CN107921022A - 用于治疗干眼病和斯耶格伦氏综合征的组合物 - Google Patents

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Abstract

本文公开其用于治疗眼和眼附件的疾病或障碍、包括干眼病和斯耶格伦氏综合征的组合物和方法，所述方法通过给予包含吲哚和类黄酮(作为混合物或作为其合成的异二聚体)的组合物来进行。

Description

用于治疗干眼病和斯耶格伦氏综合征的组合物
技术领域
本发明涉及在动物受试者、包括人中治疗眼和眼附件的疾病或障碍。更特别地，本发明涉及通过给予本发明组合物用于治疗与眼表炎症比如干眼病和斯耶格伦氏综合征有关的眼部疾病和障碍的方法。
背景技术
干眼病是泪液和眼表的多因素障碍，表征为干燥和刺激症状。尽管干眼病的发病机理并未被完全理解，已认识到的是炎症在该致衰弱病况的发展和传播中具有显著作用。不利地影响泪膜稳定性和摩尔渗透压浓度的因素能够诱导眼表损害并引发炎性级联，其产生先天和适应性免疫应答。这些免疫炎性反应导致进一步的眼表损害和自保持性炎性循环的发展。
干眼病(DED)也称为干燥性角结膜炎，是泪液和眼表的多因素障碍。DED的普遍症状包括干燥，刺激，异物感，光敏感性和瘙痒。据估计，有几乎5百万50岁及以上的美国人患有DED，并且还有上百万人经历过干眼病的发作症状；在这些人当中大约三分之二是女性。DED的患病率随年龄增加而戏剧化地上升；并且随着老年群体增加，DED相关发病率的负担也将增加。
斯耶格伦氏综合征是自身免疫性疾病，其导致泪腺破坏和引起干眼病。斯耶格伦氏综合征的精确病原学仍然未知并且据信是多因素的。斯耶格伦氏综合征的免疫发病机理与Th1炎性效应物(其已知产生细胞因子如IFN-γ和TNF-α)以及Th17效应物(与慢性炎症有关)的水平增加有关，并且表征为IL-17A和IL-6在周围和外分泌腺中的表达(Nguyen等人,2008,Arthritis Rheum 58:734-743；van Woerkom等人,2005,Ann Rheum Dis 64:1474-1479)。
需要改善的疗法来应对在这些和其它适应症中的眼部炎症。
发明概要
本发明涉及方法和组合物，其用于治疗、预防或改善眼和眼附件(包括眼睑和眼的泪器)的疾病或障碍的症状，特别是与眼和/或泪管的表面炎症有关的症状；组合物包含治疗有效量的i)吲哚和ii)类黄酮，其中吲哚和类黄酮作为混合物或作为本文描述的合成的异二聚体存在。在某些实施方式中，组合物包含吲哚和类黄酮的混合物。在特定的实施方式中，吲哚是靛玉红-3'-肟(I3O)而类黄酮是槲皮素。在备择实施方式中，吲哚是I3O和类黄酮是黄芩苷元。在备择实施方式中，吲哚和类黄酮在分开的药物组合物中同时给予或者以不同的剂量给药方案给予。
组合物中提供的治疗有效量包括这样的量的吲哚和类黄酮，其单独不是治疗有效的，但是组合起来具有治疗效果。在某些实施方式中，吲哚和类黄酮的治疗效果是加合的，而在优选的实施方式中，吲哚和类黄酮的治疗效果是增效的(也即大于加合)。
组合物的实施方式包括膳食补充剂、保健品(nutraceutical)组合物、医药食品和动物饲料，其治疗、预防或改善眼和眼附件(包括眼睑和眼的泪器)的疾病或障碍的症状，特别是与眼和/或泪管的表面炎症有关的症状。优选，包含吲哚和类黄酮的一种或多种组合物被配制为滴眼剂。
本发明也涉及治疗、预防或改善眼和眼附件(包括眼睑和眼的泪器)的疾病或障碍的症状、特别是与眼和/或泪管的表面炎症有关的症状的方法，其通过给予包含治疗有效量的i)吲哚和ii)类黄酮的组合物来进行，其中吲哚和类黄酮作为混合物或作为本文描述的合成的异二聚体存在。
附图说明
图1是眼附件的图解，显示泪腺和结膜。
图2是眼附件的图解，显示泪腺、泪道(或小管)、泪囊、和泪管(或鼻泪管)、和结膜。
图3显示体外调查的结果，其针对用不同浓度的槲皮素/和I3O组合培养杯状细胞的粘蛋白产生效果。Quer/I3O低：10μM槲皮素和0.3μMI3O；Quer/I3O中：30μM槲皮素和1μMI3O；Quer/I3O高：100μM槲皮素和3μM I3O。
图4A和4B显示30μM槲皮素/1μM I3O和30μM黄芩苷元/1μMI3O组合对下述的效果：(A)培养杯状细胞的存活和(B)同时用TNFα以及槲皮素和I3O或者黄芩苷元和I3O处理的培养杯状细胞中的粘蛋白产生，与仅用TNFα处理的对照细胞对比。
图5A和5B展示2次/天给予滴眼剂2周在斯耶格伦氏综合征鼠类模型的角膜表面的效果，其通过在第1周和第2周角膜荧光素染色确定，与对照小鼠角膜表面对比。A：2次/天单独给予30μM槲皮素或0.5μMI3O(各5μl一滴)结果。B：2次/天给予30μM槲皮素和0.5μM I3O的组合(5μl一滴)的结果。
图6显示2次/天给予含有30μM槲皮素和0.5μM I3O的滴眼剂或者对照持续1周对泪液中过氧化物酶水平的效果。
图7显示2次/天给予30μM槲皮素和0.5μM I3O(作为5μl一滴)的组合持续2周在斯耶格伦氏综合征的鼠类模型结膜中对炎性细胞因子表达的效果，通过定量PCR评价。
图8展示TSP-1null小鼠的眼组织学，其用仅媒介物处理并且标记以检测结膜中的CD45+细胞。
图9展示TSP-1null小鼠的眼组织学，其2次/天用含有30μM槲皮素和0.5μM I3O的滴眼剂处理2周并且标记以检测结膜中的CD45+细胞。
图10显示抑制浸入结膜的炎性细胞的效果，通过免疫组织化学评价。TSP-1缺乏小鼠2次/天用30mM槲皮素和0.5μM I3O的组合(作为5μl一滴)处理2周。
发明详述
发明人发现给予吲哚和类黄酮的组合在减轻眼部炎症方面显示比单独的吲哚或类黄酮更高的效力，其通过体外模型和鼠类模型的眼部疾病指征来评价。相应地，提供用于治疗眼部炎症的包含吲哚和类黄酮的组合的药物组合物，以及用吲哚和类黄酮的组合治疗、预防和改善牵涉眼部炎症的适应症症状的方法。
