CN1078466C - 青藤碱的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了青藤碱及其药用盐的新制药用途，即青藤碱在制备具有清除自由基、抗脂类过氧化和保护抗氧化酶活性作用的药物中的应用。

Description

青藤碱的新用途

本发明是关于青藤碱的新制药用途，具体说是青藤碱在制备具有清除自由基及抗脂类过氧化作用的药物中的应用，属于药物领域。

青藤碱(Sinomenine)是从防已科植物青藤Sinomenium acutum(Thunb.)R.etWils.的茎和根中提取的生物碱之一，是一种已知的药用物质。现代药理学研究表明，青藤碱具有多种药理作用。概括起来讲，目前已经知道的青藤碱的主要药理作用如下：抗炎、降压、抑制中枢、抗心律失常等作用；对机体非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫均有抑制作用，尤其是对T淋巴细胞的功能有较强的抑制作用[彭慧敏，等，青藤碱的免疫抑制作用，中国药理学报1988，9(4)377-380]；青藤碱又是一种组织胺释放剂(冯经义，等，青藤碱的药理作用VII.对胃肠活动的影响及其机制，药学学报1965；12：492)；临床上用于治疗类风湿关节炎疗效显著(张欣，等，陕西中医，1980，5：13；湖南省淑浦县中医院科研组，赤肢医生杂志，1975，12：612)；有人还对青藤碱治疗类风湿性关节炎的作用机制进行了研究[李嗣英，等，青藤碱对小鼠免疫功能的影响，中草药，1992，23(2)：81-83]。到目前为止，还没有有关青藤碱具清除自由基和抗脂类过氧化作用的报道。

本发明人经过实验研究证实了上述药理作用，完成了本发明。

因此，本发明目的是提供青藤碱在制备具有消除自由基及抗脂类过氧化作用的药物中的应用。

经过我们的实验研究表明，青藤碱，特别是盐酸青藤碱，具有抑制脂类过氧化，保护抗氧化酶活性和消除自由基的作用。

青藤碱作为一种治疗药物，已经有产品出售，例如，湖南黔阳地区制药厂生产的青藤碱(sinomenine，SIN)，武汉市中联制药厂生产的盐酸青藤碱粉剂，等。

因此，青藤碱作为清除自由基和抗脂类过氧化的药物，按照常规的制剂方法，可以制备成适合于临床上使用的任何药物剂型，例如，片剂、丸剂、胶囊剂、冲剂、口服液、乳剂、混悬剂、注射剂、栓剂、膏剂，等。

除了本发明所说的青藤碱之外，青藤碱的药物学上可接受的盐，例如盐酸青藤碱，同样具有清除自由基和抗脂类过氧化的作用，因此，青藤碱及其药物上可接受的盐用于制备清除自由基和抗脂类过氧化的药物，均属于本发明的保护范围。

青藤碱及其药物学上可接受的盐在用于制备清除自由基和抗脂类过氧化的药物时，可以添加药物学上常用的赋性剂，如，粘合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、增溶剂、防腐剂、调味剂、溶剂、乳化剂，等。

青藤碱及其药物学上可接受的盐在用于制备具有清除自由基和抗脂类过氧化作用的药物时，也可以和其他相容的治疗药物一起制成药剂。

实施例1

盐酸青藤碱粉剂2500mg，购自武汉市中联制药厂，药用淀粉250g，酒精适量造粒，干燥，进压片机压片，制成1000片，每片片重为275mg，含盐酸青藤碱25mg。

实施例2

青藤碱20000mg，淀粉180g，二者充分混合，装胶囊，制成2000粒胶囊，每粒0.1g重，含盐酸青藤碱10mg。

实验例青藤碱清除自由基及抗脂类过氧化作用的药理实验研究

一、材料与方法

1、试剂与动物

四乙氧基丙烷(1，1，3，3-tetraethoxy propane TEP)购自Fluka公司；邻联二茴香胺(O-dianisidine)购自华美公司；还原型谷胱甘肽(GSH glutathione)、还原型辅酶II(NADPH)，谷胱甘肽还原酶(glutathione reduetase)及叠氮钠(N_aN_a)均购自Sigma公司。余试剂均为国产分析纯。盐酸青藤碱为北医大仿生与天然药物国家重点实验室纯化提供。

实验动物系本院动物部提供的Wistar纯系大鼠，雄性，体重约150g，健康无眼病。利用免视网膜S抗原诱发动物自身免疫性视网膜色素膜炎(EAU)膜型大鼠在不同观察时间点，断颈处死后，立即取出眼球，冰浴下剥脱其整个视网膜组织，制备组织匀浆或者置-80℃冰箱内保存待用。

(一)视网膜组织共轭二烯的测定

参考Buege等方法稍加改良。在显微镜下仔细分离视网膜组织，用冰冷的0.05mol/L磷酸缓冲液pH7.2(含0.5mmol/L的EDTA)，用玻璃匀浆器制备成10％(W/V)的交浆，备用。将3ml氯仿甲醇(1∶2V/V)混合液内加入0.2ml匀浆液，振荡2分钟，再加入氯仿甲醇混合液1毫升，振荡1分钟。加入1ml酸化水(双蒸水用0.1N盐酸调至pH2.5)，再振荡1分钟，离心2000转/分，10分钟；将下层液1ml取出，通入氮气吹干，加入1ml乙醇，摇匀后，在233nm处测OD值，磷酸缓冲液做空白对照。

(二)丙二醛含量测定

取上述匀浆液0.2ml，加入8.1％SDS溶液0.2ml，20％醋酸溶液1.5ml及0.8％硫代巴比妥酸溶液1.5ml，振荡摇匀5分钟后，置于95℃水浴中，1小时后取出，放入冰浴中终止反应；冷却后离心2000转/分，5分钟，加入正丁醇吡啶5ml，振荡抽提2分钟，离心2000转/分，15分钟分层；吸取正丁醇吡啶层，在萤光光度计上测定萤光强度，激发光波长(Ex)为515nm，发射光波长(Em)为553nm。同时以四乙氧基丙烷1nmoL/L溶液做为标准。计算丙二醛含量。Bradford法测定蛋白含量(下同)。

(三)萤光色脂类(fluorascent chromolipid)含量的测定。

取0.2ml匀浆液，加入甲醇氯仿混合液(1∶2V/V)3.5ml，振荡5分钟，再加入2ml酸化水(同前)。振荡5分钟；离心2000转/分，5分钟。分层后将甲醇水相层取出。测定萤光强度，激发光波长(Ex)为360nm，发射光波长(Ex)为430nm。同时用硫酸奎宁溶液(1ug/ml溶于0.1N H₂SO₄中)做标准计算色脂类含量。

(四)脂类氢过氯化物(lipid hydroperoxldes)的测定，参考peter A.ward等方法。

取0.5ml匀浆液，加入3.5ml甲醇氯仿混合液(1∶2V/V)，振荡2分钟，离心2000转/分，5分钟；分层后吸取下层液2ml，通氮气吹干然后加入醋酸氯仿混合液(3∶2/V/V)1.0ml，避光条件下，加入12.8％碘化钾溶液0.05ml，振荡5分钟后，加入0.5％乙酸镉3.0ml，振荡1分钟；离心1000转/分，5分钟，取上层液，在353nm测定吸光值。

(五)髓过氧化物酶活性的测定

用50mmol/L，pH6.0的磷酸钾缓冲液(含0.5％溴化十六烷基三甲铵)，在玻璃匀浆液器中，将视网膜组织制成10％(W/V)的匀浆，冰浴下超声破碎10秒钟。反复冰融3次后，再次超声破碎10秒。离心4000g，4℃，15分钟。取0.2ml上清液，加入2.8ml磷酸缓冲液(含0.167mg/ml邻联茴香胺二盐酸盐及0.005％过氧化氢，摇匀后即在460nm处连续监测。髓过氧化物酶活性：25℃条件下，每分钟消耗1umol过氧化氢为1个活性单位。

(六)超氧化物歧化酶活性的测定

参考邓碧玉等的方法。取上述匀浆液，离心4000转/分，20分钟，取上清做提取液，取适量的提取液，加入4.5ml 50mmol/L，PH8.30K₂HPO₄缓冲液，10ul 50mmol/L连苯三酚溶液(用10mmol/L HCI新鲜配制)迅速混匀，连续测量325nm处吸光度的改变。反应以加入连苯三酚溶液开始计时，反应温度25℃，总反应体积4.6ml。1个单位酶活性定义为.在25℃条件下，每毫升反应液每分钟抑制连苯三酚自氧化率达50％的酶量。

(七)过氧化酶活性测定

原理：过氧化氢酶能催化过氧化分解，使体系中过氧化氢含量不断减少，过氧化氢在240nm处吸光值随之逐渐下降，利用此原理可测定过氧化氢酶的活性。样品分析液中含0.05mol/L Tris-HCI缓冲液，pH7.4，加入一定量过氧化氢及适量的酶提取液，反应体积为1ml，以加入提取液为反应开始计时，连续观察240nm处吸光度的变化。1个单位酶活性定义为在37℃条件下，每分钟催化1umol作用物所需的酶量。

(八)谷胱甘肽过氧化物酶活性的测定

参考paglia等的偶联谷胱甘肽还原酶的方法。样品分析液中含0.05mol/L磷酸缓冲液(含3mmol/L EDTA)，pH7.2，10mmol/L还原型谷胱甘肽，0.3mmol/L还原型辅酶II.1mmol/L叠氮钠，1单位的谷胱甘肽还原酶及适量酶量提取液。混匀后30℃保温，加入过氧化物丁烷至终浓度为1mmol/L，反应总体积1ml。反应以加入过氧化特丁烷开始计时，测定340nm处吸收光度的变化。1个单位酶活性定义为在30℃条件下，每分钟氧化1umol的还原型辅酶II所需的酶量。

二、结果

(一)青藤碱治疗EAU大鼠对其视网膜脂类过氧化产物水平的影响。

1、共轭二烯：结果如表1-1所示，经S抗原免疫后第九天，视网膜中共轭二烯水平明显增高，约为正常大鼠的4.2倍，第十四天时约为正常大鼠的4.8倍，到二十一天时，共轭二烯水平增至正常大鼠的6.8倍。由此看出，其水平在观察期内，呈上升趋势，与正常组比较均有极显著性差异，P＜0.01；经青藤碱治疗后，视网膜共轭二烯的水平比对照组有所下降，第九天时下降了约8.9％，第十四天时下降了约12.8％，但与对照组比较，在统计学上无显著性差异，治疗后第二十一天，共轭二烯水平下降更为明显，约为19.8％，统计学上有显著性差异，P＜0.05。以上结果表明，在大鼠EAU病变中，视网膜共轭二烯水平升高，青藤碱治疗可以抑制EAU大鼠视网膜菜轭二烯水平的升高。

2、丙二醛：从表1-2可以看出，EAU大鼠视网膜丙二醛(MDA)水平变化与共轭二烯相同步，均呈升高趋势。第9天时，为正常组的2.27倍，第14天时，为正常组的3.28倍，到第21天时，升高至正常组的3.93倍。与正常组比较，统计学上均有极显著性差异，P＜0.01。经青藤碱治疗后，视网膜MDA水平较对照组不同程度下降。第9天时，下降了约8.4％，第14天时，下降了约41.2％，第21天时，下降了约45.8％。治疗组与对照组比较的结果，除第9天组外，其它二组均在统计学上有极显著性差异，P均＜0.01。以上结果表明，在大鼠EAU病变中，视网膜丙二醛水平升高，青藤碱治疗能够抑制EAU大鼠视网膜丙二醛水平升高的程度。

3、萤光色脂类：萤光色脂类含量变化如表1-3所示，从中可以看出，EAU大鼠视网膜萤光色脂类含量的升高，从时间上滞后于共轭二烯及MDA的变化，在第9天和第14天时，对照组虽比正常组有所升高，但统计学无显著性差异，P＞0.05。在EAU的第21天时，其含量明显升高，约为正常组的7.3倍，两者比较的结果，统计学上有极显著性差异，p＜0.01。经青藤碱治疗后，EAU大鼠视网膜萤光色脂类较对照组，不同程度地下降，分别为12％(第9天)、6.3％(第14天)和51.0％(第21天)。两者比较的结果，第9天和第14天组，统计学上无显著性差异，P＞0.05，第21天组在统计学上有极显著差异，P＜0.01。以上结果表明，在大鼠EAU病变中，开始2周视网膜萤光色脂类无明显变化，之后才明显升高，青藤碱治疗可以抑制EAU大鼠视网膜萤光色脂类含量的升高。

4、脂类氢过氧化物：脂类氢过氧化物水平的改变，不同于前三种产物，从表1-4中可以看出，第9天时，其水平明显升高，约为正常的2.49倍，在第14天及第21天时，分别为正常组的2.03和1.84倍，两者比较的结果，统计学上均有显著性差异，P＞0.05。经青藤碱治疗后，各时间组的脂类氢过氧化物水平有一定程度下降，分别为19.7％(第9天)、25.2％(第14天)和5.3％(第21天)，但统计学上均无显著性差异，P＜0.05。以上结果表明在大鼠EAU病变中，视网膜脂类氢过氧化物水平升高，青藤碱治疗后EAU大鼠视网膜脂类氢过氧化物水平升高程度减低，但统计学上有无显著性差异。

(二)青藤碱治疗EAU大鼠对其视网膜相关酶水平的影响

1、髓过氧化物酶：从表1-5中可以看出，在免疫后14天内，EAU大鼠视网膜髓过氧化物酶活性不断增高，其中第二周内增高最为显著，之后又逐渐下降。经青藤碱治疗后，髓过氧化物酶活性较对照组不同程度下降，其中第9天下降了9.7％，第14天下降了36.5％，第21天下降了17.1％。两者比较的结果，第14天组，统计学上有极显著性差异，P＜0.01，其余两组均未达到统计学上有显著差异的程度，P＞0.05。以上结果表明，在大鼠EAU病变过程中，视网膜髓过氧化物酶活性升高，第14天时为高峰，青藤碱治疗能够减少其酶活性的增高程度。

2、超氧化物歧化酶：EAU大鼠视网膜超氧化物歧化酶SDD活性变化见表1-6。在免疫后的第9天，超氧化物歧化酶的活性增高，约为正常的1.29倍。之后下降，在第14天时降低最显著，活性只有正常值的46.2％。第21天时较前略有升高，活性只有正常值的69.5％。经青藤碱治疗后，在第9天时，与对照组比较无明显变化。在第14天及第21天时明显高于对照组，两者比较的结果在统计学上有显著性差异，P均＜0.05。结果表明，在大鼠EAU病变过程中，视网膜超氧化物歧化酶活性先短暂升高，之后下降，青藤碱治疗后2至3周，其酶活性的下降程度得到抑制。

3、过氧化氢酶：结果见表1-7。从中可以看出，EAU大鼠视网膜过氧化氢酶活性随时间呈渐降趋势，与正常组比较，分别下降了22.4％(第9天)、45.6％(第14天)及52.0％(第21天)。各时间点中对照组与治疗组比较的结果，后者的过氧化氢酶活性均高于前者，其中第14天及第21天时，两者比较的结果，统计学上均有显著性差异，p＜0.01及p＜0.05。上述结果表明，在大鼠EAU病变过程中，视网膜过氧化氢酶活性下降。青藤碱治疗能够减少其酶活性下降的程度。

4、谷胱甘肽过氧化物酶。

EAU大鼠视网膜谷胱甘肽过氧化物酶活性的变化见表1-8。与过氧化氢酶活性变化不同的是，在观察早期(第9天及第14天)其活性与正常对照组比较变化不大，至第21天时其变化方较明显，比正常对照组下降了约为20.9％，但两者比较的结果，统计学差异尚未达到显著的程度，p＞0.05。青藤碱治疗组的谷胱甘肽过氧化物酶活性的变化趋势相似于未治疗组。虽然其各时间点的酶活性稍高于未治疗组，统计学上无显著性差异，p＞0.05。实验结果表明，EAU大鼠视网膜谷胱甘肽过氧化物酶的活性，在观察早期无明显变化，第三周时有所下降。青藤碱治疗组与末治疗组之间无显著差异。

表1-1青藤碱治疗组和未治疗组EAU大鼠视网膜中共轭二烯的变化

                  CD X±SD(nmol/mg蛋白)

组别      n      未治疗组        治疗组

第9天     8     6.19±0.52      5.63±0.95

第14天    8     7.10±0.40      6.19±1.25

第21天    8     10.04±3.10     8.06±1.15*

正常组(4)：1.47±0.36

*：p＜0.05

表1-2青藤碱治疗组和未治疗组EAU大鼠视网膜中MDA的变化

                MDA X±SD(nmol/mg蛋白)

组别     n      未治疗组       治疗组

第9天    8    0.427±0.035   0.391±0.042

第14天   8    0.617±0.102   0.361±0.033**

第21天   8    0.738±0.105   0.400±0.065**

正常组(4)：0.188±0.013

**：p＜0.01

表1-3青藤碱治疗组和未治疗组EAU大鼠视网膜中荧火色脂类的变化

            FL X±SD(ug/mg蛋白)组别     n     未治疗组      治疗组第9天    8   0.025±0.007   0.022±0.006第14天   8   0.016±0.005   0.015±0.005第21天   8   0.102±0.035   0.050±0.013**正常组(4)：0.014±0.004**：p＜0.01表1-4青藤碱治疗组和未治疗组EAU大鼠视网膜中脂类氢过氧化物的变化

           LH X±SD(nmol/mg蛋白)组别    n     未治疗组       治疗组第9天   4   0.386±0.100    0.310±0.120第14天  4   0.314±0.140    0.235±0.085第21天  4   0.285±0.084    0.270±0.064正常组(4)：0.155±0.046表1-5青藤碱治疗组EAU大鼠视网膜中髓过氧化物酶活性

    髓过氧化物酶活性    (u/mg蛋白)组别    n     未治疗组      治疗组第9天   6   0.031±0.006   0.028±0.005第14天  6   0.115±0.015   0.073±0.007**第21天  6   0.041±0.004   0.034±0.004**：p＜0.01

表1-6青藤碱治疗组和未治疗组EAU大鼠视网膜中SOD活性

          SOD活性     (u/mg蛋白)

          (X±SD)组别    n     未治疗组     治疗组第9天   7    9.92±0.82   9.80±0.74第14天  7    3.56±0.93   4.83±0.77*第21天  7    5.36±1.69   6.27±1.54*正常组(4)：7.71±0.25

      *：p＜0.05表1-7青藤碱治疗组和未治疗组EAU大鼠视网膜中过氧化氢酶活性

          过氧化氢酶     (u/mg蛋白)

          (X±SD)组别    n     未治疗组       治疗组第9天   8   0.097±0.027   0.109±0.014第14天  8   0.068±0.006   0.099±0.016**第21天  8   0.060±0.006   0.076±0.006*正常组(4)：0.125±0.016*：p＜0.05 **：p＜0.01表1-8青藤碱治疗组和未治疗组EAU大鼠视网膜中谷胱甘肽过氧化物酶活性

    谷胱甘肽过氧化物酶活性   (u/mg蛋白)

           (X±SD)

组别    n      未治疗组        治疗组

第9天   4    0.315±0.031    0.324±0.030

第14天  4    0.307±0.014    0.314±0.050

第21天  4    0.261±0.041    0.274±0.039

正常组(4)：0.330±0.041

三、讨论

在本实验中，我们所观察的共轭二烯、丙二醛、脂类氢过氧化物及萤光色脂类，被认为是脂类过氧化过程中不同阶段的产物。

在脂类过氧化的初始阶段，自由基从不饱和脂肪酸中夺走氢，使之形成共轭二烯(其在233nm处有特征性吸收峰)，随之后者与氧发生反应，形成脂类过氧化物，进一步转变为类质内过氧化物。脂类内过氧化物可与多种化合物(包括羟类)反应形成烷基自由基及脂类氢过氧化物，或形成丙醛及丙二醛，后者与磷脂及芳香苯胺的氨基，以及蛋白质的氨基结合可形成共轭席夫碱，该物质具有特殊的萤光。另外，氢过氧化物可反应生成丙二醛。

我们的实验结果表明，在S抗原诱发的EAU大鼠视网膜中，多种脂类过氧化产物均不同程度的增高，反映出在EAU的病程中，自由基介导的脂类过氧化的过程加剧，其产生的损伤作用也随之加重。

对于EAU的病理损伤机制之研究发现，尽管T细胞是病变的介导因素，但是视网膜的氧化损伤则是多形核白细胞(PMN_s)所致。视网膜感光细胞内有比其它任何器官组织含量都高的多不饱和脂肪酸(PUFA_s)，因而最易受到自由基介导的脂类过氧化的损伤。在EAU的急性期，PMN_s聚积至炎症部位，同时被激活，随之发生以氧消耗增加，戊糖旁路激活及活性氧产物释放为特征的呼吸爆发(Reapiratory burst)过程。其中活性氧产物主要是超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基经歧化过程可产生H₂O₂，随之通过Haber-Weiss反应： 及Featon反应： ，产生毒性更强的羟自由基(.OH)。这些活性氧在组织内增多，可造成脂类过氧化、蛋白质及DNA等的损伤。

近年来在EAU动物模型诱发时，普遍应用卡介苗及百日咳杆菌或百日咳杆菌毒素作为双佐剂与抗原一起来免疫动物。实验发现经双佐剂免疫后的动物模型，其PMNs浸润程度增加，视网膜脂类过氧化损伤加剧。利用化学反光的方法发现EAU的高峰期超氧阴离子自由基及羟自由基明显增高。由此认为不论在EAU的初始期，还是持续期，氧自由基在视网膜氧化损伤中起主要作用，并最终导致视网膜变性。

本实验的结果表明，EAU大鼠视网膜共轭二烯及丙二醛水平的增高，在时间上基本同步，而萤光色脂类水平的增高滞后于前两者，在第二周后才显著增高。脂类氢过氧化物水平的增高在第一周未便达到高峰，之后虽明显高于正常对照，但却呈不断下降趋势。

从脂类过氧化的过程推测，由于萤光色脂类是由丙二醛与磷脂、芳香苯胺及蛋白质氨基反应后生成的产物，可能该反应的速率相对迟缓，加之组织中对醛类的活性代谢，均可能成为萤光色脂类滞后的原因。

在脂类过氧化的引发阶段所产生脂类氢过氧化物(LHOOH)，可发生裂解(fragmentation)，产生烷氧基自由基(.LHO)及羟自由基(.OH)： 。在脂类过氧化的扩展阶段，二价铁离子(Fe⁺⁺)可催化LHOOH反应生成烷氧基自由基： 。由此我们推测，在EAU病变的某一阶段LHOOH的分解大于生成，可能导致其总含量在第一周后逐渐下降。

经过青藤碱治疗以后，EAU大鼠视网膜脂类过氧化物的生成受到不同程度的抑制，同时病理检查证实多形核白细胞的浸润程度也减轻。从我们前面体外实验中发现，青藤碱本身就能清除超氧阴离子自由基及羟自由基，并有抗脂类过氧化的作用。以往的实验业已证明，细胞膜的氧化损伤，可能导致钙离子内流，激活磷脂酶，引起游离的花生四烯酸生成增加，后者可以进一步转化成前列腺素，另外脂类氢过氧化物也能够导致花生四烯酸的氧化，在这两种反应过程中，均可促成炎性细胞趋化因子产生，加重局部炎性浸润程度。因此，我们认为青藤碱减轻EAU炎症反应的作用与其清除自由基抗脂类过氧化，从而抑制炎性趋化因子产生有关。

髓过氧化物酶(MPO)在中性白细胞的嗜苯胺颗粒中浓度非常高，一直被作为中性白细胞的标志酶。在本实验的观察中，EAU大鼠的视网膜MPO活性在免疫后第9天便已升高，第14天时达到高峰，之后下降，在第21天时仍高于第9天。这种结果相似于Goto.H等的实验观察。

众所周知，在正常眼组织中存在着三种抗氧化损伤的保护机制：一是抗氧化酶系统，能够防止活性氧产生；二是自由基清除剂；三是氧化损伤的修复机制。三种机制中，首当其冲的是抗氧化酶系统，它主要包括：超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶及过氧化物酶系。

SOD被认为是抗氧酶系的首要成份，它能够专一性地清除超氧阴离子自由基(.O₂)。过氧化氢酶不仅可以清除过氧化氢(H₂O₂)，而且能够减少羟自由基的生成，谷胱甘肽过氧化物酶是一个含硒酶，可催化谷胱甘肽与过氧化氢及过氧化物起反应，以消除过氧化物的毒性作用。

在本实验中，我们观察了SOD、过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性的变化。实验结果表明，SOD的活性在动物免疫后第9天首先升高，之后随病程迅速下降，在炎症的高峰期(第14天)活性降至最低点，以后有所回升。有实验证明，视网膜SOD主要定位于感光细胞的内段及视网膜色素上皮，这些部位也恰是EAU炎症主要侵及的眼组织，而且视网膜SOD的活性远大于晶状体。因此我们推测，在EAU病变初期，视网膜SOD活性反应性升高，以消除不断增多的.O₂，当O₂的产生超过SOD清除能力时，SOD活性明显下降。另外有研究发现，组织中过多的过氧化氢产生会造成Cu-Zn SOD的重要辅基Cu⁺⁺的还原，从而抑制SOD的活性。

我们对EAU大鼠视网膜过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性测定的结果表明，二者活性变化不同于SOD，在观察期内一直呈下降趋势，其过氧化氢酶活性下降的更为明显。二者活性的下降，势必导致组织中过多的H₂O₂及过氧化物不能效清除。这不仅可以直接带来组织的损伤，而且更重要的是过多的H₂O₂可反应生成毒性更强的羟自由基，从而激活脂类过氧化过程，加重组织损伤。

利用青藤碱治疗以后，反映组织中中性白细胞浸润程度的髓过氧化物酶活性的升高得到了抑制，SOD及过氧化氢酶活性下降程度明显减轻。众所周知，正常机体内氧化与抗氧机制维持着动态平衡。抗氧化系统中，抗氧化酶系具有反应迅速、活性高的特点，因此成为抗氧化机制中主要的成份。从我们前面对EAU大鼠视网膜脂类过氧化产物的观察结果可以看出，在EAU过程中视网膜脂类过氧化过程加剧。这种自由基介导的脂类过氧化是一链式反应，有不断增强的趋势，其损伤作用会不断加重，只有通过抗氧化机制去打断反应链，才能中止或减轻其损伤。因此我们认为，在EAU中，保护体内抗氧化酶的活性及从体外给予抗氧化剂或抗氧化酶，是减轻EAU脂类过氧化损伤的有效方法。

总而言之，在EAU的病程中视网膜脂类过氧化反应增强，同时抗氧化酶系的活性下降。青藤碱治疗，对抑制脂类过氧化、减少炎症浸润、保护抗氧化酶活性是有效的。

实施例1

盐酸青藤碱粉剂25000mg，购自武汉市中联制药厂，药用淀粉250g，酒精适量造粒，干燥，进压片机压片，制成1000片，每片片重为275mg，含盐酸青藤碱25mg。

实施例2

青藤碱20000mg，淀粉180g，二者充分混合，装胶囊，制成2000粒胶囊，每粒0.1g重，含盐酸青藤碱10mg。

Claims (3)

1、青藤碱及其药用盐的药物新用途，其特征在于青藤碱及其药用盐在制备具有清除自由基作用的药物中的应用。

2、青藤碱及其药用盐的药物新用途，其特征在于青藤碱及其药用盐在制备具有抗脂类过氧化的药物中的应用。

3、青藤碱及其药用盐的药物新用途，其特征在于青藤碱及其药用盐在制备具有保护抗氧化酶活性作用的药物中的应用。