ES2392208T3 - Composiciones y procedimientos para modular la endoftalmitis mediante el uso de fluoroquinolonas - Google Patents

Abstract

Una composicion que comprende una fluoroquinolona que tiene la Formula I, II, III, IV, V, VI, VII o VIII, o una desus sales, para su uso en un medicamento para modular la endoftalmitis inflamatoria en un sujeto, en la que dichafluoroquinolona esta presente en una cantidad eficaz para dicha modulacion

Description

Composiciones y procedimientos para modular la endoftalmitis mediante el uso de fluoroquinolonas

5 Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a composiciones para su uso en un medicamento para modular la endoftalmitis mediante el uso de fluoroquinolonas.

La superficie de contacto entre el cuerpo y su entorno es amplia y, por tanto, es muy susceptible a ser invadida por los virulentos patógenos ambientales. Los tejidos externos del ojo forman parte de esta superficie de contacto y, por tanto, el ojo y sus tejidos circundantes también son vulnerables a los microorganismos virulentos, cuya invasión y crecimiento descontrolado provocan diversos tipos de infecciones oftálmicas que conducen a inflamaciones tales como blefaritis, conjuntivitis o queratitis, que, si no se tratan, pueden provocar graves deficiencias visuales. Los tipos

15 comunes de microorganismos que provocan infecciones oftálmicas son virus, bacterias y hongos. Estos microorganismos pueden invadir directamente la superficie del ojo o penetrar en el globo ocular a través de una herida o cirugía, o transmitirse hacia el interior del ojo a través del torrente sanguíneo o del sistema linfático como consecuencia de una enfermedad sistémica. Los microorganismos pueden atacar cualquier parte de la estructura del ojo, incluyendo la conjuntiva, la córnea, la úvea, el cuerpo vítreo, la retina y el nervio óptico. Las infecciones oculares u oftálmicas pueden causar dolor grave, inflamación y enrojecimiento de los tejidos del o de alrededor del ojo, así como visión borrosa y disminución de la visión.

La cascada natural del cuerpo se activa inmediatamente después del comienzo de la invasión por parte de un agente patógeno. Los leucocitos (neutrófilos, eosinófilos, basófilos, monocitos y macrófagos) son atraídos a la zona

25 de la infección en un intento de eliminar el agente patógeno a través de la fagocitosis. Los leucocitos y algunas células de los tejidos afectados son activados por los patógenos para sintetizar y liberar citocinas proinflamatorias tales como IL-1β, IL-3, IL-5, IL-6, IL-8, TNF-α (factor de necrosis tumoral α), GM-CSF (factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos) y MCP-1 (proteína quimiotáctica de monocitos 1). Después, estas citocinas liberadas además atraen más células inmunes hacia la zona infectada, amplificando la respuesta del sistema inmune para defender al huésped contra el agente patógeno. Por ejemplo, IL-8 y MCP-1 son potentes quimiotácticos para, y activadores de neutrófilos y monocitos, respectivamente, mientras que el GM-CSF prolonga la supervivencia de estas células y aumenta su respuesta hacia otros agonistas proinflamatorios. TNF-α puede activar ambos tipos de células, y estimular una mayor liberación de IL-8 y MCP-1 desde ellas. IL-1 y TNF-α son potentes quimiotácticos para los linfocitos T y B, que se activan para producir anticuerpos contra el agente patógeno.

35 El documento 2008/091752 describe un procedimiento de preparación de ácido quinoloncarboxílico y sus derivados. En el documento WO 2008/115951, se hace referencia a composiciones que comprenden fluoroquinolonas específicas que se pueden usar para tratar, mejorar o prevenir infecciones provocadas por bacterias resistentes a fármacos antibacterianos. El documento WO 02/100309 se refiere al uso de formulaciones de ácido quinoloncarboxílico en el tratamiento de infecciones oculares y perioculares.

Aunque las respuestas inflamatorias son esenciales para eliminar los agentes patógenos de la zona de la infección, una respuesta inflamatoria prolongada o hiperactiva puede ser perjudicial para los tejidos circundantes. Por ejemplo, la inflamación hace que los vasos sanguíneos de la zona infectada se dilaten para aumentar el flujo sanguíneo hacia

45 la zona. Como consecuencia de ello, estos vasos dilatados comienzan a tener filtraciones. Tras una inflamación prolongada, los vasos con filtraciones pueden producir un edema grave y afectar al buen funcionamiento de los tejidos circundantes (véase, por ejemplo, VV. W. M. van Hinsbergh, “Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology”, Vol. 17, 1018 (1997))). Además, una presencia continua dominante de macrófagos en la zona de la lesión hace que continúe la producción de toxinas (tales como especies reactivas de oxígeno) y de enzimas que degradan la matriz (metaloproteinasas de la matriz) por parte de estas células, que son perjudiciales tanto para el patógeno como para los tejidos del huésped. Por lo tanto, se deben controlar las inflamaciones prolongadas o hiperactivas para limitar los daños no deseados del cuerpo y acelerar el proceso de recuperación del mismo.

La endoftalmitis es una inflamación de las cavidades intraoculares (es decir, las cámaras anterior y posterior del ojo)

55 y los tejidos circundantes. En la mayoría de los casos, es una infección, que puede estar causada por bacterias, hongos, virus o parásitos, la que desencadena esta inflamación. La endoftalmitis postoperatoria es el tipo más común de endoftalmitis, y se produce por una infección bacteriana tras una operación de cataratas, de glaucoma o de la retina, o una queratotomía radial. La bacteria más común asociada con la endoftalmitis es Staphylococcus epidermidis. También se han encontrado en casos de endoftalmitis otras especies de estafilococos, estreptococos y Pseudomonas. La endoftalmitis infecciosa puede estar provocada por lesiones penetrantes en el ojo o por la retención de materiales naturales tras una operación de cataratas. La endoftalmitis hematógena es provocada por una infección que se propaga a través del torrente sanguíneo y se asienta en el ojo. Sin el tratamiento oportuno, la endoftalmitis puede provocar pérdida de visión.

65 Los glucocorticoides (también denominados en la presente memoria "corticosteroides") representan uno de los tratamientos clínicos más eficaces para una variedad de afecciones inflamatorias, incluyendo la inflamación aguda.

Sin embargo, los fármacos esteroides pueden tener efectos secundarios que amenazan la salud general del paciente.

Se sabe que ciertos glucocorticoides tienen un mayor potencial para elevar la presión intraocular ("PIO") que otros

5 compuestos de esta clase. Por ejemplo, se sabe que la prednisolona, que es un agente antiinflamatorio ocular muy potente, tiene una tendencia mayor a elevar la PIO que la fluorometolona, que tiene una actividad antiinflamatoria ocular moderada. También se sabe que el riesgo de las elevaciones de la PIO asociadas con el uso oftálmico tópico de los glucocorticoides aumenta con el tiempo. En otras palabras, el uso crónico (es decir, a largo plazo) de estos agentes aumenta el riesgo de sufrir elevaciones significativas de la PIO. A diferencia de la inflamación ocular aguda

10 asociada con un trauma físico o una infección de la superficie exterior de la parte anterior del ojo, que requiere terapia a corto plazo del orden de pocas semanas, la infección y la inflamación de la parte posterior del ojo puede requerir tratamiento durante largos períodos de tiempo, generalmente, durante varios meses o más. El uso crónico de los corticosteroides aumenta significativamente el riesgo de sufrir elevaciones de la PIO. Además, también se sabe que el uso de los corticosteroides aumenta el riesgo de formación de cataratas de una manera dependiente de

15 la dosis y de la duración. Una vez que se desarrollan las cataratas, pueden progresar a pesar de la suspensión del tratamiento con corticosteroides.

La administración crónica de glucocorticoides también puede conducir a osteoporosis inducida por el fármaco mediante la supresión de la absorción intestinal del calcio y la inhibición de la formación de hueso. Otros efectos

20 secundarios adversos de la administración crónica de glucocorticoides incluyen hipertensión, hiperglucemia, hiperlipidemia (niveles elevados de triglicéridos) e hipercolesterolemia (niveles elevados de colesterol) debidas a los efectos de estos fármacos en los procesos metabólicos del organismo.

Por lo tanto, sigue existiendo la necesidad de proporcionar mejores compuestos farmacéuticos, composiciones y 25 procedimientos para modular la endoftalmitis.

Resumen de la invención

En general, la presente invención proporciona composiciones para su uso en un medicamento para modular la

30 endoftalmitis inflamatoria mediante el uso de fluoroquinolonas. Más concretamente, la presente invención se refiere a una composición según lo definido en la reivindicación 1.

En otro aspecto, dicha endoftalmitis se selecciona del grupo que consiste en endoftalmitis post-operatoria, endoftalmitis post-traumática, endoftalmitis no infecciosa, panoftalmitis, endoftalmitis hematógena y combinaciones 35 de las mismas. La panoftalmitis es la inflamación de todas las capas del ojo, incluyendo las estructuras intraoculares.

En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones que comprenden una fluoroquinolona que tiene la Fórmula 1, o una de sus sales, para su uso en un medicamento para modular la endoftalmitis inflamatoria.

en la que R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo inferior no sustituidos, grupos alquilo inferior sustituidos, grupos cicloalquilo, grupos arilo C5-C24 no sustituidos, grupos arilo C5-C24 sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 sustituidos y grupos que se pueden hidrolizar en 45 organismos vivos; R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupo amino no sustituido y grupos amino sustituidos con uno o dos grupos alquilo inferior; R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo inferior no sustituidos, grupos alquilo inferior sustituidos, grupos cicloalquilo, grupos alcoxilo inferior no sustituidos, grupos alcoxilo inferior sustituidos, grupos arilo C5-C24 no sustituidos, grupos arilo C5-C24 sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 sustituidos, grupos ariloxilo C5-C24 no sustituidos,

50 grupos ariloxilo C5-C24 sustituidos, grupos heteroariloxilo C5-C24 no sustituidos, grupos heteroariloxilo C5-C24 sustituidos y grupos que se pueden hidrolizar en organismos vivos; X se selecciona del grupo que consiste en átomos de halógeno; Y se selecciona del grupo que consiste en CH2, O, S, SO SO2 y NR4, en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo inferior no sustituidos, grupos alquilo inferior sustituidos y grupos cicloalquilo; y Z se selecciona del grupo que consiste en oxígeno y dos átomos de hidrógeno.

En otro aspecto más, dicha endoftalmitis está provocada por una infección causada por bacterias, virus, hongos o protozoos.

En otro aspecto más, dicha endoftalmitis está provocada por una lesión o un trauma físico en el ojo.

5 Otras características y ventajas de la presente invención resultarán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada, y de las reivindicaciones y figuras anexas.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 muestra el efecto de la moxifloxacina y del compuesto que tiene la Fórmula IV (“BOL-303224-A") en la producción estimulada por LPS de GM-CSF, IL-1β e IL-8, IP-10, MCP-1 y MIP-1α en monocitos THP-1.

La Figura 2 muestra el efecto de la moxifloxacina y del compuesto que tiene la Fórmula IV en la producción 15 estimulada por LPS de GM-CSF, IL-1α, IL-1ra, IL-6 y VEGF en monocitos THP-1.

La Figura 3 muestra el efecto de la moxifloxacina y del compuesto que tiene la Fórmula IV en la producción estimulada por LPS de IL-12p40 en monocitos THP-1.

Descripción detallada de la invención

Como se usa en la presente memoria, el término “control” incluye la reducción, la mejoría, el alivio y la prevención.

Como se usa en la presente memoria, la expresión "alquilo inferior" o "grupo alquilo inferior" significa un grupo

25 hidrocarburo C1-C15 monovalente alifático saturado lineal o de cadena ramificada, que puede estar sustituido o no sustituido. El grupo puede estar parcial o totalmente sustituido con átomos de halógeno (F, Cl, Br o I). Los ejemplos no restrictivos de grupos alquilo inferior incluyen metilo, etilo, n-propilo, 1-metiletilo (isopropilo), n-butilo, n-pentilo, 1,1-dimetiletilo (t-butilo) y similares. Se puede abreviar como "Alq". Preferentemente, un grupo alquilo inferior comprende 1-10 átomos de carbono. Más preferentemente, un grupo alquilo inferior comprende 1-5 átomos de carbono.

Como se usa en la presente memoria, la expresión "alcoxilo inferior" o "grupo alcoxilo inferior" significa un grupo alcoxilo C1-C15 monovalente alifático saturado lineal o de cadena ramificada, que puede estar sustituido o no sustituido. El grupo puede estar parcial o totalmente sustituido con átomos de halógeno (F, Cl, Br o I). Los ejemplos

35 no restrictivos de grupos alcoxilo inferior incluyen metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, 1-metiletoxilo (isopropoxilo), nbutoxilo, n-pentoxilo, t-butoxilo y similares. Preferentemente, un grupo alquiloxilo inferior comprende 1-10 átomos de carbono. Más preferentemente, un grupo alquiloxilo inferior comprende 1-5 átomos de carbono.

El término "cicloalquilo" o la expresión "grupo cicloalquilo" significan un radical monovalente monocíclico o policíclico saturado alifático estable de 3 a 15 miembros que consiste únicamente en átomos de carbono e hidrógeno que puede comprender uno o más anillos fusionados o unidos, preferentemente, anillos monocíclicos de 3 a 7 miembros. Otras realizaciones ejemplares de grupos cicloalquilo incluyen anillos bicíclicos de 7 a 10 miembros. A menos que se especifique lo contrario, el anillo cicloalquilo puede estar unido a cualquier átomo de carbono que genere una estructura estable y, si está sustituido, puede estar sustituido en cualquier átomo de carbono adecuado que genere

45 una estructura estable. Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo, ciclodecilo, norbornilo, adamantilo, tetrahidronaftilo (tetralina), 1-decalinilo, biciclo[2.2.2]octanilo, 1-metilciclopropilo, 2-metilciclopentilo, 2-metilciclooctilo y similares.

Como se usa en la presente memoria, el término “arilo” o la expresión "grupo arilo" significan un radical carbocíclico monovalente o divalente aromático. En algunas realizaciones, el grupo arilo tiene un número de átomos de carbono de 5 a 24 y tiene un solo anillo (por ejemplo, fenilo o fenileno), múltiples anillos condensados (por ejemplo, naftilo o antranilo) o múltiples anillos unidos (por ejemplo, bifenilo). A menos que se especifique lo contrario, el anillo arilo puede estar unido a cualquier átomo de carbono adecuado que genere una estructura estable y, si está sustituido, puede estar sustituido en cualquier átomo de carbono adecuado que genere una estructura estable. Los ejemplos no

55 restrictivos de grupos arilo incluyen fenilo, naftilo, antrilo, fenantrilo, indanilo, indenilo, bifenilo y similares. Se puede abreviar como "Ar". Preferentemente, un grupo arilo comprende 5-14 átomos de carbono. Más preferentemente, un grupo arilo comprende 5-10 átomos de carbono.