吲哚
吲哚是芳族杂环有机化合物。其具有双环结构，由稠合至五元含氮吡咯环的六元苯环组成。吲哚广泛分布在天然环境中并且能够由各种细菌产生。吲哚骨架和IUPAC编号序列：
适用于本发明公开的组合物和方法的吲哚衍生物(或简言之吲哚)包括一种或多种吲哚，其表征为根据下文的式1或式2的化学式：
其中Y选自NH或NOH。
Z，Z’和Z"独立地选自H，Cl，Br和I；在某些实施方式中，Z，Z’和Z"至少一个选自Cl，Br和I；在备择实施方式中，Z，Z’和Z"中至少两个选自Cl，Br和I。
芳基’是被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基选自：氢，卤素，羟基，C1-3烷基，C1-3酯基团，胺，C1-3烷基取代的胺，芳基取代的胺，羧酸盐/酯基团，C1-3烷基羧酸酯，C1-3烷基酰胺，磺酸盐/酯，C1-3烷基磺酸盐/酯，包括这些基团的衍生物和及其在本领域已知的不破坏本公开配制剂的效力的等价物。特定的实例包括其中芳基’是：苯基，甲基苯，二甲基苯，苯酚，苯酚，苯胺，二苯胺，苯甲酸，苯甲酸酯，苯磺酸甲酯，氯苯基或溴苯基。
适用于本发明公开的组合物和方法的吲哚包括天然含吲哚的化合物，包括靛玉红及其类似物比如靛青、异靛、靛玉红E804，和靛玉红-3'-肟(I3O)，靛玉红-3'-(2,3二羟基丙基)-肟醚(E804)，6-溴-靛玉红-3'-肟，5-碘-靛玉红-3'-肟，5-5’-二溴-靛玉红，靛玉红-5-磺酸盐/酯比如5-磺酸-靛玉红-3'-肟，如下文说明。还包括的是合成的吲哚比如舒尼替尼，SU4312和SU5416，也如下文说明。
表1
靛红是二-吲哚家族，其分离自许多不同来源比如产靛青植物，数种腹足类动物软体动物，尿例如人尿，以及某些细菌菌株。
适用于本发明公开的组合物和方法的吲哚可以具有在抑制CDK2和GSK-3中特别有效的活性。所述活性与在癌症和神经变性疾病中的药理学效果有关。
最近的研究指出，不仅上述天然化合物比如靛玉红和I3O，而且数种合成的吲哚杂环化合物/药物比如舒尼替尼、SU4312和SU5416，能够用于本发明的组合。
类黄酮
类黄酮(或生物类黄酮)是一类植物次级代谢物，由于其医药特性而受到大量关注，所述特性与某些年龄相关的人类慢性疾病的降低的风险有关，受到流行病学研究的支持。存在实验证据将类黄酮与抗过敏、抗炎、抗微生物和抗癌特性关联起来并展示类黄酮是强抗氧化剂。这些特性的分子机理仍旧有待阐明。
类黄酮是低分子量苯基苯并吡喃酮并且属于植物化学物质中的一大类即多酚，其表征为每分子存在多于一个苯酚基团。类黄酮类别包括超过5000种天然类黄酮，其根据化学结构分为五个子类：黄酮醇，黄酮，黄烷酮，黄烷-3-醇和花青素。类黄酮具有15-碳架的通式结构，其由两个苯基环(A和B)和杂环(C)组成。该碳结构能够缩写为C6-C3-C6。类黄酮骨架和IUPAC编号序列如下所示：
适用于本发明公开的组合物和方法的类黄酮包括一种或多种类黄酮，其表征为根据下文式3的化学式：
其中R3，R5，R6和R8独立地选自H，OH，OCH3和OP，其中P是保护基团；R7选自H和P，其中P是保护基团。适宜的保护基团是本领域已知的那些，并且包括叔羰基(叔-BuCO-)，苯甲酰基(PhCO-)和乙酰基(MeCO-)，氯乙酰基(ClCH2CO-)基团。苯基部分可以包括苯基环上任意位置的一个或多个取代基，尤其是取代基包括OH和OCH3。
适用于本发明公开的组合物和方法的类黄酮包括黄酮醇，其中类黄酮的R3是OH基团。基本黄酮醇骨架式如下所示。黄酮醇衍生物包括在骨架其它位置的其它取代：
适用于公开的组合物和方法的特定类黄酮包括槲皮素，黄芩苷元，白杨黄素，堪非醇，汉黄芩素，芹黄素，四羟黄酮，漆树黄酮，高良姜素，杨梅酮，黄芩素，桑黄素；杜鹃黄素，棉黄素，莰非素，异鼠李亭，柚皮黄素，藿香黄酮醇，甲基鼠李亭和鼠李亭，如下表2和3说明。
表2.类黄酮化学式
表3.适用于本发明组合物的其它类黄酮
在备择实施方式中，组合物包含合成的异二聚体，其由通过合成缀合在一起的吲哚和类黄酮组成，例如根据下文式4或式5的化学式：
其中Y选自NH或NOH；
Z，Z’和Z"独立地选自H，Cl，Br和I；在某些实施方式中，Z，Z’或Z"中至少一个选自Cl，Br和I；在额外的实施方式中，Z，Z’或Z"中至少两个选自Cl，Br和I；
R3，R5，R6和R8独立地选自H，OH，OCH3和OP，其中P是保护基团；在某些实施方式中，R3，R5，R6和R8中至少一个选自OH，OCH3和OP；在额外的实施方式中，R3，R5，R6和R8中至少两个选自OH，OCH3和OP；和
芳基是被选自下述的一种或多种取代的苯基：氢，卤素，羟基，C1-3烷基，C1-3酯基团，胺，C1-3烷基取代的胺，芳基取代的胺，羧酸盐/酯基团，C1-3烷基羧酸酯，C1-3烷基酰胺，磺酸盐/酯，C1-3烷基磺酸盐/酯，包括这些基团的衍生物并且包括本领域已知的不破坏本公开配制剂效力的其它取代基。特定的实例包括其中芳基是甲基苯，二甲基苯，苯酚，苯酚，苯胺，二苯胺，苯甲酸，苯甲酸酯，苯磺酸甲酯。
合成新的异二聚体
制备羟基保护的类黄酮原料
类黄酮原料上的羟基可以根据有机合成领域技术人员已知的任何方法保护。在一种实施方式中，将具有根据上文式3的化学式的类黄酮和相对类黄酮上待保护的每个羟基摩尔浓度过量的保护剂比如4-溴-丁酸(例如1.2mol保护剂/1mol当量羟基的摩尔比)溶于含碱比如K2CO3的无水有机溶剂比如DMF。然后将NaI加入溶液，然后将其在N2气氛下于约95℃加热2小时，同时搅拌。将反应混合物倾至水中(50ml)，将有机物质萃取入乙酸乙酯(3x20ml)。提取物用H2O(5ml)洗涤，分离有机级分，干燥和真空蒸发溶剂。然后残余物通过例如柱色谱法在硅胶上纯化，用己烷-丙酮洗脱希望的保护吲哚。
