CN107929283A - 银杏二萜内酯组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种银杏二萜内酯组合物，该组合物具有改善抑郁状态的效果，该组合物可使鼠甩尾间隔时间和游泳间隔时间不同程度地延长，同时可使逃避电击次数不同程度地提高，且额外添加一定含量的银杏内酯C、银杏内酯J以及银杏内酯L后，其改善抑郁状态的效果大大提高。此外，本发明还通过实验证实给予银杏二萜内酯组合物后，SOD、MDA、GSH和TAC等指标能被不同程度地改善，其中添加一定含量的银杏内酯C、银杏内酯J以及银杏内酯L后其改善作用更为明显，能更好地改善氧化应激水平，缓解氧化损伤。

Description

银杏二萜内酯组合物

技术领域

本发明属于涉及医药技术领域，特别是涉及一种银杏二萜内酯组合物。

背景技术

银杏树别名白果树，古代又称鸭脚树或公孙树，是世界最古老的树种之一，资源在我国分布最为广泛，占世界总量的70％以上。银杏作为药用至今已有600年的历史。银杏叶有广泛生物活性，含有多种化学成分，主要包括黄酮类、萜类、多酚类、苯丙素类、有机酸、糖类、脂肪酸、脂质、无机盐和氨基酸等。现代药理研究证明，银杏叶提取物具有抗氧化、抗衰老、降血压、促进血液循环、提高脑部功能等功效。

银杏内酯属于萜类化合物，称为萜类内酯。1967年，美国哥伦比亚大学的中西香尔教授首次报道了从银杏叶提取物中发现的4个具有特殊结构的二萜内酯类(diterpenelactones)化合物即银杏内酯A、B、C和M(GA、GB、GC、GM)。1987年又分离得到银杏内酯J(GJ)，后来又发现了银杏内酯K和L(GK、GL)。银杏内酯类化合物是银杏所独有的重要成分，具有专属性的抗血小板活化因子活性,是天然的强血小板活化因子PAF(PAF是血小板和多种炎症组织分泌产生的一种内源性磷脂，是迄今发现的最有效的血小板聚集诱导剂)拮抗剂，具有抗氧化、抗炎、抗血小板聚集、抗细胞凋亡及死亡、扩张血管、保护中枢神经和缺血组织等药理作用，尤其在治疗缺血性脑卒中方面具有独特的优势。

CN1424031A报道了一种银杏内酯制剂，银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯K的含量为银杏内酯A 30-40％，银杏内酯B 50-65％，银杏内酯K 0.5-5％。基于中医药理论，中药强调多成分协同发挥作用，发明人在这个基础上发现，当组合物中同时含有银杏内酯C、银杏内酯J、银杏内酯L时，其会增加银杏内酯组合物在一些方面的药理作用。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在利用银杏内酯单体间的协同作用，寻找一种药理活性更高的组合物。

本发明提出了一种银杏二萜内酯组合物，其特征在于，所述组合物包含：以重量份计，32-36份的银杏内酯A、55-58份的银杏内酯B、2.2-3.4份的银杏内酯K；其中，该组合物还包含银杏内酯C、银杏内酯J以及银杏内酯L，且银杏内酯C、J、L三者的总量在2.6份以上。优选地，银杏内酯C、J、L各自含量均不小于0.5份。

优选地，所述的银杏内酯C、银杏内酯J、银杏内酯L、三者的总量在10.8份以下。

优选的，所述银杏内酯C、银杏内酯J、银杏内酯L三者的总量为2.6份至10.8份。

优选地，所述银杏内酯C、银杏内酯J、银杏内酯L三者的总量为3.0-6.0份；

优选地，所述银杏内酯C、银杏内酯J、银杏内酯L三者的总量为4.6份。

本发明提出了一种银杏二萜内酯组合物，其特征在于，所述组合物包含：以重量计，32-34％的银杏内酯A、56-58％的银杏内酯B、2.4-3.4％的银杏内酯K；其中，该组合物还包含银杏二萜内酯C、银杏内酯J以及银杏内酯L，且银杏内酯C、银杏内酯J以及银杏内酯L含量总和在2.6％以上。优选地，银杏内酯C、J、L各自含量均不小于0.5％。

优选地，所述银杏内酯C、银杏内酯J和银杏内酯L三者的含量总和在2.6-10.8％之间。

优选地，所述银杏内酯C、银杏内酯J和银杏内酯L三者的含量总和在3.0-6.0％之间。

优选地，所述银杏内酯C、银杏内酯J和银杏内酯L三者的含量总和为4.6％。

优选地，所述组合物中不含有白果内酯。

本发明还提出了一种包含上述组合物的银杏二萜内酯制剂，其特征在于，该制剂还包含药学上可接受的辅料。

本发明还提出了包含上述组合物的银杏二萜内酯注射剂。

具体地，该注射剂为1ml或5ml或10ml剂量，其含有5±0.5mg或25±0.5mg或50±0.5mg所述银杏二萜内酯组合物。进一步地，该注射剂还包含葡甲胺和氯化钠，各组分的重量比为：银杏二萜内酯组合物：葡甲胺：氯化钠＝(2-8)：(2-8)：(4-12)。

