CN107982301A - 一种抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法及其制备的膜剂 - Google Patents

一种抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法及其制备的膜剂 Download PDF

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Abstract

本发明提供抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法该方法包括以下步骤：1)忍冬藤提取液的制备：2)丝素蛋白溶液的制备；3)将丝素蛋白溶液中加入忍冬藤提取液中，充分混匀制得混合液，冷藏备用；4)将步骤3)所得混合液置于无菌模具中，在室温下风干后用高压蒸汽法处理，得到抗菌消炎中药复合膜剂。本发明将丝素蛋白和忍冬藤提取液进行配比制成复合膜剂，该方法生产工艺简单，便于生产自动化和无菌操作，采用丝素蛋白作为成膜材料，无毒，无刺激气味，性能稳定，成膜后有足够的强度和柔韧性，加入忍冬藤提取液制得的复合膜具有良好的抗菌消炎性能，药物含量准确，稳定性好，吸收快，疗效高，无任何毒副作用。

Description

一种抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法及其制备的膜剂
技术领域
本发明涉及中药复合膜剂领域，具体涉及一种以忍冬藤和丝素蛋白为主要原料制成的具有抗菌消炎作用的中药复合膜剂及其制备方法，属于中药制剂技术领域。
背景技术
随着世界范围的人口流动及抗生素的滥用等原因，近年来各种各种致病病原微生物(细菌、真菌、酵母菌及病毒等)层出不穷，强耐药性超级细菌的传播和蔓延容易造成感染，从而引发疾病，严重威胁着人类的健康，每当人们需要服药医治时，大都是用广谱抗生素等西药，虽然见效快，疗效好，但是存在着较大的毒副作用，所以国内外对抗生素的使用都有着严格的限制，随着国人对抗生素的认识有了提高之后，意识到抗生素带来的诸多不良反应及其相应的耐药性的影响，人们对中药维护健康和防治疾病充满了期待，而如何有效控制有害细菌的生长和繁殖，开发出一种具有抗菌消炎且无副作用，使某些致病微生物的生长或繁殖保持在必要水平以下的药物，就显得十分有意义，中药在抗菌抗病毒方面具有独特的优势，临床常用中药忍冬藤就是这方面的代表。而中药膜剂是近年来中药制剂研发的重要领域，在临床为较好的剂型之一，集靶向给药，疗效可靠，具有用药量小、性能稳定、无首过消除效应、药效作用时间长、副作用少、携带使用方便等诸多优点，贴合现代中药发展的趋势。
忍冬藤为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥茎枝。秋、冬二季采割，晒干，有清热解毒，疏风通络的功效。用于温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹，关节红肿热痛，忍冬藤与金银花均为忍冬属中的临床常用中药，由于是同一基源植物的不同药用部位，忍冬藤与金银花具有相近的化学成分和药理活性，而相比金银花资源紧缺，价格居高不下，忍冬藤则具有价格低廉，资源丰富等优势，对其进行开发利用具有重要的社会价值、经济价值和科研价值。
有研究表明药用植物忍冬中的环烯醚萜类成分具有解热、抗菌、消炎、抗病毒的活性。张玉清等采用MTT法观察了忍冬藤、三七等5种中药总黄酮成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响，结果表明忍冬藤总黄酮成分在一定质量浓度下能促进鸡胚成纤维细胞增殖或延长细胞存活时间，具有一定的体外抗病毒作用。李瑞国等采用酸乙醇回流法对忍冬藤、叶、花和花蕾的绿原酸进行提取，将忍冬不同器官的提取物分别对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行抑菌试验，结果表明忍冬不同器官绿原酸提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有显著的抑制作用，对金黄色葡萄球菌的抑制作用较强，对大肠杆菌的抑制作用相对较弱。张少华等采用琼脂平板扩散法，研究了忍冬藤、黄芩等21种中药对乳房炎奶牛乳汁中分离出的3种主要致病菌的体外抑菌情况。结果发现金黄色葡萄球菌对忍冬藤、枳壳等药物中度敏感。
丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白，含量约占蚕丝的70％-80％，富含18种氨基酸，具有优良的物理特性和化学特性。从生物体整体、细胞和分子生物学水平对丝素蛋白的研究表明，丝素蛋白安全可靠，具有良好的生物相溶性，易于做成粉状、纤维状及膜状等形态，用其作为载体已经成功的固定化酶、单克隆抗体、微生物等，它在固定化载体材料的应用方面也具有巨大的发展潜力，适于开发功能性材料。
膜剂是指药物或药材提取液混悬于适宜合成或天然成膜材料中经加工制成的薄膜状的内服、外用制剂。根据不同膜材和药物性能，以及临床用药要求，可以制成速效药膜或定量缓释药膜各种膜剂。相比其他剂型具有用量小，含量准确，稳定性好，吸收起效快，可控速释药，且该产品对皮肤无刺激作用等。但其主要缺点是不适用于剂量较大的药物，应用受限制。由于中药多为复方制剂且剂量大、制成膜剂时受一定限制，只能选择药味少的复方，得进一步提取纯化后才可制成膜剂。
发明内容
为了克服治疗抗菌消炎的抗生素不良反应多、耐药性强的缺陷。本发明的目的是提供一种抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法，其中，该方法包括以下步骤：
1)忍冬藤提取液的制备：
a)提取：取忍冬藤饮片，加入6-10倍量的60-80％乙醇溶液，加热回流提取1-2小时，重复1-3次，提取液过滤，真空回收乙醇，至含原药材0.4g/ml-0.6g/ml的药液；b)萃取：用1-3BV体积量石油醚处理得到的药液，然后用等体积乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，浓缩后转入水相配制成忍冬藤萃取液；c)洗脱：将所得的萃取液通过大孔吸附树脂，用4-10BV的水洗脱，水液弃去，用4-10BV的80％乙醇洗脱，减压回收乙醇，得到忍冬藤提取液；
2)丝素蛋白溶液的制备：取一定量的家蚕茧壳放置于0.25％-0.75％的碳酸钠溶液中在80℃-100℃保持30min，此过程重复两次；将脱胶后的丝素纤维溶解于8M-10M的溴化锂溶液中；将上述溶液转移至透析袋中进行透析；将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩处理得到质量分数为10-20％的丝素蛋白溶液；
3)将步骤2)所得丝素蛋白溶液中加入步骤1)所得忍冬藤提取液，充分混匀制得混合液，冷藏备用；
4)将步骤3)所得混合液置于无菌模具中，在室温下风干后用高压蒸汽法处理，得到抗菌消炎中药复合膜剂。
作为优选，所述忍冬藤提取液通过以下步骤制备：将忍冬藤切成段，打成粗粉，加入8倍量乙醇，加热回流提取1.5小时，重复2次，所述乙醇浓度为70％，提取液真空浓缩至含原药材0.5g/ml的药液；过滤后用2BV石油醚处理，然后用等体积乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，浓缩后转入水相配制成忍冬藤萃取液；通过的大孔吸附树脂为D101，用10BV水洗脱，用12BV的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，所得忍冬藤提取液为每1ml相当于忍冬藤生药量5.0g。
作为优选，所述步骤1)中的洗脱条件为：将忍冬藤萃取液转入水相进行4倍稀释，取经预处理的D101大孔吸附树脂，装柱，以1BV/h的速度上样，静置2小时后，用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用80％乙醇以2BV/h的速度洗脱。
作为优选，所述步骤2)中丝素蛋白溶液通过以下步骤制备得到：取一定量的家蚕茧壳放置于0.50％的碳酸钠溶液中在95℃保持30min，此过程重复两次；将脱胶后的丝素纤维溶解于9.0M的溴化锂溶液中；将上述溶液转移至透析袋中进行透析；将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩、离心处理，得到丝素蛋白溶液。
