CN108004260A - 调节动物肠道菌群结构的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种调节动物肠道菌群结构的方法，该方法通过控制目的动物的肠道菌群相关基因的表达调节所述目的动物的肠道菌群结构。由此，能够通过针对特定的肠道菌群功能基因的调控，实现对肠道菌群结构的精准调控。

Description

调节动物肠道菌群结构的方法
技术领域
本发明涉及调节动物肠道菌群结构的方法。
背景技术
肠道菌群是在人体肠道共生的微生物总称，它与人的健康有着紧密的关系。从发现肠道微生物开始，人们就尝试着通过改变肠道微生物，改善人体的健康状况。
早期人们口服酸奶等乳酸菌发酵产物，向肠道中大量补充乳酸菌，改变肠道菌群的结构。后来，人们通过研究，发现一些特定的低聚糖和多糖能够促进双歧杆菌等肠道益生菌的生长，从而服用这类物质达到促进肠道益生菌增加的目的。但是，现有的方法都只能直接或间接的增加特定的肠道益生菌从而改变肠道菌群结构，改善肠道健康状况。
因而，目前调节动物肠道菌群结构的方法仍有待改进。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种改变肠道菌群结构的新手段。
需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
现阶段，主要通过服用乳酸制品，菌剂，菌片等直接向肠道中补充特定的乳酸杆菌，双歧杆菌等益生菌；或者，通过服用特定的低聚糖和多糖等，使肠道中的双歧杆菌等益生菌增殖，改变肠道菌群结构；结合上述两种方案，同时补充益生菌和特定的低聚糖、多糖，增加肠道益生菌的存活几率，改变肠道菌群结构。然而，上述方案都不能直接针对肠道菌群的功能进行调控，而是间接通过益生菌等对肠道菌群的构成进行调节，作用间接而且不明确，无法实现精准调节。
目前，科学研究已经细化到研究肠道菌群基因的表达和功能改变对人体健康产生的影响。因而，发明人旨在通过针对特定的肠道菌群功能基因的调控，实现对肠道菌群结构的精准调控。
然而，特定的肠道菌群功能基因的调控难度较大，需要解决的问题众多，例如：
1、序列特异性问题
肠道微生物种群复杂，有针对性的敲除或者敲低目标基因的技术(噬菌体，转座子，CRISPR，ncRNA等)都有较高的序列特异性要求。因而，针对要敲除的目标基因所在的种属分别设计序列。
2、转化效率问题
大部分细菌都不能在自然状态下自发、高效地接受外源DNA，需要制备感受态。
3、靶标筛选效率问题
蛋白靶标物种间保守性较高，小分子药物也可能容易进入细胞或者直接作用于细胞表面的靶点，这是相比序列靶点的优势。但是，蛋白药物的筛选可能成本高，效率低，难度大。
4、存在侵染宿主，改变宿主基因序列的潜在风险。
由此，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种调节动物肠道菌群结构的方法。根据本发明的实施例，该方法通过控制目的动物的肠道菌群相关基因的表达调节所述目的动物的肠道菌群结构。由此，能够通过针对特定的肠道菌群功能基因的调控，实现对肠道菌群结构的精准调控。
根据本发明的实施例，通过下列方式的至少之一控制所述目的动物的肠道菌群相关基因的表达：
使所述目的动物过表达选自丁酸合成通路关键基因、维生素合成通路关键基因和细菌素合成通路关键基因的至少之一的肠道菌群相关基因；
抑制所述目的动物的选自细菌毒性分泌系统关键基因、细菌表面抗原基因和肠道细菌毒性基因的至少之一的肠道菌群相关基因的翻译表达。
具体地，针对丁酸合成通路关键基因：丁酸属于短链脂肪酸的一种，能够为肠壁细胞提供能量，调节免疫，在多种疾病研究中都发现了正面作用，而且丁酸的合成通路研究比较透彻。发明人发现，将丁酸合成通路的几个关键酶基因用载体整合进入肠道菌群，能够有效提高肠道菌群合成丁酸的能力，从而能够提高目的动物肠道中的有益菌比例，调节目的动物肠道菌群结构。
针对维生素合成通路关键基因：肠道细菌合成是人体维生素B6、维生素K等的主要来源。将多种维生素合成通路的基因通过载体整合进入目的动物的肠道菌群，能够增强对维生素的合成，为人体补充维生素，且能有效调节目的动物的肠道菌群结构。
针对细菌素合成通路关键基因：细菌分泌的细菌素能够抑制特定的其它细菌，帮助自己获得优势生态位。将抑制机会治病菌的细菌素整合进目的动物肠道菌群表达，有助于调控菌群结构，降低机会致病菌比例，从而有效调节目的动物的肠道菌群结构。
