CN107892690A - Fascaplysin的衍生物及制备方法与用途 - Google Patents

Fascaplysin的衍生物及制备方法与用途 Download PDF

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CN107892690A CN201711241277.3A CN201711241277A CN107892690A CN 107892690 A CN107892690 A CN 107892690A CN 201711241277 A CN201711241277 A CN 201711241277A CN 107892690 A CN107892690 A CN 107892690A
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贺殿
王震
赵全义
贾忠
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
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Abstract

本发明公开一种Fascaplysin的衍生物，及其制备和在药物中的应用。本发明的Fascaplysin的衍生物通式如式(Ⅰ)示，

Description

Fascaplysin的衍生物及制备方法与用途
技术领域
本发明涉及一种化合物及其制备和这种化合物的用途，确切讲本发明涉及一种Fascaplysin的衍生物，及其制备和在药物中的应用。
背景技术
Fascaplysin是一种红色色素，在1988年首先由Rolletal.从斐济海洋海绵Fascaplysinopsis sp中分离出，也是第一个天然存的五环环系12H-吡啶并[1,2-a：3,4-b]二吲哚成员。Fascaplysin表现出广泛的生物活性，包括抗细菌，抗真菌，抗病毒，HIV-1-RT，p56酪氨酸激酶，抗疟疾，对许多癌细胞系也有效，以及 CDK4抑制作用。Fascaplysin可以抑制几种微生物的生长，包括金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，白色念珠菌和酿酒酵母。fascaplysin显示出对小鼠白血病细胞L-1210 的增殖的抑制，ED50值为0.2μM/mL，并且在鼠肿瘤细胞毒性测定中显示出选择性。Fascaplysin表现出对人宫颈癌HeLa细胞的抗增殖作用，通过外源性死亡途径和线粒体途径诱导凋亡，但不能在G1期进行细胞周期阻滞。Fascaplysin 通过血管内皮生长因子(VEGF)阻断和对人脐静脉内皮细胞进行细胞周期阻滞和凋亡，使其显示出抗血管生成活性。最近Yan等人报道了fascaplysin抑制S180 细胞植入肿瘤的生长，可能通过凋亡，抗血管生成或细胞周期停滞机制。 Fascaplysin同样显示出特异性CDK4抑制活性，其IC50值为0.35μM，并且还阻断癌细胞在细胞周期的G0/G1期的生长。然而，同样可以观察到fascaplysin 对其他CDKs的活性较差，CDK1/Cyclin B的IC50>100μM，CDK2/Cyclin A和 CDK-2/Cyclin E的IC50>50μM，CDK5/p35的IC50值为20μM。有趣的是， CDK4/Cyclin D2和CDK4/Cyclin D3在>100μM浓度时不被抑制，而 CDK6/Cyclin D2被抑制，其IC50为35μM。这可以反映细胞周期蛋白与其CDKs 以不同的方式结合。Fasacaplysin由于其平面五环结构，还显示出DNA插入活性。研究发现fascaplysin的结合模式和亲和常数与其他典型的DNA嵌入剂的结合模式和亲和常数相当。这种嵌合使fascaplysin具有较高细胞毒性，毒副作用大，严重限制了其临床应用。
发明内容
本发明研究了大量国内外文献的基础上，以具有特异选择性的CDK4小分子抑制活性的天然产物Fascaplysin(平面五环季铵盐)为先导化合物，利用计算机辅助药物设计软件设计了一系列Fascaplysin的衍生物，以降低其DNA嵌入能力，以及保留CDK4抑制剂的药效作用，药理实验证明，本发明的化合物具有较好抗肿瘤活性。
本发明的化合物通式(Ⅰ)如下：
取代基R2为氯、甲氧基、硝基。
本发明式(Ⅰ)示化合物制备方法参见式(Ⅱ)，即：
1)称取色胺2mmol溶于20ml水中，室温搅拌下，逐滴加入浓硫酸3mmol, 溶液澄清，取体积浓度40％的乙醛溶液20mmol溶于5ml水中然后缓慢加入反应液中，室温下搅拌30min，100℃回流7h，反应液冷却至室温，用氢氧化钠水溶液调节PH至10，二氯甲烷萃取，合并有机相，盐水冲洗，在使用无水硫酸钠进行干燥，过滤减压蒸馏，过色谱柱提纯(二氯甲烷：石油醚：甲醇＝5:2:1； 1％三乙胺)得中间体化合物1-甲基-1,2,3,4-四氢β咔啉；
2)称取相应的酸1.8mmol溶于干燥四氢呋喃中，冰水浴下滴加1.2倍 SOCl2,65℃回流1h，用真空泵旋干，备用。取中间体化合物1.5mmol溶于10ml 干燥四氢呋喃中，冰浴搅拌下，将相应的酰氯溶于5ml干燥四氢呋喃缓慢滴入反应液中，室温反应5h，旋蒸，饱和NaCl水洗三次，无水硫酸钠干燥，色谱柱提纯(乙酸乙酯：石油醚＝1:1)得到目标化合物。
