CN107828680B - 一种复合微生态制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种复合微生态制剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种复合微生态制剂及其制备方法和应用，所述复合微生态制剂包括植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母。该复合微生态制剂作为蛋鸡饲料添加剂，具有较高的活菌数，不仅能够提高蛋鸡的生产性能，延缓产蛋率的下降，而且能够提升鸡蛋品质，具有广阔的应用前景和市场价值。

Description

一种复合微生态制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生态制剂领域，涉及一种复合微生态制剂及其制备方法和应用。
背景技术
鸡蛋是人类蛋白质的重要来源。目前，蛋鸡通常采用笼养饲喂的方式，所产的鸡蛋个体大，产量高，但味道和营养价值往往不如普通家养蛋鸡所产的鸡蛋，并且笼养蛋鸡还普遍存在免疫力较低、肠胃功能和卵巢功能较差的问题。如何提高蛋鸡的免疫力、肠胃功能和卵巢功能，提升鸡蛋的口感和营养价值，缩小笼养鸡蛋与家养鸡蛋的品质差距，一直是研发人员需要解决的首要问题。
在饲料中添加微生态制剂(Microecological feed additives)，是调节蛋鸡肠道微生态平衡，提高蛋鸡体质，从而提升笼养鸡蛋品质的重要途径。
CN 103518980 B公开了一种蛋鸡饲用微生态制剂的制备方法及其应用，该微生态制剂是将植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌菌种经发酵罐增菌培养后，与含有果胶、吐温80、甘油、甘露醇、海藻糖和碳酸氢钠的水溶液混合均匀，通过喷雾干燥技术制成微胶囊化活菌粉，将此菌粉与硒化卡拉胶、蛋氨酸锌及辅料混合均匀后制成，该微生态制剂不仅可以维持蛋鸡的机体健康，还能提高蛋鸡的生产性能，但是不具有提升鸡蛋的口感和营养价值的作用。
CN 104522433 A公开了一种蛋鸡用复合生物饲料添加剂及其制备方法，该复合生物饲料添加剂不仅添加有枯草芽孢杆菌、啤酒酵母菌及植物源乳酸菌等微生态制剂，还包含饲料级黄腐酸、虫粉、经发酵的虫粪以及由黄芪提取物、太子参提取物和葡萄籽提取物组成的提取物复合制剂，具有调节机体肠道菌群平衡、增强机体免疫功能、提高生产性能等作用，然而该复合生物饲料添加剂成分复杂、成本较高、制备工艺繁琐，料蛋比无法满足养殖户的需求，并且对提升鸡蛋的口感和营养价值没有显著效果。
CN 103141712 B公开了一种蛋鸡产蛋期配合饲料及其制备方法，配合饲料不仅通过添加枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、乳酸菌和酵母菌等微生态制剂，提升鸡蛋的营养价值，降低鸡蛋的胆固醇含量，而且通过添加陈皮、姜黄、决明子、灵芝等中草药，促进蛋鸡免疫器官的发育，提供机体的免疫力。然而这些中草药需经过粉碎、煎煮、过滤、浓缩等步骤提取有效成分，使得制备饲料的过程较为复杂，同时增加了制备饲料的工艺成本。
因此，提供一种可以提高蛋鸡生产性能、提升鸡蛋品质的复合微生态制剂，对蛋鸡养殖业具有重要意义。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种复合微生态制剂及其制备方法和应用，以克服现有技术成分复杂、安全性差、料蛋比高、无法改善鸡蛋品质等缺陷。
第一方面，本发明提供一种复合微生态制剂，所述复合微生态制剂包括植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母；
其中，所述植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.13132，保藏日期为2016年10月21日；
枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.13131，保藏日期为2016年10月21日；
所述酿酒酵母，命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.13133，保藏日期为2016年10月21日。
本发明提供的复合微生物制剂的植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母均为发明人自行筛选获得，品质优良，作为蛋鸡饲料添加剂，具有较高的活菌数，提高了蛋鸡的生产性能，延缓了生产性能的下降，提升了鸡蛋品质。
优选地，所述植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602:枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BFC1601:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的比例为(1-8):(1-10):(3-10)，例如可以是1:1:3、1:1:4、1:1:8、1:1:10、1:2:3、1:2:4、1:2:8、1:2:10、1:7:3、1:7:4、1:7:8、1:7:10、1:10:3、1:10:4、1:10:8、1:10:10、5:1:3、5:1:4、5:1:8、5:1:10、5:2:3、5:2:4、5:2:8、5:2:10、5:7:3、5:7:4、5:7:8、5:7:10、5:10:3、5:10:4、5:10:8、5:10:10、8:1:3、8:1:4、8:1:8、8:1:10、8:2:3、8:2:4、8:2:8、8:2:10、8:7:3、8:7:4、8:7:8、8:7:10、8:10:3、8:10:4、8:10:8或8:10:10，优选为(1-5):(2-7):(4-8)。
本发明中，发明人发现当植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的比例由(1-8):(1-10):(3-10)优化为(1-5):(2-7):(4-8)，按1％添加量饲喂34周龄海兰褐蛋鸡，料蛋比和日均耗料显著降低(P<0.05)，料蛋比最低为1.979±0.111，降低了8.34％，日均耗料最低为110.26±7.290g/d，降低了7.67％，同时有效延缓了产蛋率的下降，产出的鸡蛋蛋黄明显变大(蛋黄高度变高，直径变大)，蛋白高度变小。
优选地，所述复合微生态制剂还包括保护剂。
优选地，所述保护剂按重量百分比包括：海藻糖1-10％、甘露醇0.5-8％、乳糖1-15％、维生素C 0.1-5％、羟甲基纤维素0.5-10％、脱脂奶粉1-10％、甘油1-15％、玉米淀粉10-50％和无菌水20-45％，其中，所述保护剂各组分重量百分比之和为100％。
优选地，所述海藻糖的重量百分比为1-10％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，优选为2-7％，进一步优选为5％。
优选地，所述甘露醇的重量百分比为0.5-8％，例如可以是0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％或8％，优选为1-5％，进一步优选为3％。
优选地，所述乳糖的重量百分比为1-15％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％，优选为3-10％，进一步优选为4％。
优选地，所述维生素C的重量百分比为0.1-5％，例如可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％或5.0％，优选为0.1-1％，进一步优选为0.3％。
优选地，所述羟甲基纤维素的重量百分比为0.5-10％，例如可以是0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，优选为1-6％，进一步优选为5％。
优选地，所述脱脂奶粉的重量百分比为1-10％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，优选为2-6％，进一步优选为4％。
优选地，所述甘油的重量百分比为1-15％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％，优选为3-12％，进一步优选为8％。
优选地，所述玉米淀粉的重量百分比为10-50％，例如可以是10％、12％、15％、18％、20％、22％、25％、28％、30％、32％、35％、38％、40％、42％、45％、48％或50％，优选为20-40％，进一步优选为38％。
优选地，所述无菌水的重量百分比为20-45％，例如可以是20％、25％、30％、32.7％、35％、40％或45％，优选为35-42％，进一步优选为32.7％。
优选地，所述保护剂按重量百分比包括：海藻糖2-7％、甘露醇1-5％、乳糖3-10％、维生素C 0.1-1％、羟甲基纤维素1-6％、脱脂奶粉2-6％、甘油3-12％、玉米淀粉20-40％和无菌水25-50％，其中，所述保护剂各组分重量百分比之和为100％。
优选地，所述保护剂按重量百分比包括：海藻糖5％、甘露醇3％、乳糖4％、维生素C0.3％、羟甲基纤维素5％、脱脂奶粉4％、甘油8％、玉米淀粉38％和无菌水32.7％。
优选地，所述复合微生态制剂还包括包被液。
优选地，所述包被液按重量百分比包括：淀粉1-20％、脱脂奶粉1-10％、柠檬酸0.1-10％、羧甲基纤维素钠1-10％、麦芽糊精0.1-10％、葡聚糖1-20％和无菌水55-75％，其中，所述包被液各组分重量百分比之和为100％。
优选地，所述淀粉的重量百分比为1-20％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％，优选为5-15％，进一步优选为10％。
优选地，所述脱脂奶粉的重量百分比为1-10％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，优选为3-8％，进一步优选为7％。
优选地，所述柠檬酸的重量百分比为0.1-10％，例如可以是0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，优选为0.5-5％，进一步优选为4％。
优选地，所述羧甲基纤维素钠的重量百分比为1-10％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，优选为1-4％，进一步优选为3％。
优选地，所述麦芽糊精的重量百分比为0.1-10％，例如可以是0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，优选为0.1-4％，进一步优选为2％。
优选地，所述葡聚糖的重量百分比为1-20％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％，优选为2-13％，进一步优选为6％。
优选地，所述无菌水的重量百分比为55-75％，例如可以是55％、58％、60％、62％、65％、68％、70％、72％或75％，优选为65-70％，进一步优选为68％。
优选地，所述包被液按重量百分比包括：淀粉5-15％、脱脂奶粉3-8％、柠檬酸0.5-5％、羧甲基纤维素钠1-4％、麦芽糊精0.1-4％、葡聚糖2-13％和无菌水50-80％，其中，所述包被液各组分重量百分比之和为100％。
优选地，所述包被液按重量百分比包括：淀粉10％、脱脂奶粉7％、柠檬酸4％、羧甲基纤维素钠3％、麦芽糊精2％、葡聚糖6％和无菌水68％。
优选地，所述植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602的活菌数≥1.0×109cfu/g，例如可以是1.0×109cfu/g、1.5×109cfu/g、2.0×109cfu/g、2.5×109cfu/g、3.0×109cfu/g、3.5×109cfu/g、4.0×109cfu/g、4.5×109cfu/g或5.0×109cfu/g，优选为≥3.0×109cfu/g。
优选地，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601的活菌数≥1.0×1010cfu/g，例如可以是1.0×1010cfu/g、1.5×1010cfu/g、2.0×1010cfu/g、2.5×1010cfu/g、3.0×1010cfu/g、3.5×1010cfu/g、4.0×1010cfu/g、4.5×1010cfu/g或5.0×1010cfu/g，优选为≥1.5×1010cfu/g。
优选地，所述酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的活菌数≥5.0×109cfu/g，例如可以是5.0×109cfu/g、5.5×109cfu/g、6.0×109cfu/g、6.5×109cfu/g、7.0×109cfu/g、7.5×109cfu/g、8.0×109cfu/g、8.5×109cfu/g、9.0×109cfu/g、9.5×109cfu/g或10.0×109cfu/g，优选为≥7.0×109cfu/g。
第二方面，本发明提供了一种如第一方面所述复合微生态制剂的制备方法，包括如下步骤：分别按配方量配制微生物混合液、保护剂和包被液，将配制的微生物混合液和保护剂混合后，再使用包被液进行包被。
优选地，所述微生物混合液与所述保护剂的质量比为(1-10):(1-8)，例如可以是1:1、1:2、1:6、1:8、5:1、5:2、5:6、5:8、10:1、10:2、10:6或10:8，优选为(1-5):(2-6)。
优选地，所述微生物混合液与所述包被液的质量比为(1-5):(1-10)，例如可以是1:1、1:2、1:5、1:10、3:1、3:2、3:5、3:10、5:1、5:2、5:5或5:10，优选为(1-3):(3-5)。
第三方面，本发明提供了一种如第一方面所述复合微生态制剂用于制备饲料，优选用于制备蛋鸡饲料。
优选地，所述复合微生态制剂的添加量为0.1-5％，例如可以是0.1％、1％、2％、3％、4％或5％，优选为1％。
与现有技术相比，本发明制备的复合微生态制剂具有如下有益效果：
(1)提高了蛋鸡的生产性能，对料蛋比和日均耗料影响显著(P<0.05)，料蛋比最低为1.979±0.111，日均耗料最低为110.26±7.290；
(2)提高了鸡蛋品质，对蛋黄高度、蛋黄直径及蛋白高度影响显著(P<0.05)，黄高/蛋宽比最大为0.354±0.030，蛋黄直径/蛋长比最大为0.664±0.031，蛋白高/蛋宽比最小为0.129±0.029，蛋黄明显变大(蛋黄高度变高，直径变大)，蛋白高度变小；
(3)延缓了蛋鸡生产性能的下降，产蛋期34周龄(产蛋高峰期)和产蛋期56周龄(产蛋末期)的海兰褐蛋鸡具有相近的生产性能，生产的鸡蛋品质相当。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实施例1
(1)菌株初筛
从中国农业科学院饲料研究所辅楼旁土壤中，通过自然选育法初筛乳酸菌、芽孢杆菌和酵母菌。
(1’)乳酸菌筛选
将采集的样本用无菌水进行梯度稀释，选取三个梯度涂分离固体培养基(胰蛋白胨10g、酵母提取物10g、12％脱脂奶粉乳液200mL、琼脂15g、CaCO3 3g、H2O 800mL，pH6.5，115℃灭菌20min)，37℃培养48h，选取产生钙溶圈菌株进行菌落观察，将不同菌落形态菌株分别进行划线纯化，镜检观察形态。
(2’)芽孢杆菌筛选
将采集的样本用无菌水进行梯度稀释，选取三个梯度进行80℃水浴处理10min后，涂LB固体培养基平板，37℃培养24h，观察菌落形态，将不同菌落形态菌株分别进行划线纯化，镜检观察形态。
(3’)酵母菌筛选
将采集的样本用无菌水进行梯度稀释，选取三个梯度涂孟加拉红培养基，30℃培养48h，观察菌落形态，将不同菌落形态菌株分别进行划线纯化，镜检观察形态。
(2)菌株复筛
初筛得到乳酸菌、芽孢杆菌和酵母菌分别通过成分鉴定、抗逆性评价和抗菌能力评价，得到植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603。
实施例2复合微生态制剂(I)
将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602(CGMCC No.13132)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601(CGMCC No.13131)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)BFC1603(CGMCC No.13133)分别进行发酵，发酵结束后离心发酵液并收集湿菌体，用生理盐水重悬菌体。将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603按3:4:6的比例混合，制备得到微生物混合液。微生物混合液与保护剂按3:4的质量比混合后，再加入包被液进行包被，微生物混合液与包被液的质量比为2:3.5。保护剂和包被液的配方如表1所示。
制备得到的复合微生态制剂中，植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602的活菌数为5.0×109cfu/g，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601的活菌数为2.5×1010cfu/g，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的活菌数为8.0×109cfu/g，活菌总数为3.8×1010cfu/g。该复合微生态制剂用于制备蛋鸡饲料，添加量为1％。
表1
Figure GDA0001522781490000101
实施例3复合微生态制剂(II)
将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602(CGMCC No.13132)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601(CGMCC No.13131)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)BFC1603(CGMCC No.13133)分别进行发酵，发酵结束后离心发酵液并收集湿菌体，用磷酸盐缓冲液(pH 6.8)重悬菌体。将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603按1:2:4的比例混合，制备得到微生物混合液。微生物混合液与保护剂按1:3的质量比混合后，再加入包被液进行包被，微生物混合液与包被液的质量比为1:3。保护剂和包被液的配方如表2所示。
制备得到的复合微生态制剂中，植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602的活菌数为4.0×109cfu/g，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601的活菌数为2.0×1010cfu/g，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的活菌数为7.0×109cfu/g，活菌总数为3.1×1010cfu/g。该复合微生态制剂用于制备蛋鸡饲料，添加量为2％。
表2
Figure GDA0001522781490000111
Figure GDA0001522781490000121
实施例4复合微生态制剂(III)
将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602(CGMCC No.13132)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601(CGMCC No.13131)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)BFC1603(CGMCC No.13133)分别进行发酵，发酵结束后离心发酵液并收集湿菌体，用生理盐水重悬菌体。将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603按5:7:8的比例混合，制备得到微生物混合液。微生物混合液与保护剂按3:5的质量比混合后，再加入包被液进行包被，微生物混合液与包被液的质量比为3:5。保护剂和包被液的配方如表3所示。
制备得到的复合微生态制剂中，植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602的活菌数为3.0×109cfu/g，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601的活菌数为1.5×1010cfu/g，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的活菌数为6.5×109cfu/g，活菌总数为2.45×1010cfu/g。该复合微生态制剂用于制备蛋鸡饲料，添加量为3％。
表3
Figure GDA0001522781490000131
实施例5复合微生态制剂(IV)
将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602(CGMCC No.13132)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601(CGMCC No.13131)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)BFC1603(CGMCC No.13133)分别进行发酵，发酵结束后离心发酵液并收集湿菌体，用磷酸盐缓冲液(pH 6.8)重悬菌体。将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603按1:1:3的比例混合，制备得到微生物混合液。微生物混合液与保护剂按1:1的质量比混合后，再加入包被液进行包被，微生物混合液与包被液的质量比为1:1。保护剂和包被液的配方如表4所示。
制备得到的复合微生态制剂中，植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602的活菌数为2.0×109cfu/g，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601的活菌数为1.2×1010cfu/g，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的活菌数为6.0×109cfu/g，活菌总数为2.0×1010cfu/g。该复合微生态制剂用于制备蛋鸡饲料，添加量为5％。
表4
Figure GDA0001522781490000141
Figure GDA0001522781490000151
实施例6复合微生态制剂(V)
将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602(CGMCC No.13132)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601(CGMCC No.13131)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)BFC1603(CGMCC No.13133)分别进行发酵，发酵结束后离心发酵液并收集湿菌体，用生理盐水重悬菌体。将植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603按4:5:5的比例混合，制备得到微生物混合液。微生物混合液与保护剂按1:2的质量比混合后，再加入包被液进行包被，微生物混合液与包被液的质量比为1:2。保护剂和包被液的配方如表5所示。
制备得到的复合微生态制剂中，植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602的活菌数为1.0×109cfu/g，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601的活菌数为1.0×1010cfu/g，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的活菌数为5.0×109cfu/g，活菌总数为1.6×1010cfu/g。该复合微生态制剂用于制备蛋鸡饲料，添加量为0.1％。
表5
Figure GDA0001522781490000152
Figure GDA0001522781490000161
对比例1
与实施例2相比，微生物混合液中植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母均为市售菌株，其他条件与实施例2相同。
对比例2
与实施例2相比，微生物混合液中植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的比例为3:3:2，其他条件与实施例2相同。
对比例3
与实施例2相比，微生物混合液中植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的比例为1:1:1，其他条件与实施例2相同。
对比例4
与实施例2相比，微生物混合液中不含有酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603，植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601的比例为3:4，其他条件与实施例2相同。
对比例5
与实施例2相比，微生物混合液中不含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601，植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的比例为1:2，其他条件与实施例2相同。
对比例6
与实施例2相比，微生物混合液中不含有植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFC1603的比例为2:3，其他条件与实施例2相同。
对比例7
与实施例2相比，蛋鸡饲料中不添加复合微生态制剂，其他条件与实施例2相同。
蛋鸡生产性能和鸡蛋品质分析
选取18万只健康的采食正常、体重相近、产蛋率一致、产蛋期34周龄(产蛋高峰期)的海兰褐蛋鸡，平均分为12个处理组，每个处理组为一栋鸡舍，每栋鸡舍1.5万只，饲喂添加有实施例或对比例制备的复合微生态制剂的饲料，或者饲喂未添加复合微生态制剂的正常基础饲料。基础饲料包括玉米、豆粕、膨化大豆、石粉和预混料等物质，可以保证蛋鸡摄入充足的营养物质和微量元素。
试验期持续6周，试验在生物饲料开发国家工程研究中心蛋鸡养殖示范基地进行，试验鸡自由采食、饮水，饲养管理按照示范基地现行方案执行。每周收集一次鸡蛋，每组收集10枚鸡蛋进行指标测定。其中，蛋鸡生产性能指标为产蛋率、平均蛋重、料蛋比、死淘率和耗料量；鸡蛋品质指标为蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋形指数和蛋黄颜色等。
数据采用SAS统计软件ANOVA过程进行统计分析，Duncan氏法进行多重比较。结果以平均值±标准差表示。以P<0.05为判断显著性的标准。
结果如表6-7所示。
表6复合微生态制剂对蛋鸡生产性能的影响
Figure GDA0001522781490000181
Figure GDA0001522781490000191
注：同列数据肩标字母不同表示差异显著(P<0.05)，字母相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。
从表6分析表明，实施例2-6及对比例2-6中，复合微生态制剂对日均耗料及料蛋比影响显著(P<0.05)，对产蛋率、平均蛋重及死淘率影响不显著(P>0.05)，其中实施例2生产性能效果最好，与对比例7相比，料蛋比降低了8.34％，日均耗料降低了7.67％；对比例1与对比例7相比，复合微生态制剂对料蛋比、日均耗料、对产蛋率、平均蛋重及死淘率影响不显著(P>0.05)，但是有降低日均耗料及料蛋比的趋势。
表7复合微生态制剂对鸡蛋品质的影响
Figure GDA0001522781490000192
Figure GDA0001522781490000201
注：同列数据肩标字母不同表示差异显著(P<0.05)，字母相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。
从表7分析表明，实施例2-6及对比例2-6中，复合微生态制剂对蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳重量、蛋壳强度及蛋黄颜色影响不显著(P>0.05)；对蛋黄高度、蛋黄直径及蛋白高度影响显著(P<0.05)，蛋黄明显变大，蛋白高度变小，其中实施例2生产性能效果最好；对比例1与对比例7相比，复合微生态制剂对对蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳重量、蛋壳强度、蛋黄高度、蛋黄直径、蛋白高度及蛋黄颜色影响不显著(P>0.05)。
另选取18万只健康的采食正常、体重相近、产蛋率一致、产蛋期56周龄(产蛋末期)的海兰褐蛋鸡，平均分为12处理组，每个处理组为一栋鸡舍，每栋鸡舍1.5万只，饲喂添加有实施例或对比例制备的复合微生态制剂的饲料，或者饲喂未添加复合微生态制剂的正常基础饲料，得到的蛋鸡生产性能指标和鸡蛋品质指标数据基本一致。因此，本发明制备的复合微生态制剂具有延缓蛋鸡生产性能下降的作用。
综上所述，本发明制备的复合微生态制剂：(1)提高了蛋鸡的生产性能，料蛋比和日均耗料显著降低；(2)提高了鸡蛋品质，蛋黄明显变大，蛋白高度变小；(3)延缓了蛋鸡生产性能的下降，产蛋期34周龄(产蛋高峰期)和产蛋期56周龄(产蛋末期)的海兰褐蛋鸡具有相近的生产性能，生产的鸡蛋品质相当。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (15)

1.一种复合微生态制剂，其特征在于，所述复合微生态制剂由微生物组合物、保护剂和包被液组成，
其中，所述微生物组合物由植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母组成；
其中，所述植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌BFC1602，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13132，保藏日期为2016年10月21日；
枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌BFC1601，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13131，保藏日期为2016年10月21日；
所述酿酒酵母，命名为酿酒酵母BFC1603，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13133，保藏日期为2016年10月21日；
所述植物乳杆菌BFC1602:枯草芽孢杆菌BFC1601:酿酒酵母BFC1603的比例为(1-8):(1-10):(3-10)；
所述保护剂由如下组分组成：海藻糖1-10％、甘露醇0.5-8％、乳糖1-15％、维生素C0.1-5％、羟甲基纤维素0.5-10％、脱脂奶粉1-10％、甘油1-15％、玉米淀粉10-50％和无菌水20-45％，其中，所述保护剂各组分重量百分比之和为100％；
所述包被液由如下组分组成：淀粉1-20％、脱脂奶粉1-10％、柠檬酸0.1-10％、羧甲基纤维素钠1-10％、麦芽糊精0.1-10％、葡聚糖1-20％和无菌水55-75％，其中，所述包被液各组分重量百分比之和为100％。
2.根据权利要求1所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述植物乳杆菌BFC1602:枯草芽孢杆菌BFC1601:酿酒酵母BFC1603的比例为(1-5):(2-7):(4-8)。
3.根据权利要求2所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述保护剂由如下组分组成：海藻糖2-7％、甘露醇1-5％、乳糖3-10％、维生素C 0.1-1％、羟甲基纤维素1-6％、脱脂奶粉2-6％、甘油3-12％、玉米淀粉20-40％和无菌水35-42％，其中，所述保护剂各组分重量百分比之和为100％。
4.根据权利要求3所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述保护剂由如下组分组成：海藻糖5％、甘露醇3％、乳糖4％、维生素C 0.3％、羟甲基纤维素5％、脱脂奶粉4％、甘油8％、玉米淀粉38％和无菌水32.7％。
5.根据权利要求2所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述包被液由如下组分组成：淀粉5-15％、脱脂奶粉3-8％、柠檬酸0.5-5％、羧甲基纤维素钠1-4％、麦芽糊精0.1-4％、葡聚糖2-13％和无菌水65-70％，其中，所述包被液各组分重量百分比之和为100％。
6.根据权利要求5所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述包被液由如下组分组成：淀粉10％、脱脂奶粉7％、柠檬酸4％、羧甲基纤维素钠3％、麦芽糊精2％、葡聚糖6％和无菌水68％。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述植物乳杆菌BFC1602的活菌数≥1.0×109cfu/g；
所述枯草芽孢杆菌BFC1601的活菌数≥1.0×1010cfu/g；
所述酿酒酵母BFC1603的活菌数≥5.0×109cfu/g。
8.根据权利要求7所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述植物乳杆菌BFC1602的活菌数≥3.0×109cfu/g；
所述枯草芽孢杆菌BFC1601的活菌数≥1.5×1010cfu/g；
所述酿酒酵母BFC1603的活菌数≥7.0×109cfu/g。
9.一种如权利要求1-8中任一项所述的复合微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：分别按配方量配制微生物混合液、保护剂和包被液，将配制的微生物混合液和保护剂混合后，再使用包被液进行包被。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述微生物混合液与所述保护剂的质量比为(1-10):(1-8)；
所述微生物混合液与所述包被液的质量比为(1-5):(1-10)。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述微生物混合液与所述保护剂的质量比为(1-5):(2-6)；
所述微生物混合液与所述包被液的质量比为(1-3):(3-5)。
12.一种如权利要求1-8中任一项所述的复合微生态制剂在制备饲料中的应用。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述的复合微生态制剂用于制备蛋鸡饲料。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述复合微生态制剂的添加量为0.1-5％。
15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述复合微生态制剂的添加量为1％。
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