El término "heteroarilo" o la expresión "grupo heteroarilo" significan un radical monovalente o divalente monocíclico o policíclico aromático estable que puede comprender uno o más anillos fusionados o unidos. En algunas realizaciones, el grupo heteroarilo tiene 5-24 miembros, siendo preferentemente, un radical monocíclico de 5 a 7 o un radical bicíclico de 7 a 10 miembros. El grupo heteroarilo puede tener de uno a cuatro heteroátomos en el/los anillo/s independientemente seleccionado/s entre nitrógeno, oxígeno y azufre, en el que cualquier heteroátomo de azufre puede estar opcionalmente oxidado y cualquier heteroátomo de nitrógeno puede estar opcionalmente oxidado 65 o cuaternizado. A menos que se especifique lo contrario, el anillo heteroarilo puede estar unido a cualquier heteroátomo o átomo de carbono adecuado que genere una estructura estable y, si está sustituido, puede estar sustituido en cualquier heteroátomo o átomo de carbono adecuado que genere una estructura estable Los ejemplos no restrictivos de heteroarilos incluyen furanilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, tiadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolizinilo, azaindolizinilo, indolilo, azaindolilo, diazaindolilo, dihidroindolilo, dihidroazaindoílo, isoindolilo, 5 azaisoindolilo, benzofuranilo, furanopiridinilo, furanopirimidinilo, furanopirazinilo, furanopiridazinilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrofuranopiridinilo, dihidrofuranopirimidinilo, benzotienilo, tienopiridinilo, tienopirimidinilo, tienopirazinilo, tienopiridazinilo, dihidrobenzotienilo, dihidrotienopiridinilo, dihidrotienopirimidinilo, indazolilo, azaindazolilo, diazaindazolilo, bencimidazolilo , imidazopiridinilo, benztiazolilo, tiazolopiridinilo, tiazolopirimidinilo, benzoxazolilo, benzoxazinilo, benzoxazinonilo, oxazolopiridinilo, oxazolpirimidinilo, bencisoxazolilo, purinilo,

10 cromanilo, azacromanilo, quinolizinilo, quinolinilo, dihidroquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, isoquinolinilo, dihidroisoquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, cinnolinilo, azacinnolinilo, ftalazinilo, azaftalazinilo, quinazolinilo, azaquinazolinilo, quinoxalinilo, azaquinoxalinilo, naftiridinilo, dihidronaftiridinilo, tetrahidronaftiridinilo, pteridinilo, carbazolilo, acridinilo, fenazinilo, fenotiazinilo y fenoxazinilo, y similares.

15 Los glucocorticoides ("GC") se encuentran entre los fármacos más potentes usados para el tratamiento de enfermedades inflamatorias alérgicas y crónicas o de la inflamación provocada por infecciones. Sin embargo, como se mencionó anteriormente, el tratamiento a largo plazo con GC se asocia, a menudo, con numerosos efectos secundarios adversos tales como diabetes, osteoporosis, hipertensión, glaucoma o cataratas. Estos efectos secundarios, al igual que otras manifestaciones fisiológicas, son el resultado de la expresión anómala de los genes

20 responsables de dichas enfermedades. Las investigaciones realizadas en la última década han aportado importantes conocimientos sobre las bases moleculares de las acciones mediadas por los GC sobre la expresión de los genes sensibles a los GC. Los GC ejercen la mayor parte de sus efectos genómicos mediante la unión al receptor citoplasmático GC ("RG"). La unión del GC con el RG provoca la translocación del complejo GC-RG hacia el núcleo de la célula, en el que modula la transcripción de genes, bien de un modo de regulación positivo (transactivación) o

25 negativo (transrepresión). Cada vez hay más pruebas de que los efectos tanto beneficiosos como no deseados del tratamiento con GC se producen como consecuencia de niveles de expresión no diferenciados de estos dos mecanismos; es decir, avanzan a niveles de eficacia similares. Aunque todavía no ha sido posible comprobar los aspectos más fundamentales de la acción de los GC en las enfermedades inflamatorias crónicas, hay pruebas de que es probable que los efectos inhibidores de los GC sobre la síntesis de las citocinas sean de particular

30 importancia. Los GC inhiben la transcripción, a través del mecanismo de transrepresión, de varias citocinas que son importantes en enfermedades inflamatorias, incluyendo IL-1β (interleucina-1β), IL-2, IL-3, IL-6, IL-11, TNF-α (factor de necrosis tumoral-α), GM-CSF (factor estimulante de colonias granulocitos y macrófagos) y quimiocinas que atraen células inflamatorias hacia la zona de la inflamación, incluyendo IL-8, RANTES, MCP-1 (proteína quimiotáctica de monocitos 1), MCP-3, MCP-4, MIP-1α (proteína inflamatoria de macrófagos 1α) y eotaxina. P. J.

35 Barnes, Clin. Sci., Vol. 94, 557-572 (1998). Por otro lado, hay pruebas convincentes de que la síntesis de las quinasas IKB, que son proteínas que tienen efectos inhibidores sobre los factores de transcripción proinflamatorios NF-kB, es aumentada por los GC. Estos factores de transcripción proinflamatorios regulan la expresión de genes que codifican muchas proteínas inflamatorias tales como citocinas, enzimas inflamatorias, moléculas de adhesión y receptores inflamatorios. S. Wissink et al., Mol. Endocrinol., Vol. 12, n.º 3, 354-363 (1998); P. J. Barnes y M. Karin,

40 New Engl. J. Med., Vol. 336, 1066-1077 (1997). Así pues, tanto la función de transrepresión como la función de transactivación de los GC dirigidos a diferentes genes producen el efecto beneficioso de la inhibición inflamatoria. Por otro lado, la diabetes y el glaucoma inducidos por esteroides parecen estar producidos por la acción de transactivación de los GC sobre los genes responsables de estas enfermedades. H. Schacke et al., Pharmacol. Ther., Vol. 96, 23-43 (2002). Por lo tanto, mientras que la transactivación de ciertos genes por parte de los GC

45 produce efectos beneficiosos, la transactivación de otros genes producida por los mismos GC puede generar efectos secundarios no deseados. Así pues, es muy deseable proporcionar compuestos farmacéuticos, composiciones y procedimientos para la modulación de la inflamación sin los efectos secundarios no deseados de la terapia con GC.

En general, la presente invención se refiere a composiciones para su uso en un medicamento para modular la 50 endoftalmitis mediante el uso de fluoroquinolonas.

En otro aspecto, dicha endoftalmitis se selecciona del grupo que consiste en endoftalmitis post-operatoria, endoftalmitis post-traumática, endoftalmitis no infecciosa, panoftalmitis, endoftalmitis hematógena y combinaciones de las mismas.

55 En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones que comprenden una fluoroquinolona que tiene la Fórmula 1, o una de sus sales, para su uso en un medicamento para modular la endoftalmitis inflamatoria.

en la que R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo inferior no sustituidos, grupos alquilo inferior sustituidos, grupos cicloalquilo, grupos arilo C5-C24 no sustituidos, grupos arilo C5-C24 sustituidos, grupos 5 heteroarilo C5-C24 no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 sustituidos y grupos que se pueden hidrolizar en organismos vivos; R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupo amino no sustituido y grupos amino sustituidos con uno o dos grupos alquilo inferior; R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo inferior no sustituidos, grupos alquilo inferior sustituidos, grupos cicloalquilo, grupos alcoxilo inferior no sustituidos, grupos alcoxilo inferior sustituidos, grupos arilo C5-C24 no sustituidos, grupos arilo C5-C24 sustituidos, 10 grupos heteroarilo C5-C24 no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 sustituidos, grupos ariloxilo C5-C24 no sustituidos, grupos ariloxilo C5-C24 sustituidos, grupos heteroariloxilo C5-C24 no sustituidos, grupos heteroariloxilo C5-C24 sustituidos y grupos que se pueden hidrolizar en organismos vivos; X se selecciona del grupo que consiste en átomos de halógeno; Y se selecciona del grupo que consiste en CH2, O, S, SO SO2 y NR4, en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo inferior no sustituidos, grupos alquilo inferior

15 sustituidos y grupos cicloalquilo; y Z se selecciona del grupo que consiste en oxígeno y dos átomos de hidrógeno.

En otro aspecto más, una composición de la presente invención para su uso en un medicamento para modular la endoftalmitis comprende un miembro de una familia de fluoroquinolonas que tiene la Fórmula II, o una de sus sales,

en la que R1, R3, X, Y y Z tienen los significados descritos anteriormente.

En un aspecto, R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo C1-C5 (o alternativamente, C1

25 C3) sustituidos y no sustituidos, grupos cicloalquilo C3-C10 (o alternativamente, C3-C5), grupos arilo C5-C14 (o alternativamente, C6-C14 o C5-C10 o C6-C10) sustituidos o no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C14 (o alternativamente, C6-C14 o C5-C10 o C6-C10) sustituidos o no sustituidos y grupos que se pueden hidrolizar en organismos vivos. En una realización, R1 se selecciona del grupo que consiste en grupos alquilo C1-C5 (o alternativamente, C1-C3) sustituidos y no sustituidos.

30 En otro aspecto, R2 se selecciona del grupo que consiste en grupo amino no sustituido y grupos amino sustituidos con uno o dos grupos alquilo C1-C5 (o alternativamente, C1-C3).

En otro aspecto más, R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo C1-C5 (o alternativamente,

35 C1-C3) sustituidos y no sustituidos, grupos cicloalquilo C3-C10 (o alternativamente, C3-C5), grupos alcoxilo C1-C5 (o alternativamente, C1-C3) sustituidos o no sustituidos, grupos arilo C5-C14 (o alternativamente, C6-C14 o C5-C10 o C6-C10) sustituidos o no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C14 (o alternativamente, C6-C14 o C5-C10 o C6-C10) sustituidos o no sustituidos y grupos ariloxilo C5-C14 (o alternativamente, C6-C14 o C5-C10 o C6-C10) sustituidos o no sustituidos. En una realización, R3 se selecciona del grupo que consiste en grupos cicloalquilo C3-C10 (o alternativamente, C3-C5).

40 En otro aspecto más, X se selecciona del grupo que consiste en Cl, F y Br. En una realización, X es Cl. En otra realización, X es F.

En un aspecto más, Y es CH2. En otro aspecto más, Z comprende dos átomos de hidrógeno. En otro aspecto más, Y es NH, Z es O y X es Cl.

5 En otro aspecto, una composición de la presente invención comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable. En la Tabla 1, se muestran algunos miembros no restrictivos de la familia de los compuestos que tienen la Fórmula I.

Hay otros compuestos de la familia que no se encuentran enumerados en la Tabla I que también son adecuados en 10 determinadas situaciones. Tabla 1

Algunas fluoroquinolonas seleccionadas

Compuesto

R1 R2 R3 X Y Z

1

H H CH3 Cl CH2 2 H

2

H NH2 CH3 Cl CH2 2 H

3

H NH2 ciclopropilo Cl CH2 2 H

4

H NH(CH3) ciclopropilo Cl CH2 2 H

5

H N(CH3)2 ciclopropilo Cl CH2 2 H

6

CH3 NH2 ciclopropilo Cl CH2 2 H

7

C2H5 NH2 ciclopropilo Cl CH2 2 H

8

H NH2 ciclopropilo F CH2 2 H

9

H NH2 ciclopropilo Br CH2 2 H

10

H NH(C2H5) ciclopropilo Cl CH2 2 H

11

H NH(C3H7) ciclopropilo F CH2 2 H

12

H NH2 ciclopentilo Cl CH2 2 H

13

H NH2 ciclopropilo Cl CH2 O

14

H NH2 ciclopropilo F CH2 O

15

H NH2 ciclopropilo Br CH2 O

16

H NH2 ciclopropilo Cl CH(C2H5) O

17

CH3 NH2 ciclopropilo Cl CH2 O

18

CH3 NH(CH3) ciclopropilo Cl CH2 O

19

CH3 N(CH3)2 ciclopropilo Cl CH2 O

20

CH3 NH(C3H7) ciclopropilo Cl CH2 O

21

CH3 NH(C2H5) ciclopropilo Cl CH2 O

22

CH3 N(CH3)(C2H5) ciclopropilo Cl CH2 O

23

H NH2 ciclopropilo Cl NH O

24

CH3 NH(CH3) ciclopropilo Cl NH O

25

H 2H ciclopropilo Cl NH O

En una realización, el ácido fluoroquinoloncarboxílico incluido en una composición y usado en un procedimiento de 15 la presente invención tiene la Fórmula III.

En otra realización, el ácido fluoroquinoloncarboxílico incluido en una composición y usado en un procedimiento de la presente invención tiene la Fórmula IV, V o VI.

En otra realización más, el ácido fluoroquinoloncarboxílico incluido en una composición y usado en un procedimiento de la presente invención tiene la Fórmula VII o VIII.

En otro aspecto más, una composición de la presente invención comprende un enantiómero de uno de los compuestos que tiene la Fórmula I, II o III.

En otro aspecto más, una composición de la presente invención comprende una mezcla de enantiómeros de uno de los compuestos que tiene la Fórmula I, II o III.

Una fluoroquinolona revelada en la presente memoria se puede producir mediante un procedimiento descrito en las 5 patentes estadounidense n.º 5.447.926 y 5.385.900.

En otro aspecto más, dicha infección está provocada por bacterias, virus, hongos, protozoos o combinaciones de los mismos.

En otro aspecto más, la presente invención proporciona una composición para su uso en un medicamento para modular una respuesta inflamatoria que acompaña a una cirugía ocular, en la que dicha composición comprende una de las fluoroquinolonas que tiene la Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII o VIII, y dicho procedimiento emplea dicha composición. Los ejemplos no restrictivos de dicha cirugía ocular incluyen operación de cataratas, operación de glaucoma, operación de retina y queratotomía radial.

15 En otro aspecto más, la presente invención proporciona composiciones para su uso en un medicamento para tratar o controlar la endoftalmitis en un sujeto, composiciones que producen un nivel inferior de al menos un efecto secundario adverso en comparación con las composiciones que comprenden al menos un glucocorticoide usado en la técnica anterior para tratar o controlar dicho endoftalmitis.