本发明式(Ⅰ)示化合物可在制备预防或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶 CDK4抑制剂有关的疾病的药物中的应用。
本发明式(Ⅰ)示化合物在于可在制备预防或治疗下列疾病的药物中的应用,所述疾病是:黑色素瘤、肝癌、胃癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、食管癌、胃肠道癌。
上述化合物包括式(Ⅰ)示化合物或式(Ⅰ)示化合物在药学上可接受的盐，例如与下列酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、马来酸、苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸；此外还包括无机碱的酸式盐，如：含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐。
本发明的化合物主要是针对以CDK4为靶点，天然产物fascaplysin结构改造的一系列化合物，保留CDK4抑制剂的药效作用，化合物产率高，在空气中相对较稳定，水溶性比较好，操作简单，制备方法相对与现有技术优点是：原料易得，价格低廉，制备路线短，制备方法简单，生产成本低。
附图说明
图1 Fascaplysin与CDK4/CyclinD1分子对接示意图。
图2 Ⅱ-5与CDK4/CyclinD1分子对接示意图。
具体实施方式
一、化合物的制备
(一)式(Ⅰ)的化合物的制备
1.称取色胺2mmol溶于20ml水中，室温搅拌下，逐滴加入浓硫酸3mmol, 溶液澄清，取40％乙醛溶液20mmol溶于5ml水中然后缓慢加入反应液中，室温下搅拌30min，100℃回流7h，反应液冷却至室温，用氢氧化钠水溶液调节PH 至10，二氯甲烷萃取，合并有机相，盐水冲洗，在使用无水硫酸钠进行干燥，过滤减压蒸馏，过色谱柱提纯(二氯甲烷：石油醚：甲醇＝5:2:1；1％三乙胺) 得目标中间体化合物1-甲基-1,2,3,4-四氢β咔啉。
2.称取相应的酸(1.8mmol)溶于干燥四氢呋喃中，冰水浴下滴加1.2倍 SOCl2,65℃回流1h，用真空泵旋干，备用。取中间体化合物(1.5mmol)溶于 10ml干燥四氢呋喃中，冰浴搅拌下，将相应的酰氯溶于5ml干燥四氢呋喃缓慢滴入反应液中，室温反应5h，旋蒸，饱和NaCl水洗三次，无水硫酸钠干燥，色谱柱提纯(乙酸乙酯：石油醚＝1:1)得到目标化合物。
本发明实施例中优选制备了以下结构化合物：
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)苯基酮(Ⅱ-1)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(2-氯苯基)酮(Ⅱ-2)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(4-氯苯基)酮(Ⅱ-3)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(2-甲氧基苯基)酮(Ⅱ-4)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(3-甲氧基苯基)酮(Ⅱ-5)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(4-甲氧基苯基)酮(Ⅱ-6)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(2-硝基苯基)酮(Ⅱ-7)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(4-硝基苯基)酮(Ⅱ-8)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(3,5-二硝基苯基)酮(Ⅱ-9)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(2-硝基-5-甲基苯基)酮(Ⅱ-10)
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(苯乙基)酮(Ⅱ-11)
这些化合物的表征如下：
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)苯基酮(Ⅱ-1)
