体是IgG。
在一些实施方式中，抗CD123抗体是IgG1同种型。
在其它实施方式中，抗CD123抗体是IgG4同种型。
在一些实施方式中，本文所述抗CD123抗体或抗原结合片段是重组体。在一些实施方式中，本文所述抗CD123抗体或抗原结合片段是人抗体或抗体的抗原结合片段。
本发明还提供包括有效量的本文公开的抗CD123抗体或片段和药学上可接受的载体的药物组合物。
附图说明
图1中的数据显示，测试的5种抗CD123抗体结合并促进针对RPMI8226靶细胞的ADCC活性。
具体实施方式
术语定义
术语“肽”、“多肽”和“蛋白”均指包括2个或以上相互以肽键连接的氨基酸残基的分子。这些术语涵盖例如天然和人工蛋白、蛋白片段、蛋白序列的多肽类似物(例如突变蛋白、变体蛋白或融合蛋白)，以及翻译后修饰蛋白，或共价或非共价修饰蛋白。肽、多肽或蛋白可以是单体或聚合体。
多肽的“变体”(例如，抗体的变体)包括相对于其他多肽序列而插入、删除和/或取代了一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列。已公开的变体包括，例如，融合蛋白。
多肽的“衍生物”是经过化学修饰的多肽(例如，抗体)，例如通过连接另一个化学部分(例如，聚乙二醇，或白蛋白，如人血清白蛋白)、磷酸化和糖基化。除非另有说明，术语“抗体”除了指含有两条全长的重链和两条全长的轻链的抗体之外，还包括其衍生物、变体、片段及突变蛋白，其示例如下所述。
“抗原结合蛋白”是包括与抗原结合的部分，以及可选地，允许抗原结合部分采取促进抗原结合蛋白与蛋白结合的构型的支架或骨架部分的蛋白。抗原结合蛋白的例子包括抗体、抗体片段(例如，抗体的抗原结合部分)、抗体衍生物和抗体类似物。该抗原结合蛋白可以包括，例如，具有接枝的CDRs或CDRs衍生物的替代蛋白支架或人工支架。所述支架包括但不限于，包含引入例如以稳定抗原结合蛋白的三维结构的突变体的抗体衍生支架，以及包括例如生物可相容聚合物的全合成支架。参见，例如，Korndorfer et al.,2003,Proteins:
Structure,Function,and Bioinformatics,Volume 53,Issue 1:121-129；Roqueet al.,2004,Biotechnol.Prog.20:639-654.此外，可以使用肽抗体模拟物("PAMs")，以及基于利用纤连蛋白成分作为支架的抗体模拟物的支架。
抗原结合蛋白可以具有，例如，免疫球蛋白结构。
“免疫球蛋白”是由2对相同的多肽链组成的四聚物分子，每对中有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括约100-110或以上氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。每条链的羰基末端部分具有恒定区，主要负责效应子功能。人轻链被归类为κ或λ轻链。重链被归类为μ(mu)、Δ(delta)、γ(gamma)、α(alpha)或ε(epsilon)，分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。优选地，本文公开的抗CD123抗体的特征在于其在重VH和轻VL氨基酸序列中的可变区序列。在轻链和重链中，可变区和恒定区由约12个或以上氨基酸的“J”区连接，其中重链还包括一个含约10个或以上氨基酸的“D”区。一般参见，FundamentalImmunology Ch.7(Paul,W.,ed.,2nd ed.RavenPress,N.Y.(1989)).
每对轻/重链的可变区组成了抗体结合位点，因此一个完整的免疫球蛋白具有2个结合位点。免疫球蛋白链的可变区显示出由称为互补决定区或CDRs的三个高变区连接的相对保守的框架区(FR)相同的通用结构。从N-端到C-端，轻链和重链均包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4区。每个区的氨基酸分配与Kabat等人在Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed.,US Dept.of Health and Human Services,PHS,NIH,NIH Publication no.91-32421991.中的定义一致。免疫球蛋白链中的其他氨基酸编号系统包括IMGT.RTM.(internationalImMunoGeneTics information system；Lefranc et al,Dev.Comp.Immunol.29:185-203；2005)and AHo(Honegger and Pluckthun,/.Mol.Biol.309(3):657-670；2001).
除非另有说明，“抗体”指的是完整免疫球蛋白或其能与完整抗体为特异结合而竞争的抗原结合部分。在一个实施方式中，抗体包括两个相同的重链，每个重链包括一个重链可变区和重链恒定区CHI，Cm和Cm；并且包括两个相同的轻链，每个轻链包括一个轻链可变区和一个轻链恒定区(CL)。
在一个实施方式中，本发明的抗体包括选自本文所述的SEQ ID Nos:
1到28的重链和轻链可变区序列。
抗体的抗原结合部分可以由重组DNA技术或完整抗体的酶切或化学裂解法制备。抗原结合部分尤其包括Fab，Fab'，F(ab')2，Fv，区抗体(dAbs)和互补决定区(CDR)片段，单链抗体(scFv)，嵌合抗体，双抗体，三抗体，四体抗体和含有至少一部分足以使抗原与多肽特异性结合的免疫球蛋白的多肽。
在一些实施方式中，抗体可以从含多样化抗原特异性免疫球蛋白的血清或血浆等来源制得。如果此类抗体进行亲和纯化，则能够针对特定抗原特异性进行富集强化。所述抗体富集制剂通常由低于约10％的针对特定抗原具有特异性结合活性的抗体组成。将这些制剂经过几轮亲和纯化，能够增加针对抗原具有特异性结合活性的抗体的比例。以此方式制备的抗体通常被称为“单特异性”。
本文所用术语“单特异性”是指对一个特定抗原表位显示出亲和力的抗体。单特异性抗体制剂可以由约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或99.9％的针对特定抗原具有特异性结合活性的抗体组成。
在一些实施方式中，抗原结合蛋白如抗体可以具有一个或多个结合位点。若有超过一个结合位点，这些结合位点可以相同或不同。例如，天然存在的人免疫球蛋白典型地具有2个相同结合位点，而“双特异”或“双官能团”抗体则具有2个不同结合位点。
“抗体片段”或“抗体的抗原结合片段”包含完整抗体的一部分，优选包含抗体抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括但不限于Fab，Fab'，F(ab')2，Fv片段和线性抗体。抗体片段也被称为“抗体部分”。
抗体的抗原结合部分(或片段)可以由重组DNA技术或完整抗体的酶切或化学裂解法制备。抗原结合部分尤其包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、区抗体(dAbs)，以及互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双抗体，三抗体，四体抗体和含有至少一部分足以使抗原与多肽特异性结合的免疫球蛋白的多肽。
Fab片段是含有VL、VH、CL和CH1区的单价片段；F(ab')2片段是含有2个在铰链区处由二硫键连接的Fab片段的二价片段；Fd片段含有VH和CH1区；Fv片段含有抗体单臂的VL和VH区；dAb片段含有VH区、VL区或VH区或VL区的抗原结合片段(美国专利6,846,634；6,696,245,美国申请公开20/0202512；2004/0202995；2004/0038291；2004/0009507；2003/0039958,andWard et al.,Nature 341:544-546,1989)。
单链抗体(scFv)是一种抗体，其中VL和VH区由连接子(例如，氨基酸残基合成序列)连接以形成连续蛋白链，且该连接子的长度足以允许该蛋白链自身折叠并形成单价抗原结合位点(Bird et al.,1988,Science 242:423-26and Huston et al.,1988,Proc.Natl.Acad.Set USA85:5879-83)。
双抗体是含有两条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链包括由连接子连接的VL和VH区，且该连接子长度短，不允许同一条链上的两个区之间配对，由此允许每个区与另一条多肽链上的互补区配对(Holliger et al.,1993,Proc.Natl.Acad.Set USA 90:6444-48,and Poljak et al.,1994,Structure 2:1121-23)。若双抗体的2条多肽链相同，则其配对所得的双抗体将具有2个相同的抗原结合位点。具有不同序列的多肽链可用于形成具有2个不同抗原结合位点的双抗体。类似地，三抗体和四抗体分别是含有3个或4个多肽链并分别形成3个或4个抗原结合位点(可以相同或不同)的抗体。
术语“人抗体”包括具有源于人免疫球蛋白序列的一个或多个可变区和恒定区的抗体。在一个实施方式中，所有的抗体可变区和恒定区均源自人免疫球蛋白序列(称为全人抗体)。这些抗体可以从多种途径制备，下文对此进行了举例，包括通过与小鼠的目标抗原的免疫反应，其中小鼠经过基因改造以表达源自人重链和/或轻链编码基因的抗体。在一个优选的实施方式中，使用重组方法制备全人抗体，使得抗体的糖基化模式与存在于自然界中具有相同序列的抗体不同。
人源化抗体的序列不同于源自非人物种的抗体序列，其差别在于一个或多个氨基酸的取代、删除和/或添加，由此使该人源化抗体与非人物种抗体相比，在对人类对象给药时引起免疫反应的可能性降低和/或引起的免疫反应严重性降低。
在一个实施方式中，非人物种抗体的重链和/或轻链的骨架和恒定区中的某些氨基酸突变，以产生人源化抗体。在另一个实施方式中，人抗体的恒定区与非人物种的可变区融合。在另一个实施方式中，非人抗体的一个或多个CDR序列中的一个或多个氨基酸残基改变，以降低该非人抗体向人类对象给药时可能的免疫原性，其中改变的氨基酸残基要么对于该抗体与其抗原的免疫特异结合来说并不重要，或该氨基酸序列的改变是保守变化，由此该人源化抗体与抗原的结合并不显著差于该非人抗体与抗原的结合。如何制备人源化抗体的示例可以参见美国专利6054297，5886152和5877293。
术语“嵌合抗体”是指含有来自一个抗体的一个或多个区和来自一个或多个其他抗体的一个或多个区的抗体。在一个实施方式中，一个或多个CDRs源自人抗CD 123抗体。在另一个实施方式中，所有CDRs都源自人抗CD 123抗体。在另一个实施方式中，源自多个人抗CD 123抗体的CDRs混合搭配在嵌合抗体中。例如，嵌合抗体可以包括来自第一个人抗PAR-2抗体的轻链的CDR1、来自第二个人抗CD 123抗体的轻链的CDR2和CDR3，以及来自第三个抗CD 123抗体的重链的CDRs。其他组合也是可能的。
此外，骨架区可以来自相同的抗CD 123抗体之一，一个或多个不同抗体，例如人抗体，或来自人源化抗体。在一个嵌合抗体的实施例中，其重链和/或轻链的一部分等同于、同源于或来源于特定物种的抗体，或类属于特定抗体类型或亚类的抗体，且所述链的剩余部分等同于、同源于或来源于另一个特定物种的抗体，或类属于另一个特定抗体类型或亚类的抗体。还包括所述抗体具有所需生物活性的片段(即，能够特异性结合CD123的能力)。
“CDR接枝抗体”是含有来自特定物种或种型抗体的一个或多个CDRs和来自相同或不同物种或种型的另一抗体的骨架的抗体。
“多特异抗体”是识别一种或多种抗原上的多个表位的抗体。此类型抗体的一个亚类为“双特异抗体”，其识别相同或不同抗体上的两个不同表位。
若抗原结合蛋白在结合抗原(例如CD123)时的解离常数为1毫微摩尔或以下，则称其与抗原“特异结合”。
“抗原结合域”、“抗原结合区”或“抗原结合位点”是指抗原结合蛋白上含有与抗原相互作用的氨基酸残基(或其他化学部分)并有利于该抗原结合蛋白与该抗原间的特异性和亲和性的部分。对于与其抗原特异结合的抗体而言，这包括其至少一个CDR域的至少一部分。
术语“Fc多肽”包括源于抗体Fc区域的多肽的原生和突变形式。还包括含有促进二聚化的铰链区的所述多肽的截短形式。含有Fc部分的融合蛋白(及由此形成的寡聚物)提供的有益效果在于，易于通过蛋白质A或蛋白质G柱来以亲和层析法进行纯化。
“表位”是通过抗原结合蛋白(例如，通过抗体)结合的分子的部分。表位可以包括该分子的非邻近部分(例如，在多肽中，在多肽一级序列中并不相邻但在该多肽的三级和四级结构中相互足够靠近从而被抗原结合蛋白结合的氨基酸残基)。
两个多核苷酸或两个多肽序列的“相同百分比”或“同源百分比”是用GAP电脑程序(GCG Wisconsin Package,version 10.3(Accelrys,San Diego,Calif.)中的一部分)以其默认参数来比较序列而确定的。
术语“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸”在全文中可交换地使用，其包括DNA分子(例如cDNA或基因组DNA)、RNA基因组(例如mRNA)、以核苷酸类似物生成的DNA或RNA类似物(例如，肽核酸和非天然存在核苷酸类似物)及其杂合体。核酸分子可以是单链或双链的。在一个实施例中，本发明的核酸分子包括编码抗体或其片段、衍生物、突变蛋白或变体的连续开放阅读框。
若两条单链多核苷酸的序列能够反向平行对齐，使得一条多核苷酸中的每个核苷酸都与另一条多核苷酸上的互补核苷酸相对，而不存在间隙，且各序列的5’端或3’端也没有不配对的核苷酸，则称这两条多核苷酸互为“互补链”。
若两条多核苷酸可在中等严格条件下相互杂交，则称其“互补”。因此，一条多核苷酸可以在并非对方互补链的情况下与另一条多核苷酸互补。
“载体”是一种可用于将另一条与之连接的核酸引入细胞的核酸。一种载体类型是“质粒”，即可供额外核酸片段连接的线形或环形双链DNA分子。另一种载体类型是病毒载体(例如复制缺陷反转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，其中额外DNA片段可引入病毒基因组中。某些载体被引入宿主细胞后能够进行自主复制(例如，含有细菌复制起点的细菌载体和附加体哺乳类载体)。其他载体(例如，非附加体哺乳类载体)当引入宿主细胞时，整合入宿主细胞的基因组，由此随着宿主基因组进行复制。“表达载体”是一种能够进行指定多核苷酸表达的载体类型。
当核苷酸序列所连接的调控序列影响该核苷酸序列的表达(例如表达水平、时机或位点)时，则称该核苷酸序列“可操作地”连接到该调控序列。“调控序列”是能够影响与之可操作地连接的核酸的表达(例如表达水平、时机或位点)的核酸。例如，调控序列可以直接对其所调控的核酸起作用，或通过一个或多个其他分子(例如与该调控序列和/或核酸结合的多肽)来起作用。调控序列的例子包括启动子、增强子和其他表达控制元件(例如，多腺苷酸化信号)。调控序列的更多示例记述在例如Goeddel,1990,Gene ExpressionTechnology:Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,CA.和Baron etal.,1995,Nucleic Acids Res.23:3605-06.中。
“宿主细胞”是可用于表达核酸，例如本发明核酸的细胞。宿主细胞可以是原核细胞，例如E.coli；或真核细胞，例如真核单细胞(如酵母菌或其他真菌)、植物细胞(例如，烟草或番茄植物细胞)、动物细胞(如人细胞、猴细胞、仓鼠细胞、小鼠细胞、大鼠细胞或昆虫细胞)或杂种细胞。宿主细胞的例子包括猴肾细胞COS-7系(ATCC CRL 1651)(参见Gluzman etal.,1981,Cell 23:175)、L细胞、C127细胞、3T3细胞(ATCC CCL 163)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或其衍生物|(例如Veggie CHO)和在无血清培养基上生长的相关细胞系(参见Rasmussen et al.,1998,Cytotechnology 28:31)，或CHO的DX-B11品系(缺少DHFR)(参见Urlaub et al.,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-20)、HeLa细胞、BHK(ATCC CRL10)细胞系、源于非洲绿猴肾细胞系CV1的CV1/EBNA细胞系(ATCC CCL 70)(参见McMahan etal.,1991,EMBO J.10:2821)、人胚肾细胞(例如293、293EBNA或MSR 293)、人表皮A431细胞、人Colo205细胞、其他转化灵长类细胞系、正常二倍体细胞、源于初生组织和初生外植体的体外培养所得的细胞系、HL-60、U937、HaK或Jurkat细胞。
在一个实施方式中，宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，但不是人宿主细胞。典型地，宿主细胞是能够以编码多肽且能够在该宿主细胞中表达的核酸转化或转染得到的培养细胞。术语“重组宿主细胞”可用于表示已经用需表达的核酸来转化或转染的宿主细胞。宿主细胞还可以是指包含该核酸，但在调控序列被引入该宿主细胞并与该核酸可操作连接以前，并不以所需表达水平来表达该核酸的细胞。应当理解，术语“宿主细胞”并不单指特定的对象细胞，而是也指所述细胞的后代或潜在后代。因为由于例如突变或环境影响的存在，后代中可能发生某些修饰，使得这些后代事实上与其亲代细胞并不等同，但其仍应属于本文中的“宿主细胞”术语所涵盖的范围。
术语“重组抗体”是指根据标准重组表达方法制备的抗体。例如，重组抗体可以从一个包含抗体的编码序列的表达载体(或可能多个表达载体)转染的细胞或细胞系中表达，其中所述编码序列不与细胞天然相关。在一个实施方式中，如果重组抗体存在于自然界中，则其具有与含有相同序列的抗体的糖基化模式不同的糖基化模式。
在一个实施方式中，重组抗体在哺乳动物宿主细胞中表达，而不是人宿主细胞。
值得注意的是，个体哺乳动物宿主细胞具有独特的糖基化模式
本文所用术语“有效量”是指与CD123结合的抗体或其抗原结合部分的量，其足以在施用于受试者时达到治疗疾病的效果。
本文提供的治疗有效量的抗体或片段将根据抗体的相对活性而变化，并且取决于所治疗的受试者和疾病状况，受试者的体重和年龄，疾病状况的严重程度，管理方式等，其可以由本领域普通技术人员容易地确定。
术语“分离的”是指基本上不含其它细胞材料的蛋白质(例如抗体)。在一个实施方式中，分离的抗体基本上不含来自相同物种的其它蛋白质。
在一个实施方式中，分离的抗体由来自不同物种的细胞表达，并且基本上不含来自不同物种的其它蛋白质。
通过使用本领域熟知的蛋白质纯化技术，通过分离，蛋白质可以基本上不含天然相关组分(或与用于产生抗体的细胞表达系统相关的组分)。
在一个实施方式中，分离本发明的抗CD123抗体或抗原结合片段。
“中和抗体”或“抑制抗体”是当过量抗CD 123抗体使蛋白水解活化量降低至少约20％(使用如本文实施例中所述的化验)时，抑制CD 123的蛋白水解活化的抗体。在各实施方式中，抗原结合蛋白将CD123的蛋白水解活化量降低至少30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、99％和99.9％。
CD 123抗原结合蛋白
本发明涉及CD123结合蛋白，特别涉及与CD123，例如人CD123结合的抗-CD123抗体或其抗原结合片段(例如抗CD123人抗体和抗体片段)及其用途。
本发明的各个方面涉及抗体和抗体片段，药物组合物，核酸，重组表达载体，以及用于制备此类抗体和片段的宿主细胞。
本发明还包括使用本发明抗体在体外或体内检测人CD123以抑制CD123活性，以及预防或治疗疾病如癌症的方法。
所列序列包括对CD 123具有特异性的新型人抗体重链和轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明提供一种抗CD123抗体或其抗原结合片段，其包括具有包含SEQ ID NO：1，SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ IDNO.23,SEQ ID NO.25,和SEQ ID NO.27的氨基酸序列的可变区的重链。在一个实施方式中，本发明提供一种抗CD123抗体或其抗原结合片段，其包括具有包含SEQ ID Nos.2,SEQ IDNO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ IDNO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,和SEQID NO.28中任一个氨基酸序列的可变区的轻链。在一个实施方式中，本发明提供一种抗CD123抗体或其抗原结合片段，其包括具有包含SEQ ID Nos.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,和SEQ ID NO.28中任一个氨基酸序列的可变区的轻链；且包括具有包含SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,和SEQ ID NO.27中任一个氨基酸序列的可变区的重链。
互补决定区(CDRs)在轻链和重链可变区中都被称为高变区。
可变区的高度恒定部分被称为骨架(FR)。
给定抗体的互补决定区(CDRs)和骨架区(FR)可以使用Kabat等人；Lefranc等人，和/或Honegger和Pluckthun先前描述的系统来鉴定。Kabat等人描述的编号系统也是本领域技术人员熟知的(1991,NIH Publication 91-3242,National Technical InformationService,Springfield,Va.)。
在这方面，Kabat等人定义了适用于任何抗体的可变区序列的编号系统。
本领域普通技术人员可以明确地将该系统的“Kabat编号”分配给任何可变区氨基酸序列，而不依赖于序列本身以外的任何实验数据。
在一些实施方式中，本发明提供一种包含SEQ ID Nos:1至28中所述的重链和轻链可变区的CDRs的抗CD123抗体。例如，本发明提供一种抗CD123抗体或其抗原结合片段，其包括具有SEQ ID NO.l,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ IDNO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ IDNO.23,SEQ ID NO.25,和SEQ ID NO.27中所述的氨基酸序列的CDRs的重链可变区。在一个实施方式中，本发明提供一种抗CD123抗体或其抗原结合片段，其包括具有SEQ ID Nos.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,和SEQ ID NO.28任一氨基酸序列的CDRs的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明提供一种抗CD123抗体或其抗原结合片段，其包括具有SEQ ID Nos.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ IDNO.24,SEQ ID NO.26,和SEQ ID NO.28中任一个氨基酸序列的CDRs的轻链可变区；且包括具有包含SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ IDNO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ IDNO.23,SEQ ID NO.25,和SEQ ID NO.27任一所述的氨基酸序列的CDRs的重链可变区。
在一个实施方式中，本公开提供一种以至少10-6M的结合亲和力与CD123表位结合的IgG类全人抗体，其中所述抗体包括与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ IDNO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的重链可变区序列,和与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ IDNO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的轻链可变区序列。
在一个实施方式中，该全人抗体包括重链和轻链，其中所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(此处称为LAA3),SEQ ID NO.3/SEQ IDNO.4(此处称为LAA4),SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(此处称为LAA6),SEQ ID NO.7/SEQ IDNO.8(此处称为LAA8),SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(此处称为LAB11),SEQ ID NO.11/SEQID NO.12(此处称为LAB2),SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(此处称为LAC11),SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16(此处称为LAC12),SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(此处称为LAE4),SEQ IDNO.19/SEQ ID NO.20(此处称为LAF5),SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(此处称为LAF7),SEQID NO.23/SEQ ID NO.24(此处称为LAG12),SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26(此处称为LAH3),SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28(此处称为LAH5)，及其组合。
在一个实施方式中，在至少95％相同(或至少96％相同，或至少97％相同，或至少98％相同或至少99％相同)的重链或轻链中进行的置换是保守性氨基酸置换。“保守性氨基酸置换”是指氨基酸残基被具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的侧链(R基团)的另一个氨基酸残基所置换。
通常，保守性氨基酸置换基本上不会改变蛋白质的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列通过保守性置换彼此不同的情况下，可以向上调整序列同一性百分比或相似程度，以校正置换的保守性质。
用于进行该调整的方法是本领域技术人员所熟知的。参见，例如Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24:307-331，其通过引用并入本文。具有相似化学性质侧链的氨基酸组的实例包括(1)脂肪族侧链：甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸和异亮氨酸；(2)脂肪族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；(3)含酰胺侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳香族侧链：苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸；(5)基础侧链：赖氨酸，精氨酸和组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，和(7)含硫侧链是半胱氨酸和甲硫氨酸。
本发明的抗原结合蛋白的抗体结合片段可以用常规技术制备。所述片段的例子包括但不限于Fab和F(ab')2片段。
在一个实施方式中，本公开提供一种含有来自重链的可变区和来自轻链的可变区的Fab全人抗体片段，其中所述重链可变区序列与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ IDNO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ IDNO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ IDNO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同，且所述轻链可变区序列与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同。
在一个实施方式中，全人抗体Fab片段包括重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQID NO.4,SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ IDNO.10,SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ IDNO.16,SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQ IDNO.22,SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQ IDNO.28，及其组合。
在一个实施方式中，本公开提供一种单链人抗体，其包括来自重链的可变区和来自轻链的可变区以及连接重链和轻链可变区的连接肽，其中所述重链可变区序列与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同，且所述轻链可变区序列与SEQ ID NO.2,SEQ IDNO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ IDNO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ IDNO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同。
在一个实施方式中，全人单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中该单链全人抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQID NO.10,SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQID NO.16,SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQID NO.22,SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQID NO.28，及其组合。
在一个实施方式中，本公开进一步提供一种包括施用抗CD123多肽的治疗广谱哺乳动物癌症的方法，其中全人抗体包括，与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同的重链可变区序列，且包含与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的轻链可变区序列；其中，Fab全人抗体片段包括，与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ IDNO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ IDNO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同的重链可变区序列，且包括与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ IDNO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ IDNO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的轻链可变区序列；以及
其中，单链人抗体包括，与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ IDNO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ IDNO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同的重链可变区序列，且包括与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ IDNO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ IDNO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的轻链可变区序列。
优选地，该全人抗体包括重链和轻链，其中所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(此处称为LAA3),SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4(此处称为LAA4),SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(此处称为LAA6),SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8(此处称为LAA8),SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(此处称为LAB11),SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12(此处称为LAB2),SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(此处称为LAC11),SEQ ID NO.15/SEQ IDNO.16(此处称为LAC12),SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(此处称为LAE4),SEQ ID NO.19/SEQID NO.20(此处称为LAF5),SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(此处称为LAF7),SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24(此处称为LAG12),SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26(此处称为LAH3),SEQ IDNO.27/SEQ ID NO.28(此处称为LAH5)，及其组合。优选地，全人抗体Fab片段包括重链和轻链，其中所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(此处称为LAA3),SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4(此处称为LAA4),SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(此处称为LAA6),SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8(此处称为LAA8),SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(此处称为LAB11),SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12(此处称为LAB2),SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(此处称为LAC11),SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16(此处称为LAC12),SEQ ID NO.17/SEQ IDNO.18(此处称为LAE4),SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20(此处称为LAF5),SEQ ID NO.21/SEQID NO.22(此处称为LAF7),SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24(此处称为LAG12),SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26(此处称为LAH3),SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28(此处称为LAH5)，及其组合。
优选地，全人单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中该单链全人抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ IDNO.4,SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ IDNO.10,SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ IDNO.16,SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQ IDNO.22,SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQ IDNO.28，及其组合。
用于从感兴趣的抗体获得不同子类或种型的抗体的方法是已知的，即子类转换。因此，例如可以从IgM抗体得到IgG抗体，反之亦然。此类技术允许制备既具有特定抗体(亲代抗体)的抗原结合性质，也具有不同于亲代抗体的抗体种型或子类的相关生物性质的新抗体。可以使用重组DNA技术。所述过程中可以使用编码特定抗体多肽的克隆DNA，例如编码所需种型抗体的恒定区的DNA(Lantto et al.,2002,Methods Mol.Biol.178:303-16)。此外，若需要的是IgG4，还可能希望在铰链区中引入点突变(CPSCP->CPPCP)(Bloom et al.,1997,Protein Science 6:407)，以减缓重链间形成二硫键从而可能导致IgG4抗体异质性的趋势。因此，在一个实施方式中，本发明的抗体是人IgG1抗体。
因此，在一个实施方式中，本发明的抗体是人IgG4抗体。
本公开提供了许多结构，其特征在于其可变区的氨基酸序列的抗体。
然而，该氨基酸序列在保持其与其特异性靶标的高度结合的同时，可能发生一些变化。
更具体地，可变区中的许多氨基酸可以用保守性置换来改变，并且可预测所得抗体的结合特征与野生型抗体序列的结合特征不同。抗体可变区中有许多氨基酸不直接与抗原作用或影响抗原结合，并且对于决定抗体结构不是关键的。例如，在任何公开的抗体中的预测的非必需氨基酸残基优选被来自同一类别的另一个氨基酸残基替代。识别不消除抗原结合的氨基酸保守性置换的方法是本领域公知的(参见,例如,Brumme l et al.,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi et al.Protein Eng.12(10):879-884(1999)；and Burks et al.Proc.Natl.Acad.Set USA94:412-417(1997))。Near etal.Mol.Immunol.30:369-377,1993解释了如何通过定点诱变影响或不影响结合。
Near等人认为只有突变的残基具有高的改变抗原结合的可能性。
大多数对结合亲和力(Near等人，表3)和结合不同形式的地高辛具有适度或负面影响(Near等人，表2)。因此，本公开也包括与本文公开的序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的各种序列。
在一些实施方式中，本文提供的抗体或其抗原结合片段具有1×10-6M或以下；5×10-7M或以下；1×10-7M或以下；5×10-8M或以下；1×10-8M或以下；5×10-9M或以下；或1×10- 9M或以下的解离常数(KD)。在一个实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段的KD为1x10-7M至1x 10-10M。在一个实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段的KD为1x 10-8M至1x10-10M。
本领域普通技术人员将理解用于测定抗体或其片段的KD的已知方法。
例如，在一个实施方式中，通过放射性抗原结合试验(RIA)来测量KD。
在一个实施方式中，使用Fab版本的目标抗体及其抗原进行RIA。例如，Fabs对抗原的溶液结合亲和力通过以下方法测定：在无标记抗原滴定系列存在的情况下，用最小浓度的(125I)-标记的抗原平衡Fab，然后用被抗Fab抗体包覆的板捕获被结合的抗原(参见，例如，Chen et al.,J.Mol.Biol.93:865-881(1999))。根据另一个实施方式，使用BIACORE表面等离子体共振试验来测量KD。
本文所用术语“表面等离子体共振”，是指允许通过检测生物传感器基质内的蛋白质浓度变化来分析实时相互作用的光学现象，例如使用BIACORE系统(Biacore LifeSciences division of GE Healthcare,Piscataway,NJ)。
另一方面，本公开提供一种抑制CD123活性的抗原结合蛋白。在一个实施方式中，该抗原结合蛋白的IC50为1000nM或以下。在另一个实施方式中，该IC50为100nM或以下；在另一个实施方式中，该IC50为10nM或以下。在另一个实施方式中，该IC50与本申请实施例中所述的抗体基本相同。在另一个实施方式中，该抗原结合蛋白抑制CD123活性的IC50与本申请中所述的抗体基本相同。
另一方面，本公开提供一种与在细胞表面表达的人CD 123结合的抗原结合蛋白，且当发生该结合时，抑制CD 123在该细胞中的信号活动，而不会造成细胞表面的CD 123的量显著减少。可以使用任何用于测定或估计细胞表面和/或细胞内部的CD123的量的方法。在其他实施方式中，该抗原结合蛋白与CD123表达细胞结合，使得低于约75％、50％、40％、30％、20％、15％、10％、5％、1％或0.1％的细胞表面CD123被内吞。
另一方面，本公开提供一种抗原结合蛋白，其在体外或体内(例如，对人类对象给药时)的半排出期为至少1天。在一个实施方式中，该抗原结合蛋白的半排出期为至少3天。在另一个实施方式中，该抗原结合蛋白的半排出期为4天或以上。在另一个实施方式中，该抗原结合蛋白的半排出期为8天或以上。在另一个实施方式中，该抗原结合蛋白被衍生或修饰，使得其与未衍生的或未修饰的抗原结合蛋白相比具有更长的半排出期。在另一个实施方式中，该抗原结合蛋白包括一个或多个点突变，以增加血清半排出期，例如WO00/09560所述。
本公开进一步提供多特异性抗原结合蛋白，例如双特异抗原结合蛋白，例如通过两个不同的抗原结合位点或区域，与CD123的两个不同表位结合或与CD123的一个表位和另一分子的一个表位结合的抗原结合蛋白。此外，本申请公开的双特异抗原结合蛋白，可以包括来自此述抗体之一的CD 123结合位点，以及来自另一此述抗体之一的第二CD 123结合区，其中涵盖本文引用其他出版物所描述的抗体。可选地，一种双特异性抗原结合蛋白可以包括一个来自此述抗体之一的抗原结合位点，以及来自本领域所知的另一种CD 123抗体或以已知方法或此述方法制备的抗体的第二抗原结合位点。
本领域中有多种已知的制备双特异性抗体的方法。所述方法包括使用杂交-杂交瘤(hybrid-hybridomas)，如Milstein et al.,1983,Nature 305:537所述，以及抗体片段的化学连接(Brennan et al.,1985,Science 229:81；Glennie et al.,1987,J.Immunol.139:2367；美国专利6,010,902)。此外，双特异性抗体可以通过重组途径来制备，例如使用亮氨酸拉链部分(即，来自优选地形成异源二聚体的Fos和Jun蛋白；Kostelnyet al.,1992,J.Immunol.148:1547)或其他锁匙互动域结构，如美国专利5,582,996所述。
