CN107727770A - 一种高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于海洋食品检测领域，特别涉及一种高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法。本发明所述的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，其特征在于，萃取剂为含有乙酸的乙腈水溶液，其中乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为：乙腈∶水＝8∶2，乙酸的含量为乙腈水溶液体积的1％。该方法融合了QuEChERS法和液相微萃取新方法，适用于海产品抗生素简便、快速、有效的检测。

Description

一种高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法

技术领域

本发明属于海洋食品检测领域，特别涉及一种高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法。

背景技术

抗生素广泛应用于治疗动物的多种细菌性感染疾病。抗生素类药物主要是通过注射、口服、饮水等方式进入动物体内。有些抗生素类还被作为饲料添加剂，用来预防动物细菌性疾病和促进动物生长而被长期使用。如土霉素添加剂、金霉素添加剂等经口腔进入动物体内，短时间不能完全排出，极易在体内蓄积，造成肉类食品中的抗生素药物残留。

由于抗生素的广泛使用，使得细菌的耐药性不断增加，食用含抗生素残留的肉类食品后，人体内细菌的耐药性增加。同时，动物体内的耐药性菌株的耐药性也可能转移到人体细菌中，从而对人类产生极大的危害。因此，对肉类食品进行抗生素残留检测对保证食品安全具有重要意义。

海产品的高脂肪、高蛋白特性以及待测目标物的两性性质使得常规的检测方法结果的准确度不高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简便、快速有效的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，解决常规的检测方法结果的准确度不高的技术问题为解决以上技术问题，本发明采用的技术方案是：

本发明所述的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，萃取剂为含有乙酸的乙腈水溶液，其中乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为：乙腈∶水＝8∶2，乙酸的含量为乙腈水溶液体积的1％。

优选的，采用的微萃取剂为体积分数为1％的乙酸水溶液。

优选的，液相色谱采用的流动相为：流动相A：0.5％乙酸水溶液，流动相B：乙腈。

优选的，流动相的流速：0.7ml/min；梯度洗脱条件：0-18min，90％-82％A；18-23min，82％-65％A；23-26min，65％A；26-27min，65％-90％A；27-35min，90％A。

优选的，液相色谱的紫外检测波长λ＝280nm。

优选的，检出限为0.0218～0.0902ug/g，定量限为0.0725-0.3007ug/g。

优选的，步骤包括分析溶液的制备，具体为：

准确称取均质后的鱼肉组织于离心管中，向离心管中加入含有乙酸的乙腈水溶液、硫酸镁、氯化钠，充分摇匀后离心，取萃取液，氮吹浓缩，得到浓缩后的萃取液；

将乙酸水溶液作为微萃取剂，与上述浓缩后的萃取液混合后，加入环己烷，混匀离心，吸取水相沉积相，用含有乙酸的乙腈水溶液等体积稀释后，作为分析溶液。

优选的，步骤包括检测样品制备，具体为：

1.0g均质后的鱼肉组织样品于5ml聚四氟乙烯离心管中，向离心管中加入1ml含有体积百分数为1％乙酸的乙腈水溶液、0.4g硫酸镁、0.1g氯化钠，充分摇匀后离心，取萃取液氮吹浓缩至200ul，得到浓缩后的萃取液；

将50ul的体积百分数为1％的乙酸水溶液作为微萃取剂，与浓缩后的萃取液混合后，加入3ml环己烷，混匀离心，吸取水相沉积相，用体积百分数为1％乙酸的乙腈水溶液等体积稀释后，作为分析溶液；

其中，乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为乙腈∶水＝8∶2。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

针对海产品的高脂肪、高蛋白特性以及待测目标物的两性性质，建立QuEChERS-反相-分散液液微萃取新方法，QuEChERS法能够快速有效第从海产品中萃取目标物，同时去除蛋白质；反相-分散液液微萃取法采用非极性体系，以水溶液为微萃取剂，以萃取剂为分散剂，能够对萃取液中目标物进行快速的分离富集，同时除去萃取液中脂肪，该方法融合了QuEChERS法和液相微萃取新方法，适用于海产品抗生素简便、快速、有效的检测。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明进行详细阐述。