米黄色粉末；产率：57.47％；mp:167-170℃；1HNMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ10.99(s,1H,NH),7.65–7.19(m,7H,Ar-H),7.02(dt,J＝14.8,6.8 Hz,2H,Ar-H),5.85–5.39(m,1H,CH-N),4.96–4.57(m,1H,CH2-N),3.89–3.61 (m,1H,CH2-N),2.86–2.60(m,2H,CH2-CH2),1.54(d,J＝5.9Hz,3H,CH3).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,TMS,ppm):δ164.47,137.22,136.49,135.83,129.99, 129.99,129.10,126.99,126.84,126.84,121.52,119.11,118.27,111.60,106.54, 62.32,41.91,22.28,19.37.MS(ESI+)m/z:291.1503[M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(2-氯苯基)酮(Ⅱ-2)
米白色粉末；产率：49.38％；mp:224-225℃；1HNMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ11.02(s,1H,NH),7.58(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H,Ar-H),7.53–7.46(m, 2H,Ar-H),7.45(dd,J＝6.9,1.5Hz,1H,Ar-H),7.37(d,J＝7.7Hz,1H,Ar-H),7.33 (d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.10–7.04(m,1H,Ar-H),6.97(td,J＝7.5,0.9Hz,1H, Ar-H),5.71(m,1H,CH-N),3.50–3.41(m,2H,CH2-N),2.69–2.58(m,2H, CH2-CH2),1.55(d,J＝6.7Hz,3H,CH3).13CNMR(100MHz,DMSO-d6,TMS, ppm):δ166.50,136.62,136.53,135.38,131.10,130.13,129.92,128.32,128.06,126.74,121.56,119.13,118.29,111.64,106.56,61.48,45.55,21.98,19.18.MS(ESI +)m/z:325.1112[M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(4-氯苯基)酮(Ⅱ-3)
米黄色粉末；产率：69.96％；mp:213-214℃；1HNMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ10.99(s,1H,NH),7.55(d,J＝8.1Hz,2H,Ar-H),7.48(d,J＝6.7Hz, 2H,Ar-H),7.40(d,J＝7.6Hz,1H,Ar-H),7.31(t,J＝15.5Hz,1H,Ar-H),7.06(t,J ＝6.7Hz,1H,Ar-H),6.98(t,J＝7.3Hz,1H,Ar-H),5.71–5.50(m,1H,CH-N),3.70 (m,CH2-N),3.50–3.39(m,1H,CH2-N),2.84–2.63(m,2H,CH2-CH2),1.59–1.48 (d,J＝6.7Hz,3H,CH3).13CNMR(100MHz,DMSO-d6,TMS,ppm):δ168.02, 136.51,135.93,135.68,134.70,134.70,129.22,126.81,126.81,121.61,119.12, 118.34,111.69,111.54,106.52,55.99,46.00,22.17,19.35.MS(ESI+)m/z:325.1095[M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(2-甲氧基苯基)酮(Ⅱ-4)
白色粉末；产率：68.75％；mp:236-237℃；1HNMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ10.87(s,1H,NH),7.44–7.39(m,2H,Ar-H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H, Ar-H),7.19(d,J＝6.2Hz,1H,Ar-H),7.11(d,J＝8.3Hz,1H,Ar-H),7.08–7.02(m, 2H,Ar-H),6.96(t,J＝7.3Hz,1H,Ar-H),5.78–5.60(m,1H,CH-N),3.79(s,J＝ 22.0Hz,3H,OCH3),3.42(m,J＝20.4,10.9Hz,2H,CH2-N),2.76–2.54(m,2H, CH2-CH2),1.52(d,J＝6.7Hz,3H,CH3).13CNMR(100MHz,DMSO-d6,TMS, ppm):δ167.53,155.67,136.55,135.87,135.81,130.81,128.26,127.52,126.80, 126.75,121.45,121.25,119.05,111.58,106.77,56.27,55.78,45.29,22.29,19.41. MS(ESI+)m/z:321.1606[M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(3-甲氧基苯基)酮(Ⅱ-5)
