CN107961382B - miR-1252在制备治疗特应性皮炎的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了miR‑1252在制备治疗特应性皮炎的药物中的应用，所述miR‑1252的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示.本发明以探索可成为特应性皮炎疾病标记物的物质为目的，涉及包括测定皮肤细胞及/或皮肤组织中特定蛋白质的表达及/或其基因表达的判定特应性皮炎的方法，所述方法中，所述特定蛋白质伴随特应性皮炎的炎症其表达发生改变或因特应性皮炎起因的程度其表达发生改变。本发明还提供用于判定特应性皮炎的炎症程度或特应性皮炎发病的危险度的试剂盒及鉴定具有治疗及/或预防特应性皮炎作用的物质的方法。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体的，涉及一种microRNA在制备治疗特应性皮炎的药物中的应用。
背景技术
特应性皮炎是一种慢性反复性、瘙痒性、炎症性皮肤疾病。特应性皮炎多自婴儿期起病，病情迁延反复。其临床表现较复杂，不同临床时期存在不同的皮损。皮疹多形性并具有渗出倾向，常伴有哮喘、过敏性鼻炎及血清IgE增高等症状和体征。急性期皮损多表现为红斑、丘疹及水疱，严重者常可见广泛抓痕、糜烂及渗出；亚急性期皮损多表现为红斑、抓痕及鳞屑；慢性期则多表现为纤维化丘疹、苔藓样变及皮肤增厚性斑块。随着全球化工业化发展，受气候变化、环境污染、饮食卫生文化习惯等多重因素的影响，特应性皮炎的发病率在全球范围内呈逐渐上升趋势，特别是在欧美等西方工业文明发达国家，其发病率甚至多年居高不下；而根据最新流行病数据，从20世纪末到本世纪初20多年时间内，中国特应性皮炎患者的总标化患病率也由0.69％逐渐上升至3.07％，并且处在快速增长期。而我国城市化、工业化程度的不断加深、生态环境的日益恶化、传统饮食结构、生活习惯的转变，则势必更明显地影响儿童特应性皮炎的发病，使我国儿童特应性皮炎的患病率呈现快速增长的趋势。目前对于特应性皮炎的反复发作，仍是一个难以解决的问题。
特应性皮炎为多因素、多环节、多途径共同作用的一种疾病。皮肤功能障碍失调已被认为是特应性皮炎基本的特征。皮肤屏障功能障碍可导致微生物、变应原和其他环境因素的渗入，继而导致包括炎症、变应原的致敏作用及微生物的聚集等后果。皮肤细胞之间的胞间连接蛋白，如丝聚蛋白flaggrin，紧密连接蛋白occludin，在特应性皮炎患者的皮肤中表达量出现明显下降，被认为是皮肤屏障功能障碍的重要原因。
miRNA是调节基因表达的内源性非编码小分子RNA，在转录后水平对基因表达进行调控，参与细胞周期、凋亡、发育、分化和新陈代谢等生理过程。miRNA在细胞中表达失调会导致癌症在内的多种疾病的发生，最新研究表明，一些miRNA在特应性皮炎中异常表达，但何种miRNA与特应性皮炎的发生、发展有关仍未达成共识。
因此有必要寻找与特应性皮炎发生、发展有关的miRNA，从而为临床上治疗特应性皮炎提供一种有效手段。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抑制特应性皮炎发展的含有miRNA的药物组合物，为临床上治疗特应性皮炎提供可能。
本发明的发明人在对特应性皮炎的相关研究中发现miR-1252在特应性皮炎患者血液中含量显著升高，同时发现miR-1252能够抑制翻译起始因子eIF4G2的表达，进而抑制丝聚蛋白flaggrin和紧密连接蛋白occludin的表达。特应性皮炎患者血液中miR-1252的含量高低可作为诊断特应性皮炎的一个分子标记物。
本发明的一个方面提供了miR-1252在制备治疗特应性皮炎的药物中的应用，所述miR-1252的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
可选的，所述应用包括制备缓解特应性皮炎、防止特应性皮炎复发的药物。
可选的，所述应用包括将miR-1252与载体结合后与抗炎症药物和/或药物可接受的辅料复配制成药物组合物。
本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物以miR-1252为活性成分，其中，所述miR-1252的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。
可选的，所述药物组合物含有与载体结合的miR-1252和/或药物可接受的辅料。
在本发明所提供的药物组合物中，载体可以为本领域常用的适合于miRNA在宿主细胞中表达的载体种类，例如，所述载体可以为脂质体、壳聚糖或慢病毒表达载体。
在本发明的一种实施方式中，所述表达载体为慢病毒表达载体，优选的，所述慢病毒表达载体可以为pWPXL、pMD2.G或psPAX2慢病毒表达载体。
在本发明的一个优选的实施方案中，所述药物组合物还任选地包含一种或多种其他对特应性皮炎有效的药物，这些药物是本领域技术人员所熟知的。
附图说明
图1为miR-1252在健康人群和特应性皮炎患者血清中的含量。
图2为miR-1252能够抑制丝聚蛋白flaggrin和紧密连接蛋白occludin的表达。
其中，(A)为miR-1252mimics转染293T细胞，Q-PCR检测miR-1252的含量；(B)为miR-1252 mimics转染293T细胞后检测翻译起始因子eIF4G2，丝聚蛋白flaggrin和紧密连接蛋白occludin的表达。
图3为抑制miR-1252能够促进丝聚蛋白flaggrin和紧密连接蛋白occludin的表达。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明进行详细说明。