额外的可用技术包括如美国专利5959083和5807706中所述的技术。
在另一方面，抗原结合蛋白包括抗体的衍生物。
该衍生化抗体可以包括能够赋予该抗体所需性质的任何分子或物质，例如在一种特定用途中增加其半排出期。该衍生化抗体可以包括，例如可检测(或标记的)部分(例如，放射性的、比色的、抗原性的或酶催化的分子，探测珠(例如磁性或
电子致密的(例如，金)珠)，或结合另一分子(例如生物素或链霉亲和素)的分子，治疗或诊断部分(例如放射性，细胞毒性或
药物活性部分)或增加抗体对于特定用途(例如，在体内或体外施用于受试者，例如人受试者或其他的用途)的适应性的分子。
可用于衍生抗体的分子的例子包括白蛋白(例如人血清白蛋白)和聚乙二醇(PEG)。连接白蛋白且聚乙二醇化的抗体衍生物可以使用本领域所熟知的技术来制备。在一个实施方式中，该抗体与甲状腺素运载蛋白(TTR)或TTR变体缀合或以其他方式连接。该TTR或TTR变体可以用选自以下种类的化学物质进行化学改性：葡聚糖、聚(N-乙烯基吡咯酮)、聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯多元醇及聚乙烯醇。
含有一个或多个抗原结合蛋白的寡聚物可以用作CD123的拮抗剂。寡聚物可以是共价连接或非共价连接的二聚体、三聚体或更高寡聚物的形式。也可以使用包括2个或更多抗原结合蛋白的寡聚物，其例子之一为同源二聚体。其他寡聚物包括异源二聚体、同源三聚体、异源三聚体、同源四聚体、异源四聚体等。
其中一个实施例指向包含多个抗原结合蛋白的寡聚体，所述抗原结合蛋白通过共价或非共价作用连接在与所述抗原结合蛋白融合的多肽部分之间。所述多肽可以是连接肽(间隔子)，或具有促进寡聚化性质的多肽。亮氨酸拉链和某些源自抗体的多肽也属于能够促进与之连接的抗原结合蛋白寡聚化的多肽，下文将详细描述。
在特定实施方式中，寡聚体包括2至4个抗原结合蛋白。寡聚体的抗原结合蛋白可以是任何形式，例如上述任何形式，例如变体或片段。优选地，寡聚体包括具有CD 123结合活性的抗原结合蛋白。
另一种用于制备寡聚抗原结合蛋白的方法包括使用亮氨酸拉链。亮氨酸拉链域是促进其所在的蛋白质的寡聚化的多肽。亮氨酸拉链最初是在若干DNA结合蛋白中识别出来的(Landschulz et al.,1988,Science 240:1759)，此后在各种不同蛋白中也发现过。在已知的亮氨酸拉链中，有天然存在的多肽及其衍生物，能够二聚化或三聚化。适用于制备可溶寡聚蛋白的亮氨酸拉链域的例子如WO 94/10308所述，以及如Hoppe et al.,1994,FEBSLetters 344:191中所述的源自肺表面活化蛋白D(SPD)的亮氨酸拉链。
Fanslow et al.,1994,Semin.Immunol.6:267-78描述了一种修饰亮氨酸拉链，其允许与其融合的外源蛋白稳定地三聚化。在一种途径中，在适当的宿主细胞中表达含有与亮氨酸拉链融合的抗CD 123抗体片段或衍生物的重组融合蛋白，并从培养基上清液中回收可溶寡聚抗CD123抗体片段或衍生物。
针对CD 123的抗原结合蛋白可用于例如在体外或体内检测CD 123多肽的存在的化验。所述抗原结合蛋白还可用于以免疫亲和色谱法对CD 123蛋白进行纯化。
阻断性抗原结合蛋白可用于本申请所公开的方法中。具有CD 123拮抗剂功能的所述抗原结合蛋白可用于治疗任何CD 123引起的病症，包括但不限于各种癌症。
抗原结合蛋白可用于体外过程或体内给药以抑制CD 123诱导的生物活性。因此，从CD123的激活中(直接或间接)获益的疾病可以得到治疗，所述疾病的例子如本文所述。在一个实施方式中，本发明提供了一种治疗方法，包括以降低CD 123诱导的生物活性的有效剂量，用CD 123阻断性抗原结合蛋白对由此需要的哺乳动物进行体内给药。
在一些实施方式中，抗原结合蛋白包括抑制CD123生物活性的全人单克隆抗体。
抗原结合蛋白，包括本文所述抗体及抗体片段，可以由多种常规技术中的任一种来制备。例如，可以使用任何本领域已知技术，从天然表达所述蛋白的细胞中纯化而得(例如，从产生一种抗体的杂交瘤中纯化该抗体)，或在重组表达体系中制备。例如，参见：Monoclonal Antibodies,Hybridomas:A New Dimension in Biological Analyses,Kennet et al.(eds.),Plenum Press,New York(1980)；and Antibodies:A LaboratoryManual,Harlow and Land(eds.),Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,N.Y.,(1988)。
本领域已知的任何表达体系均可用于制备本发明的重组多肽，包括本文所述抗体及抗体片段。一般来说，以含有编码一种所需多肽的DNA的重组表达载体来转化宿主细胞。可以使用的宿主细胞是原核生物，酵母或高等真核细胞。
原核生物包括革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌，例如E.coli或bacilli。更高等的真核细胞包括昆虫细胞和已建立的源于哺乳类的细胞系。合适的哺乳类宿主细胞系的例子包括猴肾细胞(ATCC CRL 1651)(Gluzman et al.,1981,Cell 23:175)的COS-7系,L细胞,293细胞、C127细胞、3T3细胞(ATCC CCL 163)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、BHK(ATCCCRL 10)细胞系，以及源于非洲绿猴肾细胞系CV1(ATCC CCL 70)的CV1/EBNA细胞系(如McMahan et al.,1991,EMBO J.10:2821所述)。
适用于细菌、真菌、酵母菌和哺乳类细胞宿主的克隆和表达载体如Pouwels etal.(Cloning Vectors:A Laboratory Manual,Elsevier,N.Y.,1985)所述。
转化后的细胞可以在促进多肽表达的条件下培养，且以常规蛋白纯化程序来回收多肽。一种所述纯化过程包括使用亲和色谱法，例如，在具有与其结合的CD123的全部或部分(例如，胞外区)的基质上。
本申请的思路中使用的多肽包括基本不含内源性污染杂质的基本同质的重组哺乳类抗CD123抗体多肽。
可以使用多种已知技术中的任一种来制备抗原结合蛋白并筛选所需性质。某些技术涉及分离编码目标抗原结合蛋白的多肽链(或其部分)的核酸
(例如，抗CD123抗体)，并通过重组DNA技术操纵核酸。
例如，该核酸可以与另一目标核酸融合或变异(例如，通过诱变或其他常规技术)以添加、删除或取代一个或多个氨基酸残基。
可以使用本领域中已知的任何标准方法来制备本发明中的多肽。在一个实施例中，使用重组DNA方法，通过将编码该多肽的核酸序列(例如cDNA)插入重组表达载体中，并在促进表达的条件下表达该DNA序列，从而制备所述多肽。
在一个实施方式中，本发明的特征在于编码本文所述的抗体或抗体片段的核酸。例如，在一个实施方式中，本发明包括编码SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.25,和SEQ ID NO.27所述的重链可变区和编码SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ IDNO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ IDNO.24,SEQ ID NO.26,和SEQ ID NO.28所述的轻链可变区的核酸。
编码任一个本文公开的各种多肽中的核酸可以通过化学合成制得。可以选择密码子使用来促进细胞中的表达。该密码子使用取决于所选用的细胞类型。针对E.coli和其他细菌，以及哺乳动物细胞、植物细胞、酵母菌细胞和昆虫细胞，开发了特定的密码子使用模式。
核酸操作的通用技术记载于例如Sambrook et al.,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Vols.1-3,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2ed.,1989，或F.Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology(Green Publishing andWiley-Interscience:New York,1987)及其定期更新中，在此以引用方式并入。
编码所述多肽的DNA可操作地连接在来自哺乳动物、病毒或昆虫基因的适宜转录元件或转录调控元件上。所述调控元件包括转录增强子、可选的用于控制转录的操作子序列、编码合适mRNA核糖体结合位点的序列、控制转录和翻译终止的序列。另外，还加入了在宿主中的复制能力(通常由复制起点赋予)和促进接合子识别的选择基因。
所述重组DNA还可以包括可用于纯化该蛋白的任何类型蛋白标记序列。蛋白标记的示例包括但不限于组蛋白标记、FLAG标记、原癌基因标记、HA标记或GST标记。适用于细菌、真菌、酵母菌和哺乳动物细胞宿主的克隆和表达载体可以参见Cloning Vectors:ALaboratory Manual,(Elsevier,N.Y.,1985)。
采取适用于宿主细胞的方法将该表达结构引入宿主细胞。本领域已知有各种用于将核酸引入宿主细胞的方法，包括但不限于：电穿孔；以氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖(DEAE-dextran)或其他物质进行的转染；
微弹轰击法；脂质转染；以及，感染(其中载体充当感染原)。适当的宿主细胞包括原核细胞、酵母菌、哺乳类细胞或细菌细胞。
适当的细菌包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物，例如，E.coli或Bacillus spp。酵母菌，优选为Saccharomyces菌种，也可以用于多肽制备。各种哺乳类或昆虫细胞培养体系也可用于表达重组蛋白。用于在昆虫细胞中制备外源蛋白的Baculovirus体系可参见综述：Luckow and Summers(Bio/Technology,6:47,1988)。适当的哺乳类宿主细胞系的例子包括内皮细胞、COS-7猴肾细胞、CV-1、L细胞、C127、3T3、中国仓鼠卵巢(CHO)、人胚肾细胞、HeLa、293、293T和BHK细胞系。通过培养适当的宿主/载体体系来表达重组蛋白，以制备纯化多肽。在许多应用中，本文公开的众多多肽的小尺寸使得在E.coli中表达成为优选表达方法。然后，从培养基或细胞提取物中纯化该蛋白。
蛋白还可以使用细胞翻译体系来制备。为此，必须对编码该多肽的核酸进行修饰，以允许体外转录以产生mRNA并允许该mRNA在所用的特定无细胞体系(真核(例如哺乳类或酵母菌)无细胞翻译体系或原核(例如细菌)无细胞翻译体系)中进行无细胞翻译。
CD 123结合性多肽还可以通过化学合成来制备(例如，通过如Solid PhasePeptide Synthesis,2nd ed.,1984,The Pierce Chemical Co.,Rockford,I11.中所述的方法)。还可以通过化学合成来产生对蛋白的修饰。
本发明中的所述多肽可以通过蛋白化学领域众所周知的蛋白分离/纯化方法进行纯化。非限制性的例子包括：提取、重结晶、盐析(例如，硫酸铵或硫酸钠)、离心、渗析、超滤、吸附层析、离子交换层析、疏水层析、正相层析、反相层析、凝胶过滤、凝胶渗透层析、亲和层析、电泳、逆流分布或其任意组合。纯化后，多肽可以交换入不同缓冲液，和/或以本领域所知各种方法中的任一种浓缩。
纯化多肽优选为具有至少85％纯度，更优选的纯度为至少95％，最优选纯度为至少98％。无论该纯度的确切数值是多少，该多肽的纯度足以用作医药产品。
在一些实施方式中，本公开提供与CD123结合的单克隆抗体。单克隆抗体可以使用本领域已知的任何方法来制备，例如从完成免疫接种程序的转基因动物中收获脾细胞并使其无限增殖化。脾细胞可以使用任何本领域已知的技术来无限增殖，例如通过将它们与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤。
用于制备融合蛋白的杂交瘤技术的骨髓瘤细胞优选为不产生抗体、融合效率高，且缺乏某些酶从而无法在某些仅支持所需融合细胞(杂交瘤)生长的选择性培养基中生长的细胞。适用于小鼠融合的细胞系的例子包括Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NS1/1.Ag 4 1、Sp210-Agl4、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG 1.7和S194/5XX0Bul；用于大鼠融合的细胞系的例子包括R210.RCY3、Y3-Ag 1.2.3、IR983F和48210。可用于细胞融合的其他细胞系有U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2和UC729-6。
本发明的抗原结合蛋白的抗体结合片段可以用本领域熟知的常规技术制备。
多肽的翻译后修饰
在一些实施例中，本发明的结合性多肽还可以包括翻译后修饰。示范性翻译后蛋白修饰包括磷酸化、乙酰化、甲基化、ADP-核糖基化、泛素化、糖基化、羰基化、类泛素化、生物素酰化或添加多肽侧链或疏水基。由此一来，修饰后的可溶性多肽可能含有非氨基酸成分，例如脂类、多糖或单糖、磷酸。糖基化的一种优选形式为唾液酸化，其将一个或多个唾液酸部分链接至所属多肽。唾液酸部分提高蛋白的可溶性及血清半排出期，同时还降低其可能的免疫原性。参见Raju et al.Biochemistry.2001 31；40(30):8868-76。
在一个实施方式中，所述可溶性多肽的修饰形式包括将所述可溶性多肽链接至非蛋白质高分子。在一个实施方式中，所述高分子为聚乙二醇(PEG)、聚丙醇或聚氧化烯烃，如美国专利4640835；4496689；4301144；4670417；4791192或4179337所述。
PEG是可溶于水的聚合物，其市面有售，或可以根据本领域所熟知的方法(Sandlerand Karo,Polymer Synthesis,Academic Press,New York,Vol.3,pages 138-161)通过乙二醇的开环聚合反应制备而成。术语“PEG”用于广泛涵盖任何聚乙二醇分子，无论其大小或PEG末端的修饰为何，且可以用以下公式代表：X--O(CH2CH2O)n-CH2CH2OH(1)，其中n＝20-2300且X为H或一种末端修饰(例如C1-4烷基)。在一个实施例中，本发明的PEG的一个末端以羟基或甲氧基结尾，即X为H或CH3(“甲氧基PEG”)。PEG还可以进一步包括：结合反应所必需的化学基团；源于该分子的化学合成的化学基团；或作为该分子的部分的最佳距离的间隔子的化学基团。此外，所述PEG可以由一个或多个连接在一起的PEG侧链组成。具有多个PEG链的PEGs称为多臂或分支PEGs。