En un aspecto, un nivel de dicho al menos un efecto secundario adverso se determina in vivo o in vitro. Por ejemplo, un nivel de dicho al menos un efecto secundario adverso se determina in vitro mediante la realización de un cultivo celular y determinando el nivel de un biomarcador asociado con dicho efecto secundario. Dichos biomarcadores pueden incluir proteínas (por ejemplo, enzimas), lípidos, azúcares y derivados de los mismos que participan en, o

25 son los productos de, la cascada bioquímica que genera el efecto secundario adverso. Más adelante, en la presente memoria, se describen más detalladamente los procedimientos de ensayo in vitro representativos.

En otro aspecto más, dicho al menos un efecto secundario adverso se selecciona del grupo que consiste en glaucoma, cataratas, hipertensión, hiperglucemia, hiperlipidemia (niveles elevados de triglicéridos) e hipercolesterolemia (niveles elevados de colesterol).

En otra realización, un nivel de dicho al menos un efecto secundario adverso se determina aproximadamente un día después de la administración de dicha composición por primera vez a, y de estar presente en, dicho sujeto. En otra realización, un nivel de dicho al menos un efecto secundario adverso se determina aproximadamente 14 días

35 después de la administración de dicha composición por primera vez a, y de estar presente en, dicho sujeto. En incluso otra realización más, un nivel de dicho al menos un efecto secundario adverso se determina aproximadamente 30 días después de la administración de dicha composición por primera vez a, y de estar presente en, dicho sujeto Alternativamente, un nivel de dicho al menos un efecto secundario adverso se determina aproximadamente 2, 3, 4, 5 ó 6 meses después de la administración de dichos compuestos o composiciones por primera vez a, y de estar presentes en, dicho sujeto.

En otro aspecto, dicho al menos un glucocorticoide de la técnica anterior usado para tratar, controlar, reducir o mejorar las mismas afecciones se administra a dicho sujeto a una dosis y con una frecuencia suficientes para producir un efecto beneficioso en dicha afección equivalente a una composición de la presente invención después

45 de aproximadamente el mismo tiempo transcurrido.

En otro aspecto más, dicho al menos un glucocorticoide de la técnica anterior se selecciona del grupo que consiste en 21-acetoxipregnenolona, alclometasona, algestona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, cloroprednisona, clobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, corticosterona, cortisona, cortivazol, deflazacort, desonida, desoximetasona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato, enoxolona, fluazacort, flucloronida, flumetasona, flunisolida, acetónido de fluocinolona, fluocinonida, fluocortin-butilo, fluocortolona, fluorometolona, acetato de fluperolona, acetato de fluprednideno, fluprednisolona, flurandrenolida, propionato de fluticasona, formocortal, halcinonida, propionato de halobetasol, halometasona, acetato de halopredona, hidrocortamato, hidrocortisona, etabonato de loteprednol, mazipredona, medrisona, meprednisona,

55 metilprednisolona, furoato de mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisolona, 25-dietilamino-acetato de prednisolona, fosfato sódico de prednisolona, prednisona, prednival, prednilideno, rimexolona, tixocortol, triamcinolona, acetónido de triamcinolona, benetonida de triamcinolona, hexacetonida de triamcinolona, sus sales fisiológicamente aceptables, combinaciones de los mismos y mezclas de los mismos. En una realización, dicho al menos un glucocorticoide de la técnica anterior se selecciona del grupo que consiste en dexametasona, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, medrisona, triamcinolona, etabonato de loteprednol, sales fisiológicamente aceptables de los mismos, combinaciones de los mismos y mezclas de los mismos. En otra realización, dicho al menos un glucocorticoide de la técnica anterior es aceptable para usos oftálmicos.

PRUEBA 1: Inhibición de la expresión de citocinas inducida por LPS en monocitos THP-1 humanos por el 65 compuesto que tiene la fórmula IV y moxifloxacina

Procedimiento experimental

Los monocitos THP-1 humanos (ATCCTIB202) se adquirieron de la Colección Americana de Cultivos Tipo (Manassas, Virginia) y se mantuvieron en medio RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, California) complementado con 5 suero bovino fetal al 10% ("SBF", Invitrogen, Carlsbad , California), 100 U/ml de penicilina (Invitrogen, Carlsbad, California) y 100 µg/ml de estreptomicina (Invitrogen, Carlsbad, California) a 37ºC en una incubadora humedecida con CO2 al 5%. Se precultivaron las células THP-1 en medio RPMI 1640 que contenía suero dializado al 10% durante 24 h. Se sembraron las células en placas de 24 pocillos en medio RPMI 1640 que contenía suero dializado al 2% (adquirido en Hyclone, Loga, Utah) y se trataron con vehículo (DMSO, dimetilsulfóxido), 10 µg/ml de LPS

10 (Sigma Aldrich, St. Louis, Missouri), 0,1, 1, 10 ó 30 µg/ml de moxifloxacina (Neuland Laboratories, Hyderabad, India), 0,1, 1, 10 ó 30 µg/ml de compuesto que tiene la Fórmula IV (también conocido en la presente memoria como "BOL303224-A" Bausch & Lomb Incorporated, Rochester, Nueva York), 10 µg/ml de LPS + 0,1, 1, 10 ó 30 µg/ml de moxifloxacina o 10 µg/ml de LPS + 0,1, 1, 10 ó 30 µg/ml de compuesto que tiene la Fórmula IV durante 18 horas Cada tratamiento se realizó por triplicado.

15 Ensayo Multiplex sobre plataforma Luminex

Las muestras se analizaron usando la tecnología de perlas Multiplex, que utiliza microesferas como soporte sólido para inmunoensayos y permite el análisis de todas las citocinas de cada muestra (D. A. Vignali, J. Immunol. 20 Methods, Vol. 243, 243-255 (2000)). Se midieron dieciséis citocinas siguiendo las instrucciones del fabricante. En síntesis, se incubaron 50 µl de muestras de medio con perlas de captura revestidas de anticuerpo durante una noche a 4ºC. Luego se incubaron las perlas lavadas con anticuerpos contra citocina humana marcados con biotina durante 2 h a temperatura ambiente, tras lo que se incubaron con estreptavidina-ficoeritrina durante 30 min. Se analizaron las muestras con Luminex 200™ (Luminex, Austin, Texas) y el programa informático Beadview v1.0 25 (Upstate Cell Signaling Solutions, Temecula, California). Se usaron las curvas patrón de concentraciones conocidas de citocinas humanas recombinantes para convertir las unidades de fluorescencia (intensidad media de fluorescencia) en la concentración de las citocinas en pg/ml. Solo se usaron las partes lineales de los curvas patrón para cuantificar las concentraciones de citocinas, y en los casos en los que la lectura de la fluorescencia superó el intervalo lineal de la curva patrón, se realizó una dilución apropiada para garantizar que la concentración estaba en

30 la parte lineal de la curva.

Función metabólica celular

La competencia metabólica celular se determinó mediante un ensayo AlamarBlue (J. O'Brien et al., FEBS J., Vol. 35 267, 5421-5426 (2000)). En síntesis, tras retirar el medio, se incubaron las células con solución AlamarBlue diluida

1:10 de (Biosource, Camarillo, California) durante 3 horas a 37ºC en una incubadora humidificada con CO2 al 5%. Se leyó la placa fluorométricamente en excitación a 530-560 nm y emisión a 590 nm. Se usaron las unidades de fluorescencia relativa ("UFR") para determinar la viabilidad celular.

40 Análisis de datos y estadísticas

Todas las concentraciones de las citocinas (pg/ml) se expresaron como la media ± la desviación estándar. El análisis estadístico que compara los efectos del tratamiento en todos los grupos se realizó mediante un ANOVA monofactorial con una prueba de comparación post hoc de Dunnett, usando bien el control del vehículo o el

45 tratamiento con LPS como referencias. Para todos los ensayos, p < 0,05 fue predeterminado como el criterio de relevancia estadística.

Resultados

50 En ningún caso, los tratamientos produjeron un efecto estadísticamente relevante sobre la actividad metabólica celular medida mediante el ensayo AlamarBlue (datos no mostrados). Los resultados globales de los estudios que determinan los niveles de citocinas en el medio de cultivo de estos diversos grupos de tratamiento se resumen en la Tabla 2. Se detectaron niveles sustanciales de 14 de las 16 citocinas del ensayo en los medios de cultivo de monocitos THP-1, afectando a todas las citocinas, a excepción de EGF y IL-7. La exposición de los monocitos THP

55 1 a 10 µg/ml de LPS durante 18 horas produjo un aumento significativo de 13 de las 14 citocinas detectables; la cantidad de VEGF en el medio de cultivo de monocitos THP-1 también aumentó, pero el aumento no alcanzó relevancia estadística.

Tabla 2

Resumen de la inhibición de la producción de citocinas estimulada por LPS producida por moxifloxacina y el compuesto que tiene la Fórmula IV en monocitos THP-1 humanos

Citocina

Inhibida por moxifloxacina a µg/ml Inhibida por el compuesto que tiene la Fórmula IV a µg/ml

0,1

1 10 30 0,1 1 10 30

Fractalcina

G-CSF

X X X X

GM-CSF

X X

IL-12p40

X X X X

IL-1α

X X X X X

IL-1β

X X

IL-1ra

X X X X X

IL-6

X X X X

IL-8

X X

IP-10

X X

MCP-1

X

MIP-1α

X X

RANTES

VEGF

X X X

Nota: "X" significa inhibición relevante a una determinada concentración.

Tanto la moxifloxacina como el compuesto que tiene la Fórmula IV inhibieron significativamente la producción de citocinas inducida por LPS en monocitos THP-1. Para la moxifloxacina, se observó un efecto inhibidor significativo a

5 1 µg/ml para IL-12p40, a 10 µg/ml para IL-lra y IL-6, y a 30 µg/ml para G-CSF, GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-8, IP-10 y MIP1-α (Tabla 1). Para el compuesto que tiene la Fórmula IV, se observó un efecto inhibidor significativo a 0,1 µg/ml para IL-1α, a 1 µg/ml para G-CSF, IL-Ira y IL-6, y a 30 µg/ml para GM-CSF, IL-12p40, IL-1β, IL-1α, IL-Ira, IL-8, IP-10, MCP-1 y MIP-1 (Tabla 2). Ni la moxifloxacina ni el compuesto que tiene la Fórmula IV modificaron la producción estimulada por LPS de RANTES ni de fractalcina.

10 Las citocinas detectadas en el presente estudio se dividieron en cuatro grupos de respuesta diferentes. El primer grupo incluye aquellas citocinas para las que estas fluoroquinolonas no tuvieron una eficacia significativa (RANTES y fractalcina). El segundo grupo de citocinas incluye GM-CSF, IL-1β, IL-8, IP-10, MCP-1 y MIP-1α. Para estas citocinas, tanto la moxifloxacina como el compuesto que tiene la Fórmula IV (marcado como BOL-303224-A en las

15 figuras) tuvieron efectos comparables tras la estimulación con LPS (Figura 1). El tercer grupo de citocinas, que incluye G-CSF, IL-1α, IL-Ira, IL-6 y VEGF, son aquellas para las que el compuesto que tiene la Fórmula IV demostró ser más potente que la moxifloxacina (Figura 2). Finalmente, el cuarto grupo de citocinas son aquellas para las que la moxifloxacina fue más potente que el compuesto que tiene la Fórmula IV, y solo consiste en IL-12p40 (Figura 3).

20 Con el compuesto que tiene la Fórmula IV, se observaron efectos inhibidores de las citocinas significativos a concentraciones muy bajas. Por ejemplo, se observó un efecto inhibidor significativo del compuesto que tiene la Fórmula IV a una concentración tan baja como a 100 ng/ml en IL-1α, y a 1.000 ng/ml en G-CSF, IL-Ira y IL-6. Estas concentraciones están muy por debajo de las concentraciones oculares previstas tras la administración tópica (K. W. Ward et al., J. Ocul. Pharmacol. Ther., Vol. 23,243-256 (2007)). Por lo tanto, se pueden obtener beneficios clínicos

25 resultantes de este perfil de inhibición de citocinas.

PRUEBA 2: Evaluación de la eficacia de cuatro formulaciones de antibióticos en un modelo profiláctico de endoftalmitis en conejos blancos de Nueva Zelanda

30 Introducción

El objetivo del presente estudio consistió en evaluar la eficacia de cuatro formulaciones de antibióticos en el tratamiento de la endoftalmitis bacteriana en conejos blancos de Nueva Zelanda.

35 Materiales y procedimientos

Artículos de prueba En este estudio, se usaron cuatro formulaciones de antibióticos, y se identificaron de la siguiente manera:

• BOL-303224-A (suspensión al 0,6%) 5 • Quixin® (Levofloxacina al 0,5%)

•

Vigamox® (Moxifloxacina al 0,5%)

•

Zymar® (Gatifloxacina al 0,3%).

10 Los artículos de ensayo se almacenaron a temperatura ambiente y se usaron como fueron suministrados por el proveedor. Para cada artículo de ensayo, se recibió una hoja de datos sobre la seguridad del material (MSDS) o un prospecto con la información pertinente en materia de seguridad. Se usó solución salina normal como artículo de control negativo y se administró de la misma manera que las formulaciones de antibióticos. En la Tabla 3, se

15 muestra más información sobre los artículos de ensayo y de control.

Tabla 3

Artículo Descripción

BOL-303224-A Suspensión al 0,6% (6 mg/ml): Bausch & Lomb, n.º de lote 037931

Solución oftálmica de levofloxacina, 0,5% (5 mg/ml); Vistakon® Pharmaceuticals, LLC. n.º

Quixin®

de lote 108020, fecha de caducidad 09/04

Solución oftálmica de clorhidrato de moxifloxacina, 0,5% como base (5 mg/ml): Alcon

Vigamox®

Laboratories. Inc., n.º de lote 122453F. fecha de caducidad 09/02

Solución oftálmica de gatifloxacina, 0,3% (3 mg/ml); Allergan. Inc., n.º de lote 48125, fecha

Zymar®

de caducidad 08/12 y n.º de lote 48517, fecha de caducidad 09/01

Solución salina Inyección de cloruro sódico al 0,9% USP; B. Braun Medical Inc., n.º de lote J6L012, fecha normal de caducidad 08/09, y n.º de lote J7D025, fecha de caducidad 09/04

Inóculo bacteriano

20 Se usó Staphylococcus aureus (S. aureus) resistente a la meticilina, cepa ATCC 33591 (Microorganismos MicroBioLogics Power™, n.º de lote 496431, fecha de caducidad 09/01, número/nódulo: 2,6 x 108) para la inducción de la endoftalmitis bacteriana. Los estafilococos de S. aureus se suministraron en forma de nódulos liofilizados y se almacenó en refrigeración (2-8ºC) antes de su hidratación. Los estafilococos de S. aureus se suministraron con una

25 MSDS. Se usó agua tamponada (APHA) (Remel Corp., n.º de lote 472492, fecha de caducidad 11/09/07, n.º de lote 540843, fecha de caducidad 18/04/08) como líquido de hidratación. Se usó solución salina equilibrada (BSS) (B. Braun Medical, n.º de lote J6N011, fecha de caducidad 08/10) para preparar las suspensiones de S. aureus para la inoculación.