针对细菌毒性分泌系统关键基因：细菌毒性分泌系统，例如细菌的III、IV分泌系统等通常是细菌向外分泌毒素的主要结构，发明人发现，通过使用小分子药物，或者通过ncRNA敲低目的动物肠道菌群结构中细菌的毒性分泌系统相关基因，能够有效抑制目的动物细菌毒性分泌系统相关基因的表达，从而有效降低细菌的致病能力，实现对目的动物肠道菌群结构的调控。
针对细菌表面抗原基因：细菌表面抗原通常是导致机体炎症反应的原因，在人体已经出现免疫失衡的情况下，抑制表面抗原的表达可能能够缓解炎症反应，不过在人体正常情况下，需要这些抗原刺激免疫系统的正常功能维持。通过ncRNA等方法敲低目的动物肠道菌群结构中细菌的表面抗原基因，能够有效抑制目的动物细菌表面抗原基因的表达，从而有效降低细菌的致病能力，实现对目的动物肠道菌群结构的调控。
针对肠道细菌毒性基因：常见的细菌毒性蛋白，例如肠毒素、毒性休克蛋白、溶血素等等，能够直接导致疾病。通过建立已知毒性蛋白序列库，设计对应的DNA、RNA水平靶点，抑制这些毒性基因的表达，能够有效降低细菌的致病能力，实现对目的动物肠道菌群结构的调控。
根据本发明的一些实施例，所述肠道菌群相关基因为丁酸合成通路关键基因，调节所述目的动物的肠道菌群结构是通过使所述目的动物过表达丁酸合成通路关键基因，增强所述目的动物肠道菌群的丁酸合成能力实现的。
根据本发明的一些具体示例，通过以下步骤增强所述目的动物肠道菌群的丁酸合成能力：
(1)构建包含丁酸合成通路关键基因表达序列的第一载体；
(2)将所述第一载体转化至第一大肠杆菌，并筛选阳性转化子，以便获得携带第一载体的第一大肠杆菌；
(3)将所述携带第一载体的第一大肠杆菌进行扩大培养，并制备成第一细菌胶囊；以及
(4)使目的动物口服所述第一细菌胶囊，
其中，所述第一载体为噬菌体或含转座子的质粒。
由此，能够有效地将丁酸合成通路的关键酶基因整合进入肠道菌群，能够有效提高肠道菌群合成丁酸的能力，从而能够提高目的动物的有益菌比例，调节目的动物肠道菌群结构。并且，方法简单，口服即可实现。
根据本发明的实施例，所述丁酸合成通路关键基因为选自ptB、buk、but、bcd、atoA、atoD和4Hbt的至少之一。
根据本发明的一些具体示例，所述丁酸合成通路关键基因为ptB+buk基因，所述丁酸合成通路关键基因表达序列包含rpoB启动子序列和ptB+buk基因序列。
根据本发明的一些实施例，所述丁酸合成通路关键基因为bcd基因，所述丁酸合成通路关键基因表达序列包含rpoB启动子序列和bcd基因序列。
根据本发明的一些实施例，所述rpoB启动子序列为下列的任意一种：SEQ ID NO：1-9，所述ptB+buk基因序列如SEQ ID NO：10所示，所述bcd基因序列如SEQ ID NO：11所示。由此，序列特异性好，转化效率高，不存在侵染宿主和改变宿主基因序列的潜在风险。
根据本发明的实施例，所述肠道菌群相关基因为肠道细菌毒性基因，调节所述目的动物的肠道菌群结构是通过抑制所述目的动物肠道细菌毒性基因的翻译表达实现的。
根据本发明的实施例，通过以下步骤抑制所述目的动物肠道细菌毒性基因的翻译表达：
(1)构建包含肠道细菌毒性基因的反义表达序列的第二载体；
(2)将所述第二载体转化至第二大肠杆菌，并筛选阳性转化子，以便获得携带第二载体的第二大肠杆菌；
(3)将所述携带第二载体的第二大肠杆菌进行扩大培养，并制备成第二细菌胶囊；以及
(4)使目的动物口服所述第二细菌胶囊，
其中，所述第二载体为噬菌体或含转座子的质粒。
由此，能够有效地将肠道细菌毒性基因整合进入肠道菌群，从而能够有效抑制这些毒性基因的表达，降低细菌的致病能力，实现对目的动物肠道菌群结构的调控。并且，方法简单，口服即可实现。
根据本发明的实施例，所述肠道细菌毒性基因为选自astA、toxin A和set1A的至少之一。
根据本发明的一些实施例，所述肠道细菌毒性基因为astA基因，所述肠道细菌毒性基因的反义表达序列包含rpoB启动子序列和astA基因保守区反义序列。
根据本发明的另一些实施例，所述肠道细菌毒性基因为toxin A基因，所述肠道细菌毒性基因的反义表达序列包含rpoB启动子序列和toxin A基因保守区反义序列。
根据本发明的一些实施例，所述肠道细菌毒性基因为set1A基因，所述肠道细菌毒性基因的反义表达序列包含rpoB启动子序列和set1A基因保守区反义序列。
根据本发明的一些具体示例，所述rpoB启动子序列为下列的任意一种：SEQ IDNO：1-9，所述astA基因保守区反义序列如SEQ ID NO：12所示，所述toxin A基因保守区反义序列如SEQ ID NO：13所示，所述set1A基因保守区反义序列如SEQ ID NO：14所示。由此，序列特异性好，转化效率高，不存在侵染宿主和改变宿主基因序列的潜在风险。
其中，所述第一大肠杆菌和所述第二大肠杆菌可以为选自乳酸菌，噬热链球菌，双歧杆菌的任意一种。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明实施例，增强肠道菌群丁酸合成能力的实验设计路线示意图；
图2显示了实施例1的动物模型验证的检测结果；以及
图3显示了实施例2的动物模型验证的检测结果。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，例如可以采购自Illumina公司。
实施例1增强肠道菌群丁酸合成能力实验
根据本发明的调节动物肠道菌群结构的方法，参照图1，按照以下步骤增强肠道菌群丁酸合成能力，调节动物肠道菌群结构：
1.构建丁酸合成基因表达序列
1)获取丁酸合成关键基因ptB+buk(SEQ ID NO：10)，bcd(SEQ ID NO：11)。
2)获取稳定转录基因rpoB启动子序列(可从多种常见肠道微生物基因组扩增获得)，其序列可选自SEQ ID NO：1-9的任意一种。
3)连接丁酸合成关键基因序列和rpoB启动子序列，以便分别构建ptB+buk和bcd基因的表达序列(即丁酸合成基因表达序列)：
5’-rpoB启动子+ptB+buk基因-3’；
5’-rpoB启动子+bcd基因-3’。
2.构建运输载体
1)将上述表达序列连接至含转座子的质粒(或噬菌体)；
2)将该质粒转化至有接合能力的大肠杆菌，并筛选阳性转化子；
3)将上述携带转座子的大肠杆菌扩大培养，收集，并保藏菌种。
3.胶囊的制备
通过对转入丁酸合成基因的大肠杆菌进行培养，培养基采用LB培养基(购自环凯微生物科技公司)，待菌浓度达到109cfu/ml，离心收集菌体，加入12％的脱脂奶粉作为保护剂，进行真空冷冻干燥，形成干粉，然后将干粉灌注胶囊，封口。
4.动物模型验证
制备好的转入丁酸合成基因的大肠杆菌的细菌胶囊需要进一步的进行动物模型验证，考察其对动物肠道微生物的调节，检测粪便微生物丁酸相关基因的含量，同时选取一种能够调节肠道，能够治疗肠道紊乱引发疾病的益生菌VSL#3作为对照进行比较。
1)实验动物：C57bl/6小鼠，8周龄，体重20g±2g，小鼠饲养环境为SPF级。
2)实验分组：细菌胶囊组——采用制备的细菌胶囊进行灌胃
VSL#3组——VSL#3进行灌胃
对照组——200ul的PBS灌胃
3)实验过程
通过对细菌胶囊进行活菌计数，PBS调节菌浓度至109cfu/ml，VSL#3也同样调节菌浓至109cfu/ml，每组随机分配8只小鼠，每只小鼠每日灌胃200ul菌液，每天观察小鼠的基本情况，包括饮食、饮水，实验维持14天，实验结束后采集小鼠粪便，通过平板培养计数法检测小鼠粪便中产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)的数量和总的培养细菌数量，同时进行粪便细菌DNA提取，检测粪便中丁酸合成关键基因ptB，buk，bcd含量。
4)实验结果
表1产气荚膜梭菌的数量比较
结果显示，细菌胶囊可以显著降低粪便中产气荚膜梭菌的数量(*P<0.05)，同时比VSL#3产气荚膜梭菌的数量少，说明细菌胶囊在抑制产气荚膜梭菌的能力强于VSL#3。
表2.粪便细菌总数量比较
从肠道细菌的数量来看，细菌胶囊可以增加细菌总数，但是不显著。
通过对丁酸合成的相关基因ptB，buk，bcd进行荧光定量PCR检测，结果如图2所示，图2表明细菌胶囊组和VSL#3组的肠道中丁酸的相关基因的数量显著高于对照组(*P<0.05)
实施例2抑制肠道细菌毒性蛋白表达实验
根据本发明的调节动物肠道菌群结构的方法，按照以下步骤抑制肠道细菌毒性基因表达，调节动物肠道菌群结构：
1.构建mRNA反义表达序列
1)获取所述细菌毒性基因astA、toxin A和set1A的保守区反义序列，其中，astA基因保守区反义序列如SEQ ID NO：12所示，toxin A基因保守区反义序列如SEQ ID NO：13所示，set1A基因保守区反义序列如SEQ ID NO：14所示。
2)获得稳定转录基因rpoB启动子序列(可从多种常见肠道微生物基因组扩增获得)，其序列可选自SEQ ID NO：1-9的任意一种。
3)连接细菌毒性基因保守区反义序列和rpoB启动子序列，以便分别构建毒性基因astA、toxin A和set1A的反义表达序列。
2.构建运输载体
1)将上述表达序列连接至含转座子的质粒(或噬菌体)；
2)将该质粒转化至有接合能力的大肠杆菌，筛选阳性转化子；
3)将上述携带转座子的大肠杆菌扩大培养，收集，制成细菌胶囊。
3.胶囊的制备
通过对携带转座子的大肠杆菌进行培养，培养基采用LB培养基(购自环凯微生物科技公司)，待菌浓度达到109cfu/ml，离心收集菌体，加入12％的脱脂奶粉作为保护剂，进行真空冷冻干燥，形成干粉，然后将干粉灌注胶囊，封口。
4.动物模型验证
制备好的携带转座子的大肠杆菌的细菌胶囊需要进一步的进行动物模型验证，通过小鼠服用胶囊，检测服用胶囊和未服用胶囊小鼠粪便中毒性基因的表达情况，来判定该细菌胶囊的抑制效果。
1)实验动物：C57bl/6小鼠，8周龄，体重20g±2g，小鼠饲养环境为SPF级。
2)实验分组：细菌胶囊组——采用制备的细菌胶囊进行灌胃
VSL#3组——VSL#3进行灌胃
对照组——200ul的PBS灌胃
3)实验过程
通过对细菌胶囊进行活菌计数，PBS调节菌浓度至109cfu/ml，VSL#3也同样调节菌浓至109cfu/ml，每组随机分配8只小鼠，每只小鼠每日灌胃200ul菌液，每天观察小鼠的基本情况，包括饮食、饮水，实验维持14天，实验结束后采集小鼠粪便，同时进行粪便细菌DNA提取，通过荧光定量PCR检测粪便中毒性基因astA、toxin A和set1A的含量
4)实验结果
粪便中毒性基因astA、toxin A和set1A的检测结果如图3所示，结果显示，细菌胶囊组的小鼠粪便中毒性基因的表达水平显著低于VSL#3组和对照组，说明细菌胶囊具有对肠道中有害菌毒性基因的表达抑制能力，从而降低有害菌对人体健康的损伤。
以上实施例的载体是以含转座子的质粒为例，如果是噬菌体载体，则将表达序列连接至合适的噬菌体，转染大肠杆菌。口服转染的大肠杆菌，由其在肠道自发裂解，并将噬菌体释放，溶源整合至其它肠道细菌。
上述各序列具体如下：
1、肠道细菌的rpoB基因的启动子序列：
>Bacteroides vulgatus ATCC 8482
TTAGCCTGAGTATCAGGTAATACGGTTAGGAATCCTCTGGTAGAGGATTCTTAACCTTTTTGTGTCTATATTATTATTAAGTTCTACAAAATATTAACAA(SEQ ID NO：1)
>Bacteroides thetaiotaomicron VPI-5482
AGCCTGGTAATCAGGTAATTCGGTTAGGAATCCTTCGCAAGAGGATTCTTAACCTTTTTGTGTATATATTTCAAATTAAGTTCTCCAAATTCATTCACAG(SEQ ID NO：2)
>Bacteroides fragilis YCH46
AGCCTGGTTATCAGGTAATTCGGTTAAGAATCCTTCACAAGAGGATTCTTAACCTTTTTGTGTATATATTTAAAATTAAGTTCTCCAAATTCATTGACAG(SEQ ID NO：3)
>Escherichia coli str.K-12substr.MG1655
TTGCGGAAAGTGTTCCATTTTCCGGTCAACAAAATAGTGTTGCACAAACTGTCCGCTCAATGGACAGATGGGTCGACTTGTCAGCGAGCTGAGGAACCCT(SEQ ID NO：4)
>Prevotella melaninogenica ATCC 25845
TAGGTGAGTCCTAACCTTTTTGTGTCTTTTGACATATATAGGGATTTCCCCTTTTTAGTCCGCCGCTGGACTTTAAACATTCGAATATTTAATTTCAGTT(SEQ ID NO：5)
>Bifidobacterium adolescentis ATCC
TGACAAGGAAGAAGCGCCCGCGTACTAGGCATATGGTGGCCAATGAGAGCGCTTCCGGGGAAACATATCGATACGATTAGCGAGCGATAAGGAACGTCCA(SEQ ID NO：6)
