CN107857751A - 一种化合物及其制备方法、药物组合物和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及天然化合物领域，特别是涉及一种具有如下结构式的新化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或前药及其制备方法、药物组合物和用途：

Description

一种化合物及其制备方法、药物组合物和用途

技术领域

本发明涉及天然化合物领域，特别是涉及一种xanthone类化合物及其制备方法、药物组合物和用途。

背景技术

恶性肿瘤是当前威胁人类健康和生命的主要疾病。在大多数发达国家，肿瘤是仅次于心血管病的第二大死亡原因。子宫颈癌在世界各地都有发生，是人体最常见的癌瘤之一，不但在女性生殖器官癌瘤中占首位，而且是女性各种恶性肿瘤中最多见的癌瘤。前列腺癌是威胁男性健康的常见肿瘤之一，2002年全球新发病例为679 000例，位列男性肿瘤的第2位。前列腺癌确切的发病原因尚未明确，而且近年来呈迅速上升趋势。早期前列腺癌可无任何预兆症状，仅仅是筛查时发现血清前列腺特异抗原值升高和(或)直肠指检发现前列腺异常改变。而一旦出现症状，常属较晚期的进展性前列腺癌，此时前列腺患者中往往已经出现癌细胞转移侵润现象。肺腺癌(lung adenocarcinoma)是肺癌的一种，属于非小细胞癌。不同于鳞状细胞肺癌，肺腺癌较容易发生于女性及不抽烟者。在肺部的位置常较周边，肿瘤扩大的速度较慢(倍增时间约120天)。早期无征兆，表现为圆形或椭圆形肿块，一般生长较慢，但有时早期即发生血行转移，通常诊断出来时已经是晚期。肠癌(carcinomaofrectum)是胃肠道中常见的恶性肿瘤，发病率仅次于胃和食管癌，是大肠癌的最常见部分(占60％左右)。

目前在癌症的治疗方面，由于手术治疗和放化疗的不断进步，原发癌症以及一些早期癌症患者的死亡率在不断的下降，癌症逐渐地变成了一种慢性疾病，称之为“带瘤生存”。目前带瘤生存的患者不断增多，仅在美国就有1200万带瘤生存的患者。但是癌症总体的死亡率依然居高不下，癌症的复发就是其中的一个主要原因。在临床上，对于预防癌症的复发已经越来越受到人们的关注，但是到目前为止仍没有有效的药物。

大苞藤黄，拉丁文名：Garcinia bracteata C.Y.Wu ex Y.H.Li藤黄科、藤黄属乔木，产云南南部至东南部和广西南部。生于石灰岩山杂木林中，海拔400-1300(-1750) 米。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种抗肿瘤xanthone类化合物及其制备方法、药物组合物和用途。

具体地说，本发明的第一方面是提供了一种化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药，其特征在于，所述化合物A具有下列结构式(Ⅰ)：

本发明的第二方面是提供了所述的化合物A的制备方法，所述方法包括如下步骤：

a)将大苞藤黄叶经95％乙醇渗漉提取，减压浓缩至无有机溶剂味，得浸膏；

b)将步骤a)所得的浸膏混悬于水中，用石油醚萃取，减压蒸发萃取液，得萃取物；

c)将步骤b)所得的萃取物经硅胶柱色谱洗脱，以石油醚与乙酸乙酯按100:0～1:4的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，经薄层色谱显色反应，合并流份，得19个亚流份，分别为F1～F19；

d)将步骤c)中得到的F3浸膏经Sephadex LH20凝胶柱色谱分离，以氯仿与甲醇按1:1 的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，得20个亚流份，分别为F3.1～F3.20；F3.1～F3.20亚流份经制备液相分离，得目标化合物A，浓缩，干燥，所述液相条件为：65％乙腈-甲酸水作为流动相等度洗脱，流速7mL/min，检测波长325nm。

本发明的第三方面是提供了一种防治肿瘤的药物组合物，所述组合物包含治疗有效量的上述化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药。

在一优选例中，所述肿瘤选自宫颈癌、前列腺癌、肺腺癌或肠癌中的一种或多种。

本发明还提供了所述的化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备防治肿瘤的药物中的应用。

在一优选例中，所述肿瘤细胞选自选自宫颈癌、前列腺癌、肺腺癌或肠癌中的一种或多种。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

具体实施方式

本发明的问世是基于这样一个意外发现：从大苞藤黄中提取的一种Xanthone类化合物A，具体指化合物Bracteaxanthone Ⅶ，具有抑制前列腺癌细胞PC-3、人宫颈癌细胞HeLa、人非小细胞肺癌细胞A549和人结肠癌细胞HT-29增殖的能力。因此，化合物A有望开发成为一种防治子宫颈癌、前列腺癌、肺腺癌和肠癌的药物。

进而，本发明首先提供了具有下列结构式(Ⅰ)的化合物A，具体如下：

化合物Bracteaxanthone Ⅶ，分子式：C₂₄H₂₆O₆，分子量：410

本发明还提供了上述化合物相应的所有药学上可以接受的盐、水合物或前药。这些盐可以由化合物中带正电荷的部分(例如，胺基)与具有相反电性的带负电荷(例如，三氟醋酸) 形成；或者由化合物中带负电荷的部分(例如，羧基)与正电荷(例如，钠、钾、钙、镁)形成。化合物可以含有一个非芳香性的双键，具有一个或多个不对称中心。所以，这些化合物可以作为外消旋的混合物、单独的对映异构体、单独的非对映异构体、非对映异构体混合物、顺式或反式异构体存在。所有这些异构体都是可预期的。所述的“本发明的化合物的前药”通常指一种物质，当用适当的方法施用后，可在受试者体内进行代谢或化学反应而转变成本发明的化合物或其盐。

本发明的结构式为(Ⅰ)的化合物A可通过本领域的常规方法如醇提、层析等从大苞藤黄等植物中提取获得，亦可通过商业途径购买或者利用市售原料，通过现有技术中传统的化合物合成方法合成获得。本领域的普通技术人员根据现有公知技术可以合成本发明的化合物。合成的化合物可以进一步通过柱色谱法、高效液相色谱法或结晶等方式进一步纯化。

合成化学改造、保护官能团方法学(保护或去保护)对合成应用化合物是很有帮助的，并且是现有技术中公知的技术，如R.Larock,Comprehensive OrganicTransformations, VCH Publishers(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts,ProtectiveGroups in Organic Synthesis,3^rd Ed.,John Wiley and Sons(1999)；L.Fieser andM.Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis,John Wiley andSons(1994)；and L.Paquette,ed., Encyclopedia of Reagents for OrganicSynthesis,John Wiley and Sons(1995)中都有公开。

本发明的上述化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药可以有效地抑制多种肿瘤细胞的生长，故而本发明的上述化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或前药可用于制备防治肿瘤的药物。

本发明还提供了一种药物组合物，该药物组合物包括本发明的化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药，与药学上可接受的载体，该药物组合物可用于防治肿瘤。

本发明还提供了一种药物制剂，该药物制剂包括本发明的化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药，该药物制剂可用于治疗肿瘤。

本发明的化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药在组合物或药物制剂中的含量例如0.0001-50wt％；较佳的0.001-30wt％；更佳的0.01-20wt％。

治疗有效量(即可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量)的本发明的化合物A或化合物B与药学上可以接受的载体(用于治疗给药的载体，它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性)可以组成药物制剂，这些药物制剂可以制备成口服制剂、注射剂、片剂、粉制剂、胶囊剂、分散片、缓释制剂等。

治疗有效量的本发明的药物组合物的用量介于0.001-500mg/kg体重/天之间，任何介于上述范围之内的用量皆为本发明的药物组合物的有效量。优选的，本发明的药物组合物的用量介于0.005-300mg/kg体重/天之间；更优选的，本发明的药物组合物的用量介于0.0l-100mg/kg体重/天之间。所述的“治疗有效量”可用于相关疾病的单一用药或联合用药治疗。本领域的专业人员能够理解，在实际给药时的用量可高于或低于上述剂量范围。针对某一对象(如哺乳动物—人)的“治疗有效量”和具体治疗方案可受诸多因素的影响，包括所用本发明的化合物A，或其前药的药效活性、给药对象的年龄、体重、一般情况、性别、饮食、给药时间、疾病易感性、疾病进程以及收治医师的判断等。所述的“治疗”指的是给予机体(含有肿瘤、具有肿瘤的症状或者具有肿瘤的前兆)本发明的化合物A，以治疗、减轻、减缓、改变、治愈、影响、改善其肿瘤、肿瘤的症状或肿瘤的前兆。

本发明的化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药或其组合物或其药物制剂可以通过口服、静脉内、肌肉内、皮下、鼻腔内、直肠内等途径给药。固体载体如：淀粉、乳糖、磷酸二醇、微晶纤维素、黑糖和白陶土，而液态载体如：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合活性成分的特性和所需要的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，如，调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。

这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性化合物(作为游离碱或药学上可接受的盐)的溶液或悬浮液。还可在甘油、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物的生长。

适用于注射的药物形式包括：无菌水溶液或分散液和无菌粉(用于临时制备无菌注射液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物如细菌和真菌的污染和影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇、它们的适当混合物和植物油。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

实施例1从大苞藤黄叶中提取并鉴定Bracteaxanthone Ⅶ

1.1实验材料

大苞藤黄于2012年10月采自广西省，植物经广西药物植物院的宋志军研究员鉴定。植物样本保存于上海中医药大学创新中药实验室。

1.2试验方法

大苞藤黄叶(7.6kg)，经95％乙醇渗漉提取，减压浓缩至无有机溶剂味，得浸膏(2.6kg)，混悬于水中，用石油醚萃取。石油醚浸膏(700g)经硅胶柱色谱洗脱，石油醚-乙酸乙酯(100:0 →1:4，V/V)混合溶液梯度洗脱，经薄层色谱显色反应，合并流份，得19个亚流份(F1～F19)。

其中的F3浸膏经Sephadex LH20凝胶柱色谱分离，氯仿-甲醇(1:1)混合溶液作为洗脱剂洗脱，得20个亚流份(F3.1～F3.20)；F3.1～F3.12流份经制备液相分离，得目标化合物A (Bracteaxanthone Ⅶ)2.94mg。液相条件为：65％乙腈-甲酸水作为流动相等度洗脱，流速： 7mL/min，检测波长325nm。

本实验中，硅胶柱层析选用青岛海洋化工有限公司柱层析硅胶(200-300目)；TLC薄层分析选用烟台江友硅胶开发有限公司HSGF254薄层层析硅胶板；凝胶柱选用SephadexLH-20 (GE Healthcare Bio-Sciences AB,Sweden)为填料；制备液相柱选用Xbridge PrepC₁₈OBD column (19×250mm,5μm)。

Bracteaxanthone Ⅶ是一个淡黄色、无定形粉末，通过高分辨质谱确定分子式为C₂₄H₂₆O₆，为一未见报道的新化合物。其NMR数据如下：

1.3实验结果

从大苞藤黄中分离得到化合物Bracteaxanthone Ⅶ，经核磁及质谱检测，化学结构分别如 (Ⅰ)所示：

实施例2Bracteaxanthone Ⅶ抑制人宫颈癌Hela细胞、人前列腺癌细胞PC-3、人非小细胞肺癌细胞A549、人结肠癌HT-29细胞增殖。

2.1实验材料

化合物Bracteaxanthone Ⅶ按照实施例1的方法从大苞藤黄中提取得到，纯度98％。

人前列腺癌细胞PC-3，人宫颈癌细胞HeLa，购自美国ATCC公司，人非小细胞肺癌细胞A549，香港中文大学林格教授赠予，人结肠癌细胞HT-29，清华大学许乃寒教授赠予。

RPMI1640，胎牛血清，青霉素和链霉素，购自美国Invitrogen公司，Taxol购自美国陶素公司。碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)和RNase A购自于美国Sigma公司

2.2实验方法

人非小细胞肺癌细胞A549和人宫颈癌细胞HeLa，用含10％胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培液基，人前列腺癌细胞PC-3，人结肠癌细胞HT-29，用含10％胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培液基，于37℃，5％CO₂及饱和湿度的培养箱中培养，用0.25％胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。

人前列腺癌细胞PC-3，人非小细胞肺癌细胞A549，人宫颈癌细胞HeLa和人结肠癌细胞 HT-29(3*10⁴个/ml)接种于96孔板中。分别加入终浓度梯度为1.25μM、2.5μM、5μM、10μM的24个化合物于96孔板中，5-FU、Etoposide作为阳性药对照组，设置空白试剂孔，正常对照组，培养72h后，每孔加入10ul CCK-8，避光孵育1-4h进行染色。使用酶标仪在450nm 下检测吸光度值，计算出不同浓度的生长抑制率，生长抑制率％＝(control组的平均值-治疗组的平均值)/control的平均值×100％。当细胞的生长抑制率达到50％时，化合物的浓度即为IC₅₀值。实验数据均用平均值±标准误差表示，使用SPSS16.0统计软件进行分析。

2.3实验结果

结果如表1所示，1个化合物分别作用于HeLa、A549、PC-3、HT-29细胞72小时后，抑制细胞增殖的作用。其中Bracteaxanthone Ⅶ有较强的细胞毒性，IC50在20μM以下，能够明显抑制一种或多种肿瘤细胞的增殖。

表1 2个化合物抑制肿瘤细胞生长的IC₅₀/μM值

本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明精神之前提下，本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰，所述改变和修饰同样落入本申请所附权利要求的覆盖范围。

Claims (6)

1.一种化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药，其特征在于，所述化合物A具有下列结构式(Ⅰ)：

2.一种如权利要求1所述的化合物A的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

a)将大苞藤黄叶经95％乙醇渗漉提取，减压浓缩至无有机溶剂味，得浸膏；

b)将步骤a)所得的浸膏混悬于水中，用石油醚萃取，减压蒸发萃取液，得萃取物；

c)将步骤b)所得的萃取物经硅胶柱色谱洗脱，以石油醚与乙酸乙酯按100:0～1:4的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，经薄层色谱显色反应，合并流份，得19个亚流份，分别为F1～F19；

d)将步骤c)中得到的F3浸膏经Sephadex LH20凝胶柱色谱分离，以氯仿与甲醇按1:1的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，得20个亚流份，分别为F3.1～F3.20；F3.1～F3.20亚流份经制备液相分离，得目标化合物A，浓缩，干燥，所述液相条件为：65％乙腈-甲酸水作为流动相等度洗脱，流速7mL/min，检测波长325nm。

3.一种防治肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含治疗有效量的如权利要求1所述的化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药。

4.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤选自宫颈癌、前列腺癌、肺腺癌或肠癌中的一种或多种。

5.如权利要求1所述的化合物A，或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备防治肿瘤的药物中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，所述肿瘤细胞选自选自宫颈癌、前列腺癌、肺腺癌或肠癌中的一种或多种。