作为优选，在去离子水中透析3天去除溶液中的盐离子，透析过程中每隔6小时换水一次；将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩处理，然后8000rpm离心10min，收集上清液，采用称重法测量丝素蛋白溶液浓度。
作为优选，所述步骤2)将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩处理至得到质量分数为15％的丝素蛋白溶液。
作为优选，丝素蛋白溶液-忍冬藤提取液按1-9：1-9的质量配比混合，充分搅拌均匀，将混合液置于无菌模具中，使其均匀平铺，在室温下风干后用高压蒸汽法处理，即得一种抗菌消炎中药复合膜剂。
作为优选，所述丝素蛋白溶液与忍冬藤提取液按7：3的质量配比进行混合，制备膜后的成膜性最好，有足够的强度和柔韧性。
本发明将丝素蛋白和忍冬藤提取液进行配比制成复合膜剂，该方法生产工艺简单，便于生产自动化和无菌操作，采用丝素蛋白作为成膜材料，无毒，无刺激气味，性能稳定，成膜后有足够的强度和柔韧性，加入忍冬藤提取液制得的复合膜具有良好的抗菌消炎性能，药物含量准确，稳定性好，吸收快，疗效高，无任何毒副作用。
本发明的另一个目的是提供根据上述制备方法制备得到的抗菌消炎中药复合膜剂，其中，优选地，所述膜剂每平方厘米含忍冬藤提取液0.3ml。将忍冬藤经科学提取浓缩后，再经过纯化和丝素蛋白混合配比制成的膜剂，给药途径较广，可经口服、舌下给药、口腔贴服，皮肤和粘膜创伤、烧伤或炎症表面覆盖、耳鼻喉等途径给药，发挥局部或全身治疗作用。在生产过程中对人类和环境一般不产生污染危害，生物相溶性好，无毒副作用，无环境污染，并克服了中药膜剂载药量小的缺点。
本发明的另一个目的是提供一种中药复合膜剂在制备抗菌消炎药物中的应用。在本发明的一个具体的实施方式中，本发明提供的复合膜剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有定量杀灭作用，当浓度为15％丝素蛋白溶液：忍冬藤提取液7：3时的抗菌消炎效果最佳。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明所用的忍冬藤为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥茎枝。秋、冬二季采割，晒干，有清热解毒，疏风通络的功效。用于温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹，关节红肿热痛，相比金银花资源紧缺，价格居高不下，忍冬藤则具有价格低廉，资源丰富等优势，经现代制药工艺提取忍冬藤，对其有效化学成分进行纯化，按一定配比制成中药膜剂，给药途径较广，可经口服、舌下给药、口腔贴服，皮肤和粘膜创伤、烧伤或炎症表面覆盖、耳鼻喉等途径给药，发挥局部或全身治疗作用，并具有明确的疗效。制备方法简单，操作可行，且环境污染小，并克服了中药膜剂载药量小的缺点，对其进行开发利用具有重要的社会价值、经济价值和科研价值。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点和效果更加清楚明显，结合以下实施例，对本发明进一步详细说明。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，提出了如下的一种抗菌消炎中药复合膜剂及其制备方法：
一、忍冬藤提取工艺优选
采用乙醇回流法作为忍冬藤的最佳提取方法，以乙醇浓度、液料比、提取时间、提取次数作为考察的4个因素，每因素取3个水平，作L9(34)正交试验设计；以绿原酸含量、总黄酮含量为指标，采用综合评分法，并以绿原酸含量最高为50分，依次类推；以总黄酮含量最高为50分，依次类推；将两项相加计算总分。通过正交试验表统计分析软件计算试验结果，确定最佳提取工艺，结果见表1、2、3。
表1因素水平表
1、正交试验优化忍冬藤提取工艺溶液的制备
分别取忍冬藤饮片(粉碎过三号筛)1g，精密称定，按照上述L9(34)正交表进行正交试验，提取结束后，放冷，过滤，滤液分别用相应的的乙醇溶液定容至100ml，备用，每个浓度各重复3次(n＝3)。按照绿原酸含量测定方法和总黄酮含量测定方法，计算其含量，并按照评分标准计算总分，结果见表2。
2、含量测定
2.1绿原酸含量测定
(1)色谱条件：资生堂Capcell Pak C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.4％磷酸溶液(13：87)；检测波长：327nm。