制备吲哚-类黄酮异二聚体产品
保护的类黄酮与吲哚游离胺的偶联反应可以根据有机化学技术人员已知的实现该类型偶联的任何偶联反应进行。尤其是，脱水偶联方案是优选的。
在特别的实施方式中，将具有上文根据式1或式2的化学式的保护的类黄酮和吲哚以大约等摩尔量组合，溶于无水有机溶剂例如THF，将摩尔过量的HCl例如约1.2当量EDCHCl加至该溶液，然后将其搅拌过夜。减压除去THF。剩余物质用例如乙酸乙酯和水萃取，分离有机级分，干燥，然后减压蒸发溶剂。然后将所得残余物通过有机合成技术人员熟悉的方法例如柱色谱法纯化，在硅胶上用己烷-丙酮洗脱方案1中鉴定的产品1a和产品1b或洗脱方案2中鉴定的产品2。产品1a和产品1b能够根据化学领域的已知方法纯化和分离。
本发明的异二聚体并无特别限制并且可以是共价连接任何类黄酮的任何吲哚，只要产品具有改善本文描述的病况的效力。在优选的实施方式中，共价连接通过吲哚环氮形成。在又一优选的实施方式中，吲哚是I3O而类黄酮是槲皮素。在备择实施方式中，吲哚是靛玉红而类黄酮是槲皮素；吲哚是I3O而类黄酮是黄芩苷元；或吲哚是靛玉红而类黄酮是黄芩苷元。
组合物和药物组合物的配制和给予
根据本发明的组合物包含至少一种类黄酮作为活性成分。在优选的实施方式中，类黄酮表征为具有式3的化学式。在所述组合物中的类黄酮浓度可以根据其配制的给药类型而变化。例如，组合物可以包含0.1ng/ml至10mg/ml，优选10ng/ml至1mg/ml，比如100ng/ml至100μg/ml，优选100ng至10μg/ml类黄酮。组合物可以包含0.1ng/ml至1.0ng/ml，例如1.0ng/ml至10ng/ml，例如10ng/ml至100ng/ml，例如100ng/ml至1.0μg/ml，例如1μg/ml至10μg/ml，例如10μg/ml至100μg/ml，例如100μg/ml至1.0mg/ml，例如1mg/ml至10mg/ml，例如10mg/ml至100mg/ml类黄酮。
在特别的实施方式中，根据本发明的组合物包含至少一种式3类黄酮作为活性成分。组合物可以包含0.01至10wt％的类黄酮，优选1至5wt％，更优选1至4wt％，或最优选0.1至2％，按组合物重量计。在特别优选的实施方式中，类黄酮是槲皮素或黄芩苷元并且组合物配制用于局部递送例如递送入眼中。
根据本发明的组合物还包含至少一种吲哚作为活性成分。在优选的实施方式中，吲哚表征为具有式1或式2的化学式。吲哚在所述组合物中的浓度可以根据其配制的给药类型而变化。组合物可以包含0.1ng/ml至10mg/ml，优选10ng/ml至1mg/ml，比如100ng/ml至100μg/ml，优选100ng至10μg/ml吲哚。组合物可以包含0.1ng/ml至1.0ng/ml，例如1.0ng/ml至10ng/ml，例如10ng/ml至100ng/ml，例如100ng/ml至1.0μg/ml，例如1μg/ml至10μg/ml，例如10μg/ml至100μg/ml，例如100μg/ml至1.0mg/ml，例如1mg/ml至10mg/ml，例如10mg/ml至100mg/ml吲哚。在特别的实施方式中，根据本发明的组合物包含至少一种式1或2吲哚作为活性成分。组合物可以包含0.01至10wt％的吲哚，优选1至5wt％，更优选1至4wt％，或最优选0.1至2％，按组合物重量计。在特别优选的实施方式中，吲哚是靛玉红或IO3并且组合物配制用于局部递送例如递送入眼中。
在特别的实施方式中，根据本发明的组合物包含至少一种合成的异二聚体作为活性成分，其包含类黄酮和吲哚。在优选的实施方式中，合成的异二聚体表征为具有式4或式5的化学式。异二聚体在所述组合物中的浓度可以根据其配制的给药类型而变化。组合物可以包含0.1ng/ml至10mg/ml，优选10ng/ml至1mg/ml，比如100ng/ml至100μg/ml，优选100ng至10μg/ml的合成的异二聚体。组合物可以包含0.1ng/ml至1.0ng/ml，例如1.0ng/ml至10ng/ml，例如10ng/ml至100ng/ml，例如100ng/ml至1.0μg/ml，例如1μg/ml至10μg/ml，例如10μg/ml至100μg/ml，例如100μg/ml至1.0mg/ml，例如1mg/ml至10mg/ml，例如10mg/ml至100mg/ml的合成的异二聚体。
在特别的实施方式中，根据本发明的组合物包含至少一种式1或式2的吲哚和至少一种式3的类黄酮，其中吲哚和类黄酮以范围1000:1至1:1000的摩尔比存在。
在额外的实施方式中，根据本发明的组合物包含至少一种吲哚和类黄酮的异二聚体作为活性成分。组合物可以包含0.01至10wt％的异二聚体，优选1至5wt％，更优选1至4wt％，或最优选0.1至2％，按组合物重量计。任选地，包含异二聚体的组合物可以还包含吲哚，类黄酮或两者的混合物。
在某些实施方式中，按照本发明的组合物包括本领域已知用于治疗眼部疾病、眼表炎症、泪腺的破坏和损害、斯耶格伦氏综合征和干眼病的其它活性剂。
根据本发明组合物的"药物有效剂量"是指在需要治疗的受试者中诱导希望生物学效果所必需的量。
组合物可以以许多不同方式配制，取决于特别的组合物/药物组合物的用途和给药类型。本领域技术人员完全可以配制符合优选给药类型比如局部、经口或经肠胃外的组合物。
本发明的一种优选实施方式是提供配制用于在眼和眼附件中的局部、表面和受限区域局部施用的组合物，其也称为眼用组合物。在上述实施方式中，优选的是组合物配制为软膏剂，洗剂，霜剂，洗浴混合物，凝胶，糊剂，乳状物，悬浮液，气雾剂，喷雾，膜，泡沫，精华素，棉签，小拭子，垫子，贴剂，粉末，糊剂，搽剂，粘稠乳液，或适于局部给药的其它配制剂。