白色粉末；产率：68.75％；mp:150-151℃；1HNMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ10.85(s,1H,NH),7.42–7.36(m,2H,Ar-H),7.30(d,J＝7.4Hz,1H, Ar-H),7.08–7.02(m,2H,Ar-H),7.00–6.92(m,3H,Ar-H),5.63(m,6.5Hz,1H, CH-N),3.80(s,3H,OCH3),3.34(m,J＝12.6,7.5Hz,2H,CH2-N),2.83–2.62(m, 2H,CH2-CH2),1.53(d,J＝6.6Hz,3H,CH3).13CNMR(100MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ169.62,159.77,138.59,136.49,135.79,130.35,126.83,121.51, 119.10,118.90,118.28,115.75,112.20,111.59,106.58,55.79,45.83,41.87,22.29, 19.38.MS(ESI+)m/z:321.1605[M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(4-甲氧基苯基)酮(Ⅱ-6)
白色粉末；产率：70.83％；mp:232-233℃；1HNMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ10.78(s,1H,NH),7.39(d,J＝8.6Hz,3H,Ar-H),7.29(d,J＝8.0Hz, 1H,Ar-H),7.08–6.94(m,4H,Ar-H),5.57–5.30(m,1H,CH-N),3.81(s,3H, OCH3),3.42–3.21(m,2H,CH2-N),2.72(m,2H,CH2-CH2),1.53(d,J＝6.7Hz,3H, CH3).13CNMR(100MHz,DMSO-d6,TMS,ppm):δ169.96,160.68,136.47,135.96, 129.21,129.00,126.86,126.86,121.48,119.08,118.26,114.32,114.32, 111.58,106.70,55.78,42.05,19.12.MS(ESI+)m/z:321.1610[M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(2-硝基苯基)酮(Ⅱ-7)
淡黄色粉末；产率：66.10％；mp:251-252℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ11.03(s,1H,NH),8.26(d,J＝8.2Hz,1H,Ar-H),7.89(t,J＝7.3Hz, 1H,Ar-H),7.75(t,J＝7.4Hz,1H,Ar-H),7.61(d,J＝7.2Hz,1H,Ar-H),7.37(dd,J ＝17.5,7.8Hz,2H,Ar-H),7.06(dd,J＝16.6,8.7Hz,1H,Ar-H),6.98(t,J＝7.3Hz, 1H,Ar-H),5.59(m,1H,CH-N),3.58–3.39(m,2H,CH2-N),2.82–2.61(m,2H, CH2-CH2),1.58(d,J＝6.6Hz,3H,CH3).13CNMR(100MHz,DMSO-d6,TMS, ppm):δ166.27,145.69,136.56,135.37,133.26,130.85,126.85,126.77,125.34, 121.56,119.14,118.39,118.28,111.65,106.55,50.86,41.75,21.84,20.63.MS(ESI +)m/z:336.1354[M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(4-硝基苯基)酮(Ⅱ-8)
金黄色粉末；产率：59.70％；mp:268-269℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ10.90(s,1H,NH),8.31(d,J＝8.7Hz,2H,Ar-H),7.72(d,J＝8.5Hz, 2H,Ar-H),7.40(d,J＝7.8Hz,2H,Ar-H),7.06(t,J＝7.1Hz,1H,Ar-H),6.98(td,J ＝7.5,1.0Hz,1H,Ar-H),5.80–5.57(m,1H,CH-N),3.67–3.39(m,2H,CH2-N), 2.85–2.61(m,2H,CH2-CH2),1.56(d,J＝5.8Hz,3H,CH3).13C NMR(100MHz, DMSO-d6,TMS,ppm):δ168.10,148.34,143.33,136.52,135.42,128.48,126.77, 126.77,124.45,124.45,121.57,119.15,118.28,111.64,106.47,46.00,41.95,22.15, 19.39.MS(ESI+)m/z:336.1361[M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(3,5-二硝基苯基)酮(Ⅱ-9)
红色粉末；产率：54.39％；mp:249℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ11.02(s,1H),8.90(s,1H,NH),8.69(d,J＝1.6Hz,2H,Ar-H),7.42(d, J＝7.6Hz,1H,Ar-H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.07(t,J＝7.4Hz,1H,Ar-H), 6.98(t,J＝7.4Hz,1H,Ar-H),5.67(dd,J＝12.8,6.6Hz,1H,CH-N),3.72(dd,J＝ 13.8,4.4Hz,1H,CH2-N),3.58–3.47(m,1H,CH2-N),2.81(dd,J＝19.0,8.1Hz,1H, CH2-CH2),2.66(d,J＝12.7Hz,1H,CH2-CH2),1.60(d,J＝6.6Hz,3H,CH3).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,TMS,ppm):δ165.79,148.77,148.77,139.80,136.51, 135.34,127.81,126.76,121.57,119.69,119.14,118.32,111.61,106.49,100.00, 46.40,42.19,22.20,19.36.MS(ESI+)m/z:381.2984[M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(2-硝基-5-甲基苯基)酮(Ⅱ -10)
黄色固体；产率：53.85％；mp:258-260℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ10.91(s,1H,NH),8.14(d,J＝8.4Hz,1H,Ar-H),7.55–7.50(m,1H, Ar-H),7.38(d,J＝6.2Hz,2H,Ar-H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.10–7.02(m, 1H,Ar-H),7.00–6.94(m,1H,Ar-H),5.64(m,1H,CH-N),3.48(dd,J＝14.9,9.2 Hz,2H,CH2-N),2.84–2.59(m,2H,CH2-CH2),2.47(s,3H,Ar-CH3),1.58(d,J＝ 6.7Hz,3H,CH3).13CNMR(100MHz,DMSO-d6,TMS,ppm):δ166.39,147.05, 143.33,136.55,135.40,133.41,131.11,126.86,126.78,125.31,121.54,119.12, 118.27,111.64,106.57,65.55,45.94,21.42,19.21,18.30.MS(ESI+)m/z:350.1510 [M+H]+.。
(1-甲基-1,3,4,9-四氢-2H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-2-)(苯乙基)酮(Ⅱ-11)
深黄色固体；产率：52.63％；mp:195℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6, TMS,ppm):δ10.89(s,1H,NH),7.36–7.23(m,7H,Ar-H),7.03(t,J＝7.4Hz,1H, Ar-H),6.94(t,J＝7.2Hz,1H,Ar-H),5.57(q,J＝6.4Hz,1H,CH-N),4.16(dd,J＝ 13.8,4.5Hz,1H,CH2-N),3.93–3.76(m,1H,CH2-N),3.84(s.2H,Ar-CH2),2.68– 2.58(m,1H,CH2-CH2),2.48–2.39(m,1H,CH2-CH2),1.40(d,J＝6.7Hz,2H,CH3). 13CNMR(100MHz,DMSO-d6,TMS,ppm):δ169.57,136.46,136.42,136.15, 129.51,129.51,128.94,129.82,126.93,126.77,121.38,119.00,118.21,111.52, 106.64,49.10,45.32,22.16,19.27.MS(ESI+)m/z:305.1658[M+H]+.。
二、本发明化合物的体外细胞实验
(1)实验材料
细胞株：A-549(人非小细胞肺癌细胞株)，HeLa(人宫颈癌细胞株)，Hep-G2 (人肝癌细胞株)，WI-38(人胚肺成纤维细胞)
培养基：Hyclone RPMI-1640培养基，DMEM高糖培养基，10％胎牛血清。
药物及配制：目标化合物，溶于DMSO,并按一定比例稀释得到5个浓度。
(2)实验方法
将对数期生长的细胞株，以每孔约103个细胞加入96孔板中，待细胞贴壁后将不同浓度的溶液加入作用，每个浓度设置3个复孔。培养箱中培养48h，每孔加入10μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，继续培养4h后弃去上清液，每孔再加入150μL DMSO，充分震荡使甲瓒溶解，在酶标仪570nm下测定吸光度 OD值。细胞抑制率的计算公式为：
细胞抑制率％＝(对照组OD值-用药组OD值)/对照组OD值×100％，再计算出IC50。
(3)实验结果
本发明的四氢β-咔啉类fascaplysin衍生物中，对肿瘤细胞抑制活性最好为Ⅱ-5(5μM<IC50<30μM)。本发明的fascaplysin衍生物对肿瘤细胞增殖抑制活性弱于阳性对照Fascaplysin，但对正常细胞(WI-38)的抑制活性IC50值高，细胞毒性较之有所降低，选择性有所提高。
本发明的目标化合物与CDK4分子对接实验
(1)实验材料
计算平台：CPU(2颗英特尔至强E5-2683 V3，总计28核心56线程。主频2.0G睿屏3.0G)，内存(128GB DDR4 ECC 2133MHZ)，硬盘(4TB SATA 6Gb/s最大支持40TB硬盘)，GPU计算卡(2个NVDIA GTX 980支持并进行计算)
试验用化合物：Fascaplysin、Ⅱ-5，用chemdraw软件将小分子配体画出来，并用chem3D Pro软件将其结构能量最小化，并且保存成.mol2的格式，用于分子对接。
目的蛋白为CDK4/Cyclin D1 PDB ID：2W99。
(2)实验方法
采用PUB中的CDK4/Cyclin D(PDB ID：2W99)为目的蛋白。首先，将下载好的2W99晶体结构用LeadIT软件打开，此蛋白晶体包括二条链，本发明选择B链为主链作为活性对接位点，按照LeadIT对接操作流程将受体蛋白进行前期准备，包括去除水分子，加极性氢等。将配体Fascaplysin、Ⅱ-5依次对接到 2W99受体中，查看其对接结果。
(3)实验结果
对照品Fascaplysin及目标化合物Ⅱ-5与CDK4/CyclinD1对接结果分别见图1、2、所示。
参见附图，两个化合物与CDK4/CyclinD1模拟对接结果可知，其均可以进入疏水活性腔，与CDK4/CyclinD1作用，作用位点残基略有不同。Fascaplysin 可以与疏水活性腔中LEU-178、VAL-176氨基酸残基形成2个氢键；目标化合物Ⅱ-5与疏水活性腔氨基酸残基GLN-168、ARG-181、VAL-174、VAL-175、VAL-176形成五个氢键。

Claims (4)

1.如式(Ⅱ)示的化合物，
其中取代基R2为氯、甲氧基、硝基。
2.权利要求1所述化合物制备方法参见式(Ⅱ)，即：
1)称取色胺2mmol溶于20ml水中，室温搅拌下，逐滴加入浓硫酸3mmol,溶液澄清，取体积浓度40％的乙醛溶液20mmol溶于5ml水中然后缓慢加入反应液中，室温下搅拌30min，100℃回流7h，反应液冷却至室温，用氢氧化钠水溶液调节PH至10，二氯甲烷萃取，合并有机相，盐水冲洗，在使用无水硫酸钠进行干燥，过滤减压蒸馏，过色谱柱提纯得中间体化合物1-甲基-1,2,3,4-四氢β咔啉；
2)称取相应的酸1.8mmol溶于干燥四氢呋喃中，冰水浴下滴加1.2倍SOCl2,65℃回流1h，用真空泵旋干，备用，取中间体化合物溶于10ml干燥四氢呋喃中，冰浴搅拌下，将相应的酰氯溶于5ml干燥四氢呋喃缓慢滴入反应液中，室温反应5h，旋蒸，饱和NaCl水洗三次，无水硫酸钠干燥，色谱柱提纯得到目标化合物。
3.权利要求1所述化合物用于制备预防或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4抑制剂有关的疾病的药物，所述化合物是指包括式(Ⅰ)示化合物及式(Ⅰ)示化合物在药学上可接受的盐，包括与下列酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、马来酸、苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸，以及含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐的无机碱的酸式盐。
4.权利要求1所述化合物在用于制备预防或治疗下列疾病的药物,所述疾病是:黑色素瘤、肝癌、胃癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、食管癌、胃肠道癌，所述化合物是指包括式(Ⅰ)示化合物及式(Ⅰ)示化合物在药学上可接受的盐，包括与下列酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、马来酸、苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸，以及含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐的无机碱的酸式盐。
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