分支PEGs可以通过例如向各种多元醇添加聚氧化乙烯来制备。例如，可以从季戊四醇和环氧乙烷制备4臂分支PEG。分支PEG参见例如EP-A0473084和美国专利5932462所述。5,932,462中所述的氨基酸序列的CDRs的重链可变区。PEGs的一种形式包括两个通过赖氨酸的主要氨基链接的PEG侧链(PEG2)(Monfardini et al.,Bioconjugate Chem.6(1995)62-69)。相对于未修饰结合性多肽的清除率，PEG修饰的多肽的血清清除率可以降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或甚至90％。该PEG修饰的多肽的半排出期(t1/2)也可能相对于未修饰蛋白得到改善。相对于未修饰结合性多肽的半排出期，该PEG修饰的多肽的半排出期可以被改善至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、125％、150％、175％、200％、250％、300％、400％或500％，或甚至1000％。在一些实施方式中，该蛋白半排出期是体外测定的，例如在盐水缓冲溶液或血清中。在其他实施方式中，该蛋白半排出期是体内半排出期，例如该蛋白在血清或其他动物体液中的半排出期。
治疗方法，剂型和给药模式
本公开进一步提供一种治疗广谱哺乳动物癌症的方法，其包括施用本发明的抗CD123抗体或抗原结合片段。
在一个实施方式中，本公开提供一种治疗癌症的方法，包括施用抗CD 123抗体或其片段，其中所述抗体选自：以结合亲和度至少为10-6M与CD123表位结合的IgG类全人抗体；含有重链可变区和轻链可变区的Fab全人抗体片段；含有重链可变区和轻链可变区以及连接所述重链和轻链可变区的肽连接头的单链人抗体。可用于本发明的抗体和片段的重链和轻链可变区(以及所述序列内的CDR)如SEQ ID Nos.1-30所述。
在一个实施方式中，本文所述方法包括全人Fab抗体片段的用途，该全人Fab抗体片段包括与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27,SEQ ID NO.29及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同的重链可变区序列，且包括与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ IDNO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ IDNO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28,SEQ ID NO.30及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同的轻链可变区序列。
在一个实施方式中，本文所述方法包括单链人抗体的用途，该单链人抗体包括与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ IDNO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27,SEQ ID NO.29及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同的重链可变区序列，且包括与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ IDNO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ IDNO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28,SEQ ID NO.30及其组合的氨基酸序列至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同的轻链可变区序列。
在一个实施方式中，该全人抗体包括重链和轻链，其中所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(此处称为C38A1),SEQ ID NO.3/SEQ IDNO.4(此处称为C38A2),SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(此处称为C38B1),SEQ ID NO.7/SEQ IDNO.8(此处称为C38B4),SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(此处称为C38B7),SEQ ID NO.11/SEQID NO.12(此处称为C38C4),SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(此处称为C38C9),SEQ IDNO.15/SEQ ID NO.16(此处称为C38D1),SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(此处称为C38D2),SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20(此处称为C38D5),SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(此处称为C38D8),SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24(此处称为C38D10),SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26(此处称为C38D11),SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28(此处称为C38F8),SEQ ID NO.29/SEQ IDNO.30(此处称为C38G8)，及其组合。
优选地，全人抗体Fab片段包括重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(此处称为C38A1),SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4(此处称为C38A2),SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(此处称为C38B1),SEQ IDNO.7/SEQ ID NO.8(此处称为C38B4),SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(此处称为C38B7),SEQID NO.11/SEQ ID NO.12(此处称为C38C4),SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(此处称为C38C9),SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16(此处称为C38D1),SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(此处称为C38D2),SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20(此处称为C38D5),SEQ ID NO.21/SEQ IDNO.22(此处称为C38D8),SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24(此处称为C38D10),SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26(此处称为C38D11),SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28(此处称为C38F8),SEQ IDNO.29/SEQ ID NO.30(此处称为C38G8)，及其组合。
在一个实施方式中，全人单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中该单链全人抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQID NO.10,SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQID NO.16,SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQID NO.22,SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQID NO.28,SEQ ID NO.29/SEQ ID NO.30，及其组合。
给药的技术和剂量取决于特定多肽类型及治疗中的特定症状，但能够被本领域技术人员容易地确定。一般来说，监管机构要求用作药物的蛋白试剂的制型能够使得致热源达到可接受的低水平。由此一来，药物制型通常会与其他制型非常不同，因为其几乎没有致热源，或至少仅含有由适当监管机构(例如，FDA)所确定的可接受致热源水平。
本公开的治疗组合物可以以单位剂型与药学可接受的稀释剂、载体或赋形剂一同给药。给药的非限定性示例可以是非肠道的(例如静脉注射，皮下注射)、口服或外用的。此外，可以使用任何基因治疗技术，例如裸DNA递送、重组基因和载体、基于细胞的递送，包括间接体内操作患者细胞等。
该组合物可以丸剂、片剂、胶囊、液体或持续释放片剂的形式用于口服给药；或以液体形式用于静脉注射、皮下注射或非肠道给药；或以凝胶剂、洗剂、软膏剂、乳膏剂或聚合物形式进行外用给药。
在一些实施方式中，所公开的抗体通过吸入给药，但由于全IgG抗体的分子尺寸(～150kDa)，其雾化可能受限。
为了使可用的商用雾化装置最大化，可能需要更小的Fab片段。
本领域中熟知的制型方法可以参见例如"Remington:The Science and Practiceof Pharmacy"(20th ed.,ed.A.R.Gennaro A R.,2000,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,Pa.)。外用给药的制型可以包括例如赋形剂、无菌水、盐水、聚亚烷基二醇如聚乙二醇、植物原料油或氢化萘。可以使用可生物相容、可生物降解的丙交酯聚合物，丙交酯/乙交酯共聚物，或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物来控制化合物的释放。
可以使用nM颗粒剂型(如可生物降解的nM粒子、固体脂质nM粒、脂质体)来控制化合物的体内分布。其他潜在的有用非肠道递送体系包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可植入输注系统和脂质体。该化合物的制型浓度根据若干因素而改变，包括药物给药剂量和给药途径。
可选地，所述多肽可以作为药学可接受的盐的形式给药，例如药物产业中常用的无毒酸加成盐或金属络合物。酸加成盐的例子包括有机酸，例如乙酸、乳酸、双羟萘酸、马来酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、苯甲酸、棕榈酸、辛二酸、水杨酸、酒石酸、甲磺酸、甲苯磺酸或三氟乙酸等；聚合酸如单宁酸、羧甲基纤维素等；以及，无机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸等。金属络合物包括锌、铁等等。在一个实例中，所述多肽在乙酸钠的存在下配制，以增加热稳定性。
口服制型包括：含活性成分和无毒药学可接受赋形剂混合物的片剂。所述赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂或填料(例如蔗糖或山梨醇)、润滑剂、助流剂和抗粘剂(例如硬脂酸镁，硬脂酸锌，硬脂酸，二氧化硅，氢化植物油或滑石)。
口服制型还可以提供为咀嚼片形式，或活性成分与惰性固体稀释剂混合的硬质明胶胶囊，或活性成分与水或油培养基混合的软质明胶胶囊。
治疗有效剂量指的是对给药对象产生疗效的剂量。确切剂量取决于需治疗的病症，且可以由本领域技术人员使用已知技术来查明。一般来说，该多肽的给药为每天约0.01g/kg至约50mg/kg，优选为每日0.01g/kg至约30mg/kg，最优选为每日0.1mg/kg至约20mg/kg。该多肽可以每天给药(例如每日一次、两次、三次或四次)或优选为较低频率给药(例如，每周、每两周、每三周、每月或每季度)。此外，本领域已知，可能需要根据年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、给药时间、药物相互作用和疾病严重程度来调节，这可以由本领域技术人员以常规实验来确定。
CD 123结合多肽可单独给药或与一种或多种附加疗法共同给予，例如化疗、放疗、免疫疗法、手术治疗或其任意组合。如上所述，在其他治疗策略中，也可以使用长期疗法或辅助疗法。所述方法的某些实施例中，可以共同(同时)或不同时期(前后相继)地用一种或多种多肽治疗剂给药。此外，多肽治疗剂可以与另一种类治疗癌症或抑制血管生成的化合物共同给药。在某些实施例中，本发明所述抗CD123抗体剂可单独使用。
在一些实施例中，所述结合性多肽或其片段用于诊断目的时可以标记或不标记。典型地，诊断性分析需要检测结合性多肽与CD123之间结合而形成的复合物。所述结合性多肽或其片段可以被直接标记，类似于抗体。可以使用各种标记，包括但不限于，放射性核素、荧光剂、酶、酶底物、辅酶因子、酶抑制剂和配体(例如生物素、半抗原)。本领域技术人员熟知多种适当的免疫分析法(例如参见美国专利3817827、3850752、3901654、4098876)。未标记的结合性多肽可用于化验分析，例如凝集试验。未标记的结合性多肽还可以与另一种(一种或多种)可用于检测该结合性多肽的适当试剂(例如能与该结合性多肽反应的已标记抗体或其他适当试剂(如标记的蛋白A))组合使用。
在一个实施方式中，本发明的结合性多肽可用于酶免疫分析，其中所述多肽与酶缀合。当含有CD123蛋白的生物样本与所述结合性多肽CD123接触时，结合性多肽和CD123蛋白之间发生结合。在一个实施方式中，含有表达CD123蛋白的细胞(例如内皮细胞)的样本与所述抗体接触，而在结合性多肽和载有能被该结合性多肽识别的CD123蛋白的细胞之间发生结合。已结合细胞可以从未结合试剂中分离，且可以测定特异结合至细胞上的结合性多肽-酶嵌合体的存在，例如通过令该样本与能够在该酶作用下产生颜色或其他可检测变化的酶底物相接触。在又一个实施例中，所述结合性多肽可以不标记，而添加第二种已标记多肽(例如一种抗体)来识别所述结合性多肽。