在本发明中，术语“miR-1252”是指包含SEQ ID No.1所示序列或其同源序列的微小RNA。本领域中已知各种来源的miR-1252，例如，人、鼠、兔等，这些同源序列均包含在本发明的术语miR-1252中。本发明的术语中还包含上述天然存在的miR-1252序列经取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，或经过生物学化学修饰后仍具有miR-1252生物活性的衍生RNA。
本发明中，人工合成的以及可以通过购买市售商品方式获得的具有miR-1252生物学活性的miR-1252模拟物也属于本发明的保护范围。
此外，本发明所述的miR-1252也可以为前体形式，miR-1252前体是指在被施用对象的细胞内或体内可以被加工成为miR-1252的前体。获得天然存在的miR-1252前体的方法为本领域技术人员所公知。
本领域技术人员公知，miR-1252的初始转录产物经过一系列的加工后，形成成熟的miR-1252。miR-1252前体只有在加工成成熟的miR-1252后才具有相应的生物学功能。
本发明所提供的组合物可以用于治疗特应性皮炎。所述组合物中含有有效量的本发明的miR-1252。
在本发明中，所述药物可接受的辅料包括各种赋形剂、稀释剂和佐剂。辅料其本身并不是必要的活性成分，且使用后没有过分的毒性。这类辅料包括但不限于：生理盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇等。
在本发明的一种实施方式中，所述组合物的形式适合于：直接裸microRNA注射法、脂质体包裹RNA直接注射法、繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法或复制缺陷腺病毒携带目的DNA法等。
本发明的miR-1252的有效剂量可以随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等进行相应的调整。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员综合各因素来确定。所述因素包括但不限于：miR-1252的药代动力学参数、被治疗的患者的健康状况、体重、给药途径等。
本发明中，所述药物组合物的给药途径为静脉内、动脉内灌注或局部注射等，也可以采用本领域技术人员所熟知的给药技术进行给药。
本发明的药物组合物可以与其它治疗手段联合，用于特应性皮炎的治疗。
实施例1
本实施例证明miR-1252在特应性皮炎患者血液中的含量高于健康人群
收集健康人群和特应性皮炎患者的血清样本各7例，通过miR提取试剂盒获得血液中的miR，利用Q-PCR的方法检测并比较血清中miR-1252的相对含量。如图1，特异性皮炎患者血清中miR-1252的含量显著高于健康人群血清中的含量。
实施例2
本实施例证明miR-1252抑制丝聚蛋白flaggrin和紧密连接蛋白occludin的表达
用转染试剂lipofectamine2000将miR-1252的模拟物miR-1252mimics(miR-1252模拟物)转染人肾上皮细胞系293T，并用Q-PCR检测其表达量如图2A，结果表明，miR-1252mimics转染293T后细胞中miR-1252表达量显著性上升，证明mimics能够模拟miR-1252的表达。miR-1252 mimics转染293T细胞48后，用免疫印迹的方法检测细胞内翻译起始因子eIF4G2的表达。如图2B，miR-1252mimics显著降低eIF4G2的表达。因eIF4G2可促进flaggrin和occludin的表达，从而保持表皮和真皮细胞的紧密连接，防止特应性皮炎的发生。进一步实验发现，miR-1252也能够显著性抑制丝聚蛋白flaggrin和紧密连接蛋白occludin的表达。
实施例3
本实施例证明抑制miR-1252可促进丝聚蛋白flaggrin和紧密连接蛋白occludin的表达。
用转染试剂lipofectamine 2000将miR-1252的抑制剂miR-1252 inhibitor(与miR-1252结合并抑制其发挥作用)转染人肾上皮细胞系293T细胞48后，用免疫印迹的方法检测细胞内翻译起始因子eIF4G2的表达。如图3，miR-1252 inhibitor显著增加eIF4G2的表达。因eIF4G2可促进flaggrin和occludin的表达，从而保持表皮和真皮细胞的紧密连接，防止特应性皮炎的发生。进一步实验发现，miR-1252 inhibitor也能够显著性增加丝聚蛋白flaggrin和紧密连接蛋白occludin的表达。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 北京市顺义区妇幼保健院
<120> miR-1252在制备治疗特应性皮炎药物中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agaaggaaau ugaauucauu ua 22
Claims (5)
1.miR-1252-5pinhibitor在制备治疗特应性皮炎的药物中的应用，miR-1252-5pinhibitor能够显著性增加丝聚蛋白flaggrin和紧密连接蛋白occludin的表达，从而保持表皮和真皮细胞的紧密连接，防止特应性皮炎的发生。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括制备缓解特应性皮炎和防止特应性皮炎复发的药物。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，包括将miR-1252-5p inhibitor与载体结合后与抗炎症药物和/或药物可接受的辅料复配制成药物组合物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述载体为慢病毒表达载体。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述载体为脂质体或壳聚糖。
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