CN107936093B - 小分子多肽及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种小分子多肽，小分子多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还提供了小分子多肽的用途。本发明的多肽具有良好的α‑葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性，稳定性强，结构易于调控，具有很明显的应用潜力。

Description

小分子多肽及其用途
技术领域
本发明涉及一种小分子多肽。更具体地说，本发明涉及一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性的小分子多肽。
背景技术
糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。目前的降糖药物的作用机制中，通过抑制能催化淀粉或蔗糖消化的最后一步而产生糖类物质的α-葡萄糖苷酶活性，被认为是控制II型糖尿病的理想途径。临床上应用的临床上用于治疗糖尿病的α-葡萄糖苷酶抑制剂主要有阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇等，但这些化合物具有一定的副作用。因此，需要制备新型的α-葡萄糖苷酶抑制剂。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种小分子多肽及其用途，该小分子多肽稳定性强，并具有具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种小分子多肽，小分子多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
优选的是，所述的小分子多肽，所述小分子多肽的等电点为9.0。
本发明还提供了一种小分子多肽的用途，用于制备治疗糖尿病的药物。
本发明还提供了一种小分子多肽的用途，用于制备清除自由基的药物。
本发明至少包括以下有益效果：
1、本发明的多肽具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性，同时具备抗氧化活性。
2、本发明方法是一种小分子多肽，稳定性强，结构易于调控，具有很明显的应用潜力。
3、本发明小分子多肽与大分子多肽相比合成方法简便，易于大规模生产。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
一种小分子多肽，小分子多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；
SEQ ID No.1：DDCCKVKQKSSSKKLDL。
所述小分子多肽的等电点为9.0。
所述小分子多肽的的分子量为1925.26g/mol。
所述小分子多肽的制备方法：
选用氨基酸-王树脂作为载体(树脂)，用二氯甲烷将树脂充分溶胀，加入第一个Fmoc-保护氨基酸，用二甲基甲酰胺清洗几遍，用适当浓度的DBLK，将Fmoc-保护基团脱出，之后用二甲基甲酰胺清洗数遍，洗去DBLK，称取适合的缩合剂苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐和活化剂甲基吗啉以及C端第二个Fmoc-保护氨基酸(Fmoc-Asp-OH)进行偶联，通过茚三酮检测法进行检测确保连接比较完全，用二甲基甲酰胺清洗几遍，洗去残留的各种残基，活化剂和缩合剂，依氨基酸序列进行偶联，将所有的氨基酸连接结束后，脱去最后的Fmoc-保护基团，用切割液裂解，去除树脂和氨基酸保护基团，得到小分子多肽的粗品，送质谱确认产品分子量1925.26g/mol符合理论值。
实施例2
小分子多肽体外α-葡萄糖苷酶活性的测定。
所有测试都是用Microplate reader ELX808TM型酶标仪(美国BioTek公司)，在37℃条件下测定。数据分析软件使用Origin软件进行数据处理，使用阿卡波糖作为对照品。
(1)抑制剂储备液的配制：所测试的抑制剂配成10mM的DMSO溶液(实施例1多肽的DMSO溶液)。
(2)酶储备液的配制：α-葡萄糖苷酶购自美国Sigma公司；用pH＝6.8的磷酸盐缓冲液分别配成1mg/mL。
(3)底物储备液的配制：对硝基苯葡萄糖苷(PNPG)为底物，购自Sigma公司；用pH＝6.8的磷酸盐缓冲液分别配成10mg/mL。
(4)终止液的配制：碳酸钠(Na2CO3)购自上海国药；用pH＝6.8的磷酸盐缓冲液分别配成0.1M Na2CO3溶液。
(5)测试：每次测试的体积都为200μL的pH＝6.8的磷酸盐缓冲液。
往96孔酶标板中加入分别加入10μL不同浓度抑制剂溶液(用pH＝6.8磷酸盐缓冲溶液稀释抑制剂储备液)，用pH＝6.8磷酸盐缓冲溶液补齐至170μL，然后加入10μL酶储备液，在37℃的酶标仪中保温10min，立即加入20μL底物储备液，混匀后立即测其在λ＝405nm处一分钟吸光度变化(斜率)。参比液为pH＝6.8磷酸盐缓冲溶液。
(6)结果判断：以未加样品所测得的吸光度变化(斜率)作为100个活力单位；
相对酶活力＝(加入抑制剂的吸光度变化(斜率)/没有加入抑制剂的吸光度变化(斜率)×100，当酶的相对活力为50时的抑制剂的浓度即为抑制剂的IC50值，结果见表1：
表1.多肽对α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC50值
药物 IC<sub>50</sub>(μM)
多肽 5.33
阿卡波糖(对照品) 7.05
从实施例2的结果可以看出本发明的多肽对α-葡萄糖苷酶的抑制活性(IC50＝5.33μM)强于对照品阿卡波糖(IC50＝7.05μM)。实验表明，该化合物具有强的抑制α-葡萄糖苷酶活性。本发明为研究开发新的抗糖尿病药物提供了新的思路。
实施例3
将2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)用蒸馏水配制成2mM溶液，取50mL上述溶液与200mL K2S2O8水溶液(70mM)混合均匀，避光放置12-16h，得到2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基离子(ABTS·+)溶液。用磷酸盐缓冲液(PBS)将ABTS·+溶液稀释至吸光度为0.70±0.02(Abs＝734nm处)。分别取0.6mL多肽的DMSO溶液(0.2,0.4,0.6,0.8μM)，加入4mL ABTS·+溶液，在5min时测其吸光度。ABTS·+自由基清除率(S％)计算公式如下：S％＝(A0-A)/A0，其中A0为ABTS·+溶液的吸光度，A为加药液后的吸光度。
表1.多肽对ABTS·+自由基离子的清除率
浓度(μM) 清除率(％)
0.2 26.8
0.4 51.2
0.6 70.3
0.8 90.2
结果表明，本发明的多肽分子具有优异的抗氧化性能，对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基离子的清除能力达到90％以上。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
SEQUENCE LISTING
<110> 广西中医药大学
<120> 小分子多肽及其用途
<130> application
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 17
<212> PRT
<213> 多肽
<400> 1
Asp Asp Cys Cys Lys Val Lys Gln Lys Ser Ser Ser Lys Lys Leu Asp
1 5 10 15
Leu

Claims (3)

1.一种小分子多肽，其特征在于，小分子多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.如权利要求1所述的小分子多肽，其特征在于，所述小分子多肽的等电点为9.0。
3.一种如权利要求1所述的小分子多肽的用途，其特征在于，用于制备治疗糖尿病的药物。
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蜂王浆水溶性蛋白质及其水解多肽对自由基的清除能力和对胰脂肪酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性;励建荣 等;《中国食品学报》;20120930;第12卷(第9期);第8-15页 *

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