30 Se preparó una suspensión de S. aureus cada día de inoculación de la siguiente manera: se llevaron a la temperatura ambiente los nódulos de S. aureus liofilizados y el líquido de hidratación. Se colocaron de dos a tres nódulos con pinzas estériles en 10 ml de líquido de hidratación en un vial. Se tapó el vial y se incubó a 34-38ºC durante 30 minutos para garantizar la completa hidratación. Tras la incubación, se agitó el material hidratado con movimientos vorticiales para obtener una suspensión homogénea y una distribución uniforme del organismo. Se usó

35 esta suspensión como un inóculo el día de la preparación.

Se contaron las unidades formadoras de colonias (UFC) de los inóculos de la siguiente manera: se prepararon diluciones en serie 1:10 (volumen inicial: volumen final) con BSS, y se prepararon placas de vertido de las diluciones por duplicado (1 ml/placa) con agar de soja y tripticaseína (TSA). Se incubaron las placas a 30-35ºC durante 29-47

40 horas y luego se realizó el recuento. Las concentraciones resultantes de los inóculos fueron de 3,5 x 107 UFC/ml (para los Grupos A-C), 2,9 x 107 UFC/ml (para los Grupos D-F) y 3,3 x 107 UFC/ml (para los Grupos G-I).

Se cuantificó el volumen de dosis (25 µl) de cada inóculo de la siguiente manera: se colocaron 0,025 ml del inóculo en 9,975 ml de BSS. Se prepararon diluciones en serie 1:10 con BSS, y se prepararon placas de vertido de las

45 diluciones por duplicado (1 ml/placa) con TSA. Se incubaron las placas a 30-35ºC durante 29-47 horas y luego se realizó el recuento. Las concentraciones resultantes de los inóculos fueron de 2,5 x 105 UFC/dosis (para los Grupos A-C), 7,5 x 105 UFC/ml (para los Grupos D-F) y 4,1 x 105 UFC/ml (para los Grupos G-I).

Durante el recuento de los inóculos, se produjeron las siguientes desviaciones del protocolo: para la primera

50 dilución, se colocaron 0,025 ml de inóculo en 9,975 ml de BSS; el protocolo especificaba que se colocarían 1,0 ml de inóculo en 1,45 ml de BSS. Las placas preparadas se incubaron a 30-35ºC; el protocolo especificaba que las placas se incubarían a 34-38ºC. Estas desviaciones no tuvieron ningún efecto en el resultado del estudio.

Sistema de ensayo

Animales

5 Se adquirieron cincuenta y un conejos blancos de Nueva Zelanda hembra de The Rabbit Source (Ramona, California). Los animales tenían 9-15 semanas de vida y pesaban 1,6-2,5 kg en el momento de la dosificación. El protocolo especificaba que los animales pesarían al menos 2,0-3,0 kg en el momento de la dosificación, pero ocho animales de los grupos D-F pesaban menos de 2,0 kg. Esta desviación no tuvo ningún efecto en el resultado del estudio. Los animales se identificaron con marcas en la oreja y tarjetas de jaula.

Cría de animales

A su llegada, se examinaron los animales para asegurarse de que estaban sanos y se pusieron en cuarentena durante 10 días antes someterlos al estudio. Cuando acabó el período de cuarentena, se volvieron a examinar los

15 animales de nuevo en cuanto a los parámetros generales de salud y la presencia de anomalías anatómicas oftálmicas.

Se introdujeron los animales en jaulas colgantes de acero inoxidable individuales. El alojamiento y la higiene se realizaron según el procedimiento operativo interno.

Los animales recibieron diariamente alimento certificado rico en fibra para conejos Teklad Global. El análisis y la certificación de la dieta fueron proporcionados por el proveedor, Harlan Teklad. No se realizaron análisis a parte de los proporcionados por el fabricante. Los animales recibieron agua corriente ad libitum. No se conocía la existencia de ningún contaminante en el agua, y no se realizaron análisis adicionales al margen de los proporcionados por el

25 distrito hídrico local y según lo especificado en el procedimiento operativo interno. Los parámetros ambientales fueron controlados según el procedimiento operativo interno. La temperatura ambiente del estudio fue de 21,122,1ºC con una humedad relativa del 57-86%.

Exploraciones previas al tratamiento

Antes de su estudio, se sometió cada animal a un examen oftálmico previo al tratamiento (lámpara de hendidura y oftalmoscopia indirecta). Las observaciones se calificaron de acuerdo con el sistema Shadduck de McDonald y se registraron usando una hoja de recogida de datos estandarizada. Los criterios de aceptación en el estudio fueron los siguientes: puntuaciones de ≤ 1 por congestión conjuntiva e inflamación; puntuaciones de 0 ó 3 para la reacción de

35 la pupila (que indican que la reacción de la pupila era normal (puntuación = 0) o que las pupilas se dilataron con un agente midriático antes de la oftalmoscopia (puntuación = 3)); puntuaciones de 0 para el resto de las variables de observación.

Grupos de tratamiento

En la Tabla T2-1, se describen los grupos de tratamiento. El estudio se realizó en tres fases de la siguiente manera: primero se inocularon los animales de los Grupos A-C (BOL-303224-A, Zymar® y solución salina); los animales de los Grupos D-F (Quixin®, Vigamox® y sin tratar) se inocularon ocho días después; y los animales de los Grupos G-l (Quixin®, Vigamox® y solución salina) se inocularon treinta y tres días después del primer grupo.

45 Antes del tratamiento en cada fase, se pesaron los animales y se asignaron aleatoriamente a los grupos programados para el tratamiento, con una excepción: ocho días después de realizar la inoculación en el primer grupo, se añadieron los animales del Grupo F (controles no tratados) al estudio tras repartirlos aleatoriamente entre los grupos D y E (Quixin® y Vigamox®). El protocolo indicaba que los animales se pesarían y se asignarían aleatoriamente entre los grupos de tratamiento en cada fase. Como los pesos de los animales del Grupo F fueron similares a los pesos de los animales del Grupo D y E, esta desviación no tuvo ningún efecto sobre el resultado del estudio. Los animales fueron repartidos aleatoriamente entre los grupos de tratamiento según el diseño estadístico Cuadrado Latino modificado.

55 Dosis de antibióticos

Se trató el ojo derecho de los animales de los grupos A-E y G-I con el artículo apropiado (agente antibiótico o solución salina) antes y después de la inoculación intracameral. El artículo se administró por vía tópica con una pipeta de desplazamiento positivo a un volumen de 50 µl por dosis. Cada ojo derecho recibió cuatro dosis del artículo en intervalos de 15 minutos antes de la inoculación (a los 60, 45, 30 y 15 minutos) y cinco dosis del artículo en intervalos de 6 horas tras la inoculación (inmediatamente después de la inoculación y a las 6, 12, 18 y 24 horas). Se registró la hora de la administración de cada dosis. El ojo derecho de los animales del Grupo F permaneció sin tratamiento antes y después de la inoculación.

65 El protocolo especificaba que las dosis de los agentes antibióticos o de la solución salina se administrarían dentro de los siguientes intervalos de tiempo: intervalos de ± 3 minutos para antes de la inoculación; inmediatamente después de la inoculación (sin intervalo); e intervalos de ± 5 minutos a las 6 horas o más después de la inoculación. Los intervalos de tiempo reales en algunos casos fueron mayores que los especificados. La mayoría de las dosis se administraron en los siguientes intervalos: intervalos de ± 4 minutos para antes de la inoculación; de inmediatamente a 5 minutos después de la inoculación; intervalos de ± 5 minutos a las 6 horas y 24 horas después de la inoculación;

5 e intervalos de ± 30 minutos a las 12 horas y 18 horas después de la inoculación. Para los intervalos de dosificación previos e inmediatamente posteriores a la inoculación, los intervalos de tiempo se aumentaron ligeramente a partir de la inoculación, y las dosificaciones de los antibióticos se llevaron a cabo en habitaciones separadas por diferente personal para mantener las condiciones de esterilidad. Las desviaciones en los intervalos de tiempo de las dosificaciones no tuvieron ningún efecto aparente en el resultado del estudio.

Ayunas

Los animales de los Grupos A-E y G-I se mantuvieron en ayunas al menos una hora antes de la dosificación intracameral. Se registraron la hora de inicio del ayuno y la hora de la dosificación intracameral. Los animales del

15 Grupo F no estuvieron en ayunas antes de la dosificación. El protocolo especificaba que todos los animales se mantendrían en ayunas al menos dos horas antes de la dosificación intracameral. Esta desviación no tuvo ningún efecto en el resultado del estudio.

Anestesia

Antes de la dosificación intracameral, se pesaron los animales y se anestesiaron con una inyección intravenosa de un cóctel de quetamina/xilazina (77 mg/ml de quetamina, 23 mg/ml de xilazina) a dosis de 0,1 mg/kg.

Preparación del ojo

25 Se administró clorhidrato de proparacaína al 0,5% (1-2 gotas) en cada ojo derecho antes de la dosificación intracameral.

Procedimiento de dosificación intracameral

En el Día 1, cada animal recibió una inyección intracameral de 25 µl de inóculo de S. aureus en el ojo derecho. Las inyecciones intracamerales se aplicaron con una jeringa Hamilton con una aguja de calibre 30 de 1’27 cm. El protocolo especificaba que las inyecciones intracamerales se administrarían con una aguja de calibre 30 de 1,59 cm. También se especificaba que los datos recogidos incluirían los pesos de las jeringas de dosificación, pero las

35 jeringas no se pesaron durante las inyecciones. Estas desviaciones no tuvieron ningún efecto en el resultado del estudio. La inyección intracameral se hizo a través del limbo en la cámara anterior central.

Inmediatamente después de la inyección, se taponó la zona de la inyección con hisopos de algodón estériles o compresión conjuntiva. Se observó una pequeña cantidad de fuga tras 14 inyecciones de la siguiente manera: Grupo

A: n.º 2983 y 2969; Grupo B: n.º 2967 y 2953; Grupo D: n.º 3326, 3329, 3340 y 3334; Grupo E: n.º 3091; Grupo F: n.º 3078 y 3088; Grupo G: n.º 3524 y 3552; Grupo H: n.º 3537. Se registró la hora de cada inyección. Para mantener la esterilidad, la inoculación y la dosificación de los antibióticos se llevaron a cabo en habitaciones separadas por personal diferente.

45 Mortalidad/Morbilidad

Se observó la mortalidad/morbilidad de los animales dos veces al día.

Pesos corporales

Los animales se pesaron al azar y antes de la dosificación intracameral.

Observaciones oftálmicas

55 Se realizaron observaciones oftálmicas con una lámpara de hendidura (incluyendo observaciones de la conjuntiva, la córnea y el iris) y oftalmoscopia indirecta (observación del segmento posterior) en los dos ojos de cada animal el día 2, tras la administración de las dosis finales de agente antibiótico o solución salina. También se observaron los ojos de animales del Grupo D-I en cuanto a la reacción de la pupila, la turbidez del humor acuoso por la presencia de proteínas, la turbidez del humor acuoso por la presencia de células y la opacidad del cristalino. El protocolo no especificaba la observación de la reacción de la pupila, la turbidez del humor acuoso por la presencia de proteínas, la turbidez del humor acuoso por la presencia de células ni la opacidad del cristalino de los ojos. Esta desviación proporcionó más datos para la evaluación y no tuvo ningún efecto adverso en el resultado del estudio. Los signos oculares se puntuaron usando una escala de gravedad de 0 a 3 o de 0 a 4 para cada síntoma descrito (blefaritis, iritis, conjuntivitis, edema de córnea e infiltrados en la córnea). El protocolo especificaba que los signos oculares se

65 puntuarían con una escala de gravedad de 0 a 3 para cada síntoma, pero para algunos de los síntomas oculares, las observaciones se puntuaron con una escala de 0 a 4. Esta desviación no tuvo ningún efecto en el resultado del estudio. La puntuación total más alta posible por ojo fue de 27 (excluyendo las puntuaciones de la reacción de la pupila, la turbidez del humor acuoso por la presencia de proteínas, la turbidez del humor acuoso por la presencia de células y la opacidad del cristalino). El sistema de puntuación para los exámenes oftálmicos y la evaluación clínica de los segmentos anterior y posterior se muestra en la Tabla T2-2.

5 Eutanasia

Tras finalizar el examen oftálmico clínico de 24 horas de duración, los animales fueron sacrificados con una inyección intravenosa de solución de eutanasia comercial. La eutanasia se realizó según el procedimiento operativo interno establecido.

Necropsia

Tras la eutanasia, se recogieron asépticamente los humores acuoso y vítreo de cada ojo derecho para determinar el

15 número de bacterias viables de estos tejidos. Las muestras de humor acuoso y vítreo se recogieron con una aguja de 1’27 cm de calibre 30 y una aguja de 2,54 cm de calibre 21, respectivamente. Se registraron los volúmenes de las muestras recogidas. Se licuó cada muestra de humor vítreo haciéndola pasar tres veces por una aguja de calibre 25 (lo que se realizó en una campana de seguridad biológica). Se observó la presencia de sangre en una muestra de humor vítreo (Grupo E, n.º 3336).

Recuento de bacterias

Los recuentos bacterianos de las muestras de humor acuoso y vítreo se determinaron de la siguiente manera: para cada muestra, se hicieron diluciones de factor 10 (volumen inicial: volumen final = 1:10, 1:100, 1:1.000 y 1:10.000)

25 con tampón de fosfato estéril. Se sembró cada dilución en placas por duplicado (ml/placa) en TSA, y se incubaron las placas durante 46-48 horas a 30-35ºC. Se realizó el recuento de las colonias de cada placa, y se calculó la media de los recuentos de las placas duplicadas. Se usó la dilución con menos de 300 colonias bacterianas por placa para calcular el número de bacterias de cada muestra. El número de organismos viables de S. aureus (UFC) se expresó como un logaritmo en base 10. Se sometieron las placas de muestras con recuentos bacterianos poco comunes a la identificación de especies mediante un sistema de identificación microbiana automatizado de Vitek (BioMérieux).