本发明还提出了上述的组合物在制备抗抑郁药物中的应用。

本发明还提出了上述的组合物在制备心脑血管药物中的应用。

本发明还提出了上述的组合物在制备改善氧化应激药物中的应用。

所述“应用”是指将上述提取物给予具有相应疾病或该疾病的倾向的受试者，其目的为赋予治疗效果，例如治愈、缓解、改变、影响、改善或预防上述疾病、其症状或其倾向。本领域技术人员，能根据所治疗的疾病的类型、给药途径、赋形剂的使用容易确定具体的有效剂量，该剂量可能会因为同时使用其它药物而有所差异。

本发明利用鼠模型，证实了银杏二萜内酯组合物可使甩尾间隔时间和游泳间隔时间不同程度地延长，同时可使逃避电击次数不同程度地提高，且额外添加一定含量的银杏内酯C、银杏内酯J以及银杏内酯L后，其改善抑郁状态的效果大大提高。此外，本发明还通过实验证实给予银杏二萜内酯组合物后，SOD、MDA、GSH和TAC等指标能被不同程度地改善，其中添加一定含量的银杏内酯C、银杏内酯J以及银杏内酯L后其改善作用更为明显，能更好地改善氧化应激水平，缓解氧化损伤。

本发明所述的“以上”包括本数，例如2.6份以上，包括2.6份；再例如2.6％以上，包括2.6％。

具体实施方式

以下通过具体实施方式对本发明进行更加详细的说明，以便能够更好地理解本发明的方案及其各个方面的优点。然而，以下描述的具体实施方式的内容仅是说明的目的，而不是对本发明的限制。

需要注意的是，如未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用原料药或辅料，以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例或份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用与本发明。

实施例1：银杏二萜内酯组合物的抗抑郁作用

1材料

动物：SPF级雄性SD大鼠，体重为200-220g；SPF级雄性昆明鼠，体重为20-24g，南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，合格证号SCXK(苏)2016-0008。

受试药物：各银杏二萜内酯化合物均为市售标准品，按照下表所述比例配制成不同比例的银杏二萜内酯组合物A-K组，并用0.5％葡甲胺与0.15％柠檬酸溶解制备成实验用溶液。阳性药为盐酸丙咪嗪片(上海九福药业公司，25mg/片)，配制成12.5mg/mL和5mg/mL的药液。

银杏二萜内酯组合物中各组分重量份配比(份)

2方法

2.1小鼠甩尾实验：选取体重20-24g健康雄性小鼠，随机分成模型组、阳性药组及银杏二萜内酯组合物A-K组，每组10只。阳性药组每天灌胃丙咪嗪片50mg/kg，银杏二萜内酯组合物A-K组小鼠每天给药剂量为9mg/kg(ig)，每天1次，连续给药5天。于第5次给药后30min开始实验，实验时将小鼠尾端2cm的部位贴在一木棍上，使动物成倒挂状态，其头部离地面约5cm。两侧用板隔开动物视线，记录动物6min内后3min的不动时间。给药前测定1次，给药5天后测定1次。计算小鼠自身两次不动时间的差值经lg(X+86)转换后进行统计分析。

2.2小鼠强迫游泳实验：选取体重20-24g的雄性小鼠，分组及给药同2.1节。于第5次给药后30min开始实验。将小鼠放入水深10cm的量筒中(高20cm，直径14cm)，水温30℃。计算小鼠自身两次不动时间的差值经lg(X+45)转换后进行统计分析。

2.3大鼠电击躲避实验：采用获得性无助电击模型观察药物的抗抑郁作用。选取体重180-220g健康雄性大鼠，随机分成正常组、模型组、阳性药组及银杏二萜内酯组合物A-K组，每组10只。模型组每天灌胃相同容量的生理盐水，阳性药组每天灌胃丙咪嗪片33mg/kg，银杏二萜内酯组合物A-K组大鼠每天给药剂量为6.26mg/kg(ig)，每天1次，连续给药35天。于第30次给药30min后开始实验，实验第一天进行“无助诱发”，用一20×10×10cm的底部为铜栅的笼子，给动物施以60次随机的无法逃避的足部电击(0.85mA，15s，每1min给1次)，正常组大鼠放入相同的笼子中但不给于电击。48h后开始进行回避训练。用20×10×10cm的穿梭箱，底部铜栅间隔为1cm。将动物单个放入穿梭箱一端，让其适应5min后进行20次的回避训练，每次间隔30s。训练时先给予一个灯光信号，允许动物在此期间达另一端以逃避电击，若无反应发生，则光信号再持续3s，同时还出现一个0.8mA，3s的足部电击，若仍无反应发生，电击和光信号立即停止并作一次逃避失败记录。训练共进行5天，记录每只大鼠每天训练时的逃避成功次数，对第5次训练结果进行统计。

2.4统计分析：数据均以表示，所有数据采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，判断差异的显著性。

3、结果

由表1可见，与模型组比较，丙咪嗪显著延长小鼠甩尾和游泳间隔时间，差异有统计学意义(与正常组相比，P<0.01)。给予银杏二萜内酯组合物后，甩尾间隔时间和游泳间隔时间均不同程度延长，其中A-C三组的改善作用更为明显(与模型组相比，P<0.01)，显著优于D-K组(与模型组相比，P<0.05)，能更好地改善抑郁状态。

表1银杏二萜内酯组合物对小鼠的抗抑郁作用

由表2可见，与正常组比较，模型组大鼠逃避电击次数显著下降(P<0.01)。给予阳性药丙咪嗪后，与模型组比较，丙咪嗪显著提高大鼠逃避电击次数，差异有统计学意义(与模型组相比，P<0.01)。给予银杏二萜内酯组合物后，大鼠逃避电击次数显著提高，其中A-C三组的改善作用更为明显(与模型组相比，P<0.01)，显著优于D-K组(与模型组相比，P<0.05)，能更好地改善抑郁状态。

表2银杏二萜内酯组合物对大鼠的抗抑郁作用

实施例2：银杏二萜内酯组合物的抗氧化应激作用

1材料

动物：SPF级雄性SD大鼠，体重为200-220g，南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，合格证号SCXK(苏)2016-0008。

受试药物：各银杏二萜内酯化合物均为市售标准品，按照上表所述比例配制成不同比例的银杏二萜内酯组合物A-K组，并用0.5％葡甲胺与0.15％柠檬酸溶解制备成实验用溶液。阳性药为依达拉奉注射液(南京先声东元制药有限公司，30mg/支)。

主要试剂：10％水合氯醛(北京鼎盛伟业生物科技公司)，丙二醛测定试剂盒(MDA)、超氧化物歧化酶测定试剂盒(SOD)、谷胱甘肽测定试剂盒(GSH)、总氧化力测定试剂盒(TAC)以及BCA蛋白测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

主要仪器：MP12001型电子天平(上海市恒平科学仪器有限公司)，AR2140型电子分析天平[奥赛斯国际贸易(上海)有限公司]，DHG-9053A型电热恒温干燥箱(上海医用恒温设备厂)，Enspire型多功能酶标仪(珀金埃尔默仪器有限公司)，5804R低温高速离心机(艾本德中国有限公司)。

2方法

2.1造模与给药：取健康雄性大鼠，随机分成正常组、模型组、阳性药组及银杏二萜内酯组合物A-K组，除正常组外，其余各组每天均以6g/kg酒精灌胃。阳性药组大鼠每天给予6.25mg/kg依达拉奉注射液(iv)，银杏二萜内酯组合物A-K组大鼠每天给药剂量为3mg/kg(iv)，连续给药或给予酒精5周。

2.2氧化应激水平检测：给予结束后，各组大鼠采用10％水合氯醛进行麻醉，取腹主动脉血，肝素抗凝后分离血清，按照试剂盒说明书检测血清中MDA、SOD、GSH和TAC水平变化，各样品的蛋白含量采用BCA蛋白测定试剂盒测定。

2.3统计分析：数据均以表示，所有数据采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，判断差异的显著性。

3、结果

由表3可见，与正常组比较，模型组MDA水平显著上升(P<0.01)，而SOD、GSH和TAC水平则显著下降(与正常组相比，P<0.01)，表明大鼠受到了明显的氧化损伤。给予依达拉奉注射液后，各指标均被显著纠正(与模型组相比，P<0.01)。给予银杏二萜内酯组合物后，SOD、MDA、GSH和TAC等指标被不同程度地改善，其中A-C三组的改善作用更为明显(与模型组相比，P<0.01)，显著优于D-K组(与模型组相比，P<0.05)，能更好地改善氧化应激水平，缓解氧化损伤。

表3银杏二萜内酯组合物对大鼠氧化应激水平的影响(n＝10)

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种银杏二萜内酯组合物，其特征在于，所述组合物包含：以重量计，32-36％的银杏内酯A、55-58％的银杏内酯B、2.2-3.4％的银杏内酯K；其中，该组合物还包含总量在2.6％以上，且各自含量均不小于0.5％的银杏内酯C、银杏内酯J以及银杏内酯L。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述银杏内酯C、银杏内酯J以及银杏内酯L总量占组合物的2.6-10.8％，优选3.0-6.0％，最优选4.6％。

3.一种包含权利要求1或2所述组合物的银杏二萜内酯制剂，其特征在于，该制剂还包含药学上可接受的辅料。

4.包含权利要求1或2所述组合物的银杏二萜内酯注射剂。

5.根据权利要求4所述的注射剂，其特征在于，该注射剂为1ml或5ml或10ml剂量，其含有5±0.5mg或25±0.5mg或50±0.5mg所述银杏二萜内酯组合物。

6.根据权利要求4或5所述的注射剂，其特征在于，该注射剂还包含葡甲胺和氯化钠，各组分的重量比为：银杏二萜内酯组合物：葡甲胺：氯化钠＝(2-8)：(2-8)：(4-12)。

7.权利要求1或2所述的组合物在制备抗抑郁药物中的应用。

8.权利要求1或2所述的组合物在制备心脑血管药物中的应用。

9.权利要求1或2所述的组合物在制备改善氧化应激药物中的应用。