在一些方面中，还可以制备用于检测生物样本中的CD123蛋白的存在的试剂盒。所述试剂盒可包括与CD123蛋白或所述受体的部分相结合的CD123结合性多肽，以及一种或多种适用于检测结合性多肽与受体蛋白或其部分之间的复合物的存在的辅助试剂。本发明的多肽组合物可以以冻干形式单独提供，也可与其它表位特异性的其他抗体组合提供。所述标记或未标记的结合性多肽和/或抗体可以与辅料(例如，缓冲液，例如Tris、磷酸和碳酸盐缓冲液；稳定剂；赋形剂；杀菌剂和/或惰性蛋白例如牛血清白蛋白)一起包含在试剂盒中。例如，该结合性多肽和/或抗体可以与辅料共同提供为冻干形式，或辅料可以单独提供，由使用者来组合。一般来说，所述辅料的含量低于多肽或抗体浓度的约5％重量，且通常总量至少为多肽或抗体浓度的约0.001％重量。当使用了第二种能够与该结合性蛋白结合的抗体时，所述抗体在该试剂盒中可以例如提供在单独的试管或容器中。该第二抗体，若存在，一般具有标记，且制型形式可以与上述抗体制型类似。
使用标准的单字母或三字母缩写来表示多肽序列。除非另有说明，否则每个多肽序列的氨基端在左侧，羰基端在右侧；每个单链核酸序列，以及每个双链核酸序列的顶链，其5’端在左侧，3’端在右侧。还可以通过说明特定多肽序列与参照序列的区别，来描述该序列。
优选地，待治疗的广谱哺乳动物癌症选自非霍奇金淋巴瘤(NHL)，伯基特淋巴瘤(BL)，多发性骨髓瘤(MM)，B型慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)，B和T型急性淋巴细胞白血病(ALL)，T细胞淋巴瘤(TCL)，急性骨髓细胞白血病(AML)，毛细胞白血病(HCL)，霍奇金淋巴瘤(HL)和慢性骨髓细胞白血病(CML)。
本文所述的CD123抗体看完用于治疗、延缓、防止复发或缓解癌症或其他肿瘤疾病，包括血液恶性肿瘤和/或CD123+肿瘤。本文所述的CD123抗体可用于治疗癌症，所述癌症选自非霍奇金淋巴瘤(NHL)，急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性骨髓细胞白血病(AML)，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性骨髓细胞白血病(CML)，多发性骨髓瘤(MM)，乳腺癌，卵巢癌，头颈癌，膀胱癌，黑素瘤，结肠直肠癌，胰腺癌，肺癌，平滑肌瘤，平滑肌肉瘤，神经胶质瘤，恶性胶质瘤和实体瘤。所述实体瘤选自乳腺肿瘤，卵巢肿瘤，肺肿瘤，胰腺肿瘤，前列腺肿瘤，黑素瘤肿瘤，结肠直肠肿瘤，肺肿瘤，头颈肿瘤，膀胱肿瘤，食道肿瘤，肝肿瘤和肾肿瘤。
如本文所用，“血液癌症”是指一种血液的癌症，并且包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤等。“白血病”是指一种血液的癌症，血液中产生太多对抗感染无效的白细胞，从而挤掉构成血液的其他部分，如血小板和红细胞。据了解，白血病病例分为急性或慢性。
某些形式的白血病包括急性淋巴细胞性白血病(ALL)；急性骨髓细胞白血病(AML)；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；慢性骨髓细胞白血病(CML)；骨髓增生性疾病/肿瘤(MPDS)；和骨髓增生异常综合征。“淋巴瘤”可以指霍奇金淋巴瘤，无痛、侵袭性的非霍奇金淋巴瘤，伯基特淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤(小细胞和大细胞)等。
骨髓瘤可以指多发性骨髓瘤(MM)，巨细胞性骨髓瘤，重链骨髓瘤和轻链或Bence-Jones骨髓瘤。
实施例1
用ADCC测定法测定抗CD123抗体与CD123表达细胞结合并促进功能活性的能力。
用于该测定的效应细胞是在IL-2(100U/ml)存在的情况下培养一夜的经纯化的NK细胞。靶细胞是RPMI8226细胞，一种骨髓瘤细胞系，以每孔5×103加入孔中。
然后以1微克每毫升加入测试抗体，并在37℃下与RPMI8226细胞培养20分钟。
洗涤后，以1×105/孔加入效应细胞，得到效应细胞与靶细胞比例为20:1。该测定可以进行至少4小时，之后使用Promega Cyto-glo试剂盒评价细胞毒性。
图1中的数据显示，测试的5种抗CD123抗体结合并促进针对RPMI8226靶细胞的ADCC活性。
序列表
序列表
<110> 索伦托治疗有限公司
<120> 与CD123结合的抗体治疗方法
<130> CD123-1
<150> 62/144899
<151> 2015-04-08
<160> 28
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 119
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Glu Trp Phe Ser Glu Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 108
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Gln Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln Lys Val
1 5 10 15
Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Asn Asn Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln Thr Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala
85 90 95
Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 3
<211> 118
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Ser Asp Ala Leu Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 111
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Pro Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 5
<211> 118
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asp Tyr Tyr Glu Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 110
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ala Asp Val Gly Gly Asp
20 25 30
Tyr Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Thr Ile Tyr Asp Val Ser Glu Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Gly Thr Trp Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 7
<211> 119
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Thr Arg Gly Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 8
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105
<210> 9
<211> 130
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Lys Leu
50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Glu Glu Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Gly Ser Trp Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 10
<211> 109
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Gln Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 11
<211> 118
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Asp Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Tyr Asp Ser Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 110
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 12
Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Gln Phe Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Lys Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Ser Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn His Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 13
<211> 120
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gln Gln Trp Pro Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 111
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ala Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln His Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Tyr Gln Arg Pro Leu Glu Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Arg Leu
85 90 95
Asn Gly Phe Tyr Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 15
<211> 118
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Trp Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu His
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Phe Arg Asp Tyr Tyr Phe Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 111
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 16
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ile Asp Val Asp Lys Asp
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Arg Val Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp His Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser
85 90 95
Leu Ser Ser Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 17
<211> 121
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Asp Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Tyr Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 111
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 18
Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Arg Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Gly Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 19
<211> 122
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Thr Ile Pro Lys Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Val Val Pro Ala Ala Ile Val Glu Ala Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 20
<211> 122
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 20
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Thr Ile Pro Lys Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Val Val Pro Ala Ala Ile Val Glu Ala Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 21
<211> 126