En el recuento, se produjeron las siguientes desviaciones del protocolo: las relaciones de dilución de las muestras usadas para la siembra fueron de 1:10, 1:100, 1:1.000 y 1:10.000; el protocolo especificaba que las relaciones serían de 1:1, 1:10, 1:100 y 1:1.000. El TSA usado en la siembra fue suministrado por Remel Corp; el protocolo

35 especificaba que el TSA sería suministrado por Difco. Las placas de muestra se incubaron durante 46-48 horas a 30-35ºC; el protocolo especificaba que las placas de muestras se incubarían durante 48 horas a 34-38ºC. Las placas de muestras con recuentos bacterianos poco comunes se sometieron a la identificación de especies; el protocolo no indicaba la realización de una identificación microbiana. Estas desviaciones no tuvieron ningún efecto en el resultado del estudio.

Análisis estadístico

Se calcularon los datos estadísticos descriptivos (media y desviación estándar) para el total de las puntuaciones de gravedad oftálmica de cada grupo de tratamiento. Los datos restantes se evaluaron únicamente mediante un

45 examen.

Declaración del bienestar de los animales

El presente estudio se realizó para evaluar la eficacia de los artículos de ensayo en el tratamiento de la endoftalmitis bacteriana. Se estudiaron otras alternativas de realización del presente estudio; sin embargo, para evaluar adecuadamente la eficacia de los artículos de ensayo, se requería un sistema de ensayo de cuerpo entero. El presente estudio cumplió con todas las políticas internas de bienestar de los animales y fue aprobado por el Comité Institucional para el Uso y Cuidado de los Animales.

55 Resultados

Mortalidad

No se produjo la mortalidad no programada de ningún animal del estudio.

Observaciones oftálmicas

Las puntuaciones medias de gravedad oftálmica total se presentan en la Tabla T2-3. Las diferencias generales entre los grupos fueron las siguientes: los ojos tratados con BOL-303224-A (Grupo B) mostraron menores puntuaciones 65 totales que los ojos tratados con Zymar® (Grupo C), Quixin® (Grupos D y H), Vigamox® (Grupos E e I), solución salina (Grupos A y G) o sin tratar (Grupo F). Las diferencias en las puntuaciones totales entre los grupos de Zymai®,

Quixin®, Vigamox® y solución salina/sin tratar no fueron tan claras, principalmente debido a la variabilidad producida dentro de estos grupos. Los ojos en los que se inocularon 7,5 x 105 UFC parecieron tener puntuaciones totales más altas que los ojos que recibieron 4,1 x 105 UFC y a los que se administraron tratamientos similares (Quixin®, Vigamox® o solución salina/sin tratar).

5 Las observaciones oftálmicas de cada animal se presentan en la Tabla T2-4. No se muestran las observaciones de los ojos izquierdos sin tratar, porque todos los ojos izquierdos parecían normales. Se observaron signos de inflamación en todos los ojos derechos; las anomalías observadas comúnmente entre todos los grupos incluyeron congestión e inflamación de la conjuntiva; lesiones de la córnea (sin paño); turbidez del humor acuoso por la

10 presencia de proteínas y por la presencia de células; participación del iris; y presencia de fibrina en la cámara anterior. La secreción conjuntival se observó con frecuencia en los ojos derechos de todos los grupos, a excepción del grupo B (BOL-303224-A), en el que no se observó secreción conjuntival. A menudo, se observó una escasa reacción de la pupila en los ojos derechos de todos los grupos, a excepción de los grupos G-I (grupos de inoculación de 4,1 x 105 UFC), en los que la reacción de la pupila fue casi normal. El segmento posterior del ojo no estaba visible

15 en 17 de los 18 ojos en los que se inocularon 2,5 x 105 UFC (Grupos A-C), ni en 14 de los 15 ojos en los que se inocularon 7,5 x 105 UFC (Grupos D-F), pero fue visible en 14 de los 18 ojos en los que se inocularon 4,1 x 105 UFC (Grupos G-I).

Recuento de bacterias

20 Los recuentos bacterianos de las muestras de humor acuoso y vítreo se muestran en la Tabla T2-5. Se encontraron bacterias viables en las muestras de humor acuoso de la siguiente manera: en los 6 ojos tratados con solución salina, se inocularon 2,5 x 105 UFC (Grupo A); en 2 de los 6 ojos tratados con solución salina, se inocularon 4,1 x 105 UFC (Grupo G); 2 de los 3 ojos no tratados (grupo F); y en 2 de los 6 ojos tratados con Quixin®, se inocularon

25 4,1 x 105 UFC (Grupo H). De las muestras de los ojos tratados con solución salina, una (Grupo G, n.º 3551) tuvo un recuento bacteriano superior a 3 x 106 UFC; éste fue mayor que el recuento del inóculo. Las colonias de las placas cultivadas de esta muestra se identificaron como dos especies contaminantes (Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes). Excluyendo la muestra contaminada, los recuentos bacterianos más altos, 195 y 135 (log10 (UFC) = 2,29 y 2,13, respectivamente), se encontraron en las muestras de humor acuoso de dos ojos no tratados (grupo F). A

30 efectos comparativos, el recuento de bacterias (log10 (UFC)) inyectado en estos ojos fue de 5,88.

No se encontraron bacterias viables en las muestras de humor acuoso del resto de los ojos tratados con solución salina, no tratados o tratados con Quixin®, ni en ninguno de los ojos tratados con BOL-303224-A al 0,6% (Grupo B), Zymar® (Grupo C) o Vigamox® (Grupos E y I). No se encontraron bacterias viables en ninguna de las muestras de

35 humor vítreo.

Conclusiones

El objetivo del presente estudio consistía en evaluar la eficacia de cuatro formulaciones de antibióticos en el

40 tratamiento de la endoftalmitis bacteriana en conejos blancos de Nueva Zelanda. En conclusión, la inyección intracameral de 2,5 x 105 a 7,5 x 105 UFC de S. aureus en los ojos de los conejos provocó endoftalmitis en las 24 horas de la inoculación como se indica por las observaciones oftálmicas. Las observaciones oftálmicas sugirieron que BOL-303224-A (compuesto que tiene la Fórmula IV) controló la inflamación ocular asociada con la endoftalmitis, especialmente, la secreción conjuntival, más efectivamente que los otros productos antibióticos comerciales o la

45 solución salina/la ausencia de tratamiento. Las muestras de humor vítreo recogidas a las 24 horas de la inoculación, bien de los ojos que recibieron un tratamiento de antibiótico o de los que no lo recibieron, no contenían bacterias viables. La mayoría de las muestras de humor acuoso recogidas a las 24 horas de la inoculación no contenían bacterias viables, incluyendo las muestras de los cinco ojos que no recibieron ningún tratamiento de antibiótico. Para los nueve ojos que no recibieron tratamiento de antibiótico, las muestras de humor acuoso contenían S. aureus

50 viable, pero en poblaciones sustancialmente reducidas. La cierta reducción en los recuentos bacterianos se podría atribuir al propio sistema inmune de los conejos y a la especie bacteriana seleccionada, S. aureus, que no se pudo desarrollar en un entorno que es más anaeróbico en la naturaleza.

Tabla T2-1 55 Grupos de tratamiento

Grupo N.º Tratamiento tópico Volumen de la Dosificación de las Volumen de la dosis Necropsia con antibiótico (ojo dosis bacterias de S. aureus ATCC

derecho) (ojo derecho) 33591 A 6 Solución salina 50 µl Intracameral 25 µl Día 2 B 6 BOL-303224-50 µl Intracameral 25 µl Día 2

A al 0,6% C 6 Zymar® 50 µl Intracameral 25 µl Día 2 (Gatifloxacina al 0,3%)

Grupo

N.º Tratamiento tópico Volumen de la Dosificación de las Volumen de la dosis Necropsia

con antibiótico (ojo

dosis bacterias de S. aureus ATCC

derecho)

(ojo derecho) 33591

D

6 Quixin® 50 µl Intracameral 25 µl Día 2

(Levofloxacina al

0,5%)

E

6 Vigamox® 50 µl Intracameral 25 µl Día 2

(Moxifloxacina al

0,5%)

F

3 Sin tratar NA Intracameral 25 µl Día 2

G

6 Solución salina 50 µl Intracameral 25 µl Día 2

H

6 Quixin® 50 µl Intracameral 25 µl Día 2

(Levofloxacina al

0,5%)

I

6 Vigamox® 50 µl Intracameral 25 µl Día 2

(Moxifloxacina al

0,5%)

Tabla T2-2

Sistema clínico de puntuación oftálmica

SEGMENTO ANTERIOR

Congestión de la conjuntiva

0 = Normal. Puede aparecer un color blanquecino a rosa rojizo sin inyección perilímbica

(excepto en las posiciones de las 12:00 y las 6:00), observándose fácilmente los

vasos de la conjuntiva palpebral y bulbar.

1 = Un color rojizo principalmente limitado a la conjuntiva palpebral con un poco de inyección perilímbica, pero principalmente limitado a la parte inferior y superior del ojo desde la posición de las 4:00 a la de las 7:00 y de las 11:00 a la 1:00.

2 = Color rojo brillante de la conjuntiva palpebral acompañado de inyección perilímbica que cubre al menos el 75% de la circunferencia de la región perilímbica.

3 = Color oscuro, rojo carnoso con congestión tanto de la conjuntiva bulbar como de la conjuntiva palpebral junto con una marcada inyección perilímbica y la presencia de petequias en la conjuntiva. Las petequias predominan generalmente a lo largo de la membrana nictitante y la conjuntiva palpebral superior.

Inflamación de la conjuntiva

0= Normal o ninguna inflamación del tejido de la conjuntiva.

1 = Inflamación por encima de lo normal sin eversión de los párpados (fácilmente distinguible al observar que los párpados superior e inferior están dispuestos como en el ojo normal); la inflamación generalmente comienza en el fondo de saco inferior cerca del canto interno.

2 = Inflamación con desalineación de la aproximación normal de los párpados inferior y superior; principalmente limitada al párpado superior, de modo que, en las etapas iniciales, la separación de los párpados comienza por la eversión parcial del párpado superior. En esta etapa, la inflamación se limita generalmente al párpado superior con un poco de inflamación en el fondo de saco inferior.

3 = Inflamación definida con eversión parcial esencialmente equivalente de los párpados superior e inferior. Esto se puede observar fácilmente mirando al animal de frente y fijándose en la posición de los párpados: si los márgenes oculares no coinciden, es que hay eversión.

4 = Pronunciada eversión del párpado superior con eversión menos pronunciada del párpado inferior. Es difícil retraer los párpados y observar la región perilímbica.

Secreción de la conjuntiva

La secreción se define como un precipitado gris blanquecino.

0 = Normal, sin secreción.

1 = Secreción por encima de lo normal y presente en la parte interna del ojo, pero no en los párpados ni en las pestañas.

2 = La secreción es abundante, fácilmente observable, y se recoge en los párpados y en las pestañas.

3 = La secreción ha estado fluyendo por los párpados hasta humedecer las pestañas

sustancialmente.

Participación del iris

0 = Iris normal sin hiperemia de los vasos sanguíneos.

1 = Inyección mínima de los vasos secundarios, pero no de los vasos terciarios. Prácticamente uniforme, pero puede ser de mayor intensidad en la posición de las

12:00 a la 1:00 o en la posición de las 6:00. Si se limita a esa zona, los vasos terciarios deben estar sustancialmente hiperémicos.

2 = Inyección moderada de los vasos secundarios y terciarios con una ligera inflamación del estroma del iris (la superficie del iris aparece ligeramente rugosa; generalmente, con mayor predominancia cerca de las posiciones de las 3:00 y las 9:00).

3 = Inyección marcada de los vasos secundarios y terciarios con una inflamación notable del estroma del iris. El iris parece rugoso; puede estar acompañada de hemorragia (hifema) en la cámara anterior.

Córnea

0 = Córnea normal.

1 = Cierta pérdida de transparencia. Sólo participan el epitelio y/o la mitad anterior del estroma. Las estructuras subyacentes son claramente visibles, aunque se puede evidenciar fácilmente algo de turbidez.

2 = Pérdida moderada de transparencia. La turbidez se extiende hasta el endotelio. Con iluminación difusa, las estructuras subyacentes son claramente visibles, aunque se pueden perder algunos detalles.

3 = Implicación de todo el espesor del estroma. Con iluminación difusa, las estructuras subyacentes apenas son visibles (todavía se pueden observar turbidez del humor acuoso, iris, reacción de la pupila, cristalino)

4 = Implicación de todo el espesor del estroma. Con iluminación difusa, no se pueden ver las estructuras subyacentes. Participación de la superficie de la córnea

0 = Normal.

1 = Superficie del 1-25% de turbidez del estroma.

2 = 26-50%

3 = 51-75%

4 = 76-100%

Paño (vascularización de la córnea)

0 = Sin paño.

1 = Hay vascularización presente, pero los vasos no han invadido toda la circunferencia de la córnea.

2 = Los vasos han invadido 2 mm o más de toda la superficie de la córnea.

SEGMENTO POSTERIOR

0 = Ojo normal sin opacidad del vítreo.

1 = La opacidad del vítreo permite la observación del nervio óptico y de los vasos de la retina.

2 = La opacidad del vítreo todavía permite la observación de los vasos principales y del nervio óptico sin dificultad.

3 = La opacidad del vítreo sólo permite la observación de los límites del nervio óptico, estando sus límites borrosos.

4 = La opacidad del vítreo evita la observación del nervio óptico.

OTRAS VARIABLES: (Puntuaciones excluidas de la puntuación de la gravedad total)

Reacción de la pupila

0 = Reacción normal de la pupila.

1 = Reacción lenta o incompleta de la pupila.

2 = Reacción nula de la pupila.

3 = Reacción nula de la pupila debido a un bloqueo farmacológico.

Turbidez del humor acuoso por presencia de proteínas

0 = Nula

1 = 1+

2 = 2+

3 = 3+

4 = 4+ (fibrina)

Turbidez del humor acuoso por presencia de células 0= Nula 1 = 1+ 2= 2+ 3= 3+ 4= 4+ Cristalino (observación del cristalino en busca de cataratas) 0= Cristalino transparente. 1 = Anterior (cortical/capsular).

2 = Nuclear. 3 = Posterior (cortical/capsular) 4 = Ecuatorial.