>Parabacteroides distasonis ATCC 8503
AACCTGGTTTCCAGGTGATTTGGTTAAGAGTCTCCGACTACGAAGACTCTTAACCTTTTTGTGTCTATAATTTCAATAAGTTCAATAAATTCCTTACTAG(SEQ ID NO：7)
>Lactobacillus plantarum WCFS1
TTTTTTATGCCTAAAATTCGGTCAAAAACGCATTTGTAACACAAATGTAATATTTGGCCGGAGGTGGCGGGTTCCGGAATAATAAGAAGGGGTGAACAAC(SEQ ID NO：8)
>Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus
GTTCGTTTTTGTCTTTTTTATGCCCAAAATCCCGGCCTTTTTAAAATGTAACACAAATGTAATATTTGCTTTCTTCAACAGGATAGAAAGGGTGTTTTCC(SEQ ID NO：9)
2、丁酸合成通路基因
>Desulfovibrio vulgaris str.Hildenborough[ptB+buk]
ATGAGCGTACTGCAAGCCGGGACTGCGACGGAGACGCCCCGCACTTCAGATGCGGGCCGACAGAACGAAGGGGCGGACGGGGCAGTGGCCGCGCCCCGGACGCTCGATGACATCGTGGCGGCGGTGGTGCGGCGTGGCATCCCGGTGCGTGTCGCGGTGGCGGCGTGTGCCGAACCCAACGCGCTCGCAGCCGTACTCGAGGCGCGTGACATGGGCATGGCCGTGCCAGTGCTGGTGGGTGACATCGCCGCGACAGAGAGCATCGCCACGGAACGGGGGCTTTCACTGGAAGGCTGCGAGGTCGAAGACGAACCCGTACCCGTGAAGGCCGTGCAGCGTGCCGTGGACAGGGTGCGTACCGGTGGTGCCGATGTGCTCATGAAGGGCCTCGTCAACACCGACGTGTTGTTACGTGTGGTGCTCAACCGCGTGTCCGGTCTCTCTGCCGGGGGGCTTCTCAGCCATGTGGCCGTGTGTTCGCTGCCTGCGACCTGCGGCGGTGAGGCTTCGGCCTCTTCGCGGCTGGTGTGCATCACCGATGCCGCAGTGAACATCAGCCCCAACATGGAGCGCAAACTCGGAATCGTCCGCAACGCCATCTGCGTGGCACGCAGCCTTGGCATCCCGTCACCTCGCGTGGCGATGCTGGCGGCGACTGAAAAGGTCATGCTGCCCGCCATGCCCGCGACGCTGGATGCCCAGATTGTGGCGCGCATGGCGGACCAGGGGGAATTCGGCGATGCGATGGTGGCAGGGCCCATGGCCCTTGATGTGGCCATCTCGCCGGATATCGCGGCGCGCAAGGGCGTGTCACACCCGGTGGCGGGGCGGGCCGACATCCTGTGCGCTCCCGACATCGAAAGCGGCAACATCCTCTACAAGTCGCTCACCACGCTGGCGCATGTGGAGATGGCGGGCATCCTCACCGGAACGACGGCCCCCGTGGTGGTGCCCTCCCGCGGTGACAGCAGGCGCAGCAAGCTGCTTTCGCTGGCCCTCGCCGCTTATGTCGCCATGGAGTGCCGGCTGTGAGCGCCTCGCAACGGCATGACCGGGGGGCCGAGCGCATCCTGGTCATCAATCCCGGTTCGACCACGACCAAGGTGGCCCTCTTCGAGGGCGAAGTGCCGTTGTTCGACGAGACCGTCGAACATGGCAAGGAGTCGTTGCGTGCCTTTCCCGCAGTGACCGACCAGTTCGCCTTCCGGCTGCGTGCGGTGAAGGACGTGCTGGAACACCACGGCGTTCTCGACACGCCGCTGGACGCCGTGGCAGGGCGGGGCGGGCTGCTGGCCCCCATGCAGGGTGGCACGTGGCGCGTCGGGCCAGCCATGCTGGCGACGCTTGCAGAGGCGCGCCATGGCGAGCATCCGTGCAACCTCGGTGCGGCGCTGGCGAGGCATTTCGCCGACCTGCATGGTGTCGAGGCCTACATCGTCGACCCCGTGGTGACGGATGAGATGGATGACGTGGCCCGGTACACCGGTCTGCCGCAGATACGTCGGCGTAGCGTCTTCCATGCGCTCAGCCATCGCGCTGCGGCGCGTGTGGCAGCGTCGAGGTGCGGTGTCGCCTATGAAGAGGGGCGCTTCCTCGTGGCCCATATGGGTGGCGGGGTCTCGGTGGCGGCGCATCGCTGCGGGCGTATCGTCGACGTGGTCAACGCCCTCGACGGCGATGGTCCCATCACCGCCGAACGCACCGGGCGATTGCCCGTGCTGCCGGTTCTCGACCTGATAGAGCGCGGTCTGCAGACCTTCGAATCCATGCGGCGCATCGTGCTGCGTGAGGGCGGGCTGTGGGCGCATTGCGGCACCAACGACCTGCGCGAGGTCGAACGGCGCATGGAGACCGGGGATGCTGCCGCCGCCGCGATTTTCGACGCTCTCGCCTATACCATCGCCAAGGAACTCGCTTCGCTGGCGCCCGCCGTCCTCGGTACGGCGCGAGGAGGCGTCACTACGGTCACCGCAGTGGTGCTCACCGGGGGCATGGCTCGCAGTGTGCGTCTGACATCACGCCTCGAAGCCCATCTCGGCTGGCTTGGGCCGATGGTGGTTCTGCCCGACGTGGAGGAGATGCGCGCGCTGACACAGGGTGTGCTTCGCGTCCTGCGAGGTGAGGAAGTGGCGAAGGAATACGTCTGA(SEQ IDNO：10)
>Clostridium botulinum A str.ATCC 3502[bcd]
ATGGAATTTGGTTTATCACAAGAACAAAAGCTTGTTAAGCAGATGCTAATGGAATTTGTAGAAAATGAAGTGGAACCAATAGCTGCTGATATAGATAAAACAGAGAGATATCCAATTGAAACAGTAGAAAAAATGGCTAAGTATGGAATAATGGGAATGCCATTTCCAAAGGAATACGGTGGAGCTGGTACTGATTATTTAAGCTATGTTATAGCAGTAGAAGAACTTGCAAAAGAATGTGCAACTACATCTGTTATTTTATCAGCACATACATCTTTATGTTGCGCTCCAATATTTGAATTTGGGACAGAAGAGCAAAAGAAAAAATATTTACCAGATCTTTTAAGCGGTAAAAAAATAGGTGCTTTTGGTTTAACAGAACCTAATGCTGGCACAGATGCATCTGCTCAACAAAGTGTAGCTGTTTTAGAAGGAGATCATTATATATTAAATGGATCAAAAATATTTATAACTAATGGTGGAGCAGCAGATACATTTGTAATATTTGCTATGACAGATAGAAGTAAGGGCGTTAAAGGAATTTCCGCATTTATATTAGAAAAGGGAATGCCCGGATTTAGCATTGGCAAGACAGAGGATAAAATGGGAATAAGAGCATCATCAACTACTGAACTTATATTTGAAGATGTAAAAGTTCCAAAACAAAATTTACTTGGTAAAGAAGGAAAAGGATTTGGTATAGCCATGAAAACTTTAGATGGCGGAAGAATTGGAATAGCAGCTCAAGCATTAGGAATAGCAGAAGGCGCTTTAGATCACGCTATTGCATATATGAAAGAAAGAAAACAATTCGGTAAAAATCTTACTAAATTTCAAGGATTGCAATGGTATATAGCAGATATGAAAGTGAGAGTAGATGCTGCTAAATATCTTGTTTATAAATCAGCATGGAAAAAATCTGCAGGAAAAAATTACACAGTTGATGCAGCTGAGGCTAAACTGTATGCAGCTGAAACAGCTATGTATGTAACAAATAAATCTCTACAAGTATTGGGTGGATATGGATACACTAAAGATTATCCATTAGAAAGAATGTTAAGAGATGCTAGAATAACTGAAATATATGAAGGAACTTCAGAAGTACAAAAAATGGTTATAGCTAATAACTTATTACACTAG(SEQ ID NO：11)