(2)对照品溶液制备：精密称取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加50％甲醇制成每1ml含47μg的溶液，即得(10℃以下保存)。
(3)供试品溶液制备：分别精密吸取上述正交试验提取液各5ml，至25ml棕色容量瓶中，分别用相应的乙醇溶液定容至刻度，摇匀，即得。
(4)含量测定：精密吸取上述绿原酸对照品溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱中，按上述色谱条件测定峰面积，计算绿原酸含量。
2.2总黄酮含量测定
(1)对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品品10mg置50ml容量瓶中，加60％乙醇溶解并定容至50ml，制备浓度为0.2mg/ml的溶液。
(2)分别精密吸取上述正交试验提取液各0.5ml至10ml容量瓶中，加入5％亚硝酸钠和10％硝酸铝各0.3ml，摇匀，放置6min，分别加入4％氢氧化钠4ml，用60％乙醇定容至刻度，摇匀，放置12min，在510nm处测定吸光度值。
(3)根据回归方程：y＝0.0102x+0.0121，其中x为芦丁浓度，单位为mg/L，y为吸光度，计算总黄酮含量。
表2正交试验结果
表3方差分析表
方差来源 偏差平方和 自由度 F值 F临界值 因素影响
A 58.206 2 7.091 5.140 显著性
B 20.071 2 2.445 5.140 不显著
C 4.516 2 0.550 5.140 不显著
D 0.039 2 0.005 5.140 不显著
误差 24.63 6
结果显示：影响忍冬藤提取液中绿原酸和总黄酮提取的因素A>B>C>D，其中A因素有显著性差异，影响最大，B、C、D因素无显著性差异，其中因素D影响最小，故最终确定最佳提取工艺为A2B2C2D2，即最佳提取工艺为按液料比8:1加入70％浓度的乙醇溶液，提取2次，每次提取1.5h。
3、验证试验
按照正交试验优化所得最佳提取工艺，重复3次作为验证试验，结果绿原酸含量分别为2.09％、2.11、2.08％；总黄酮含量分别为8.02％、8.06％、8.05％，高于正交试验中的绿原酸和总黄酮含量，证明此方法是可行的。
二、忍冬藤提取液纯化工艺优选
根据最佳正交试验工艺提取后的药液，进行过滤，并浓缩至含含原药材0.5g/ml的药液。用2BV(体积量)石油醚处理，除去大部分脂溶性成分(即不溶于水的部分)，弃去石油醚，留下的部分用等体积乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，浓缩后转入水相配制成忍冬藤萃取液；本发明采用吸附-解吸附试验，以黄酮类类成分为评价指标，利用大孔吸附树脂对忍冬藤中黄酮类物质进行有效分离纯化。
1、静态吸附量的考察
称取各大孔吸附树脂5.0g(干重)，树脂类型分别为：DM-130、D101、860021、DM-2、DM-131、AB-8，分别加入15ml忍冬藤萃取液(1.0g生药/ml)，放置24小时。抽滤，滤液定容至25ml，测定溶液中总黄酮的含量，结果表明，D101大孔吸附树脂的静态吸附能力明显优于其它树脂，故选择D101大孔吸附树脂。
2、最大动态吸附量的考察
称取已预处理的D101大孔吸附树脂20g(干重)，装柱(内径4cm，柱高21cm)，取忍冬藤萃取液50ml，加水稀释至200ml，以50ml/h(1BV/h)的速度上样，收集流出液。放置2小时后，加去离子水以50ml/h的速度洗脱，100ml/份收集，测定流出液及洗脱液中总黄酮的含量。最大动态吸附量为相当于166ml上样溶液，每克干树脂可吸附忍冬藤萃取液8.3ml。
3、上柱液浓度的考察
取忍冬藤萃取液(1.0g生药/ml)50ml，共4份，分别稀释2、4、6、8倍，以50ml/小时(1BV/h)的速度上样，收集流出液，静置2小时后，加去离子水400ml以50ml/小时的速度洗脱，100ml/份收集，测定流出液和洗脱液中总黄酮的含量。结果表明，在忍冬萃取液稀释4倍，即0.25g生药/ml时的吸附量最大，确定上柱液浓度为0.25g生药/ml。
4、上柱液流速的考察