用于局部给药的所述组合物(包括眼用组合物)可以还包括生理学上可接受的组分比如载体，表面活性剂，防腐剂，稳定剂，缓冲液，赋形剂和乳化剂，其适用于该给药类型。用于局部递送系统的适宜组分优选选自不导致接受者过度或不可避免的刺激或疼痛的组分。载体包括稀释剂并且提供药物组分在其中溶解、分散或分布的介质。配制剂包括在PBS、水或盐水或任意其它药学上可接受的液体中配制的那些。
根据本发明的组合物可以包含但不限于载体比如含水液体基，非水液体基，水可溶凝胶，矿物油基，乳液，软膏剂，霜剂，凝胶或洗剂，固体颗粒在液体中的悬浮液。
活性成分的局部可获得性取决于两个相反的因素：其溶于载体(凝胶、霜剂-亲水)中的能力，和其渗透皮肤屏障(即角质层-疏水)的能力，从而需要独特的疏水-亲水平衡。配制剂需要添加赋形剂比如渗透促进剂和增溶剂以促进运输过程(溶于媒介物和扩散穿过皮肤)之一或两者。添加剂比如醇，脂肪醇，脂肪酸，一-、二-或三-甘油酯，甘油一醚，环糊精和衍生物，聚合物，生物粘合剂，萜，螯合剂和表面活性剂已被公开增加药物的透皮递送。本发明能够使用所述赋形剂。
不限于上述的增加透皮递送的任何方法都属于本发明范围以内。根据本发明的治疗组合物可以因此包含表面活性剂比如离子和/或非离子表面活性剂。适宜的非离子表面活性剂包括例如：脂肪醇乙氧基化物(烷基聚乙二醇)；烷基酚聚乙二醇；烷基硫醇聚乙二醇；脂肪胺乙氧基化物(烷基氨基聚乙二醇)；脂肪酸乙氧基化物(酰基聚乙二醇)；聚丙二醇乙氧基化物(普流罗尼克)；脂肪酸烷基醇酰胺(脂肪酸酰胺聚乙二醇)；烷基聚糖苷，N-烷基-，N-烷氧基多羟基脂肪酸酰胺，尤其是N-甲基-脂肪酸葡糖酰胺，泊洛沙姆188，蔗糖酯；山梨醇酯，山梨醇聚乙二醇醚的酯和卵磷脂。离子表面活性剂包括例如月桂基硫酸钠，月桂酸钠，聚氧乙烯-20-鲸蜡基醚，月桂醇聚醚-9，十二烷基硫酸钠(SDS)和多库酯钠。
醇包括但不限于乙醇，2-丙醇和多元醇比如聚乙二醇(PEG)，丙二醇，甘油，丙二醇。
通过局部给药增强药物递送的方法可以用于本发明，并且包括针对组合物活性成分比如类黄酮增加吸收、最小化代谢和/或延长半衰期的任何手段。所述手段包括使用下述类的运载体：脂质体，ISCOMs，纳米颗粒，微球，水凝胶，有机凝胶，聚合物或其它微包封技术。
本发明范围内的用于局部递送的生物粘合剂包括皮肤和粘膜组织的粘合剂比如粘蛋白结合性和/或上皮组织结合性聚合物。
在组合物配制为凝胶或凝胶类物质、霜剂或粘稠乳液的本发明实施方式中，优选所述组合物包含至少一种胶凝化组分、聚合物或其它适宜试剂来增强组合物的粘度。能够使用本领域技术人员已知的任何胶凝化组分，其对处理区域并无有害效果，并且可用于配制局部给予至皮肤、眼或粘膜的组合物和药物组合物。例如，胶凝化组分可以选自：丙烯酸，卡波姆，羧基聚亚甲基，B.F.Goodrich以商标卡波普销售的材料(例如卡波普940)，聚乙烯-聚丙二醇，BASF以商标泊洛沙姆销售的材料(例如泊洛沙姆188)，纤维素衍生物例如羟基丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟基亚乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素，藻酸-丙二醇酯，聚乙烯基吡咯烷酮，veegum(硅酸镁铝)，Pemulen，Simulgel(比如Simulgel 600、SimulgelEG和simulgel NS)，Capigel，Colafax，plasdones等及其混合物。
根据本发明的凝胶或凝胶类物质包含例如小于10％w/w水，例如小于20％w/w水，例如至少20％w/w水，比如至少30％w/w水，例如至少40％w/w水，比如至少50％w/w水，例如至少75％w/w水，比如至少90％w/w水，例如至少95％w/w水。优选所述水是去离子水。
在一种实施方式中，组合物配制为软膏剂。能够使用本领域技术人员已知的任何软膏剂组分，其对待处理区域无有害效果，并且可用于配制局部给予皮肤、眼或粘膜的组合物和药物组合物。例如，一种载体可以是凡士林载体。
在一种实施方式中，配制组合物使得其是液体，在溶液或在悬浮液中包含至少一种类黄酮和至少一种吲哚。组合物可以配制为适于局部施用的任何液体形式比如滴眼剂，人工泪液，洗眼液或接触镜吸附剂，其包含液体载体比如纤维素醚(例如甲基纤维素)。
液体可以是任何有用的液体，然而常优选液体是含水液体。另外优选液体是无菌的。无菌可以通过任何常规方法例如过滤、辐射或加热实现。
液体可以包含一种或多种亲油媒介物，例如适于控释类黄酮和/或吲哚和/或合成的异二聚体的一种或多种亲油媒介物。
本发明的又一优选实施方式是提供配制用于口服给药的组合物，其呈膳食补充剂，保健品(nutraceutical)组合物，医药食品或动物饲料形式。在特别的实施方式中，所述口服给药预防、治疗或改善眼和眼附件(包括眼睑和眼的泪器)疾病或障碍的症状、特别是与眼和/或泪管的表面炎症有关的症状。本发明组合物的实施方式期望用于以本领域已知的适宜剂型向哺乳动物尤其是人给药。在口服剂型中，固体和液体剂型是特别优选的。
口服固体剂型是本领域熟知的并且包括片剂，囊片，软胶囊，胶囊和可食用的食品。口服固体剂型能够用一种或多种药学上可接受的赋形剂制备。药学上可接受的赋形剂促进形成生物学活性物质的剂型或使其成为可能，并且包括稀释剂、结合剂(bindingagent)、润滑剂、助流剂、崩解剂、着色剂、和香料和营养素。赋形剂是药学上可接受的，条件是其除了发挥希望功能之外还是无毒的、摄食良好耐受的、并且不干扰生物学活性物质的吸收。
片剂能够通过熟知压缩技术用湿法、干法或流化床造粒方法制备。将各成分在搅拌器中混合。有用搅拌器包括双筒类型，行星式搅拌器类型，和高速高剪切类型；都为技术人员已知。将共混的组合过筛和干燥以造粒。然后用本领域已知的压片机将颗粒压缩为片剂。优选，在压缩之前将颗粒过筛以确保颗粒具有希望的颗粒尺寸。片剂能够是包覆或未经包覆的，如本领域已知。