3、肠道细菌毒性基因序列保守区反义序列
>Escherichia coli O44:H18 042(EAEC)[astA]
TCAGGTCGCGAGTGACGGCTTTGTAGTCCTTCCATGACACGAAGCGCAGGCTGTTGCGCACCATATGCACGATGCATAACTGGATGCGGGCCTTCGGATATACTGTGT(SEQ ID NO：12)
>Clostridium difficile 630[toxin A]
ATTTTCATTATTGTTTGTAGTTAACTTATTATATTCGTCTAAATTAGTTAGTATAGTTTTATACTCATTTTCTCTTGGTCTAATGCTATATGCGAGTTTTATTAACTCTTCTTTAGATATTAA(SEQ ID NO：13)
>Sigella flexneri 2a str.301[set1A]
TATTCTGAAATCTGCCAGCTATGGTAACACTCTGTGGGGGAACAGCCTGAATGATCCGGCTCAGTGGGAGTTTGTTGGCATGAACAAAAACAAAGCAGTTCAGACAGTAAAAGATAGGATCC(SEQ ID NO：14)
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种调节动物肠道菌群结构的方法，其特征在于，
通过控制目的动物的肠道菌群相关基因的表达调节所述目的动物的肠道菌群结构。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过下列方式的至少之一控制所述目的动物的肠道菌群相关基因的表达：
使所述目的动物过表达选自丁酸合成通路关键基因、维生素合成通路关键基因和细菌素合成通路关键基因的至少之一的肠道菌群相关基因；
抑制所述目的动物的选自细菌毒性分泌系统关键基因、细菌表面抗原基因和肠道细菌毒性基因的至少之一的肠道菌群相关基因的翻译表达。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述肠道菌群相关基因为丁酸合成通路关键基因，调节所述目的动物的肠道菌群结构是通过使所述目的动物过表达丁酸合成通路关键基因，增强所述目的动物肠道菌群的丁酸合成能力实现的。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，通过以下步骤增强所述目的动物肠道菌群的丁酸合成能力：
(1)构建包含丁酸合成通路关键基因表达序列的第一载体；
(2)将所述第一载体转化至第一大肠杆菌，并筛选阳性转化子，以便获得携带第一载体的第一大肠杆菌；
(3)将所述携带第一载体的第一大肠杆菌进行扩大培养，并制备成第一细菌胶囊；以及
(4)使目的动物口服所述第一细菌胶囊，
其中，所述第一载体为噬菌体或含转座子的质粒。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述丁酸合成通路关键基因为选自ptB、buk、but、bcd、atoA、atoD和4Hbt的至少之一。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述丁酸合成通路关键基因为ptB+buk基因，所述丁酸合成通路关键基因表达序列包含rpoB启动子序列和ptB+buk基因序列，
任选地，所述丁酸合成通路关键基因为bcd基因，所述丁酸合成通路关键基因表达序列包含rpoB启动子序列和bcd基因序列，
任选地，所述rpoB启动子序列为下列的任意一种：SEQ ID NO：1-9，
所述ptB+buk基因序列如SEQ ID NO：10所示，
所述bcd基因序列如SEQ ID NO：11所示。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述肠道菌群相关基因为肠道细菌毒性基因，调节所述目的动物的肠道菌群结构是通过抑制所述目的动物肠道细菌毒性基因的翻译表达实现的。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，通过以下步骤抑制所述目的动物肠道细菌毒性基因的翻译表达：
(1)构建包含肠道细菌毒性基因的反义表达序列的第二载体；
(2)将所述第二载体转化至第二大肠杆菌，并筛选阳性转化子，以便获得携带第二载体的第二大肠杆菌；
(3)将所述携带第二载体的第二大肠杆菌进行扩大培养，并制备成第二细菌胶囊；以及
(4)使目的动物口服所述第二细菌胶囊，
其中，所述第二载体为噬菌体或含转座子的质粒。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述肠道细菌毒性基因为选自astA、toxinA和set1A的至少之一。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述肠道细菌毒性基因为astA基因，所述肠道细菌毒性基因的反义表达序列包含rpoB启动子序列和astA基因保守区反义序列，
任选地，所述肠道细菌毒性基因为toxin A基因，所述肠道细菌毒性基因的反义表达序列包含rpoB启动子序列和toxin A基因保守区反义序列，
任选地，所述肠道细菌毒性基因为set1A基因，所述肠道细菌毒性基因的反义表达序列包含rpoB启动子序列和set1A基因保守区反义序列，
任选地，所述rpoB启动子序列为下列的任意一种：SEQ ID NO：1-9，
所述astA基因保守区反义序列如SEQ ID NO：12所示，
所述toxin A基因保守区反义序列如SEQ ID NO：13所示，
所述set1A基因保守区反义序列如SEQ ID NO：14所示。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109234397A (zh) * 2018-10-16 2019-01-18 中国药科大学 用于检测丁酸合成基因的引物对及试剂盒

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1407108A (zh) * 2001-09-06 2003-04-02 胡放 表达乳铁蛋白的基因工程重组菌株及其应用
CN101627109A (zh) * 2006-12-01 2010-01-13 格沃股份有限公司 用于生产正丁醇的工程化改造的微生物及相关方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1407108A (zh) * 2001-09-06 2003-04-02 胡放 表达乳铁蛋白的基因工程重组菌株及其应用
CN101627109A (zh) * 2006-12-01 2010-01-13 格沃股份有限公司 用于生产正丁醇的工程化改造的微生物及相关方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CURT R. FISCHER等: "Assessment of heterologous butyrate and butanol pathway activity by measurement of intracellular pathway intermediates in recombinant Escherichia coli", 《APPLIED MICROBIAL AND CELL PHYSIOLOGY》 *
秦环龙: "《肠屏障功能的基础与临床》", 31 July 2007, 上海交通大学出版社 *
罗云波等: "《食品生物技术导论 第3版》", 31 August 2016, 中国农业大学出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109234397A (zh) * 2018-10-16 2019-01-18 中国药科大学 用于检测丁酸合成基因的引物对及试剂盒
CN109234397B (zh) * 2018-10-16 2021-06-22 中国药科大学 用于检测丁酸合成基因的引物对及试剂盒

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