Tabla T2-3 Puntuaciones medias de la gravedad ocular total Puntuación total de la gravedad

Grupo Tratamiento tópico con antibiótico (ojo Media Desv. N derecho) estándar

A Solución salina 10,0 1,4 6 B BOL-303224-A al 0,6% 6,7 1,4 6 C Zymar® (Gatifloxacina al 0,3%) 9,0 1,1 6

D Quixin® (Levofloxacina al 0,5%) 10,0 3,7 6 E Vigamox® (Moxifloxacina al 0,5%) 10,8 4,0 6 F Sin tratar 13,0 1,7 3

G Solución salina 9,7 3,1 6 H Quixin® (Levofloxacina al 0,5%) 8,5 1,4 6 I Vigamox® (Moxifloxacina al 0,5%) 8,3 1,8 6

Tabla T2-4 Observaciones oftálmicas (24 horas después de la inoculación) Tratamiento tópico: Solución salina

Dosis inoculada (S. aureus): 2,5 x 105 UFC

Puntuaciones de las observaciones (ojos derechos)

Grupo AA AAAA Animal n.º 2971 2983 2968 2954 2969 2982

Secreción de la conjuntiva 3 1 2 2 0 1

Congestión de la conjuntiva 3 3 3 3 3 3

Inflamación de la conjuntiva 2 1 1 2 1 2

Córnea 11 1 11 1

Participación de la superficie de la 1 1 1 1 1 1 córnea

Paño (vascularización de la córnea) 0 0 0 0 0 0

Participación del iris 2 2 2 2 2 2

Segmento posterior NV 0 NV NV NV NV

Puntuación total de la gravedad 12 9 10 11 8 10

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; NV = No visible. Nota: Véase la Tabla T2-2 para consultar la leyenda de la puntuación de las observaciones. No se registraron las puntuaciones de la reacción de la pupila, la turbidez del humor acuoso por presencia de proteínas, la turbidez del humor acuoso por presencia de células y el cristalino.

Tabla T2-4 (Continuación) Observaciones oftálmicas (24 horas después de la inoculación) Tratamiento tópico: BOL-3Q3224-A AL 0,6%

Dosis inoculada (S. aureus): 2,5 x 105 UFC

Puntuaciones de las observaciones (ojos derechos)

Grupo BB B BBB Animal n.º 2962 2952 2967 2978 2979 2953

Secreción de la conjuntiva 0 0 0 0 0 0

Congestión de la conjuntiva 3 3 3 3 3 3

Inflamación de la conjuntiva 1 2 1 1 1 2

Córnea 01 1 10 0

Participación de la superficie de la 0 1 1 1 0 0 córnea

Paño (vascularización de la córnea) 0 0 0 0 0 0

Participación del iris 1 2 1 1 2 1

Segmento posterior NV NV NV NV NV NV

Puntuación total de la gravedad 5 9 7 7 6 6

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; NV = No visible. Nota: Véase la Tabla T2-2 para consultar la leyenda de la puntuación de las observaciones. No se registraron las puntuaciones de la reacción de la pupila, la turbidez del humor acuoso por presencia de proteínas, la turbidez del humor acuoso por presencia de células y el cristalino.

Tabla T2-4 (Continuación) Observaciones oftálmicas (24 horas después de la inoculación) Tratamiento tópico: Zymar® (Gatifloxacina al 0,3%)

Dosis inoculada (S. aureus): 2,5 x 105 UFC

Puntuaciones de las observaciones (ojos derechos)

Grupo Animal n.º C C C C C C 2997 2950 2976 2998 2970 2980

Secreción de la conjuntiva 1 1 0 1 1 1

Congestión de la conjuntiva 3 3 3 3 3 3

Inflamación de la conjuntiva 2 2 1 1 1 1

Córnea 10 1 1 11

Participación de la superficie de la 2 0 2 1 1 1 córnea

Paño (vascularización de la córnea) 0 0 0 0 0

Participación del iris 2 2 2 1 2

Segmento posterior NV NV NV NV NV NV

Puntuación total de la gravedad 11 8 9 8 9

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; NV = No visible. Nota: Véase la Tabla T2-2 para consultar la leyenda de la puntuación de las observaciones. No se registraron las puntuaciones de la reacción de la pupila, la turbidez del humor acuoso por presencia de proteínas, la turbidez del humor acuoso por presencia de células y el cristalino.

Tabla T2-4 (Continuación) Observaciones oftálmicas (24 horas después de la inoculación) Tratamiento tópico: Quixin® (Levofloxacina al 0,5%) Dosis inoculada (S. aureus): 7,5 x 105 UFC

Puntuaciones de las observaciones (ojos derechos)

Grupo DDD D DD Animal n.º 3326 3330 3333 3329 3340 3334

Secreción de la conjuntiva 2 2 0 0 0 2

Congestión de la conjuntiva 3 3 3 3 3 3

Inflamación de la conjuntiva 1 2 1 1 0 2 1(1)

Córnea 1 1 002 Participación de la superficie de la 2 41 2 0 0 3 córnea

Paño (vascularización de la córnea) 0 0 0 0 0 0

Reacción de la pupila* 1 1 2 2 1 1

Turbidez del humor acuoso por 1 2 2 1 1 2 presencia de proteínas*

2(2)

3(2)

2(2) 1(2) 2(2) 3(2)

Turbidez del humor acuoso por presencia de células*

Participación del iris 2 2 2 3 2 2

Cristalino* 0 0 0 0 0 0

Segmento posterior NV NV NV NV 0 NV

Puntuación total de la gravedad 11 14 9 7 5 14

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; * = Puntuación excluida de la puntuación total de la gravedad. NV = No Visible. Nota: Véase la Tabla T2-2 para consultar la leyenda de la puntuación de las observaciones.

(1)

Superficie focal del queratocono.

(2)

Fibrina en la cámara anterior.

Tabla 4 (Continuación) Observaciones oftálmicas (24 horas después de la inoculación) Tratamiento tópico: Vigamox® (Moxifloxacina al 0,5%) Dosis inoculada (S. aureus): 7,5 x 105 UFC

Puntuaciones de las observaciones (ojos derechos)

Grupo EEEE EE Animal n.º 3338 3091 3336 3327 3335 3325

Secreción de la conjuntiva 0 2 0 2 2 2

Congestión de la conjuntiva 3 3 3 3 3 3

Inflamación de la conjuntiva 1 2 0 3 3 3

Córnea 120 1 1 1

Participación de la superficie de la 1 4 0 3 2 1 córnea

Paño (vascularización de la córnea) 0 0 0 0 0 0

Reacción de la pupila* 2 2 1 1 1 2

Turbidez del humor acuoso por 1 1 1 2 1 3 presencia de proteínas*

1(1)

2(1)

2(1) 4(2)

Turbidez del humor acuoso por 2 3 presencia de células*

Participación del iris 2 3 2 2 1 NV

Cristalino* 0 0 0 0 0 NV

Segmento posterior NV NV NV NV NV NV

Puntuación total de la gravedad 8 16 5 14 12 10

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; * = Puntuación excluida de la puntuación total de la gravedad. NV = No Visible. Nota: Véase la Tabla T2-2 para consultar la leyenda de la puntuación de las observaciones.

(1)

Fibrina en la cámara anterior.

(2)

Fibrina generalizada difusa en la cámara anterior.

Tabla T2-4 (Continuación) Observaciones oftálmicas (24 horas después de la inoculación)

Tratamiento tópico: Sin tratar Dosis inoculada (S. aureus): 7,5 x 105 UFC

Puntuaciones de las observaciones (ojos derechos)

Grupo F9 F9 F9

Animal n.º 3078 3088 3089

Secreción de la conjuntiva 2 1 2

Congestión de la conjuntiva 3 3 3

Inflamación de la conjuntiva 3 2 3

Córnea 21 2

Participación de la superficie de la 2 2 2 córnea

Paño (vascularización de la córnea) 0 0 0

Reacción de la pupila* 1 2 2

Turbidez del humor acuoso por 2 1 2 presencia de proteínas*

4(1)

2(1) 3(1)

Turbidez del humor acuoso por presencia de células*

Participación del iris 2 2 2

Cristalino* 0 0 0

Segmento posterior NV NV NV

Puntuación total de la gravedad 14 11 14

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; * = Puntuación excluida de la puntuación total de la gravedad. NV = No Visible. Nota: Véase la Tabla 2 para consultar la leyenda de la puntuación de las observaciones.

(1) Fibrina en la cámara anterior

Tabla T2-4 (Continuación) Observaciones oftálmicas (24 horas después de la inoculación)

Tratamiento tópico: Solución salina Dosis inoculada (S. aureus): 4,1 x 105 UFC

Puntuaciones de las observaciones (ojos derechos)

Grupo GGGGGG

Animal n.º 3524 3548 3535 3552 3550 3551

Secreción de la conjuntiva 0 2 1 2 0 0

Congestión de la conjuntiva

3 3 3 3 3 3

Inflamación de la conjuntiva

2 3 1 4 1 1

Córnea

1 1 1 1 0 1

Participación de la superficie de la

1 1 2 2 0 1

córnea

Paño (vascularización de la córnea)

0 0 0 0 0 0

Reacción de la pupila*

0 1 0 0 0 0

Turbidez

del humor acuoso por 1 2 2 1 1 1

presencia de proteínas*

Turbidez

del humor acuoso por 2(1) 2(2) 3(2) 1(2) 0(3) 2(2)

presencia de células*

Participación del iris

2 2 2 2 1 2

Cristalino*

0 0 0 0 0 0

Segmento posterior

NV 0 0 NV 0 0

Puntuación total de la gravedad

9 12 10 14 5 8

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; * = Puntuación excluida de la puntuación total de la gravedad. NV = No Visible. Nota: Véase la Tabla 12-2 para consultar la leyenda de la puntuación de las observaciones.

(1)

Cantidad moderada de fibrina e hipopión en la cámara anterior.

(2)

Cantidad moderada de fibrina en la cámara anterior.

(3)

Pequeña cantidad de fibrina en la cámara anterior.

Tabla T2-4 (Continuación) Observaciones oftálmicas (24 horas después de la inoculación) Tratamiento tópico: Quixin® (Levofloxacina al 0,5%) Dosis inoculada (S. aureus): 4,1 x 105 UFC

Puntuaciones de las observaciones (ojos derechos)

Grupo Animal n.º H H H H H H 3540 3537 3546 3523 3533 3547

Secreción de la conjuntiva 0 1 0 2 0 0

Congestión de la conjuntiva 3 3 3 3 3 3

Inflamación de la conjuntiva 2 1 2 1 2 2

Córnea 1 01 1 11

Participación de la superficie de la 2 0 1 1 1 1 córnea

Paño (vascularización de la córnea) 0 0 0 0 0 0

Reacción de la pupila* 0 0 2 1 1 0

Turbidez del humor acuoso por 1 1 1 1 1 1 presencia de proteínas*

1(1) 1(1) 2(2) 3(2)

Turbidez del humor acuoso por 0 1 presencia de células*

Participación del iris 1 1 2 1 2

Cristalino* 0 0 0 0 0 0

Segmento posterior NV 0 NV 0 0 0

Puntuación total de la gravedad 9 6 9 10 8 9

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; * = Puntuación excluida de la puntuación total de la gravedad. NV = No Visible. Nota: Véase la Tabla T2-2 para consultar la leyenda de la puntuación de las observaciones.

(1)

Pequeña cantidad de fibrina en la cámara anterior.

(2)

Cantidad moderada de fibrina en la cámara anterior.

Tabla T2-4 (Continuación) Observaciones oftálmicas (24 horas después de la inoculación) Tratamiento tópico: Vigamox® (Moxifloxacina al 0,5%) Dosis inoculada (S. aureus): 4.1 x 105 UFC

Puntuaciones de las observaciones (ojos derechos)

Grupo IIIII I Animal n.º 3553 3538 3539 3536 3545 3542

Secreción de la conjuntiva 0 0 0 2 0 0

Congestión de la conjuntiva 3 3 3 3 3 3

Inflamación de la conjuntiva I 2 2 2 2 1

Córnea 010111

Participación de la superficie de la 0 1 0 1 1 1 córnea

Paño (vascularización de la córnea) 0 0 0 0 0 0

Reacción de la pupila* 0 0 0 1 0 0

Turbidez del humor acuoso por 1 1 1 1 1 I presencia de proteínas*

2(1) 1(1)

Turbidez del humor acuoso por 1 2 3 3 presencia de células*

Participación del iris 2 2 2 2 2 2

Cristalino* 0 0 0 0 0 0

Segmento posterior 0 0 0 0 0 0

Puntuación total de la gravedad 6 9 7 11 9 8

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; * = Puntuación excluida de la puntuación total de la gravedad. Nota: Véase la Tabla T2-2 para consultar la leyenda de la puntuación de las observaciones.

(1) Cantidad moderada de fibrina en la cámara anterior.

Tabla T2-5 Recuentos bacterianos de las muestras de humor acuoso y vítreo

Inóculo (25 μl)

Humor acuoso Humor vítreo

Grupo

Tratamiento tópico Conejo n.º UFC(1) Log10 (UFC) UFC(1) Log10 (UFC) UFC(1) Log10 (UFC)

G

Solución salina 3524 3548 3535 3552 3550 3551 4,1 x 105 4,1 x 105 4,1 x 105 4,1 x 105 4,1 x 105 4,1 x 105 5,61 5,61 5,61 5,61 5,61 5,61 0 0 0 20 0 NA(2) NA NA NA 1,30 NA NA(2) 0 0 0 0 0 0 NA NA NA NA NA NA

(continuación) Recuentos bacterianos de las muestras de humor acuoso y vítreo

Recuentos de bacterias viables (S. aureus) por muestra

Inóculo (25 µl)

Humor acuoso Humor vítreo

Grupo

Tratamiento tópico Conejo n.º UFC(1) Log10 (UFC) UFC(1) Log10 (UFC) UFC(1) Log10 (UFC)

H

Quixin® 3540 4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

(Levofloxacina

al 0,5%)

3537 4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

3546

4,1 x 105 5,61 5 0,70 0 NA

3523

4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

3533

4,1 x 105 5,61 5 0,70 0 NA

3547

4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

I

Vigamox® 3553 4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

(Moxifloxacina

al 0,5%)

3538 4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

3539

4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

3536

4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

3545

4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

3542

4,1 x 105 5,61 0 NA 0 NA

S. aureus = Staphylococcus aureus ATCC 33591; UFC = Unidades Formadoras de Colonias. NA = No aplicable

(1)

Recuento medio de las placas por duplicado, ajustado para las diluciones en serie.

(2)

Muestra contaminada con especies de enterobacterias.

Es posible formular un compuesto de fluoroquinolona descrito en la presente memoria en una composición

5 farmacéutica para una administración tópica, oral, subcutánea o sistémica con el fin de modular la endoftalmitis, o tratar o controlar una infección causante de dicha endoftalmitis. Dicha composición comprende un compuesto de fluoroquinolona que tiene la Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII o VIII, o una sal del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable para su administración, como cualquier experto en la técnica de la formulación farmacéutica puede determinar. Por ejemplo, se pueden usar diversos vehículos farmacéuticamente aceptables

10 conocidos en la técnica para formular una solución, emulsión, suspensión, dispersión, pomada, gel, cápsula o comprimido. Un compuesto de fluoroquinolona que tiene la Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII o VIII, o una sal del mismo, es particularmente adecuado para tratar o controlar la endoftalmitis causada por microorganismos o la endoftalmitis no infecciosa. Dicha fluoroquinolona o sal de la misma se formula en una solución, pomada, emulsión, suspensión, dispersión o gel.

15 En una realización, una composición tópica de la presente invención comprende una solución o suspensión acuosa. Comúnmente, se usa agua purificada o desionizada. El pH de la composición se ajusta mediante la adición de cualquier ácido, base o tampón ajustador del pH fisiológicamente aceptable en un intervalo de 3 a 8,5 (o alternativamente, de 4 a 7,5, o de 4 a 6,5, o de 5 a 6,5). Los ejemplos de ácidos incluyen ácido acético, bórico,

20 cítrico, láctico, fosfórico, clorhídrico y similares, y los ejemplos de bases incluyen hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, trometamina, THAM (trishidroximetilaminometano) y similares. Las sales y los tampones incluyen citrato/dextrosa, bicarbonato sódico, cloruro de amonio, y mezclas de los ácidos y de las bases anteriormente mencionados. Los tampones de pH se introducen en la composición para mantener un pH estable y para que el usuario pueda tolerar mejor el producto. En algunas realizaciones, el pH está en el intervalo de aproximadamente 4

25 a aproximadamente 7,5. Hay tampones biológicos para diversos pH disponibles, por ejemplo, en Sigma-Aldrich. Una composición de la presente invención pueden tener una viscosidad en el intervalo de 5 a 100.000 mPa.s (o alternativamente, de 10 a 50.000, o de 10 a 20.000, o de 10 a 10.000, o de 10 a 1.000, o de 100 a 10.000, o de 100 a 20.000, o de 100 a 50.000, o de 500 a 10.000, o de 500 a 20.000 mPa.s).

30 En otra realización, una composición tópica de la presente invención comprende una pomada, una emulsión o una crema (tal como una emulsión de aceite en agua) o un gel.

Las pomadas, en general, se preparan usando bien (1) una base oleaginosa, es decir, una base que consiste en aceites fijos o hidrocarburos tal como vaselina o aceite mineral; o (2) una base absorbente, es decir, una base que

35 consiste en una o varias sustancias anhidras que pueden absorber agua, por ejemplo, lanolina anhidra. Habitualmente, tras la formación de la base, bien oleaginosa o absorbente, se añade el ingrediente activo (compuesto) hasta una cantidad que proporcione la concentración deseada.

Las cremas son emulsiones de aceite/agua. Consisten en una fase de aceite (fase interna), que comúnmente comprende aceites fijos, hidrocarburos y similares, tales como ceras, vaselina, aceite mineral y similares; y una fase acuosa (fase continua), que comprende agua y cualquier sustancia hidrosoluble tal como sales añadidas. Las dos fases se estabilizan mediante el uso de un agente emulsionante, por ejemplo, un agente tensioactivo tal como

5 laurilsulfato sódico, coloides hidrófilos tales como arcillas coloidales de goma arábiga, veegum y similares. Tras la formación de la emulsión, habitualmente, se añade el ingrediente activo (compuesto) en una cantidad que permita alcanzar la concentración deseada.

Los geles comprenden una base seleccionada entre una base oleaginosa, agua o una base de emulsiónsuspensión. A la base, se añade un agente gelificante que forma una matriz en la base, aumentando su viscosidad. Los ejemplos de agentes gelificantes son hidroxipropilcelulosa, polímeros de ácido acrílico y similares. Habitualmente, el ingrediente activo (compuesto) se agrega a la formulación a la concentración deseada en un momento previo a la adición del agente gelificante.

15 La cantidad de un compuesto de fluoroquinolona descrito en la presente memoria que se incorpora a una composición de la presente invención no es de importancia fundamental; la concentración debería estar en un intervalo suficiente para permitir la fácil aplicación de la formulación en la zona de tejido afectado en una cantidad que administre la cantidad deseada de compuesto en la zona de tratamiento deseada y que proporcione el efecto terapéutico deseado. En algunas realizaciones de la presente invención, las composiciones comprenden una fluoroquinolona a una concentración en un intervalo del 0,0001% al 10% en peso (o alternativamente, del 0,001% al 5%, o del 0,01% al 5%, o del 0,01% al 2%, o del 0,01% al 1%, o del 0,01% al 0,7%, o del 0,01% al 0,5% en peso).

Por otra parte, una composición tópica de la presente invención puede contener uno o más de los siguientes agentes: conservantes, tensioactivos, adyuvantes, incluyendo medicamentos adicionales, antioxidantes, ajustadores

25 de la tonicidad, modificadores de la viscosidad y similares.

Los conservantes se pueden usar para inhibir la contaminación microbiana del producto cuando se dispensa en envases monodosis o multidosis, y pueden incluir: derivados de amonio cuaternario (cloruro de benzalconio, cloruro de bencilamonio, bromuro de cetilmetilamonio, cloruro de cetilpiridinio), cloruro de bencetonio, compuestos organomercuriales (timerosal, acetato de fenilmercurio, nitrato de fenilmercurio), metil-y propil-p-hidroxibenzoatos, alcohol betafeniletílico, alcohol bencílico, alcohol feniletílico, fenoxietanol y sus mezclas. Estos compuestos se usan a concentraciones eficaces, comúnmente, del 0,005% al 5% (en peso), dependiendo del conservante o de los conservantes seleccionados. La cantidad del conservante usado debe ser suficiente para que la solución sea físicamente estable, es decir, que no se forme un precipitado y sea eficaz contra las bacterias.

35 La solubilidad de los componentes, incluyendo una fluoroquinolona que tiene la Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII o VIII, de las presentes composiciones se puede mejorar mediante un agente tensioactivo y otro codisolvente apropiado en la composición o agentes potenciadores de la solubilidad como ciclodextrinas tales como hidroxipropilo, hidroxietilo, glucosilo, maltosilo y derivados de maltotriosilo de α-, β-y γ-ciclodextrina. En una realización, la composición comprende del 0,1% al 20% de hidroxipropil-β-ciclodextrina; alternativamente, del 1% al 15% (o del 2% al 10%) de hidroxipropil-β-ciclodextrina. Los co-disolventes incluyen polisorbatos (por ejemplo, polisorbato 20, 60 y 80), tensioactivos de polioxietileno/polioxipropileno (por ejemplo, Pluronic® F68, F84, F127 y P103), ciclodextrina, triglicéridos de ácidos grasos, glicerol, polietilenglicol, otros agentes de solubilidad tales como octoxinol 40 y tiloxapol, u otros agentes conocidos por los expertos en la técnica y mezclas de los mismos. La cantidad de

45 potenciador de la solubilidad usada dependerá de la cantidad de fluoroquinolona de la composición, usándose más potenciador de la solubilidad a mayores cantidades de fluoroquinolonas. Comúnmente, los potenciadores de la solubilidad se emplean a un nivel del 0,01% al 20% (alternativamente, del 0,1% al 5%, o del 0,1% al 2%) en peso en función del ingrediente.

El uso de agentes potenciadores de la viscosidad para proporcionar las composiciones de la invención con viscosidades superiores a la viscosidad de soluciones acuosas simples puede ser deseable para aumentar la absorción de los compuestos activos por parte de los tejidos diana o para aumentar el tiempo de retención en los mismos. Dichos agentes potenciadores de la viscosidad incluyen, por ejemplo, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa,

55 hidroxipropilcelulosa u otros agentes conocidos por los expertos en la técnica. Dichos agentes se emplean comúnmente a un nivel del 0,01% al 10% (alternativamente, del 0,1% al 5%, o del 0,1% al 2%) en peso

Los tensioactivos adecuados incluyen polivinilpirrolidona, alcohol polivinílico, polietilenglicol, etilenglicol y propilenglicol. Otros tensioactivos son polisorbatos (tales como polisorbato 80 (monooleato de polioxietilensorbitán), polisorbato 60 (monoestearato de polioxietilensorbitán), polisorbato 20 (monolaurato de polioxietilensorbitán), comúnmente conocidos por sus nombres comerciales Tween® 80, Tween® 60, Tween® 20), poloxámeros (polímeros de bloques sintéticos de óxido de etileno y óxido de propileno, tales como los comúnmente conocidos por sus nombres comerciales Pluronic®; p. ej., Pluronic® F127 o Pluronic® F108)), o poloxaminas (polímeros de bloques sintéticos de óxido de etileno y óxido de propileno unidos a etilendiamina, tales como los comúnmente 65 conocidos por sus nombres comerciales Tetronic®; por ejemplo, Tetronic® 1508 o Tetronic® 908, etc., otros tensioactivos no iónicos tales como Brij®, Myrj®, y alcoholes grasos de cadena larga (es decir, alcohol oleílico,

alcohol estearílico, alcohol miristílico, alcohol docosohexanoílico, etc.) con cadenas de carbono que tienen aproximadamente 12 o más átomos de carbono (por ejemplo, tal como de aproximadamente 12 a aproximadamente 24 átomos de carbono). El tensioactivo ayuda a una formulación tópica a difundirse por la superficie de conductos estrechos.

5 En un aspecto, puede ser deseable incluir en una composición de la presente invención al menos otro agente antiinflamatorio. Los agentes antiinflamatorios preferidos incluyen los conocidos fármacos antiinflamatorios no esteroideos (“AINE”).

10 Los ejemplos no restrictivos de los AINE son: derivados de ácido aminoarilcarboxílico (por ejemplo, ácido enfenámico, etofenamato, ácido flufenámico, isonixina, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, ácido niflúmico, talniflumato, terofenamato, ácido tolfenámico), derivados de ácido arilacético (por ejemplo, aceclofenac, acemetacina, alclofenac, amfenac, amtolmetin-guacilo, bromfenac, bufexamac, cinmetacina, clopirac, diclofenac sódico, etodolac, felbinac, ácido fenclócico, fentiazac, glucametacina, ibufenac, indometacina, isofezolac, isoxepac,

15 lonazolac, ácido metiacínico, mofezolac, oxametacina, pirazolac, proglumetacina, sulindac, tiaramida, tolmetina, tropesina, zomepirac), derivados de ácido arilbutírico (por ejemplo, bumadizón, butibufeno, fenbufeno, xenbucina), ácidos arilcarboxílicos (por ejemplo, clidanac, ketorolac, tinoridina), derivados de ácido arilpropiónico (por ejemplo, alminoprofeno, benoxaprofeno, bermoprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, fenoprofeno, flunoxaprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, ibuproxam, indoprofeno, ketoprofeno, loxoprofeno, naproxeno, oxaprozina, piketoproleno,

20 pirprofeno, pranoprofeno, ácido proticínico, suprofeno, ácido tiaprofénico, ximoprofeno, zaltoprofeno), pirazoles (por ejemplo, difenamizol, epirizol), pirazolonas (por ejemplo, apazona, benzpiperilona, feprazona, mofebutazona, morazona, oxifenbutazona, fenilbutazona, pipebuzona, propifenazona, ramifenazona, suxibuzona, tiazolinobutazona), derivados del ácido salicílico (por ejemplo, acetaminosalol, aspirina, benorilato, bromosaligenina, acetilsalicilato de calcio, diflunisal, etersalato, fendosal, ácido gentísico, glicol-salicilato, imidazol-salicilato, acetil

25 salicilato de lisina, mesalamina, morfolin-salicilato, 1-naftil-salicilato, olsalazina, parsalmida, acetilsalicilato de fenilo, fenil-salicilato, salacetamida, ácido salicilamida o-acético, ácido salicilsulfúrico, salsalato, sulfasalazina), tiazincarboxamidas (por ejemplo, ampiroxicam, droxicam, isoxicam, lornoxicam, piroxicam, tenoxicam), ácido εacetamidocaproico, S-(5'-adenosil)-L-metionina, ácido 3-amino-4-hidroxibutírico, amixetrina, bendazac, bencidamina, α-bisabolol, bucoloma, difenpiramida, ditazol, emorfazona, fepradinol, guaiazuleno, nabumetona, nimesulida,

30 oxaceprol, paranilina, perisoxal, procuazona, superóxido dismutasa, tenidap, zileutón, sus sales fisiológicamente aceptables, combinaciones los mismos y mezclas de los mismos. En una realización, el AINE es diclofenac, furbiprofeno o ketorolac.

Otros agentes antiinflamatorios no esteroideos incluyen los inhibidores selectivos de la ciclooxigenasa de tipo II,

35 tales como celecoxib y etodolac; antagonistas de PAF (factor activador de plaquetas), tales como apafant, bepafant, minopafant, nupafant y modipafant; inhibidores de PDE (fosfodiesterasa) IV, tales como ariflo, torbafillina, rolipram, filaminast, piclamilast, cipamfilina y roflumilast; inhibidores de la producción de citocinas, tales como inhibidores del factor de transcripción NF-κB; u otros agentes antiinflamatorios conocidos por los expertos en la técnica. En una realización, el agente antiinflamatorio no esteroideo es celecoxib.

40 Las concentraciones de cada uno de los agentes antiinflamatorios que pueden incluirse en las composiciones de la presente invención variarán en función del agente o de los agentes seleccionados y del tipo de inflamación que se esté tratando. Las concentraciones serán suficientes para reducir, tratar o prevenir la inflamación en los tejidos diana tras la aplicación de una composición de la presente invención en esos tejidos. Dichas concentraciones están

45 comúnmente en el intervalo del 0,0001 al 3% en peso (o alternativamente, del 0,01 al 2%, o del 0,05% al 1%, o del 0,01% al 0,5% en peso).

Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar más detalladamente las composiciones de la presente invención.