将常规优化组分比例和组成部分、粘合剂、赋形剂和水(如果使用)、以及混合时间和强度以获得希望的压片特征的颗粒。
胶囊(也称为无水填充胶囊)是口服固体剂型，其中组合物包含于适宜尺寸的、一般由明胶构成的可吞咽容器。适于含有本发明组合物的硬质空胶囊可从数种来源获得，例如Tishcon Gel-Tec，2410N.Zion Rd.，Salisbury，Md.21801；胶囊以两半形式且以各种尺寸供给。尺寸一般通过数字指定；000目前是通用的最大尺寸，5是目前通用的最小尺寸。半片胶囊能够通过适宜着色剂着色并且各半片能够具有相同或不同颜色。
在制备胶囊固体口服剂型时，将组分和成分组合并用上述任何搅拌器一起混合，加或不加稀释剂比如乳糖、甘露醇、碳酸钙等。在混合之前，组分或成分中一种或多种的颗粒能够如制备片剂期间那样制备。将经合并混合的组分、成分和赋形剂(如果存在)填充于一个半片胶囊中。然后，将填充的半片胶囊用另一半片胶囊封闭。填充胶囊的手动、半自动和自动设备是本领域已知的。
本发明所用的口服固体剂型能够是可咀嚼食品，其包括保健品组合物。除了保健品组合物之外，可咀嚼食品还能够和优选含有一种或多种营养素比如大豆蛋白分离物、大豆蛋白水解产物、酪蛋白酸钙、乳清蛋白分离物、乳清蛋白浓缩物、奶蛋白分离物、脱脂奶粉、酸奶固体、或水解牛明胶与油的组合，粘合剂，填料和本领域已知的处理助剂。口服固体剂型从具有希望成分的团块通过例如挤出形成一种形状，优选具有圆形、半圆形或矩形截面的棒，并且切割为各自约50至约175克的可咀嚼食品剂型，其中各所述剂型包括保持血糖和糖基化有效量的保健品组合物。
口服液体剂型可以是混合的。在混合的口服液体剂型的一个实例中，一种或多种组分或成分或其一部分溶于媒介物，而残余部分悬浮在媒介物中。在混合的液体口服组合物的又一实例中，保健品组合物的一种或多种组分或成分或其任何部分溶于第一媒介物，而残余部分悬浮或溶于与第一媒介物形成乳液的第二媒介物。其它混合的液体口服剂型对技术人员来说是明显的并且属于本发明范围内。
治疗方法
本发明方法提供通过给予治疗有效量的本发明组合物在患者优选人类患者中治疗、预防、改善与眼表炎症或眼附件炎症有关的疾病或障碍的症状、减少有关炎症的方法，如上文描述所述组合物包含吲哚和类黄酮、呈混合物和/或其异二聚体。在特定的实施方式中，本发明方法涵盖通过给予治疗有效量的本发明组合物在患者优选人类患者中治疗、预防或改善一种或多种与干眼病或斯耶格伦氏综合征有关的干眼病症状，所述组合物包含吲哚和类黄酮、呈混合物或呈异二聚体或呈含单独的吲哚和类黄酮的两种分开的组合物的组合。在本发明方法中，给予本发明组合物改善或减少眼部障碍的一种或多种症状比如眼部干燥，刺激，异物感，光敏感和瘙痒。在某些实施方式中，本发明涵盖本发明组合物和方法的兽医学用途，例如在非人类动物比如伴侣动物比如犬、猫等，牲畜比如牛、猪、绵羊、马、山羊、野牛等中治疗、预防或减少眼部疾病或障碍的症状。
根据本发明的眼用组合物可以每天施用1次或多于1次，例如它们可以以2至10次数/天，比如2至7次，例如2至5次，比如2至4次，比如2至3次/天给予。在本发明优选的实施方式中，组合物给予2次/天。在本发明又一优选的实施方式中，组合物给予1次/天。
根据本发明的口服的组合物可以每天施用1次或多于1次，例如它们可以以2至10次/天，比如2至7次，例如2至5次，比如2至4次，比如2至3次/天给予。在本发明优选的实施方式中，组合物给予2次/天。在本发明又一优选的实施方式中，组合物给予1次/天。
治疗时间段可以取决于治疗的特定疾病或病况而变化。根据本发明的组合物可以施用至受试者，持续的治疗时间段是一周或大于一周比如二周，三周，四周，五周，六周，七周，八周或大于八周。治疗可以对复发的受试者重复。
然而，治疗时间段一般是至少2周，例如至少3周，至少4周，至少5周，6周，7周，8周或大于8周。在本发明优选的实施方式中，用根据本发明的组合物处理需要治疗的受试者，持续约3-6周时间段，该治疗可以任选与使用上文描述的眼清洁剂组合。在本发明更优选的实施方式中，根据本发明的组合物施用约3周时间段。
实施例
本文描述合成新的异二聚体，其通过缀合上述吲哚比如靛玉红-3'-肟(I3O)和上述类黄酮比如槲皮素或黄芩苷元形成；并且合成该新的异二聚体的方法描述如下。参阅公开实施例后，对本领域普通技术人员明显的是各种备择方法可用于合成本发明的异二聚体。
槲皮素和靛玉红-3'-肟(I3O)的组合和黄芩苷元和I3O的组合的效果通过体外测试确定，而对于槲皮素和I3O的组合，在作为滴眼剂局部施用时评价眼中的免疫应答抑制，如下文详述的实验证实。对本领域普通技术人员明显的是各种备择方法可用于评价本发明组合物的效力。
实施例1-合成异二聚体A和异二聚体B
合成异二聚体A和异二聚体B，其通过槲皮素和靛玉红-3'-肟(I3O)的反应形成。将槲皮素和4-溴-丁酸以1:1.2摩尔比溶于无水DMF。将K2CO3和NaI加入溶液，然后将其在N2气氛下加热至95℃持续2小时，同时搅拌。将反应混合物倾至水中(50mL)，将有机物质萃取入乙酸乙酯(3x 20mL)。该提取物用H2O(5mL)洗涤，干燥，减压蒸发除去溶剂。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，用己烷-丙酮洗脱希望的保护的黄酮。
将中间体即保护的黄酮和I3O(大约1:1)溶于无水THF。将1.2当量EDC HCl加入，所得溶液搅拌过夜。在反应之后，减压除去THF，残余物通过乙酸乙酯和水萃取进行后处理。干燥有机层，然后减压蒸发。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，用己烷-丙酮分开地分离异二聚体A和异二聚体B。
实施例2：靛玉红-3’-肟和槲皮素对培养的杯状细胞的效果
物质和方法
靛玉红-3’-肟(I3O)得自Sigma-Aldrich(美国)和槲皮素得自NationalInstitute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products(中国)。将I3O和槲皮素溶于DMSO以形成储备溶液，浓度分别是10mM和30mM。全部储备溶液储存在-20℃。
分离和培养杯状细胞。用小鼠结膜的器官培养物来获得杯状细胞。杯状细胞是从外植体迁移出来的原代细胞。解剖结膜组织，置于磷酸缓冲盐水中(Gibco，Thermo FisherScientific，Waltham，MA)。将各结膜组织剖成12至16片，并置于12-孔培养板上，其含有恰好足够覆盖孔底部的培养基。将补充有10％胎牛血清，1mM丙酮酸钠，10mM HEPES，100μg/ml庆大霉素和1X非必需氨基酸混合物(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)的RPMI-1640培养基(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)用来供给外植体。在第一个4天，每天将50微升完全RPMI施用至外植体培养物，然后每两天向培养物供给500μl完全RPMI。外植体生长14天；然后将杯状细胞胰蛋白酶化并转移至24-孔培养板。
评价细胞存活率的碘化丙啶染色：培养物用2μg/ml碘化丙啶(PI)(Invitrogen，Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)处理，其仅染色死细胞。然后，将培养物暴露至1μg/ml DAPI(Invitrogen，Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)，其染色活细胞和死细胞两者的细胞核。对各培养物中各条件的五个区域成像，计算活细胞百分比({DAPI细胞核数-PI细胞核数}/DAPI细胞核数)。
MUC5AC ELISA：粘蛋白分泌是杯状细胞的正常功能。粘蛋白-5亚型AC(MUC5AC)ELISA试剂盒购自Biotang(Waltham，MA)和粘蛋白在上清液中的量根据生产商说明书测量。裂解杯状细胞，蛋白质的量用BCA Protein Assay Kit(Pierce，Rockford，IL)测量。蛋白质测量用来标准化上清液中的粘蛋白分泌并且表示为MUC5AC ng/mg细胞蛋白质。
对杯状细胞功能的效果
为了评价试剂对普通杯状细胞功能的效果，可杯状细胞生长至85％汇合度。在暴露于任何试剂之前，将细胞在不含血清的培养基中保持24小时。此后，将培养的结膜杯状细胞用下述配制剂处理24小时：10μM槲皮素/0.3μM I3O(低)；30μM槲皮素/1μM I3O(中)；100μM槲皮素/3μM I3O(高)。对照细胞不加处理。测试细胞的粘蛋白产生。图3显示最低浓度的槲皮素/I3O组合，10μM槲皮素/0.3μM I3O，增强培养的杯状细胞中的粘蛋白产生。
为了评价试剂对发炎的杯状细胞的效果，将杯状细胞生长至85％汇合度。在暴露于任何试剂之前，将细胞在不含血清的培养基中保持24小时。此后，将培养的结膜杯状细胞用下述试剂温育24小时：未处理对照；10ng/ml TNFα；10ng/ml TNFα+30μM槲皮素和1μMI3O；和10ng/ml TNFα+30μM黄芩苷元和1μM I3O。测试细胞的存活率和粘蛋白产生。TNFα诱导培养的细胞中的炎症。
图4A显示30μM槲皮素/0.5μM I3O将杯状细胞的存活增加至对照水平。30μM黄芩苷元/0.5μM I3O未能增加杯状细胞的存活(T检验vs对照：P<0.01)。这展示仅30μM槲皮素/0.5μM I3O的组合能够对抗TNFα的凋亡效果并增加杯状细胞的存活。图4B显示30μM槲皮素/1μMI3O和30μM黄芩苷元/1μM I3O将用TNFα处理的杯状细胞中的粘蛋白产生增加至大约对照的水平(其中30μM槲皮素/1μM I3O增加粘蛋白产生，P<0.01)，这展示该组合抵消TNFα的效果并将粘蛋白产生从TNFα处理恢复至普通。
实施例3：靛玉红-3’-肟和槲皮素在斯耶格伦氏综合征鼠类模型中的效果
斯耶格伦氏病与Th1炎性效应物(已知产生细胞因子如IFN-γ和TNF-α)以及Th17效应物(与慢性炎症有关)的增加水平有关，并且表征为IL-17A和IL-6在周围和外分泌腺中的表达(Nguyen等人，2008，Arthritis Rheum 58：734-743；van Woerkom等人，2005，AnnRheum Dis 64：1474-1479)。疾病的眼部分已描述为牵涉炎性效应物对眼表和有关组织的浸润，其产生Th1和Th17细胞因子两者(Nguyen&Peck,2009,Ocul Surf 7:11-27；Stern等人,2005,Invest Ophthalmol Vis Sci 43:2609-2614；Pflugfelder等人,1999,Curr EyeRes 19:201-211)。凝血酶敏感素-1缺乏(TSP-1null)小鼠发展慢性和进行性的眼部疾病，正如斯耶格伦氏患者中那样(Turpie等人，2009，Am J Pathol 175：1136-1147；Contreras-Ruiz等人，2013，PLoS One 8：e75937)并且同样在细胞因子水平展示这些变化。该小鼠模型中的临床病征、病理和疾病发展与人类患者非常密切地相似，使得其成为理想的临床前模型以试验能够减少眼部炎症的潜在药物的疗效。
在12周龄检测到TSP-1null小鼠中眼表损害的疾病发作，条件是在结膜中检测到角膜屏障完整性的明显破裂和炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A和IL-6表达增加(Pflugfelder等人,1999)。这些小鼠中的泪腺分泌功能异常，引起抗微生物酶如过氧化物酶的分泌减少(Turpie等人，2009)。
物质和方法
小鼠.凝血酶敏感素(TSP)-1null小鼠(C57BL/6背景)在无病原物设施中进行室内繁殖，Boston University School of Medicine，Boston，MA。全部实验按照学会指南和ARVO Statement of the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research进行。
角膜荧光素染色.将1μl荧光素钠(1％)施用至麻醉小鼠的角膜。3分钟后，用PBS冲洗眼以除去过量荧光素，评价角膜染色，用裂隙灯生物显微镜照相(Humphrey-Zeiss，Dublin，CA)，使用钴蓝光。对于角膜的各五个区域，点状染色用标准化的National EyeInstitute分级系统记录为0至3(Lemp,1995,CLAO J.21:221-232)。
经处理的结膜中的炎性细胞：将包括眼睑的整个眼包埋在石蜡中，并且切为5μM厚度(thickness)。在脱蜡之后，将切片用大鼠抗-CD45IgG(BD Biosciences，San Jose，CA)标记。然后使用碱性磷酸酶的ABC试剂盒(Vector Labs，Burlingame，CA)和Vector红(VectorLabs，Burlingame，CA)。CD45细胞数用表-荧光显微镜计数。
实时PCR.用RNA STAT-60试剂盒(Tel-Test，Inc.，Friendswood，TX)根据生产商说明书从收获自WT或TSP-1空小鼠(n＝4至5)的结膜组织分离总RNA。通过逆转录RNA用寡dT和M-MLV RT(Promega，Madison，WI)合成cDNA。用SYBR绿实时PCR测试来确定炎性细胞因子干扰素γ(IFN-γ)，肿瘤坏死因子α(TNF-α)，白细胞介素6(IL-6)或白细胞介素17A(IL-17A)的相对定量表达。用于这些基因的正向(F)和逆向(R)引物的序列如下：
IFN-γ
F 5’-TCAGCAACAACATAAGCGTCAT-3’(SEQ ID NO：1)
R 5’-GACCTCAAACTTGGCAATACTCAT-3’(SEQ ID NO：2)
TNF-α
F 5’-GGCCTCCCTCTCATCAGTTCTATG-3’(SEQ ID NO：3)
R 5’-GTTTGCTACGACGTGGGC TACA-3’(SEQ ID NO：4)
IL-6
F 5’-AGTCAATTCCAGAAACCGCTATGA-3’(SEQ ID NO：5)
R 5’-TAGGGAAGGCCGTGGTTGT-3’(SEQ ID NO：6)
IL-17A
F 5’-AGTGAAGGCAGCAGCGATCAT-3’(SEQ ID NO：7)
R 5’-CGCCAAGGGAGTTAAAG-3’(SEQ ID NO：8)
甘油醛-3-磷酸脱氢酶
F 5’-CGAGAATGGGAAGCTTGTCA-3’(SEQ ID NO：9)
R 5’-AGACACCAGTAGACTCCACGACAT-3’(SEQ ID NO：10)
用SurePRIME-&GO mastermix(MP Biomedicals，Solon，OH)来建立扩增反应，重复三次，具有下述热特征：50℃持续2分钟；1个循环，95℃持续15分钟；1个循环，52℃至55℃持续1分钟，40个循环，72℃持续30秒；1个循环，在ABI Prism分析仪(Applied BiosystemsInc.，Foster City，CA)上。各循环产生的荧光信号用系统软件分析。用门槛循环值来确定基因表达的相对定量，用甘油醛-3-磷酸脱氢酶作为参比基因。
在斯耶格伦氏综合征鼠类模型中的效果
每日将TSP-1缺乏(null)小鼠(12周龄)用滴眼剂处理两次，持续2周时间段。5μL滴眼剂是作为对照的PBS或者PBS中的0.5μM I3O和30μM槲皮素，PBS中单独的0.5μM I3O，或PBS中单独的30μM槲皮素。将滴眼剂局部施用至未麻醉小鼠的眼。年龄匹配的未处理野生型小鼠接受单独PBS的安慰剂滴眼剂。在基线(在开始治疗之前)和在第1周末尾测量干眼病的临床病征、包括对角膜表面和泪液中过氧化物酶水平的效果，并且在第2周末尾再次测试对角膜表面的效果。然后在研究时间段末尾将小鼠安乐死，用于进一步研究。将每只动物的左眼结膜解剖用于实时PCR，并且将眼固定用于组织学、尤其是分析CD45+细胞在眼结膜中的存在。
如图5A所示，用单独槲皮素处理引起角膜表面的显著改善，如第1周的角膜荧光素得分降低所证实。用单独I3O处理在第2周显示角膜荧光素得分的小改善，但并不显著。然而，图5B显示0.5μM I3O和30μM槲皮素的组合显著降低角膜损害(通过第1周和第2周的角膜荧光素染色展示)。在第1周，如图6所示，用槲皮素和I3O的组合处理与对照相比增加泪过氧化物酶水平，这意味着用所述组合处理改善泪腺的分泌功能。
在用30μM槲皮素和0.5μM I3O的组合处理的小鼠中，其结膜显示显著降低的炎性细胞因子IFNγ、TNFα、IL-6和IL17A表达，所述表达通过图7所示的实时PCR评价。这指出炎症的减少。
用30μM槲皮素和0.5μM I3O的组合或者媒介物对照处理的TSP-1 null小鼠的眼组织学展示经处理的眼结膜中的CD45+细胞密度降低。为CD45+染色的眼代表性切片(用对照媒介物或槲皮素/I3O组合处理)分别示于图8和图9。还确定CD45+细胞在结膜中的密度，其中用槲皮素-I3O组合处理的小鼠与对照相比结膜中的CD45+细胞密度降低，参见图10。

Claims (26)

1.在患者中治疗表征为眼或眼附件炎症的眼部疾病的方法，所述方法包括将包含治疗有效量的吲哚和类黄酮组合的组合物给予所述患者。
2.根据权利要求1的方法，其中所述眼部疾病是干眼病或斯耶格伦氏病。
3.根据权利要求1或2的方法，其中所述吲哚具有根据式1或式2的化学式：
其中
Y选自NH或NOH；
Z，Z’和Z"独立地选自H，Cl，Br和I；和
芳基’是被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基选自：氢，卤素，羟基，C1-3烷基，C1-3酯基团，胺，C1-3烷基取代的胺，芳基取代的胺，羧酸盐/酯基团，C1-3烷基羧酸酯，C1-3烷基酰胺，磺酸盐/酯和C1-3烷基磺酸盐/酯。
4.根据权利要求1-3中任一项的方法，其中所述吲哚选自靛青，异靛，靛玉红E804，靛玉红-3'-肟(I3O)，靛玉红-3'-(2,3二羟基丙基)-肟醚(E804)，6-溴-靛玉红-3'-肟，5-碘-靛玉红-3'-肟，5-5’-二溴-靛玉红5-磺酸-靛玉红-3'-肟，舒尼替尼，SU4312，SU5416及其组合。
5.根据权利要求1-4中任一项的方法，其中所述类黄酮具有根据式3的化学式：
其中：
R3，R5，R6和R8独立地选自H，OH，OCH3和OP，其中P是保护基团；
R7选自H和P，其中P是保护基团；和
芳基是苯基或取代的苯基。
6.根据权利要求1-4中任一项的方法，其中所述类黄酮是选自下述的一种或多种：槲皮素，黄芩苷元，白杨黄素，堪非醇，汉黄芩素，芹黄素，四羟黄酮，漆树黄酮，高良姜素，杨梅酮，黄芩素，桑黄素；杜鹃黄素，棉黄素，莰非素，异鼠李亭，柚皮黄素，藿香黄酮醇，甲基鼠李亭和鼠李亭。
7.根据权利要求1-6中任一项的方法，其中所述吲哚是靛玉红-3'-肟(I3O)。
8.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中所述类黄酮是槲皮素或黄芩苷元。
9.根据权利要求1-8中任一项的方法，其中组合物包含：
a)约0.1ng/ml至约100mg/ml的吲哚；和
b)约0.1ng/ml至约100mg/ml的类黄酮。
10.根据权利要求1-9中任一项的方法，其中组合物包含摩尔比约1000:1至1:1000的吲哚和类黄酮。
11.根据权利要求1或2的方法，其中组合物包含治疗有效量的合成的异二聚体，其选自具有根据式4和式5的化学式的化合物：
其中
Y选自NH或NOH；
Z，Z’和Z"独立地选自H，Cl，Br和I；
R3，R5，R6和R8独立地选自H，OH，OCH3和OP，其中P是保护基团；
R7选自H和P，其中P是保护基团；和
芳基和芳基’独立地是苯基或取代的苯基。
12.根据权利要求11的方法，其中组合物包含约0.1ng/ml至约100mg/ml的合成的异二聚体。
13.根据权利要求1-12中任一项的方法，其中组合物配制为眼用组合物。
14.合成的异二聚体，其具有根据式4或式5的化学式：
其中：
Y选自NH或NOH；
Z，Z’和Z"独立地选自H，Cl，Br和I；
R3，R5，R6和R8独立地选自H，OH，OCH3和OP，其中P是保护基团；和
芳基和芳基’独立地是苯基或取代的苯基。
15.一种组合物，其包含治疗有效量的吲哚和类黄酮组合。
16.权利要求15的组合物，其中所述吲哚具有根据式1或式2的化学式：
其中
Y选自NH或NOH；
Z，Z’和Z"独立地选自H，Cl，Br和I；和
芳基’是被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基选自：氢，卤素，羟基，C1-3烷基，C1-3酯基团，胺，C1-3烷基取代的胺，芳基取代的胺，羧酸盐/酯基团，C1-3烷基羧酸酯，C1-3烷基酰胺，磺酸盐/酯和C1-3烷基磺酸盐/酯。
17.根据权利要求15或16的组合物，其中所述吲哚选自靛青，异靛，靛玉红E804，靛玉红-3'-肟(I3O)，靛玉红-3'-(2,3二羟基丙基)-肟醚(E804)，6-溴-靛玉红-3'-肟，5-碘-靛玉红-3'-肟，5-5’-二溴-靛玉红5-磺酸-靛玉红-3'-肟，舒尼替尼，SU4312，SU5416及其组合。
18.根据权利要求15-17中任一项的组合物，其中所述类黄酮具有根据式3的化学式：
其中：
R3，R5，R6和R8独立地选自H，OH，OCH3和OP，其中P是保护基团；
R7选自H和P，其中P是保护基团；和
芳基是苯基或取代的苯基。
19.根据权利要求15-17中任一项的组合物，其中所述类黄酮是选自下述的一种或多种：槲皮素，黄芩苷元，白杨黄素，堪非醇，汉黄芩素，芹黄素，四羟黄酮，漆树黄酮，高良姜素，杨梅酮，黄芩素，桑黄素；杜鹃黄素，棉黄素，莰非素，异鼠李亭，柚皮黄素，藿香黄酮醇，甲基鼠李亭和鼠李亭。
20.根据权利要求15-19中任一项的组合物，其中所述吲哚是靛玉红-3'-肟(I3O)。
21.根据权利要求15-20中任一项的组合物，其中所述类黄酮是槲皮素或黄芩苷元。
22.根据权利要求15-21中任一项的组合物，其中组合物包含：
a)约0.1ng/ml至约100mg/ml的吲哚；和
b)约0.1ng/ml至约100mg/ml的类黄酮。
23.根据权利要求15-22中任一项的组合物，其中组合物包含摩尔比约1000:1至1:1000的吲哚和类黄酮。
24.根据权利要求15的组合物，包含治疗有效量的合成的异二聚体，其选自具有根据式4和式5的化学式的化合物：
其中
Y选自NH或NOH；
Z，Z’和Z"独立地选自H，Cl，Br和I；
R3，R5，R6和R8独立地选自H，OH，OCH3和OP，其中P是保护基团；
R7选自H和P，其中P是保护基团；和
芳基和芳基’独立地是苯基或取代的苯基。
25.根据权利要求24的组合物，其中组合物包含约0.1ng/ml至约100mg/ml的合成的异二聚体。
26.根据权利要求15-25中任一项的组合物，其中组合物配制为眼用组合物。
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