实施例1

1)标准溶液的配制

准确称取磺胺嘧啶1.8mg、磺胺甲基嘧啶1.9mg、氧氟沙星2.5mg、四环素2.5mg、恩诺沙星1.9mg、强力霉素2.3mg、磺胺甲噁唑2.5mg，分别置于10ml棕色容量瓶，用甲醇使其完全溶解并定容，制得抗生素类药物的储备标准溶液。各抗生素药品的标准储备液浓度分别为：磺胺嘧啶180ug/ml、磺胺甲基嘧啶190ug/ml、氧氟沙星250ug/ml、四环素250ug/ml、恩诺沙星190ug/ml、强力霉素230ug/ml、磺胺甲噁唑250ug/ml。用封口膜密封，存在冰箱4℃冷藏，避光保存。

2)海鱼样品前处理

将新鲜海鱼去除头、尾、内脏、鱼骨、鱼皮，取可食用肌肉组织置于粉碎机，均质至泥状。

3)检测样品制备

准确称取1.0g均质后的鱼肉组织样品于5ml聚四氟乙烯离心管中，向离心管中加入1ml含有1％乙酸的乙腈：水＝8:2(V：V)混合溶液、0.4g硫酸镁、0.1g氯化钠。充分摇匀后离心，取萃取液氮吹浓缩至200ul，待用。

将50ul的1％乙酸水溶液作为微萃取剂，与上述萃取液(分散剂)混合后，加入3ml环己烷，混匀离心，吸取水相沉积相，用初始流动相等体积稀释后，作为分析溶液。取20ul分析溶液注入高效液相色谱仪进行分析。

4)高效液相色谱法条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(5um,150mm×4.6mm)；流动相A：0.5％乙酸水溶液，流动相B：乙腈；流速：0.7ml/min；梯度洗脱条件：0-18min，90％-82％A；18-23min，82％-65％A；23-26min，65％A；26-27min，65％-90％A；27-35min，90％A；紫外检测波长λ＝280nm。

5)检出限、定量限

在优化条件下，配制一系列不同浓度的加标样品，根据色谱图上的峰面积与鱼肉样品的加标浓度分别绘制6种抗生素药物的工作曲线，通过工作曲线求得方法的检出限(LOD)在0.0218～0.0902ug/g范围内。定量限(LOQ)在0.0725-0.3007ug/g范围内。

6)回收率

对5种鱼肉样品进行两种不同浓度水平的加标分析，在最优实验条件下，5种鱼肉样品中目标物的回收率在50-108％之间。

Claims (8)

1.一种高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，其特征在于，萃取剂为含有乙酸的乙腈水溶液，其中乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为：乙腈∶水＝8∶2，乙酸的含量为乙腈水溶液体积的1％。

2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，其特征在于，采用的微萃取剂为体积分数为1％的乙酸水溶液。

3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，其特征在于，液相色谱采用的流动相为：流动相A：0.5％乙酸水溶液，流动相B：乙腈。

4.根据权利要求3所述的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，其特征在于，流动相的流速：0.7ml/min；梯度洗脱条件：0-18min，90％-82％A；18-23min，82％-65％A；23-26min，65％A；26-27min，65％-90％A；27-35min，90％A。

5.根据权利要求4所述的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，其特征在于，液相色谱的紫外检测波长λ＝280nm。

6.根据权利要求4所述的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，其特征在于，检出限为0.0218～0.0902ug/g，定量限为0.0725-0.3007ug/g。

7.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，其特征在于，步骤包括分析溶液的制备，具体为：

准确称取均质后的鱼肉组织于离心管中，向离心管中加入含有乙酸的乙腈水溶液、硫酸镁、氯化钠，充分摇匀后离心，取萃取液，氮吹浓缩，得到浓缩后的萃取液；

将乙酸水溶液作为微萃取剂，与上述浓缩后的萃取液混合后，加入环己烷，混匀离心，吸取水相沉积相，用含有乙酸的乙腈水溶液等体积稀释后，作为分析溶液。

8.根据权利要求7所述的高效液相色谱法测定海产品中抗生素类药物的方法，其特征在于，步骤包括检测样品制备，具体为：

1.0g均质后的鱼肉组织样品于5ml聚四氟乙烯离心管中，向离心管中加入1ml含有体积百分数为1％乙酸的乙腈水溶液、0.4g硫酸镁、0.1g氯化钠，充分摇匀后离心，取萃取液氮吹浓缩至200ul，得到浓缩后的萃取液；

将50ul的体积百分数为1％的乙酸水溶液作为微萃取剂，与浓缩后的萃取液混合后，加入3ml环己烷，混匀离心，吸取水相沉积相，用体积百分数为1％乙酸的乙腈水溶液等体积稀释后，作为分析溶液；

其中，乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为乙腈∶水＝8∶2。