CN107753659B - 一种沩山毛尖茶树提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于食品生产与应用技术领域,尤其涉及一种沩山毛尖茶树提取物及其制备方法与应用。本发明沩山毛尖茶树提取物包括沩山毛尖茶树茎、根提取物,其制备方法包括以下步骤:S1取沩山毛尖茶树茎、根,洗净后晾干;S2采用热水浸提法分别对步骤S1所得茶树茎、根原料进行提取,提取次数为2次,得合并液;S3将合并液进行浓缩,预冻,得完全冰冻的浓缩提取物液;S4将预冻的浓缩提取物液冻干。本发明提供的沩山毛尖茶树茎、根提取物能延长氧化胁迫条件下秀丽隐杆线虫的存活时间,促进体内活性氧自由基的清除,降低体内活性氧自由基的水平,还能降低老年痴呆疾病型秀丽隐杆线虫的瘫痪率,具有抗氧化和神经保护作用。

Description

一种沩山毛尖茶树提取物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于食品生产与应用技术领域,尤其涉及一种沩山毛尖茶树提取物及其制备方法与应用。
背景技术
茶树是山茶科植物,CamelliasinensisL.,我国最早的茶专著唐·陆羽《茶经》开篇就是“茶之源”,描述了茶的产地和形态,中国是世界上最早发现茶树和利用茶树的国家,茶叶产地众多。许多有关茶或药茶的读物中,经常引一段话“神农尝百草,一日遇七十毒,得茶而解之”,我国宋代,具有保健治疗作用的“茶汤”曾盛极一时,帮助人们调整脾胃功能,预防疾病。现代对茶的研究集中于从茶叶干成品中提取的茶多酚、多糖、咖啡因、茶氨酸和糖蛋白等用于含量、结构及功能研究,发现茶叶具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、抗辐射、降血糖及抗病毒等多种药理学活性。茶是一种药用价值很高的植物,1964年6月,美国颁布新的药品法以来第一个植物药VeregenTM,就是从绿茶中提取的儿茶素类和其他绿茶组分的混合物。
目前,市场上开发的茶产品种类繁多,其中对绿茶提取物的抗氧化活性功能的应用和研究最多。茶多酚是绿茶中的主要抗氧化活性成分,茶多酚在氧化还原反应中其邻苯二酚结构可有效地捕获超氧阴离子,形成较为稳定的酚氧自由基,减轻DNA的氧化损伤,保护生物体免受自由基的氧化损伤。此外,茶叶多酚还能够通过血脑屏障,改善大脑功能,对抗有毒物质引起的神经毒性和神经退行性病变,譬如阿尔兹海默症,具有明显的神经保护作用。
茶树茎、根成分与叶相似,而含量不同,叶、枝、根都含多酚化合物、多糖与咖啡碱等。目前,对茶树茎、根提取物的相关报道较少,且已有的对茶树根水煎剂的研究集中于研究抗炎镇痛、降尿酸、抗痛风、治疗高脂血症、防治实验性动脉粥样硬化等功效。但是,茶树茎、根部位提取物的体内抗氧化和神经保护方面的生物活性研究仍鲜有报道。因此,对具有体内抗氧化、神经保护作用的茶树茎、根的制备和研究,对其在食品开发及对自由基疾病、神经退行性疾病的预防治疗上的应用有重大意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种沩山毛尖茶树提取物及其制备方法。本发明提供的沩山毛尖茶树提取物能够延长氧化胁迫条件下秀丽隐杆线虫的存活时间,促进体内活性氧自由基的清除,降低体内活性氧自由基(ROS)的水平,同时,还能降低老年痴呆疾病型秀丽隐杆线虫的瘫痪率,具有体内抗氧化和神经保护作用。
本发明的技术方案是:
一种沩山毛尖茶树提取物,包括沩山毛尖茶树茎、根提取物,所述沩山毛尖茶树提取物的制备方法包括以下步骤:
S1取沩山毛尖茶树茎、根,洗净后晾干,得茶树茎、根原料;
S2采用热水浸提法分别对步骤S1所得茶树茎、根原料进行提取,分两次浸提,过滤后收集滤液,合并两次滤液,并搅拌均匀,得合并液;
S3将步骤S2所得合并液进行浓缩,得浓缩提取物液,将上述浓缩提取物液装入冷冻管中,封口,置于-80℃冰箱预冻至浓缩提取物液完全结冰,得完全冰冻的浓缩提取物液;
