CN107988139A - 一种细胞培养用营养液配方及制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及细胞营养液技术领域，具体涉及一种细胞培养用营养液配方及制备工艺，它包括基本培养基和添加营养液；所述基本培养基为DMEM/F12细胞培养基；所述添加营养液的配方组成为：包括白蛋白溶液、细胞生长因子、转铁蛋白溶液、L‑谷胺酰胺溶液、纤粘连蛋白溶液、L‑丙酮酸钠溶液、胆固醇溶液、聚乙烯吡咯烷酮溶液、胰岛素溶液，甘露醇溶液、乙醇胺溶液、亚硒酸钠溶液、金雀异黄素溶液、黄豆蛋白水解物、棕榈酸溶液和橙皮甙溶液；它具有使用添加营养液，能够促进其新陈代谢，保持良好的生长状态以及提高细胞密度，极大地提高其质量。

Description

一种细胞培养用营养液配方及制备工艺

【技术领域】

本发明涉及细胞营养液技术领域，具体涉及一种细胞培养用营养液配方及制备工艺。

【背景技术】

无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞以制备单克隆抗体，病毒抗原和重组蛋白等。大多数的无血清培养基含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素，以及一些蛋白质和清蛋白，纤维蛋白，胎球蛋白等，这些蛋白在细胞培养中发挥各种不同的功能，如提供细胞贴壁所需的基质，抗生物反应器剪切力，作为脂质和其他生长分化因子的载体等。无血清培养基的基本配方：基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。但是传统的无血清培养基也存在局限性，成本高以及由于各类元素的流失，易出现生长缓慢，生长状态较差等问题。

【发明内容】

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种细胞培养用营养液配方及制备工艺。

本发明所述的一种细胞培养用营养液配方及制备工艺，它包括基本培养基和添加营养液；所述基本培养基为DMEM/F12细胞培养基；所述添加营养液的配方组成为：包括白蛋白溶液、细胞生长因子、转铁蛋白溶液、L-谷胺酰胺溶液、纤粘连蛋白溶液、L-丙酮酸钠溶液、胆固醇溶液、聚乙烯吡咯烷酮溶液、胰岛素溶液，甘露醇溶液、乙醇胺溶液、亚硒酸钠溶液、金雀异黄素溶液、黄豆蛋白水解物、棕榈酸溶液和橙皮甙溶液。

进一步地，所述添加营养液的配方组成比为：白蛋白溶液11-15mg/mL、细胞生长因子10-20ng/mL、转铁蛋白溶液12-18μg/mL、L-谷胺酰胺溶液110-140ug/mL、纤粘连蛋白溶液3-6μg/mL、L-丙酮酸钠溶液2.2-3.2ug/mL、胆固醇溶液15-25ug/mL、聚乙烯吡咯烷酮溶液16-20μg/mL、胰岛素溶液9-12μg/mL，甘露醇溶液1-3μg/mL、乙醇胺溶液10-14ug/mL、亚硒酸钠溶液10-25mg/L、金雀异黄素溶液4-6μg/mL、黄豆蛋白水解物20-25mg/mL、棕榈酸溶液18-20μg/mL和橙皮甙溶液3-7μg/mL。

进一步地，其细胞营养液采用如下的制备方法：

步骤一：基本培养基制备：基本培养基为DMEM/F12细胞培养基；

步骤二：添加营养液的制备：

将白蛋白溶液11-15mg/mL、细胞生长因子10-20ng/mL、转铁蛋白溶液12-18μg/mL、L-谷胺酰胺溶液110-140ug/mL、纤粘连蛋白溶液3-6μg/mL、L-丙酮酸钠溶液2.2-3.2ug/mL、胆固醇溶液15-25ug/mL、聚乙烯吡咯烷酮溶液16-20μg/mL、胰岛素溶液9-12μg/mL，甘露醇溶液1-3μg/mL、乙醇胺溶液10-14ug/mL、亚硒酸钠溶液10-25mg/L、金雀异黄素溶液4-6μg/mL、黄豆蛋白水解物20-25mg/mL、棕榈酸溶液18-20μg/mL和橙皮甙溶液3-7μg/mL，按配方比进行混合，充分溶解，得添加营养液；

步骤三：将步骤一中的基本培养基与步骤二中的添加营养液按体积比为1-4：1进行配比，形成细胞营养液。

采用上述结构后，本发明有益效果为：本发明所述的一种细胞培养用营养液配方及制备工艺，它采用细胞生长因子、转铁蛋白溶液、胰岛素溶液等利于细胞因子生长，采用白蛋白溶液和纤粘连蛋白溶液等利于细胞生长，采用胆固醇溶液、聚乙烯吡咯烷酮溶液、甘露醇溶液、乙醇胺溶液、胆固醇溶液、棕榈酸溶液利于细胞代谢；它具有使用添加营养液，能够促进其新陈代谢，保持良好的生长状态以及提高细胞密度，极大地提高其质量。

【具体实施方式】

下面以具体实施例来详细说明本发明，其中的示意性实施例以及说明仅用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。

本具体实施方式所述的一种细胞培养用营养液配方及制备工艺，它包括基本培养基和添加营养液；所述基本培养基为DMEM/F12细胞培养基；所述添加营养液的配方组成为：包括白蛋白溶液、细胞生长因子、转铁蛋白溶液、L-谷胺酰胺溶液、纤粘连蛋白溶液、L-丙酮酸钠溶液、胆固醇溶液、聚乙烯吡咯烷酮溶液、胰岛素溶液，甘露醇溶液、乙醇胺溶液、亚硒酸钠溶液、金雀异黄素溶液、黄豆蛋白水解物、棕榈酸溶液和橙皮甙溶液。

所述添加营养液的配方组成比为：白蛋白溶液11-15mg/mL、细胞生长因子10-20ng/mL、转铁蛋白溶液12-18μg/mL、L-谷胺酰胺溶液110-140ug/mL、纤粘连蛋白溶液3-6μg/mL、L-丙酮酸钠溶液2.2-3.2ug/mL、胆固醇溶液15-25ug/mL、聚乙烯吡咯烷酮溶液16-20μg/mL、胰岛素溶液9-12μg/mL，甘露醇溶液1-3μg/mL、乙醇胺溶液10-14ug/mL、亚硒酸钠溶液10-25mg/L、金雀异黄素溶液4-6μg/mL、黄豆蛋白水解物20-25mg/mL、棕榈酸溶液18-20μg/mL和橙皮甙溶液3-7μg/mL。

细胞营养液采用如下的制备方法：

步骤一：基本培养基制备：基本培养基为DMEM/F12细胞培养基；

步骤二：添加营养液的制备：

将白蛋白溶液11-15mg/mL、细胞生长因子10-20ng/mL、转铁蛋白溶液12-18μg/mL、L-谷胺酰胺溶液110-140ug/mL、纤粘连蛋白溶液3-6μg/mL、L-丙酮酸钠溶液2.2-3.2ug/mL、胆固醇溶液15-25ug/mL、聚乙烯吡咯烷酮溶液16-20μg/mL、胰岛素溶液9-12μg/mL，甘露醇溶液1-3μg/mL、乙醇胺溶液10-14ug/mL、亚硒酸钠溶液10-25mg/L、金雀异黄素溶液4-6μg/mL、黄豆蛋白水解物20-25mg/mL、棕榈酸溶液18-20μg/mL和橙皮甙溶液3-7μg/mL，按配方比进行混合，充分溶解，得添加营养液；

步骤三：将步骤一中的基本培养基与步骤二中的添加营养液按体积比为1-4：1进行配比，形成细胞营养液。

具体实施例一：

一种添加营养液包括白蛋白溶液12mg/mL、细胞生长因子15ng/mL、转铁蛋白溶液15μg/mL、L-谷胺酰胺溶液125ug/mL、纤粘连蛋白溶液4μg/mL、L-丙酮酸钠溶液2.7ug/mL、胆固醇溶液20ug/mL、聚乙烯吡咯烷酮溶液18μg/mL、胰岛素溶液10μg/mL，甘露醇溶液2μg/mL、乙醇胺溶液12ug/mL、亚硒酸钠溶液18mg/L、金雀异黄素溶液45μg/mL、黄豆蛋白水解物22mg/mL、棕榈酸溶液19μg/mL和橙皮甙溶液5μg/mL。

具体实施例二：

一种添加营养液包括白蛋白溶液14mg/mL、细胞生长因子12ng/mL、转铁蛋白溶液17μg/mL、L-谷胺酰胺溶液115ug/mL、纤粘连蛋白溶液5μg/mL、L-丙酮酸钠溶液2.5ug/mL、胆固醇溶液16ug/mL、聚乙烯吡咯烷酮溶液19μg/mL、胰岛素溶液10μg/mL，甘露醇溶液2μg/mL、乙醇胺溶液11ug/mL、亚硒酸钠溶液16mg/L、金雀异黄素溶液5μg/mL、黄豆蛋白水解物22mg/mL、棕榈酸溶液20μg/mL和橙皮甙溶液4μg/mL。

具体实施例三：

一种添加营养液包括白蛋白溶液13mg/mL、细胞生长因子11ng/mL、转铁蛋白溶液13μg/mL、L-谷胺酰胺溶液120ug/mL、纤粘连蛋白溶液6μg/mL、L-丙酮酸钠溶液2.2ug/mL、胆固醇溶液25ug/mL、聚乙烯吡咯烷酮溶液16μg/mL、胰岛素溶液12μg/mL，甘露醇溶液1μg/mL、乙醇胺溶液14ug/mL、亚硒酸钠溶液13mg/L、金雀异黄素溶液4μg/mL、黄豆蛋白水解物25mg/mL、棕榈酸溶液18μg/mL和橙皮甙溶液3μg/mL。

将具体实施一中所得的添加营养液按1：2添加到DMEM/F12细胞培养基中，形成细胞营养液。

将具体实施二中所得的添加营养液按1：3添加到DMEM/F12细胞培养基中，形成细胞营养液。

将具体实施三中所得的添加营养液按1：4添加到DMEM/F12细胞培养基中，形成细胞营养液。

本发明所述的一种细胞培养用营养液配方及制备工艺，它采用细胞生长因子、转铁蛋白溶液、胰岛素溶液等利于细胞因子生长，采用白蛋白溶液和纤粘连蛋白溶液等利于细胞生长，采用胆固醇溶液、聚乙烯吡咯烷酮溶液、甘露醇溶液、乙醇胺溶液、胆固醇溶液、棕榈酸溶液利于细胞代谢；它具有使用添加营养液，能够促进其新陈代谢，保持良好的生长状态以及提高细胞密度，极大地提高其质量。

以上所述仅是本发明的较佳实施方式，故凡依本发明专利申请范围所述的特征及原理所做的等效变化或修饰，均包括于本发明专利申请范围内。

Claims (3)

1.一种细胞培养用营养液配方及制备工艺，其特征在于：它包括基本培养基和添加营养液；所述基本培养基为DMEM/F12细胞培养基；所述添加营养液的配方组成为：包括白蛋白溶液、细胞生长因子、转铁蛋白溶液、L-谷胺酰胺溶液、纤粘连蛋白溶液、L-丙酮酸钠溶液、胆固醇溶液、聚乙烯吡咯烷酮溶液、胰岛素溶液，甘露醇溶液、乙醇胺溶液、亚硒酸钠溶液、金雀异黄素溶液、黄豆蛋白水解物、棕榈酸溶液和橙皮甙溶液。

2.根据权利要求1所述的一种细胞培养用营养液配方及制备工艺，其特征在于：所述添加营养液的配方组成比为：白蛋白溶液11-15mg/mL、细胞生长因子10-20ng/mL、转铁蛋白溶液12-18μg/mL、L-谷胺酰胺溶液110-140ug/mL、纤粘连蛋白溶液3-6μg/mL、L-丙酮酸钠溶液2.2-3.2ug/mL、胆固醇溶液15-25ug/mL、聚乙烯吡咯烷酮溶液16-20μg/mL、胰岛素溶液9-12μg/mL，甘露醇溶液1-3μg/mL、乙醇胺溶液10-14ug/mL、亚硒酸钠溶液10-25mg/L、金雀异黄素溶液4-6μg/mL、黄豆蛋白水解物20-25mg/mL、棕榈酸溶液18-20μg/mL和橙皮甙溶液3-7μg/mL。

3.根据权利要求1所述的一种细胞培养用营养液配方及制备工艺，其特征在于：其细胞营养液采用如下的制备方法：

步骤一：基本培养基制备：基本培养基为DMEM/F12细胞培养基；

步骤二：添加营养液的制备：

将白蛋白溶液11-15mg/mL、细胞生长因子10-20ng/mL、转铁蛋白溶液12-18μg/mL、L-谷胺酰胺溶液110-140ug/mL、纤粘连蛋白溶液3-6μg/mL、L-丙酮酸钠溶液2.2-3.2ug/mL、胆固醇溶液15-25ug/mL、聚乙烯吡咯烷酮溶液16-20μg/mL、胰岛素溶液9-12μg/mL，甘露醇溶液1-3μg/mL、乙醇胺溶液10-14ug/mL、亚硒酸钠溶液10-25mg/L、金雀异黄素溶液4-6μg/mL、黄豆蛋白水解物20-25mg/mL、棕榈酸溶液18-20μg/mL和橙皮甙溶液3-7μg/mL，按配方比进行混合，充分溶解，得添加营养液；

步骤三：将步骤一中的基本培养基与步骤二中的添加营养液按体积比为1-4：1进行配比，形成细胞营养液。