50 EJEMPLO 1: Solución Se añade una proporción adecuada (mostrada en la tabla anterior) de Pluronic® F127 al tampón de fosfato en un recipiente con camisa de acero inoxidable esterilizado dotado de un mecanismo de agitación, a una temperatura en el intervalo de 50 a 60ºC. Se calienta la solución tampón resultante hasta una temperatura de 61 a 75ºC. A una temperatura de aproximadamente 66ºC, se añade una cantidad apropiada de BAK a la solución tampón mientras se

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto que tiene la Fórmula IV

0,2

Hidroxipropilmetilcelulosa (“HPMC”)

0,5

Cloruro de benzolconio (“BAK”)

0,01

Pluronic® F127

0,1

EDTA

0,1

NaCI

0,25

Tampón de fosfato (0,05M, pH = 5,0)

q.s. hasta 100

5 mezcla de tres a diez minutos. A una temperatura de 75ºC, se añade una cantidad apropiada del compuesto que tiene la fórmula IV al contenido del recipiente durante un periodo de tres a cinco minutos mientras se sigue mezclando. A continuación, se añaden EDTA y NaCl a la mezcla mientras se continúa mezclando durante cinco minutos más a 75ºC. Se enfría la mezcla resultante hasta una temperatura de 25 a 30ºC. La composición final se envasa en recipientes adecuados.

10 EJEMPLO 2: Solución

Para producir esta solución, se usa un procedimiento similar al del Ejemplo 1.

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto que tiene la Fórmula IV

0,35

(Manitol

4,5

Cloruro de benzolconio (“BAK”)

0,005

Polisorbato 80

0,1

EDTA

0,05

Acetato de sodio

0,03

Ácido acético,

0,04

Agua purificada

q.s. hasta 100

EJEMPLO 3: Solución Para producir esta solución que tiene la siguiente composición, se usa un procedimiento similar al del Ejemplo 1.

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto que tiene la Fórmula IV

0,2

Dexametasona

0,1

Hidroxipropilmetilcelulosa (“HPMC”)

0,5

Alexidina

0,01

Tensioactivo Brij®

0,1

EDTA

0,1

Tampón de citrato (citrato sódico 0,02M, pH = 5,0)

q.s. hasta 100

EJEMPLO 4: Solución Para producir esta solución que tiene la siguiente composición, se usa un procedimiento similar al del Ejemplo 1.

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto 8 de la Tabla 1

0,3

Colecoxib

0,15

Propilenglicol

0,5

Alexidina

0,01

Tiloxapol

0,1

EDTA

0,1

Tampón de citrato (citrato sódico 0,02M, pH = 5)

q.s. hasta 100

EJEMPLO 5: Suspensión Para producir esta solución que tiene la siguiente composición, se usa un procedimiento similar al del Ejemplo 1.

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto que tiene la Fórmula IV

0,3

Triamcinolona, USP micronizada

0,2

Hidroxietilcelulosa

0,25

BAK

0,01

Tiloxapol

0,05

EDTA

0,01

NaCI

0,3

Na2SO4

1,2

Ácido sulfúrico y/o NaOH

q.s. para ajustar el pH hasta 5,5

Tampón de citrato (citrato sódico 0,02M, pH = 5,0)

q.s. hasta 100

5 EJEMPLO 6: Emulsión

Para producir esta emulsión que tiene la composición mostrada, se usa una modificación del procedimiento del Ejemplo 1.

10 Se añade Polisorbato 60 (Tween® 60) al agua en un primer recipiente con camisa de acero inoxidable esterilizado, dotado un mecanismo de agitación, a una temperatura de 50ºC a 60ºC en cantidades que corresponden a las proporciones mostradas en la siguiente tabla. Se calienta la solución acuosa resultante hasta una temperatura de 61ºC a 75ºC. A una temperatura de 66ºC, se añade alcohol bencílico (un conservante) a la solución acuosa mientras

15 se mezcla durante de tres a diez minutos. A una temperatura de 75ºC, se añaden cantidades apropiadas del compuesto que tiene la Fórmula IV y etabonato de loteprednol a aceite de Mygliol en un segundo recipiente esterilizado, también dotado un mecanismo de agitación, durante un período de tres a cinco minutos mientras continúa la agitación. Se añaden monoestearato de sorbitán y alcohol estearilcetílico a la mezcla de aceite. Se calienta la mezcla de aceite resultante hasta una temperatura en el intervalo de 62ºC a 75ºC. Luego se añade

20 mezclando vigorosamente la mezcla de aceite a la solución acuosa del primer recipiente a una temperatura de 66ºC durante un periodo de tres a cinco minutos. Se añaden sulfato de sodio y ácido sulfúrico y/o hidróxido de sodio a la mezcla para ajustar el pH hasta 5,5. Se enfrió la composición resultante hasta una temperatura de 35ºC a 45ºC, y se homogenizó mezclando con un emulsionante de alto cizallamiento o procesándola a través de un homogenizador. La composición se enfrió más hasta una temperatura de 25ºC a 30ºC. La composición final se envasó en recipientes

25 adecuados.

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto que tiene la Fórmula IV

0,5

Etabonato de loteprednol

0,2

Polisorbato 60

1

Monostearato de sorbitán (un emulsionante)

1,5

Alcohol cetilestearílico (un estabilizador de emulsiones)

1,5

Alcohol bencílico

0,5

Aceite de Miglyol

14,5

Na2SO4

1,2

Ácido sulfúrico y/o NaOH

q.s. para ajustar el pH hasta 5,5

Agua purificada

q.s. hasta 100

Comúnmente, el aceite usado en las emulsiones es un aceite emoliente no irritante. Los ejemplos ilustrativos pero no restrictivos del mismo incluyen un aceite mineral, aceite vegetal y un aceite vegetal reformado de composición 30 conocida. Los ejemplos más específicos, pero no restrictivos, del aceite se pueden seleccionar del grupo que consiste en aceite de cacahuete, aceite de semilla de sésamo, aceite de semilla de algodón y triglicéridos de cadena

media (C6 a C12) (por ejemplo, aceites neutros de Miglyol 810, 812, 818, 829, 840, etc., disponibles en Huis America Inc.). Los emulsionantes más comunes empleados se pueden seleccionar del grupo que consiste en monoestearato de sorbitán y polisorbato. Preferentemente, los emulsionantes son no iónicos. Los emulsionantes se pueden emplear en una cantidad del 1,5 al 6,5% en peso de la composición, y preferentemente, del 3 al 5% en peso de la

5 composición. La fase hidrófoba de la emulsión puede estar en una cantidad del 15 al 25% en peso de la composición, y preferentemente, del 18 al 22% en peso de la composición.

EJEMPLO 7: Emulsión

10 Para producir esta emulsión que tiene la siguiente composición, se usa un procedimiento similar al del Ejemplo 6.

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto 13 de la Tabla 1

0,5

Triamcinolona, USP micronizada

0,2

Polisorbato 60

1

Monostearato de sorbitán

1,5

Alcohol cetilestearílico

1,5

Alcohol bencílico

0,5

Aceite de Miglyol

14,5

Na2SO4

1,2

Ácido sulfúrico y/o NaOH

q.s. para ajustar el pH hasta 5,5

Agua purificada

q.s. hasta 100

EJEMPLO 8: Pomada 15 Para producir esta solución que tiene la siguiente composición, se usa un procedimiento similar al del Ejemplo 1.

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto que tiene la Fórmula IV

0,3

Vaselina blanca USP

50

Propilenglicol

5

Glicerina

5

Tween® 20

2

Vitamina E

1

BAK

0,1

Aceite mineral

q.s. hasta 100

EJEMPLO 9: Pomada 20 Para producir esta solución que tiene la siguiente composición, se usa un procedimiento similar al del Ejemplo 1.

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto que tiene la Fórmula VI

0,3

Dexametasona

0,15

Vaselina blanca USP

50

(Propilenglicol

5

Glicerina

5

Tween® 20

2

Vitamina E

1

Vitamina D

0,5

BAK

0,1

Aceite mineral

q.s. hasta 100

EJEMPLO 10: Comprimido

Los ingredientes que se muestran en la siguiente tabla se mezclan en un mezclador, tal como un mezclador de cinta. También se pueden usar otros tipos de mezcladores que son ampliamente conocidos por los expertos en la técnica del mezclado en polvo. Se pasa la mezcla a través de una prensa de formación de comprimidos en condiciones adecuadas para la producción de comprimidos farmacéuticos.

Ingrediente

Cantidad (% en peso)

Compuesto que tiene la Fórmula IV

0,3

Celulosa microcristalina

20

Estearato de magnesio

2

Manitol

65

Almidón

q.s. hasta 100

Comparación de los efectos secundarios de los glucocorticoides y las presentes fluoroquinolonas

10 Una de las acciones adversas más frecuentes de una terapia con glucocorticoides es la diabetes esteroide. La razón de esta afección no deseada es la estimulación de la gluconeogénesis en el hígado mediante la inducción de la transcripción de las enzimas hepáticas implicadas en la gluconeogénesis y el metabolismo de los aminoácidos libres que se producen a partir de la degradación de las proteínas (acción catabólica de los glucocorticoides). Una enzima

15 clave del metabolismo catabólico en el hígado es la tirosina aminotransferasa ("TAT"). La actividad de esta enzima se puede determinar fotométricamente a partir de cultivos celulares de células de hepatoma de rata tratadas. Por lo tanto, se puede comparar la gluconeogénesis producida por un glucocorticoide con la de una fluoroquinolona descrita en la presente memoria mediante la medición de la actividad de esta enzima. Por ejemplo, en un procedimiento, se tratan las células durante 24 horas con la sustancia de ensayo (una fluoroquinolona o un

20 glucocorticoide), y luego se mide la actividad de TAT. A continuación, se comparan las actividades de TAT para la fluoroquinolona y el glucocorticoide seleccionados. Se pueden usar otras enzimas hepáticas en lugar de TAT tales como fosfoenolpiruvato carboxiquinasa, glucosa-6-fosfatasa o fructosa-2,6-difosfatasa. Alternativamente, se pueden medir directamente los niveles de glucosa en sangre en un modelo animal y compararlos para cada uno de los sujetos que son tratados con un glucocorticoide en cuanto a una afección seleccionada y aquellos tratados con una

25 fluoroquinolona para la misma afección.

Otro resultado no deseado de la terapia con glucocorticoides es la catarata inducida por GC. El potencial cataractogénico de un compuesto o una composición se puede determinar mediante la cuantificación del efecto del compuesto o de la composición en el flujo de iones de potasio que pasa a través de la membrana de las células del

30 cristalino (tales como células epiteliales del cristalino de mamíferos) in vitro. Dicho flujo de iones se puede determinar, por ejemplo, mediante técnicas electrofisiológicas o de imágenes de flujos de iones (por ejemplo, con el uso de colorantes fluorescentes). En la publicación de solicitud de patente estadounidense 2004/0219512, se describe un ejemplo de un procedimiento in vitro para la determinación del potencial cataractogénico de un compuesto o una composición.

35 Otro resultado no deseable más de la terapia con glucocorticoides es la hipertensión. Es posible medir directamente y comparar la presión arterial de sujetos emparejados de manera similar tratados con glucocorticoides y una fluoroquinolona de la presente invención por una afección inflamatoria.

40 Otro resultado no deseable más de la terapia con glucocorticoides es el aumento de la presión intraocular (“PIO”) en el sujeto. Es posible medir directamente y comparar la PIO de sujetos emparejados de manera similar tratados con glucocorticoides y una fluoroquinolona de la presente invención por una afección.

Claims (9)

1. REIVINDICACIONES

   1. Una composición que comprende una fluoroquinolona que tiene la Fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII o VIII, o una de sus sales, para su uso en un medicamento para modular la endoftalmitis inflamatoria en un sujeto, en la que dicha fluoroquinolona está presente en una cantidad eficaz para dicha modulación

   en la que R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo inferior no sustituidos, grupos

   5 alquilo inferior sustituidos, grupos cicloalquilo, grupos arilo C5-C24 no sustituidos, grupos arilo C5-C24 sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 sustituidos y grupos que se pueden hidrolizar en organismos vivos; R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupo amino no sustituido y grupos amino sustituidos con uno o dos grupos alquilo inferior;

   10 R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo inferior no sustituidos, grupos alquilo inferior sustituidos, grupos cicloalquilo, grupos alcoxilo inferior no sustituidos, grupos alcoxilo inferior sustituidos, grupos arilo C2-C24 no sustituidos, grupos arilo C5-C24 sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C24 sustituidos, grupos ariloxilo C5-C24 no sustituidos, grupos ariloxilo C5-C24 sustituidos, grupos heteroariloxilo C5-C24 no sustituidos, grupos heteroariloxilo C5-C24 sustituidos y grupos que se pueden hidrolizar en organismos vivos;

   5 X se selecciona del grupo que consiste en átomos de halógeno; Y se selecciona del grupo que consiste en CH2, O, S, SO, SO2 y NR4, en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo inferior no sustituidos, grupos alquilo inferior sustituidos y grupos cicloalquilo; y Z se selecciona del grupo que consiste en oxígeno y dos átomos de hidrógeno.
2. 2. La composición de la reivindicación 1, en la que dicha endoftalmitis se selecciona del grupo que consiste en endoftalmitis post-operatoria, endoftalmitis post-traumática, endoftalmitis no infecciosa, panoftalmitis, endoftalmitis hematógena y combinaciones de las mismas.

   15 3. La composición de la reivindicación 1, en la que dicha endoftalmitis comprende un resultado de una infección.
3. 4. La composición de la reivindicación 1, en la que R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo C1-C5 sustituidos y no sustituidos, grupos cicloalquilo C3-C10, grupos arilo C5-C14 sustituidos y no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C14 sustituidos y no sustituidos, y grupos que se pueden hidrolizar en organismos vivos; R2 se

   20 selecciona del grupo que consiste en grupo amino no sustituido y grupos amino sustituido con uno o dos grupos alquilo C1-C5; y R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, grupos alquilo C1-C5 sustituidos y no sustituidos, grupos cicloalquilo C3-C10, grupos alcoxilo C1-C5 sustituidos y no sustituidos, grupos arilo C5-C14 sustituidos y no sustituidos, grupos heteroarilo C5-C14 sustituidos y no sustituidos, y grupos ariloxilo C5-C14 sustituidos y no sustituidos.
4. 5. La composición de la reivindicación 1, en la que R3 se selecciona del grupo que consiste en grupos cicloalquilo C3-C10.
5. 6. La composición de la reivindicación 1, en la que X es Cl. 30

6. 7.

   La composición de la reivindicación 6, en la que Y es CH2.

7. 8.

   La composición de la reivindicación 6, en la que Z comprende dos átomos de hidrógeno.

   35 9. La composición de la reivindicación 1, en la que Y es NH, Z es O y X es Cl.
8. 10. La composición de la reivindicación 1, en la que el medicamento comprende una solución, emulsión, dispersión, suspensión, pomada o gel.

   40 11. La composición de la reivindicación 1, en la que la fluoroquinolona o su sal está presente en una cantidad del aproximadamente 0,0001% al 10% en peso de la composición.
9. 12. La composición de la reivindicación 11, en la que la composición comprende además un agente antiinflamatorio

   no esteroideo. 45