S4将步骤S3所得完全冰冻的浓缩提取物液用封口膜封住冷冻管,并用针头密集扎出细小的洞后,置于-70℃真空冷冻干燥机中冻干成粉末,4℃储存。
进一步地,所述步骤S2第一次浸提按照料液比1∶25-32的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮25-35min,过滤后收集滤液,第二次浸提按照料液比1∶18-22的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮17-24min。
更进一步地,所述步骤S2第一次浸提按照料液比1∶30的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮30min,过滤后收集滤液,第二次浸提按照料液比1∶20的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮20min。
进一步地,所述步骤S2所述过滤为经过25μm的滤膜精密过滤。
进一步地,所述步骤S3浓缩温度为60℃。
本发明的另一目的在于提供上述沩山毛尖茶树提取物在制备防治老年性痴呆症的药物中的应用。
与现有技术相比,本发明采用了以上技术方案,具有如下的优点和有益效果:
(1)在整体动物水平上以氧化应激模型进行试验。试验结果表明,本发明提供的沩山毛尖茶树茎、根提取物可以延长氧化胁迫条件下秀丽隐杆线虫的生存时间,提高其存活率,能促进体内活性氧自由基(ROS)的清除,降低体内活性氧自由基(ROS)水平,具有体内抗氧化作用。
(2)本发明提供的沩山毛尖茶树茎、根提物能降低老年痴呆疾病型秀丽隐杆线虫的瘫痪率,具有体内神经保护作用。
(3)本发明提供的沩山毛尖茶树茎、根提取物的制备方法具有周期短,工艺简单,安全无毒,稳定高效等特点,适合工业化生产。
附图说明
图1为EGCG对DPPH自由基的清除率的影响;
图2为沩山毛尖茶树茎、根提取物对DPPH自由基的清除率的影响;
图3为沩山毛尖茶树茎提取物对氧化胁迫条件下秀丽隐杆线虫存活率的影响;
图4为沩山毛尖茶树根提取物对氧化胁迫条件下秀丽隐杆线虫存活率的影响;
图5为沩山毛尖茶树茎、根提取物对温和氧化胁迫下秀丽隐杆线虫体内ROS水平的影响;
图6为沩山毛尖茶树茎、根提取物对老年痴呆疾病型秀丽隐杆线虫CL4176瘫痪率的影响。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明,但这并非是对本发明的限制,本领域技术人员根据本发明的基本思想,可以做出各种修改或改进,但是只要不脱离本发明的基本思想,均在本发明的范围之内。
本发明实施例中,所述沩山毛尖茶树茎、根来自湖南宁乡。
本发明实施例中所使用的试验方法,如无特殊说明,均为常规方法;所使用的材料、试剂,如无特殊说明,均为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1、一种沩山毛尖茶树提取物
所述沩山毛尖茶树提取物包括沩山毛尖茶树茎、根提取物,所述沩山毛尖提取物的制备方法包括以下步骤:
S1取沩山毛尖茶树茎、根,洗净后晾干,得茶树茎、根原料;
S2采用热水浸提法分别对步骤S1所得茶树茎、根原料进行提取,分两次浸提,第一次浸提按照料液比1∶25的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮25min,过滤后收集滤液,第二次浸提按照料液比1∶18的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮17min,过滤后收集滤液,合并两次滤液,并搅拌均匀,得合并液;
S3将步骤S2所得合并液进行浓缩,浓缩温度为60℃,得浓缩提取物液,将上述浓缩提取物液装入冷冻管中,封口,置于-80℃冰箱预冻至浓缩提取物液完全结冰,得完全冰冻的浓缩提取物液;
S4将步骤S3所得完全冰冻的浓缩提取物液用封口膜封住冷冻管,并用针头密集扎出细小的洞后,置于-70℃真空冷冻干燥机中冻干成粉末,4℃储存。
所述步骤S2所述过滤为经过25μm的滤膜精密过滤。
实施例2、一种沩山毛尖茶树提取物
所述沩山毛尖茶树提取物包括沩山毛尖茶树茎、根提取物,所述沩山毛尖茶树提取物的制备方法包括以下步骤:
S1取沩山毛尖茶树茎、根,洗净后晾干,得茶树茎、根原料;
S2采用热水浸提法分别对步骤S1所得茶树茎、根原料进行提取,分两次浸提,第一次浸提按照料液比1∶32的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮35min,过滤后收集滤液,第二次浸提按照料液比1∶22的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮24min,过滤后收集滤液,合并两次滤液,并搅拌均匀,得合并液;
S3将步骤S2所得合并液进行浓缩,浓缩温度为60℃,得浓缩提取物液,将上述浓缩提取物液装入冷冻管中,并用保鲜膜封口,置于-80℃冰箱预冻至浓缩提取物液完全结冰,得完全冰冻的浓缩提取物液;
S4将步骤S3所得完全冰冻的浓缩提取物液用封口膜封住冷冻管,并用针头密集扎出细小的洞后,置于-70℃真空冷冻干燥机中冻干成粉末,4℃储存。
所述步骤S2所述过滤为经过25μm的滤膜精密过滤。
实施例3、一种沩山毛尖茶树提取物
所述沩山毛尖茶树提取物包括沩山毛尖茶树茎、根提取物,所述沩山毛尖茶树提取物的制备方法包括以下步骤:
S1取沩山毛尖茶树茎、根,洗净后晾干,得茶树茎、根原料;
S2采用热水浸提法分别对步骤S1所得茶树茎、根原料进行提取,分两次浸提,第一次浸提按照料液比1∶30的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮30min,过滤后收集滤液,第二次浸提按照料液比1∶20的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮20min,过滤后收集滤液,合并两次滤液,并搅拌均匀,得合并液;
S3将步骤S2所得合并液进行浓缩,浓缩温度为60℃,得浓缩提取物液,将上述浓缩提取物液装入冷冻管中,封口,置于-80℃冰箱预冻至浓缩提取物液完全结冰,得完全冰冻的浓缩提取物液;
S4将步骤S3所得完全冰冻的浓缩提取物液用封口膜封住冷冻管,并用针头密集扎出细小的洞后,置于-70℃真空冷冻干燥机中冻干成粉末,4℃储存。
所述步骤S2所述过滤为经过25μm的滤膜精密过滤。
试验例一、沩山毛尖茶树提取物中的儿茶素质量分数测定
1、试验材料:本发明实施例3制备的沩山毛尖茶树茎、根提取物。
2、试验方法:
采用香草醛-浓盐酸显色法测定儿茶素的含量,室温下儿茶素的羟基与香草醛的醛基反应生成浅红色的缩醛,且颜色深浅与儿茶素含量成正相关,利用反应产物的可见吸收特征对儿茶素含量进行测定。步骤如下:
(1)配制1%盐酸香草醛溶液,现配现用,遮光;配制母液浓度为0.5mg/mL的儿茶素标准溶液;分别取1、2、3、4、5、10、15、20、25、30μL儿茶素标准溶液均加入100μL一级水,再用1%盐酸香草醛溶液补至500μL。暗处反应30min,各取100μL于96孔板,酶标仪测量492nm吸光值,制作标准曲线;
(2)样品测定:将本发明实施例3制备的沩山毛尖茶树茎、根提取物分别配制成浓度为1mg/mL的样品液,用0.45μm滤膜过滤,取30μL样品液加入100μL一级水,用1%盐酸香草醛补至500μL,暗处反应30min,取100μL于96孔板,酶标仪测量492nm吸光值,由标准曲线公式,计算儿茶素的含量。
3、试验结果:试验结果如表1所示。
表1:沩山毛尖茶树茎、根提取物中儿茶素的质量分数
材料 沩山毛尖茶树茎提取物 沩山毛尖茶树根提取物
质量分数(%) 1.4892 0.448
由表1可以看出,本发明制得的沩山毛尖茶树茎提取物中儿茶素的质量分数为1.4892%,沩山毛尖茶树根提取物中儿茶素的质量分数为0.448%。
试验例二、沩山毛尖茶树提取物对DPPH自由基的清除率的影响
1、试验材料:本发明实施例3制备的沩山毛尖茶树茎、根提取物。
2、试验方法:
(1)EGCG阳性对照对DPPH自由基清除率的影响
①DPPH醇溶液的配制
取1mg DPPH固体,溶解于42.3mL的95%乙醇中,配成浓度为6×10-5mol/L的DPPH醇溶液。
②EGCG溶液的配制
取1mgEGCG固体,溶解于43.6mL的95%乙醇中,配成浓度为5×10-5moL/L的EGCG溶液。
③DPPH自由基清除率的测定
分别吸取10份400μLDPPH醇溶液,分别加入10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL、80μL、90μL、100μL的EGCG溶液,用95%乙醇定容至500μL,置于暗处反应44min。相同体积EGCG溶液用95%乙醇溶液定容至500μL。取400μLDPPH醇溶液,用95%乙醇定容至500μL。各取100μL混合液加至96孔板中,每个浓度设3个复孔。在酶标仪以492nm的波长分别测定不同浓度EGCG+DPPH醇溶液吸光度(A1),不同浓度EGCG+95%乙醇吸光度(A2),95%乙醇+DPPH醇溶液吸光度(A0)。按下式计算清除率:DPPH自由基清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100%。
(2)沩山毛尖茶树茎、根提取物的DPPH自由基清除实验
①DPPH醇溶液的配制
取1mg DPPH固体,溶解于42.3mL的95%乙醇中,配成浓度为6×10-5mol/L的DPPH醇溶液。
②沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液的配制
分别称取1.5mg沩山毛尖茶树茎、根提取物,溶解于10mL一级水中,分别配制成0.15mg/mL的沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液。
③DPPH自由基清除率的测定
分别吸取8份400μLDPPH醇溶液,分别加入1μL、10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液,用95%乙醇定容至500μL,置于暗处反应44min。相同体积沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液用95%乙醇溶液定容至500μL。取400μLDPPH醇溶液,用95%乙醇定容至500μL。各取100μL混合液加至96孔板中,每个浓度3个复孔。在酶标仪以492nm的波长分别测定不同浓度沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液+DPPH醇溶液吸光度(A1),不同浓度沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液+95%乙醇吸光度(A2),95%乙醇+DPPH醇溶液吸光度(A0)。按下式计算清除率:DPPH自由基清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100%。
3、试验结果:
EGCG阳性对照对DPPH自由基清除率的影响试验结果如图1所示,沩山毛尖茶树茎、根提取物对DPPH自由基的清除率的影响如图2所示。
通过将图1与图2的结果进行对比可以发现,本发明制备的沩山毛尖茶树茎、根提取物均具有清除DPPH自由基的能力。
试验例三、沩山毛尖茶树提取物对氧化胁迫条件下秀丽隐杆线虫存活率的影响
1、试验材料:本发明实施例3制备的沩山毛尖茶树茎、根提取物。
2、试验对象:成虫初期的野生型秀丽隐杆线虫(N2),由美国明尼苏达大学秀丽隐杆线虫遗传信息保藏中心提供。
3、试验方法:
百草枯,学名甲基紫精,是一种强氧化剂,可诱导生物体内产生大量的ROS,常被用作秀丽线虫氧化损伤造模的化学试剂。
1M CaCl2溶液的配制:称取11.1g CaCl2置于试剂瓶中,加入90mL去离子水,完全溶解后定容至100mL,灭菌30min,冷却后置室温备用。
5.0mg/mL胆固醇乙醇溶液的配制:称取0.5g胆固醇置于试剂瓶中,加入90mL无水乙醇,充分振摇使其完全溶解,用无水乙醇定容至100mL,密封置于4℃放置备用。
1M MgSO4溶液的配制:称取24.6g MgSO4·7H2O置于试剂瓶中,加入900mL去离子水,完全溶解后定容至100mL,灭菌30min,冷却后置室温备用。
1M柠檬酸钾溶液(pH=6.0)的配制:称取20.0g柠檬酸和310.8g柠檬酸钾置于试剂瓶中,加入900mL去离子水,完全溶解后定容至1L,灭菌30min,冷却后置室温备用。
微量元素溶液的配制:称取1.860g EDTA二钠,0.690g FeSO4·7H2O,0.200gMnCl2·4H2O,0.290g ZnSO4·7H2O和CuSO4·5H2O置于试剂瓶中,加入900mL去离子水,完全溶解后定容至1L,灭菌30min,冷却后置室温备用。
S Basal溶液的配制:称取5.8gNaCl,1.3g K2HPO4·3H2O和6.0g KH2PO4置于试剂瓶中,加入750mL去离子水,完全溶解后定容至1L,灭菌30min,冷却至40~50℃时使用。
S Medium溶液的配制:取1L上述灭菌后的S Basal溶液,逐滴加入1mL5.0mg/mL胆固醇乙醇溶液,边加变振摇,使其充分溶解(溶液出现无色透明转为微乳白透明,无明显沉淀),然后依次加入3mL 1MCaCl2溶液,3mL 1M MgSO4,10mL 1M柠檬酸钾溶液(pH=6.0)和10mL微量元素溶液,常温放置备用。
分别取实施例3制得的沩山毛尖茶树茎、根提取物,按终浓度0.1mg/mL、0.5mg/mL加入到成虫初期的野生型秀丽隐杆线虫(N2)中,空白对照组加入等体积的S Medium溶液,置于20℃培养24h后,加入终浓度为50mM的百草枯进行氧化胁迫造模,然后每隔12h统计秀丽隐杆线虫存活的比例,直至其全部死亡。秀丽隐杆线虫的存活率以生存曲线表示。
4、试验结果:
试验结果如图3和图4所示。
图3和图4结果显示,沩山毛尖茶树茎、根提取物在一定浓度范围内能够延长氧化胁迫条件下秀丽隐杆线虫的生存时间,提高其存活率。试验结果表明,本发明提供的沩山毛尖茶树茎、根提取物能够缓解百草枯造成的氧化应激现象,具有抗氧化作用。
试验例四、沩山毛尖茶树提取物对秀丽隐杆线虫体内ROS水平的影响
1、试验材料:本发明实施例3制备的沩山毛尖茶树茎、根提取物。
2、试验方法:
以2mM低剂量的百草枯溶液诱导产生温和的氧化胁迫条件,导致秀丽线虫体内ROS水平升高,且在若干天之内不至于影响其存活状态。具体方案如下:
(1)取24孔培养板,设试验组和对照组,每组设两个孔,每孔终体积为1mL。试验组为同步化后的L4期野生型秀丽隐杆线虫(N2)和实施例3制得的终浓度为0.4mg/mL的沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液。阳性药物组为等体积终浓度为0.1mg/mL EGCG溶液和同步化后的L4期野生型秀丽隐杆线虫(N2)。对照组为等体积的S Medium溶液和同步化后的L4期野生型秀丽隐杆线虫(N2);
(2)将试验组、阳性药物组和对照组置于20℃培养24h后,每孔加入百草枯至终浓度为2mM,继续培养48h后,收集各组秀丽隐杆线虫,将其分别在冰浴条件下匀浆,将匀浆液在4℃、10000g条件下离心5min,收集上清液;
(3)向步骤(2)所得上清液中加入终浓度为50μM的DCFH-DA探针溶液,利用荧光酶标仪在485nm激发波长和538nm发射波长下检测荧光强度,室温检测2h,每10min测一次。同时,采用BCA蛋白分析试剂盒(Thermo公司)检测秀丽线虫蛋白质含量,ROS值为反应两小时后的荧光强度×103/蛋白质质量。试验组和对照组每组线虫的样本量为1000~1200条。
3、试验结果:
喂养沩山毛尖茶树茎、根提取物后秀丽线虫单位蛋白中的ROS含量如表2所示,沩山毛尖茶树茎、根提取物对温和氧化胁迫下秀丽隐杆线虫体内ROS水平的影响试验结果如图5所示。
表2:喂养沩山毛尖茶树茎、根提取物后秀丽线虫单位蛋白中的ROS含量
Figure GDA0002672418420000091
Figure GDA0002672418420000101
表2以及图5的结果显示,与对照组相比,经0.4mg/mL沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液饲喂后,秀丽隐杆线虫均出现体内ROS水平下降。试验结果表明,本发明提供的沩山毛尖茶树茎、根提取物能够促进体内ROS的清除,降低体内ROS水平,具有抗氧化能力。
试验例五、沩山毛尖茶提取物对老年痴呆疾病型秀丽隐杆线虫瘫痪率的影响
1、试验材料:本发明实施例3制备的沩山毛尖茶树茎、根提取物。
2、试验方法:
CL4176是一种转Aβ基因线虫,能在肌肉部位产生Aβ淀粉样沉积以及具有麻痹表现,经过升温诱导可以使Aβ大量表达,最终造成线虫瘫痪。
取实施例3制得的沩山毛尖茶树茎、根提取物,设试验组和对照组,同步化的CL4176线虫于15℃培养箱中孵育30h以后,收集秀丽线虫于预先准备的NGM培养皿中,试验组和对照组各设置3块板,每板虫量30~40条。试验组分别加入终浓度为0.4mg/mL的沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液80~100μL,继续于15℃培养18h,将孔板置于23℃培养箱,以诱导CL4176秀丽线虫体内的Aβ聚集,升温28~30h之后,开始统计瘫痪数目(瘫痪的表现为:用发丝触碰线虫尾部不动则为瘫痪),每隔2h统计一次,总共统计5~6次。瘫痪行为学实验每组线虫的样本量为120~200条。
3、试验结果:
试验结果如图6所示。
图6结果显示,与对照组相比,试验组经0.4mg/mL沩山毛尖茶树茎、根提取物溶液饲喂CL4176秀丽线虫后,相比对照组其瘫痪率降低。试验结果表明,本发明提供的沩山毛尖茶树茎、根提取物能够对老年痴呆疾病型秀丽线虫的神经元损伤具有保护作用。

Claims (3)

1.一种沩山毛尖茶树提取物,包括沩山毛尖茶树茎、根提取物,其特征在于,所述沩山毛尖茶树提取物的制备方法包括以下步骤:
S1取沩山毛尖茶树茎、根,洗净后晾干,得茶树茎、根原料;
S2采用热水浸提法分别对步骤S1所得茶树茎、根原料进行提取,分两次浸提,过滤后收集滤液,合并两次滤液,并搅拌均匀,得合并液;
S3将步骤S2所得合并液进行浓缩,得浓缩提取物液,将上述浓缩提取物液装入冷冻管中,封口,置于-80℃冰箱预冻至浓缩提取物液完全结冰,得完全冰冻的浓缩提取物液;
S4将步骤S3所得完全冰冻的浓缩提取物液用封口膜封住冷冻管,并用针头密集扎出细小的洞后,置于-70℃真空冷冻干燥机中冻干成粉末,4℃储存;
所述步骤S2第一次浸提按照料液比1∶25-32的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮25-35min,过滤后收集滤液,第二次浸提按照料液比1∶18-22的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮17-24min;
所述步骤S2所述过滤为经过25μm的滤膜精密过滤;
所述步骤S3浓缩温度为60℃。
2.如权利要求1所述的沩山毛尖茶树提取物,其特征在于,所述步骤S2第一次浸提按照料液比1∶30的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮30min,过滤后收集滤液,第二次浸提按照料液比1∶20的重量比加入一级水,至水沸腾后继续煎煮20min。
3.如权利要求1所述的沩山毛尖茶树提取物在制备防治老年性痴呆症的药物中的应用。
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