取忍冬藤萃取液200ml，共4份，分别以50ml/h(1BV/h)、100ml/h(2BV/h)、150ml/h(3BV/h)、200ml/h(4BV/h)的速度上样，收集流出液，静置2小时后，加去离子水400ml以50ml/h的速度洗脱，100ml/份收集，测定流出液和洗脱液中总黄酮的含量。结果表明，上柱液流速为50ml/h(1BV/h)时，吸附量最大，故确定上柱液流速为1BV/h。
5、洗脱液浓度及用量的考察
取忍冬藤萃取液100ml，共3份，上样，静置2小时后，用去离子水10BV、20％乙醇10BV洗脱，分别用60％、70％、80％乙醇对三份上样柱以1BV/h的速度进行洗脱，洗脱至洗脱液基本无色，100ml/份(2BV/份)收集洗脱液，测定洗脱液中总黄酮的含量。结果表明，70％乙醇800ml(16BV)能将90.5％的总黄酮洗脱下来，80％乙醇600ml(12BV)能将98.5％的总黄酮洗脱下来，而60％乙醇900ml(18BV)只能洗脱82.5％的总黄酮，故确定采用80％乙醇作为洗脱剂。
6、洗脱速度的考察
取忍冬藤萃取液100ml，共3份，上样，静置2小时后，用去离子水10BV洗脱后，分别用80％乙醇12BV对三份上样柱以1BV/h、2BV/h、3BV/h的速度进行洗脱，100ml/份(2BV/份)收集洗脱液，测定洗脱液中总黄酮的含量。
结果表明，速度为1BV/h的洗脱率为86.46％，速度为2BV/h的洗脱率为94.32％，速度为3BV/h的洗脱率为92.61％，速度为2BV/h的洗脱率最大，故确定洗脱速度为2BV/h。
7、径高比考察
取三根层析柱，分别称取20g、40g、60g(干重)经预处理的D101大孔吸附树脂，装柱，取忍冬藤萃取液150ml、300ml、450ml，以1BV/小时的速度上样，放置2小时后，分别用水10BV洗脱，再用80％乙醇12BV洗脱，2BV/份收集80％乙醇洗脱液，测定洗脱液中总黄酮的含量。结果表明，三种径高比的洗脱率基本一致，说明径高比对洗脱率影响不大。
8、验证实验
取经预处理的D101大孔吸附树脂，装柱(三根，内径9.1cm，高度70cm，保留体积1.5L)，分别取10L忍冬藤萃取液，以1.5L/h的速度上样，静置2小时后，用去离子水15L以1.5L/h的速度洗脱，弃去洗脱液，再用80％乙醇15L以3.0L/h的速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，所得忍冬藤溶液为每1ml相当于原药材5.0g。
三、丝素蛋白的制备：
1.取20g剪碎的蚕茧壳放置于0.5％的碳酸钠溶液中，加热至90℃，保持30分钟，脱胶过程重复两次，取出丝素纤维用去离子水冲洗干净，自然风干备用。配置100mL浓度为9.0M的溴化锂溶液，取10g脱胶后的丝素纤维溶解于溴化锂溶液中，随后，将上述溶液转移至透析袋(截留分子量8000-14000Da)，在去离子水中透析3天去除溶液中的盐离子，透析过程中每隔6小时换水一次。将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩处理，然后8000rpm离心10min，收集上清液，采用称重法测量丝素蛋白浓度，测得浓度为15％，放置于4℃冰箱备用。
2.取20g剪碎的蚕茧壳放置于0.75％的碳酸钠溶液中，加热至100℃，保持30分钟，脱胶过程重复两次，取出丝素纤维用去离子水冲洗干净，自然风干备用。配置100mL浓度为10.0M的溴化锂溶液，取10g脱胶后的丝素纤维溶解于溴化锂溶液中，随后，将上述溶液转移至透析袋(截留分子量8000-14000Da)，在去离子水中透析3天去除溶液中的盐离子，透析过程中每隔6小时换水一次。将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩处理，然后8000rpm离心10min，收集上清液，采用称重法测量丝素蛋白浓度，测得浓度为20％，放置于4℃冰箱备用。
3.取20g剪碎的蚕茧壳放置于0.25％的碳酸钠溶液中，加热至80℃，保持30分钟，脱胶过程重复两次，取出丝素纤维用去离子水冲洗干净，自然风干备用。配置100mL浓度为8.0M的溴化锂溶液，取10g脱胶后的丝素纤维溶解于溴化锂溶液中，随后，将上述溶液转移至透析袋(截留分子量8000-14000Da)，在去离子水中透析3天去除溶液中的盐离子，透析过程中每隔6小时换水一次。将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩处理，然后8000rpm离心10min，收集上清液，采用称重法测量丝素蛋白浓度，测得浓度为10％，放置于4℃冰箱备用。
四、中药复合膜剂的制备方法
结合药效筛选试验及成膜性试验结果，当浓度为15％丝素蛋白溶液：忍冬藤提取液(7：3)时的抗菌消炎效果最佳，且制备膜后的成膜性最好，有足够的强度和柔韧性，取丝素蛋白溶液和忍冬藤提取液，按上述比例充分搅拌均匀，取一定体积混合液置于无菌模具中，使其均匀平铺，在室温下风干后用高压蒸汽法处理，即得一种抗菌消炎中药复合膜剂，折算该膜剂每平方厘米含忍冬藤提取液为0.3ml。
五、抗菌消炎药效学试验
1.本发明中药复合膜多次皮肤刺激试验：
试验方法：将新西兰家兔的背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围各位2.5cm×2.5cm，用膜覆盖面积1.5cm×1.5cm，取受试物贴敷在一侧皮肤上，另一侧作为对照，在贴敷后4h，用水或无刺激的适宜溶剂清洗，除去残留物。每天贴敷1次，连续贴敷14d。在每次贴敷后24h观察结果，按规范中的相关要求进行评分和分级。微量便于受试物的涂抹和结果观察，必要时应剪毛。对照区的处理方法通试验区。
试验结果，见表4。
表4受试物对家兔多次皮肤刺激性试验结果
结果表明受试物对家兔多次皮肤刺激性检验结果为无刺激性，未见其他毒性。
2.中和剂鉴定试验和细菌定量杀灭试验：
器材：
①试验菌株：大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538由中国工业微生物种保藏管理中心提供，第4-8代新鲜斜面培养物；
②中和剂：D/E肉汤；
③其他：浓度为3％的有机干扰物，标准硬水等。
方法：
①检测依据：中和剂鉴定试验及定量杀灭试验按照卫生部《消毒技术规范》(2002版)2.1.1.5.5和2.1.1.7.4条；
②中和剂鉴定试验：以该试验样品和大肠杆菌作用0.5min。试验温度19℃-21℃，试验重复3次；
③定量杀灭试验：以该试验样品原液，作用时间分别为5min、10min、15min，试验温度19℃-21℃，试验重复3次。
结果：
①中和剂鉴定试验，3次重复试验中，3、4、5三组间回收菌落误差分别为8.75％、9.08％、6.54％。结果见表5。
表5中和剂鉴定试验结果
注：阴性对照均无菌生长。
②对试验结果的杀灭效果
经3次重复试验，结果表明该发明一种抗菌消炎中药复合膜剂对大肠杆菌作用5min，杀灭对数值>5.00；对金黄色葡萄球菌作用5min、10min、15min，平均杀灭对数值分别为2.36、3.95，>5.00。结果见表6。
表6丝素蛋白忍冬藤复合膜对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭效果
结论：
①经3次重复试验，结果表明D/E肉汤中和剂可中和丝素蛋白和忍冬藤复合膜中的杀菌成分，且中和剂及中和产物对试验菌生长及培养基无明显影响。表明该中和剂适用于该试验样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的定量杀灭试验。
②经3次重复试验表明，该发明的复合膜剂对大肠杆菌作用5.0min，杀灭对数值>5.00；对金黄色葡萄球菌作用5.0min、10min、15min，平均杀灭对数值分别为3.65、4.75，>5.00。
最后说明的是上面所述的实施例仅用以说明本发明的技术方案，并非对本发明的构思和范围进行限定。在不脱离本发明设计构思的前提下，本领域普通人员对本发明的技术方案做出的各种变型和改进，均应落入到本发明的保护范围，本发明请求保护的技术内容，已经全部记载在权利要求书中。

Claims (10)

1.一种抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)忍冬藤提取液的制备：
a)提取：取忍冬藤饮片，加入6-10倍量的60-80％乙醇溶液，加热回流提取1-2小时，重复1-3次，提取液过滤，真空回收乙醇，至含原药材0.4g/ml-0.6g/ml的药液；b)萃取：用1-3BV体积量石油醚处理得到的药液，然后用等体积乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，浓缩后转入水相配制成忍冬藤萃取液；c)洗脱：将所得的萃取液通过大孔吸附树脂，用4-10BV的水洗脱，水液弃去，用4-10BV的80％乙醇洗脱，减压回收乙醇，得到忍冬藤提取液；
2)丝素蛋白溶液的制备：取一定量的家蚕茧壳放置于0.25％-0.75％的碳酸钠溶液中在80℃-100℃保持30min，此过程重复两次；将脱胶后的丝素纤维溶解于8M-10M的溴化锂溶液中；将上述溶液转移至透析袋中进行透析；将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩处理得到质量分数为10-20％的丝素蛋白溶液；
3)将步骤2)所得丝素蛋白溶液中加入步骤1)所得忍冬藤提取液，充分混匀制得混合液，冷藏备用；
4)将步骤3)所得混合液置于无菌模具中，在室温下风干后用高压蒸汽法处理，得到抗菌消炎中药复合膜剂。
2.根据权利要求1所述的抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法，其中，所述忍冬藤提取液通过以下步骤制备：将忍冬藤切成段，打成粗粉，加入8倍量乙醇，加热回流提取1.5小时，重复2次，所述乙醇浓度为70％，提取液真空浓缩至含原药材0.5g/ml的药液；过滤后用2BV石油醚处理，然后用等体积乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，浓缩后转入水相配制成忍冬藤萃取液；通过的大孔吸附树脂为D101，用10BV水洗脱，用12BV的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，所得忍冬藤提取液为每1ml相当于忍冬藤生药量5.0g。
3.根据权利要求2所述的抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法，其中，所述步骤1)中的洗脱条件为：将忍冬藤萃取液转入水相进行4倍稀释，取经预处理的D101大孔吸附树脂，装柱，以1BV/h的速度上样，静置2小时后，用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用80％乙醇以2BV/h的速度洗脱。
4.根据权利要求1所述的抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法，其中，所述步骤2)中丝素蛋白溶液通过以下步骤制备得到：取一定量的家蚕茧壳放置于0.50％的碳酸钠溶液中在95℃保持30min，此过程重复两次；将脱胶后的丝素纤维溶解于9.0M的溴化锂溶液中；将上述溶液转移至透析袋中进行透析；将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩、离心处理，得到丝素蛋白溶液。
5.根据权利要求1所述的抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法，其中，在去离子水中透析3天去除溶液中的盐离子，透析过程中每隔6小时换水一次；将透析完全后的丝蛋白溶液进行浓缩处理，然后8000rpm离心10min，收集上清液，得到丝素蛋白溶液。
6.根据权利要求1所述的抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法，其中，丝素蛋白溶液浓度为15％。
7.根据权利要求1所述的抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法，其中，丝素蛋白溶液-忍冬藤提取液按1-9：1-9的质量配比混合，充分搅拌均匀，将混合液置于无菌模具中，使其均匀平铺，在室温下风干后用高压蒸汽法处理，即得一种抗菌消炎中药复合膜剂。
8.根据权利要求1所述的抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法，其中，所述丝素蛋白溶液与忍冬藤提取液按7：3的质量配比进行混合。
9.根据权利要求1-8任意一项所述的抗菌消炎中药复合膜剂的制备方法得到的中药复合膜剂。
10.一种根据权利要求9所述的中药复合膜剂在制备抗菌消炎药物中的应用。
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