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Met Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg His Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Tyr Thr Gly Asp Arg Lys Tyr Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Leu Thr Val Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ala Thr Ser Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Thr Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Glu Tyr His Asp Ser Met Ile Gly Tyr Tyr Val Gly Gly
100 105 110
Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 22
<211> 108
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 22
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Pro Gln Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 23
<211> 117
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 23
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 110
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 24
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly His
1 5 10 15
Glu Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Ala Ser Glu Ile Pro Asp Arg Phe Phe
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Val Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Asn Asp Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 25
<211> 121
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Asp Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Tyr Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 111
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 26
Leu Pro Val Leu Thr Gln Ser Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Arg Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Gly Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 27
<211> 124
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Glu His Tyr Tyr Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 28
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Thr Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105

Claims (12)

1.一种与CD123表位结合的IgG类全人抗体，其特征在于，所述全人抗体包括，与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同的重链可变区序列,和与选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ IDNO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同的轻链可变区序列。
2.根据权利要求1所述的全人抗体，其特征在于，所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(此处称为LAA3),SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4(此处称为LAA4),SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(此处称为LAA6),SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8(此处称为LAA8),SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(此处称为LAB11),SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12(此处称为LAB2),SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(此处称为LAC11),SEQ ID NO.15/SEQ IDNO.16(此处称为LAC12),SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(此处称为LAE4),SEQ ID NO.19/SEQID NO.20(此处称为LAF5),SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(此处称为LAF7),SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24(此处称为LAG12),SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26(此处称为LAH3),SEQ IDNO.27/SEQ ID NO.28(此处称为LAH5)，及其组合。
3.一种Fab全人抗体片段，包括来自重链的重链可变区和来自轻链的轻链可变区，其特征在于，所述重链可变区序列与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ IDNO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ IDNO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，所述轻链可变区序列选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ IDNO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ IDNO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同。
4.根据权利要求3所述的全人Fab抗体片段，其特征在于，所述抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4,SEQ IDNO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10,SEQ IDNO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16,SEQ IDNO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22,SEQ IDNO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28，及其组合。
5.一种单链人抗体，包括来自重链的重链可变区、来自轻链的轻链可变区、连接重链和轻链可变区的连接肽，其特征在于，所述重链可变区序列与选自SEQ ID NO.1,SEQ IDNO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ IDNO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ IDNO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同，所述轻链可变区序列选自SEQ ID NO.2,SEQID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ IDNO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ IDNO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同。
6.根据权利要求5所述的全人单链人抗体，其特征在于，所述全人单链抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4,SEQID NO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10,SEQ IDNO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16,SEQ IDNO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22,SEQ IDNO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28，及其组合。
7.根据权利要求5所述的全人单链人抗体，其特征在于，所述全人单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述全人单链抗体包括选自下组的重链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ IDNO.8,SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ IDNO.14,SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ IDNO.20,SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ IDNO.26,SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28，及其组合。
8.一种用于治疗广谱哺乳动物癌症的方法，包括以有效剂量的抗CD123多肽进行给药，其特征在于，所述抗CD123多肽选自：以至少10-6M的结合亲和力与CD123表位结合的IgG类全人抗体；含有重链可变区和轻链可变区的Fab全人抗体片段；含有重链可变区和轻链可变区以及连接所述轻链可变区和重链可变区的连接肽的单链人抗体；及其组合；
其中，所述全人抗体包括，与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ IDNO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ IDNO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同的重链可变区序列,和选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ IDNO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ IDNO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合组的氨基酸序列至少95％相同的轻链可变区序列；其中，所述Fab全人抗体片段包括，与选自SEQ IDNO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ IDNO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQ ID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ IDNO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同的重链可变区序列，和选自SEQID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ IDNO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ IDNO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同的轻链可变区序列；以及
其中，所述单链人抗体片段包括，与选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13,SEQ ID NO.15,SEQ ID NO.17,SEQID NO.19,SEQ ID NO.21,SEQ ID NO.23,SEQ ID NO.25,SEQ ID NO.27及其组合的氨基酸序列至少95％相同的重链可变区序列，和选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.28及其组合的氨基酸序列至少95％相同的轻链可变区序列。
9.根据权利要求8所述的用于治疗广谱哺乳动物癌症的方法，其特征在于，所述全人抗体包括选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQID NO.4,SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ IDNO.10,SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ IDNO.16,SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQ IDNO.22,SEQ ID NO.23/SEQ ID NO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQ IDNO.28，及其组合。
10.根据权利要求8所述的用于治疗广谱哺乳动物癌症的方法，其特征在于，所述全人抗体Fab片段包括重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体包含选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.5/SEQ IDNO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.11/SEQ IDNO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.17/SEQ IDNO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.23/SEQ IDNO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28，及其组合。
11.根据权利要求8所述的用于治疗广谱哺乳动物癌症的方法，其特征在于，所述全人单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述全人单链抗体包含选自下组的重链/轻链可变区序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.5/SEQID NO.6,SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8,SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.11/SEQ IDNO.12,SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14,SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16,SEQ ID NO.17/SEQ IDNO.18,SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20,SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22,SEQ ID NO.23/SEQ IDNO.24,SEQ ID NO.25/SEQ ID NO.26,SEQ ID NO.27/SEQ ID NO.28，及其组合。
12.根据权利要求8所述的用于治疗广谱哺乳动物癌症的方法，其特征在于，所述待治疗的广谱哺乳动物癌症选自：非霍奇金淋巴瘤(NHL)，伯基特淋巴瘤(BL)，多发性骨髓瘤(MM)，B型慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)，B和T型急性淋巴细胞白血病(ALL)，T细胞淋巴瘤(TCL)，急性骨髓细胞白血病(AML)，毛细胞白血病(HCL)，霍奇金淋巴瘤(HL)和慢性骨髓细胞白血病(CML)。
CN201680033397.1A 2015-04-08 2016-04-08 与cd123结合的抗体治疗方法 Pending CN108025065A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562144899P 2015-04-08 2015-04-08
US62/144,899 2015-04-08
PCT/US2016/026546 WO2016164657A2 (en) 2015-04-08 2016-04-08 Antibody therapeutics that bind cd123

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108025065A true CN108025065A (zh) 2018-05-11

Family

ID=57072062

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680033397.1A Pending CN108025065A (zh) 2015-04-08 2016-04-08 与cd123结合的抗体治疗方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US9969807B2 (zh)
EP (1) EP3280442A4 (zh)
JP (1) JP2018513856A (zh)
CN (1) CN108025065A (zh)
WO (2) WO2016164658A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109810195A (zh) * 2018-11-27 2019-05-28 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 一种鼠抗人cd123单克隆抗体及应用
CN110804096A (zh) * 2019-11-21 2020-02-18 深圳普瑞金生物药业有限公司 Cd123单域抗体、核苷酸序列、表达载体及试剂盒

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11685926B2 (en) 2007-02-01 2023-06-27 Enza Zaden Beheer B.V. Disease resistant onion plants
CN106573963B (zh) 2014-06-18 2021-07-20 安莎种子公司 疫霉属抗性的属于茄科的植物
US10100118B2 (en) * 2015-04-08 2018-10-16 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind CD123
CN111542537B (zh) * 2018-06-15 2022-09-27 康源博创生物科技(北京)有限公司 抗cd123抗体及其制备方法和应用
CN111620944B (zh) * 2020-06-01 2023-03-21 长春师范大学 一种全人源化抗乙肝病毒单克隆抗体、制备方法及其应用
CN112521506B (zh) * 2020-12-11 2022-09-09 华道(上海)生物医药有限公司 一种cd123抗原结合片段及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6177078B1 (en) * 1995-12-29 2001-01-23 Medvet Science Pty Limited Monoclonal antibody antagonists to IL-3
US6733743B2 (en) * 2000-03-06 2004-05-11 University Of Kentucky Research Foundation Methods to impair hematologic cancer progenitor cells and compounds related thereto
US20120189540A1 (en) * 2007-04-13 2012-07-26 Stemline Therapeutics, Inc. IL3Ralpha Antibody Conjugates And Uses Thereof

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA06010887A (es) 2004-03-23 2007-03-08 Amgen Inc Anticuerpos monoclonales especificos para ox4ol (cd 134l) humano.
EA201100642A1 (ru) * 2005-04-25 2011-12-30 Пфайзер Инк. Антитела к миостатину
WO2009070844A1 (en) * 2007-12-06 2009-06-11 Csl Limited Method of inhibition of leukemic stem cells
CN102459342B (zh) 2009-04-27 2015-01-07 协和发酵麒麟株式会社 用于治疗血液肿瘤的抗il-3ra抗体
AU2011267837B2 (en) * 2010-06-15 2016-06-23 Csl Limited Immunotherapeutic method involving CD123 (IL-3Ralpha) antibodies and immunostimulating complex
CA2868883C (en) 2012-03-30 2022-10-04 Sorrento Therapeutics Inc. Fully human antibodies that bind to vegfr2
CA2872018A1 (en) * 2012-05-17 2013-11-21 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind egfr
US9573988B2 (en) * 2013-02-20 2017-02-21 Novartis Ag Effective targeting of primary human leukemia using anti-CD123 chimeric antigen receptor engineered T cells

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6177078B1 (en) * 1995-12-29 2001-01-23 Medvet Science Pty Limited Monoclonal antibody antagonists to IL-3
US6733743B2 (en) * 2000-03-06 2004-05-11 University Of Kentucky Research Foundation Methods to impair hematologic cancer progenitor cells and compounds related thereto
US20120189540A1 (en) * 2007-04-13 2012-07-26 Stemline Therapeutics, Inc. IL3Ralpha Antibody Conjugates And Uses Thereof

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109810195A (zh) * 2018-11-27 2019-05-28 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 一种鼠抗人cd123单克隆抗体及应用
CN109810195B (zh) * 2018-11-27 2022-08-02 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 一种鼠抗人cd123单克隆抗体及应用
CN110804096A (zh) * 2019-11-21 2020-02-18 深圳普瑞金生物药业有限公司 Cd123单域抗体、核苷酸序列、表达载体及试剂盒
CN110804096B (zh) * 2019-11-21 2021-07-06 深圳普瑞金生物药业有限公司 Cd123单域抗体、核苷酸序列、表达载体及试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
WO2016164658A1 (en) 2016-10-13
EP3280442A4 (en) 2018-10-31
US9969807B2 (en) 2018-05-15
JP2018513856A (ja) 2018-05-31
WO2016164657A2 (en) 2016-10-13
WO2016164657A3 (en) 2016-11-10
EP3280442A2 (en) 2018-02-14
US20160297882A1 (en) 2016-10-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107921122A (zh) 与cd38结合的抗体治疗剂
CN114380912B (zh) 结合cd47的抗体治疗剂
CN104736168B (zh) 与pd-l1结合的抗原结合蛋白
CN108025065A (zh) 与cd123结合的抗体治疗方法
CN107922484A (zh) 结合tim3的抗体治疗剂
CN105050618B (zh) 与c-Met结合的抗原结合蛋白
CN107206076A (zh) 靶向b‑细胞成熟抗原的抗体及其用途
CN107001476A (zh) 用于增强的免疫应答和癌症治疗的组合物和方法
CN109715821A (zh) 与pd-l1结合的抗原结合蛋白
CN104105708A (zh) PDGF受体β结合多肽
WO2019091449A1 (zh) Cd96抗体、其抗原结合片段及医药用途
CN105120890B (zh) 与ErbB3结合的抗原结合蛋白
EP3744734A1 (en) Anti-4-1bb antibody, antigen-binding fragment thereof and medical use thereof
JP2020520939A (ja) Ｐｄ−ｌ１抗体医薬組成物およびその使用
EP3992211A1 (en) Anti-cea antibody and application thereof
CN108025063A (zh) 结合psma的抗体治疗剂
CN116261595A (zh) 抗vegf-抗pd-l1双特异性抗体、其药物组合物及用途
CN109988240A (zh) 抗gpc-3抗体及其用途
CN111375059B (zh) 一种抗gitr抗体药物组合物及其用途
CN106456732A (zh) 结合wisp1的抗体疗法
CN117279950A (zh) 一种靶向il-18bp的抗体及其应用
CN107148282A (zh) 结合cxcr3的抗原结合蛋白
KR20150013935A (ko) 트랜스포터에 대한 항체 및 이의 용도
TWI685504B (zh) 抗gitr抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途
CN104994872B (zh) 与igf1r结合的抗原结合蛋白

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180511

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication