CN107817280B - 一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法 - Google Patents

一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107817280B
CN107817280B CN201710866544.XA CN201710866544A CN107817280B CN 107817280 B CN107817280 B CN 107817280B CN 201710866544 A CN201710866544 A CN 201710866544A CN 107817280 B CN107817280 B CN 107817280B
Authority
CN
China
Prior art keywords
triglyceride
glutathione
reduced glutathione
solution
glucometer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710866544.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN107817280A (zh
Inventor
盛庆林
许锦琼
郑建斌
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northwest University
Original Assignee
Northwest University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northwest University filed Critical Northwest University
Priority to CN201710866544.XA priority Critical patent/CN107817280B/zh
Publication of CN107817280A publication Critical patent/CN107817280A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107817280B publication Critical patent/CN107817280B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种还原型谷胱甘肽或甘油三酯的检测方法，包括如下步骤：步骤一，分别制备检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯用的前驱液，静置10min～20min；步骤二，使用血糖仪检测前驱液，通过血糖仪响应值分别得到还原型谷胱甘肽和甘油三酯的浓度。本发明探索出了一种检测还原型谷胱甘肽和甘油三酯的新方法，利用常用的血糖仪，即可实现检测，还原型谷胱甘肽溶液的检出范围是0.24mM～1.5mM，甘油三酯的检出范围是0.5mM～2.0mM，利用血糖仪实现了非葡萄糖目标物的检测。

Description

一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法
技术领域
本发明属于电化学技术领域，具体涉及血糖仪检测谷胱甘肽和甘油三酯的方法。
背景技术
近年来，开发便携式和具有成本效益的设备来检测一些疾病标志物是许多研究工作者的研究方向，这种设备可以让大家在家中就能快速方便的检测一些身体指标，尽早发现疾病，这也就方便了居住在偏远山区医疗并不发达地区的人们。为了实现这一目标，研究者们做出了巨大的努力，然而，只有有限的部分可供公众使用。目前，血糖仪是最成功的例子，在各地药店都可以买到，也可以作为智能手机的附件。然而，目前的血糖仪都只是用来检测血糖。因此寻求一种利用血糖仪来检测其他目标物的方法是非常必要的。
还原型谷胱甘肽，在维持细胞内氧化还原平衡中起着至关重要的作用。它存在于几乎身体的每一个细胞，不仅能消除人体自由基，还可以提高人体免疫力。人体内谷胱甘肽浓度的变化与一些疾病有关，如癌症、糖尿病、阿尔茨海默病、心血管疾病和白内障。现有的测定谷胱甘肽方法，包括高效液相色谱、分光光度法和质谱技术。然而，这些方法需要昂贵的设备和复杂的操作。甘油三酯增高与动脉粥样硬化性心血管疾病风险密切相关。有效控制体内甘油三酯浓度，对进一步降低心血管系统风险，进而减少心血管疾病的发病率与致死、致残率具有重要意义。
发明内容
针对现有技术中的缺陷和不足，本发明的目的是提供一种利用血糖仪检测谷胱甘肽或甘油三酯的新方法，该方法克服了血糖仪只能检测葡萄糖的缺点，利用酶级反应实现了谷胱甘肽和甘油三酯方便、快捷的检测，并将其成功用于血液和细胞的检测中。
为达到上述目的，本发明实现过程如下：
一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法，包括如下步骤：
步骤一，分别制备检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯用的前驱液，静置10min～20min；
步骤二，使用血糖仪检测前驱液，通过血糖仪响应值分别得到还原型谷胱甘肽或甘油三酯的浓度。
上述方法可用于血液或者细胞中还原型谷胱甘肽的检测。
上述方法可用于血液中甘油三酯的检测。
其中，具体应用时，血糖仪响应变化值y与还原型谷胱甘肽浓度x之间的关系式为y＝-0.9+69.2x。血糖仪响应值y与血液中甘油三酯浓度x之间的关系式为y＝3.4+29.3x。
具体的，制备检测还原型谷胱甘肽用的前驱液的步骤包括：将NADPH、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、ATP、己糖激酶和过氧化氢混合得到混合溶液，将混合溶液与待检测的还原型谷胱甘肽溶液混合后静置，得到前驱液。
混合溶液中NADPH、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、ATP、己糖激酶和过氧化氢的浓度分别是：8～15mM，35～45U/mL，15～25U/mL，45～55mM，45～55U/mL和5～15mM。
检测时，混合溶液和待检测的还原型谷胱甘肽溶液的体积比优选3～4:1～2。
本发明待检测的还原型谷胱甘肽溶液的检出范围是0.24mM～1.5mM。
具体的，制备检测甘油三酯用的前驱液的步骤包括：将待检测的甘油三酯溶于卵磷脂和三氯甲烷的混合液中，得到混合溶液，在混合溶液中加入脂肪酶、ATP和己糖激酶的混合液进行反应，反应后加入硫酸铵、NAD+和甘油脱氢酶的碳酸缓冲液中，混匀静置后得到前驱液。
其中，卵磷脂在三氯甲烷中的浓度为70～80mg/mL，所述的脂肪酶、ATP和己糖激酶浓度分别为45～55U/mL、45～55mM和45～55U/mL，所述的硫酸铵、NAD+和甘油脱氢酶的浓度分别为28～35mM、10～18mM和45～55U/mL。
本发明待检测的甘油三酯的检出范围是0.5mM～2.0mM。
本发明的有益效果是：
(1)本发明探索出了一种检测还原型谷胱甘肽和甘油三酯的新方法，利用常用的血糖仪，即可实现检测，还原型谷胱甘肽溶液的检出范围是0.24mM～1.5mM，甘油三酯的检出范围是0.5mM～2.0mM，利用血糖仪实现了非葡萄糖目标物的检测。
(2)本发明可以用于血液和细胞中谷胱甘肽的检测，也可用于血液中甘油三酯的检测，尤其适用于家庭医疗中，可方便快速实施检测，操作简单、成本低廉。
附图说明
图1为本发明测定谷胱甘肽的示意图；
图2为本发明NADPH与血糖仪响应信号的线性关系图；
图3为本发明利用血糖仪测定缓冲溶液中谷胱甘肽的结果示意图；
图4为本发明利用血糖仪测定血液中谷胱甘肽的结果示意图；
图5为本发明利用血糖仪测定不同细胞中谷胱甘肽含量的结果图；
图6为本发明测定甘油三酯的示意图；
图7为本发明利用血糖仪测定缓冲溶液中甘油三酯的结果示意图；
图8为本发明利用血糖仪测定血液中甘油三酯的结果示意图。
具体实施方式
本发明中，使用血糖仪检测谷胱甘肽和甘油三酯，是利用了NADPH和NADH可以由血糖仪检测到，而在酶级反应中NADPH和NADH与待测物谷胱甘肽和甘油三酯有定量关系，从而实现了费葡萄糖目标物的检测。
1、谷胱甘肽的测定，包括以下步骤：
(1)在缓冲溶液配制不同浓度的谷胱甘肽；配制NADPH、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、ATP、己糖激酶和过氧化氢的混合溶液；将溶液混合均匀，静置，血糖仪测定结果；
(2)在血液中配制不同浓度的谷胱甘肽，同上述(1)的步骤，测定血液中谷胱甘肽含量；
(3)超声破碎细胞，同上述(1)步骤，测定细胞中谷胱甘肽含量。
2、甘油三酯的测定，包括以下步骤：
(1)甘油三酯通过卵磷脂和三氯甲烷乳化，并在缓冲溶液配制不同浓度的甘油三酯；配制脂肪酶、ATP和己糖激酶混合溶液；将溶液混合均匀，静置反应，取的反应后的溶液加入硫酸铵、NAD+和甘油脱氢酶的碳酸缓冲液中，混匀静置，血糖仪测定结果；
(2)甘油三酯通过卵磷脂和三氯甲烷乳化，并在血液配制不同浓度的甘油三酯，同上述(1)步骤，测定血液中谷胱甘肽含量。
以下通过实施例详细描述本发明的实现过程。
实施例1：
本实施例提供一种还原型谷胱甘肽的检测方法，谷胱甘肽测定的原理示意图见图1。
在HEPES缓冲溶液中配制浓度为2-15mM的NADPH溶液，并用血糖仪分别检测，得到NADPH浓度与血糖仪响应值的线性关系，见图2。
(1)缓冲溶液中还原型谷胱甘肽的检测步骤：
溶液A：将10mM NADPH、40U/mL谷胱甘肽还原酶、20U/mL谷胱甘肽过氧化物酶、50mMATP、50U/mL己糖激酶和10mM过氧化氢混合；将8μL溶液A与2μL HEPES缓冲溶液混合，并用血糖仪检测，结果记为P1；在HEPES缓冲溶液中配制浓度范围为0.1mM～2mM的谷胱甘肽溶液，将8μL溶液A与2μL谷胱甘肽溶液混合，静置10min，用血糖仪分别测定实验结果P2，血糖仪测定结果的变化ΔP＝P1-P2，得到谷胱甘肽浓度与血糖仪测定结果变化的关系，见图3，血糖仪对谷胱甘肽的检测范围为0.24～1.2mM，检出限为0.08mM。
(2)血液中还原型谷胱甘肽的检测步骤：
在血液中配制不同浓度的谷胱甘肽，将8μL溶液A与2μL含有谷胱甘肽的血液混合，静置10min，用血糖仪分别检测，得到血液中谷胱甘肽浓度与血糖仪测定结果变化的关系，见图4，血糖仪响应变化值y与还原型谷胱甘肽浓度x之间的关系式为y＝-0.9+69.2x，血糖仪对血液中谷胱甘肽的检测范围为0.24～1.25mM，检出限为0.08mM。
(3)细胞中还原型谷胱甘肽的检测步骤：
细胞中谷胱甘肽的检测是通过超声分别将小鼠红细胞、小鼠淋巴细胞、正常肺细胞和肺癌细胞破碎，谷胱甘肽被释放出来，将8μL溶液A与2μL经过破碎的细胞溶液混合，静置10min用血糖仪检测，并将测定结果代入图2中得到细胞中谷胱甘肽的测定结果，见图5，关系式同(2)中的结果。
实施例2：
本实施例提供一种甘油三酯的检测方法，甘油三酯测定的原理示意图见图6。
(1)缓冲溶液中甘油三酯的检测步骤：
将甘油三酯溶于6mg卵磷脂和80μL三氯甲烷的混合液中，并用三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液稀释成不同浓度，将得到的甘油三酯溶液与50U/mL脂肪酶、50mM ATP和50U/mL己糖激酶混合液混合，震荡反应，取5μL该反应产物与15μL 33mM硫酸铵、15mM NAD+和50U/mL甘油脱氢酶混匀，静置20min，用血糖仪测定结果，得到甘油三酯浓度与血糖仪响应值的关系，见图7，血糖仪对甘油三酯的检测范围为0.5～1.5mM，检出限为0.17mM。
(2)血液中甘油三酯的检测步骤：
将甘油三酯溶于6mg卵磷脂和80μL三氯甲烷的混合液中，并用血液稀释成不同浓度，将得到的甘油三酯溶液与50U/mL脂肪酶、50mM ATP和50U/mL己糖激酶混合液混合，震荡反应，取5μL该反应产物与15μL 33mM硫酸铵、15mM NAD+和50U/mL甘油脱氢酶混匀，静置20min，用血糖仪测定结果，得到血液中甘油三酯浓度与血糖仪响应值的关系，见图8，血糖仪响应值y与血液中甘油三酯浓度x之间的关系式为y＝3.4+29.3x。血糖仪对血液中甘油三酯的检测范围为0.5～2.0mM，检出限为0.17mM。

Claims (8)

1.一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
步骤一，分别制备检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯用的前驱液，静置；
步骤二，使用血糖仪检测前驱液，通过血糖仪响应值分别得到还原型谷胱甘肽或甘油三酯的浓度；
步骤一中，制备检测还原型谷胱甘肽用的前驱液的步骤包括：将NADPH、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、ATP、己糖激酶和过氧化氢混合得到混合溶液，将混合溶液与待检测的还原型谷胱甘肽溶液按照体积比3～4:1～2混合后静置，得到前驱液；
步骤一中，制备检测甘油三酯用的前驱液的方法包括：将待检测的甘油三酯溶于卵磷脂和三氯甲烷的混合液中，得到混合溶液，在混合溶液中加入脂肪酶、ATP和己糖激酶的混合液进行反应，反应后加入硫酸铵、NAD+和甘油脱氢酶的碳酸缓冲液中，混匀静置后得到前驱液。
2.如权利要求1所述方法，其特征在于：所述混合溶液中NADPH、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、ATP、己糖激酶和过氧化氢的浓度分别是：8～15mM，35～45U/mL，15～25U/mL，45～55mM，45～55U/mL和5～15mM。
3.如权利要求1所述方法，其特征在于：待检测的还原型谷胱甘肽溶液的检出范围是0.24mM～1.5mM，待检测的甘油三酯的检出范围是0.5mM～2.0mM。
4.如权利要求1所述方法，其特征在于：所述脂肪酶、ATP和己糖激酶的混合液中脂肪酶、ATP和己糖激酶浓度分别为45～55U/mL、45～55mM和45～55U/mL，所述的硫酸铵、NAD+和甘油脱氢酶的浓度分别为28～35mM、10～18mM和45～55U/mL。
5.权利要求1所述方法用于血液或者细胞中还原型谷胱甘肽检测的应用。
6.权利要求1所述方法用于血液中甘油三酯检测的应用。
7.如权利要求5所述应用，其特征在于，血糖仪响应变化值y与还原型谷胱甘肽浓度x之间的关系式为y＝-0.9+69.2x。
8.如权利要求6所述应用，其特征在于，血糖仪响应值y与血液中甘油三酯浓度x之间的关系式为y＝3.4+29.3x。
CN201710866544.XA 2017-09-22 2017-09-22 一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法 Active CN107817280B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710866544.XA CN107817280B (zh) 2017-09-22 2017-09-22 一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710866544.XA CN107817280B (zh) 2017-09-22 2017-09-22 一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107817280A CN107817280A (zh) 2018-03-20
CN107817280B true CN107817280B (zh) 2020-01-07

Family

ID=61607943

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710866544.XA Active CN107817280B (zh) 2017-09-22 2017-09-22 一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107817280B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111735811A (zh) * 2020-08-12 2020-10-02 民康医疗科技（天津）有限公司 一种甘油三酯的检测试剂、检测试纸及试纸制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101710094A (zh) * 2009-10-12 2010-05-19 张祥成 一种自动过滤红白血球的生物传感器芯片/试条
CN102192938A (zh) * 2010-03-19 2011-09-21 黄炳照 均匀的复合式触媒/酶结构及其制备方法与应用
WO2012064645A2 (en) * 2010-11-12 2012-05-18 Bayer Healthcare Llc Temperature sensing analyte sensors, systems, and methods of manufacturing and using same
CN103305590A (zh) * 2004-12-13 2013-09-18 拜尔保健有限公司 用于测量生物液体中的分析物的自我限定大小的组合物和检验设备
CN106353387A (zh) * 2016-08-24 2017-01-25 三诺生物传感股份有限公司 一种电化学测试条及同时检测多种待测物的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103305590A (zh) * 2004-12-13 2013-09-18 拜尔保健有限公司 用于测量生物液体中的分析物的自我限定大小的组合物和检验设备
CN101710094A (zh) * 2009-10-12 2010-05-19 张祥成 一种自动过滤红白血球的生物传感器芯片/试条
CN102192938A (zh) * 2010-03-19 2011-09-21 黄炳照 均匀的复合式触媒/酶结构及其制备方法与应用
WO2012064645A2 (en) * 2010-11-12 2012-05-18 Bayer Healthcare Llc Temperature sensing analyte sensors, systems, and methods of manufacturing and using same
CN106353387A (zh) * 2016-08-24 2017-01-25 三诺生物传感股份有限公司 一种电化学测试条及同时检测多种待测物的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107817280A (zh) 2018-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tasca et al. A third generation glucose biosensor based on cellobiose dehydrogenase from Corynascus thermophilus and single-walled carbon nanotubes
ATE364842T1 (de) Invasives verfahren zur in vivo analytvermessung
CN107045010B (zh) 基于二硫化锡-介孔氮化碳的光电化学传感器的制备方法
Wu et al. Chemiluminescence biosensor system for lactic acid using natural animal tissue as recognition element
CN107817280B (zh) 一种检测还原型谷胱甘肽或甘油三酯的方法
Lin et al. Immobilized Fullerene C60‐Enzyme‐Based Electrochemical Glucose Sensor
Apetrei et al. Sensitivity enhancement for microbial biosensors through cell Self-Coating with polypyrrole
Narang et al. Fabrication of an amperometric triglyceride biosensor based on PVC membrane
CN109254063A (zh) 一种负载型普鲁士蓝电化学生物传感器标记物的制备方法
Erecińska et al. In vitro studies on yeast cytochrome c peroxidase and its possible function in the electron transfer and energy coupling reactions
AU2018100445A4 (en) A method for dopamine detection with GO-PtCu nano-enzyme
Lai et al. A dry chemistry-based electrochemiluminescence device for point-of-care testing of alanine transaminase
Derina et al. Voltammetric determination of cholesterol in human blood serum
CN103033623A (zh) 人m2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒及制备方法
CN104458607A (zh) 一种快速检测微生物胞外呼吸活性的方法
CN104807995B (zh) 一种灵敏度高的连续检测法gldh检测试剂
Chauhan et al. Covalent immobilization of uricase inside a plastic vial for uric acid determination in serum and urine
Liang et al. Silicon-based field-effect glucose biosensor based on reduced graphene oxide-carboxymethyl chitosan-platinum nanocomposite material modified LAPS
CN111269957A (zh) 一种基于比色法检测生物样品中nad+含量的方法及其应用
CN107764877B (zh) 一种高灵敏的血清总胆汁酸电化学检测方法
Ly et al. Human-urine diabetes assay and in vivo rat bladder assay using a fluorine-doped carbon nanotube catheter sensor
CN101672814A (zh) 一种电化学受体生物传感器及其应用
Wang et al. Determination of lactate dehydrogenase in human erythrocytes by capillary electrophoresis with electrochemical detection
Ma et al. Smart enzyme-free amplification dual-mode self-powered platform designed on two-dimensional networked graphdiyne and DNA nanorods for ultra-sensitive detection of breast cancer biomarkers
CN105675677B (zh) 一种基于螺环材料的胆固醇生物传感器的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant