CN107714633A - 一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物及其在护肤品中的应用 - Google Patents

Abstract

一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物及其在护肤品中的应用，本发明的祛皱组合物的活性物组分包含有荷花干细胞提取物、螺旋藻小分子多肽、积雪草提取物。活性物组分中荷花干细胞提取物质量百分比为0.1‑3％，螺旋藻小分子多肽质量百分比为1‑5％，积雪草提取物2‑10％。三种物质均有抗氧化的作用，利用各种成分合理组合、共同作用来达到祛皱的功效，从而延缓肌肤老化。

Description

一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物及其在护肤品中的 应用

技术领域

本发明涉及护肤品领域，特别是涉及一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物及其在护肤品中的应用。

背景技术

随着环境的变化和年龄的增长，皮肤的屏障功能会降低，皮肤内的胶原蛋白和弹性蛋白会逐渐减少，从而导致皮肤出现皱纹、失去弹性、暗淡无光泽等老化现象。

植物干细胞又称为分生组织，是相对于植物体内已经分化的成熟组织而言的，是植物体内未分化的细胞。植物干细胞是生长发育的源泉和信号调控中心。具有很强的自我更新和持续分裂能力，是拥有永久生存能力的“不朽细胞”。

植物干细胞培养技术是利用干细胞生长和遗传特性方面的优势，在传统细胞培养的基础上，以植物干细胞为目标，诱导、分离和培养外植体，建立相应的干细胞体系。植物干细胞培养主要有3个步骤：(1)从植物中获得含有形成层的组织；(2)将含有形成层的组织在培养基中培养；(3)从形成层中分离细胞，从而获得形成层来源的干细胞。

植物干细胞培养技术培养干细胞获得的细胞产物的裂解液、提取物和培养物可以作为活性成分用于护肤品中。如来自野山参或人参形成层的植物干细胞系，其裂解液、提取物及其培养物作为有效成分的组合物，具有抑制由UV辐射引起的活性氧，有效减少或抑制与衰老有关的因素，从而预防和抑制衰老；制备护肤液、乳液、营养霜、按摩霜和面膜等。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物及其在护肤品中的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，所述祛皱组合物的活性物组分及质量百分比为荷花干细胞提取物0.1-3％、螺旋藻小分子多肽1-5％、积雪草提取物2-10％。

荷花干细胞提取物的制备方法为(1)从荷花茎尖中获得含有形成层的组织；(2)从形成层中分离细胞，经固体培养基培养后获得形成层来源的干细胞；(3)形成层来源的干细胞在液体培养基中进行传代培养，获得扩增后的荷花干细胞；(4)生物反应器放大培养；(5)冷冻破碎后浓缩，即获得荷花干细胞提取物。

近年来，活性小分子多肽倍受关注，它们与生物体内其它物质相比，最大的特点便是它们具有很高的生物活性，在生物体的生长发育和新陈代谢中起着至关重要的生物学作用，因其抗氧化，抗衰老效果显著，而被广泛应用于护肤品中。已有研究利用超声波破碎法辅助提取螺旋藻蛋白,并与直接水提法进行了比较；对泡沫分离螺旋藻可溶性蛋白的提取物进行了紫外可见光扫描和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱扫描,确定提取物主要为分子量在5000D以下的小分子多肽。【郭准.泡沫分离提取螺旋藻小分子多肽及其活性研究[D].北京：北京林业大学，2012.】

研究表明，许多天然化合物在提高皮肤成纤维细胞活力，或促进胶原蛋白分泌的方面具有显著作用，如肽、萜类、黄酮类、生物碱类等天然产物。积雪草中还含有非常低含量的三萜酸，三萜酸(积雪草酸和羟基积雪草酸等)是三萜皂苷经酶或酸解等方法，完全去掉糖基之后，生成的相应苷元。积雪草中的三萜皂苷因其在促进皮肤成纤维细胞分泌胶原蛋白的作用，越来越受到关注，并已开始在护肤品中得到应用。

作为本发明的优选实施方式，所述祛皱组合物的活性物组分及质量百分比为荷花干细胞提取物1％、螺旋藻小分子多肽3％、积雪草提取物5％。

作为本发明的优选实施方式，所述螺旋藻小分子多肽的分子量小与5,000Da。

作为本发明的优选实施方式，所述祛皱组合物中还含有以下质量百分比组分：油脂6-10％、保湿剂10-15％，乳化剂2-6％，增稠剂0.5-2％，防腐剂0.01-0.5％，其余为水。

作为本发明的优选实施方式，所述所述油脂选自辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油中的至少一种。

作为本发明的优选实施方式，所述保湿剂选自甘油、1,3-丁二醇，透明质酸、丙二醇中的至少一种。

作为本发明的优选实施方式，所述乳化剂选自失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷中的至少一种。

作为本发明的优选实施方式，所述增稠剂选自丙烯酸酯聚合物、纤维素胶、羟乙基纤维素、改性淀粉、黄原胶、硅酸镁钠中的至少一种。

作为本发明的优选实施方式，所述防腐剂选自2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇、苯扎氯铵、苯甲醇中的至少一种。

本发明还提供一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物在护肤品中的应用，所述护肤品的剂型为膏霜状、乳液状、凝胶状或水剂状。

本发明还提供一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物在护肤品中的应用，其制备方法，包括以下步骤：

(1)将油脂、乳化剂和增稠剂加热至70℃～90℃，搅拌至原料完全溶解得油相；

(2)将保湿剂、去离子水加热至80℃～95℃，搅拌至原料完全溶解，得水相；

(3)将油相和水相混合均匀，搅拌乳化，得到乳化液，调节乳化液的pH为5～8；

(4)在乳化液中添加活性物组分并搅拌均匀，得到祛皱护肤品。

本发明的有益效果为：本发明的含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，是将螺旋藻小分子多肽、积雪草提取物三种具有抗氧化作用的物质以一定的比例复配使用，可以进一步显著提高人皮肤成纤维细胞的活性，能全方位对老化皮肤进行修复，可应用于抗皱祛皱护肤护肤品的开发。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物的实施例，其包含以下质量百分比的组分：

荷花干细胞提取物1％，螺旋藻小分子多肽3％，积雪草提取物5％，油脂(辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油)8％，保湿剂(甘油、1,3-丁二醇，透明质酸)12.5％，乳化剂(失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷)，增稠剂(丙烯酸酯聚合物、羟乙基纤维素、黄原胶)1％，防腐剂(苯甲醇)0.05％，其余为水。

本发明中荷花干细胞提取物的制备方法，包括以下步骤：

1、从荷花中获取含有形成层的组织：

取荷花茎尖，清洗15～20min，浓度75％酒精表面消毒后，无菌水冲洗数次，再用浓度10％～100％的过氧化氢水溶液浸泡消毒10～20min，无菌水冲洗数次，用滤纸吸干后，在无菌条件下，在培养皿中将荷花茎尖切成长5-7cm,宽5-7cm的薄片，将制备好的薄片用蔗糖高渗透液处理，使分化的组织失去活力，仅形成层能保留生命力，以此方法获得荷花形成层组织。

2、从形成层中分离细胞，经固体培养基培养后获得形成层来源的干细胞：

(1)将剥离的形成层组织接种在固体培养基中进行培养：

以每1g组织接种5cm2固体培养基的密度进行接种，培养温度为25～29℃，光照8-10小时，光照强度1500～2000lx，PH值为5.6～5.9，培养10～20天。培养后，形成层组织为均一生长的平板状组织，而其他组织则为不规则的聚集生长物。将再生的形成层组织接种至新鲜的固体培养基中进行二次培养，即可获得荷花干细胞团。

(2)酶解法分离荷花干细胞：

采用质量分数为0.25％的纤维素酶溶液和质量分数为0.25％的果胶酶溶液对形成层干细胞团进行酶解8-12小时。将荷花干细胞团分离成单个干细胞。

3、形成层来源的干细胞在液体培养基中进行传代培养，获得扩增后的荷花干细胞:

将酶解后的荷花干细胞转移至包含植物干细胞培养液的烧瓶中进行传代培养，培养方式为恒温摇床培养，并时刻在显微镜下观察细胞的聚集状态和程度。其中培养条件为摇床转速100转/分钟，培养温度35℃，每小时光照10分钟，培养第7天时，加入新鲜的植物干细胞培养液至细胞密度为1×10⁷个/ml，然后继续培养，培养后用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团、残渣等，得到荷花干细胞悬液。

4、生物反应器放大培养：

将荷花干细胞悬液转移至20L生物反应器中进行大规模培养，生物反应器中添加有5L的植物干细胞培养基，培养第7天时，加入10L的新鲜培养基，继续培养后收获细胞。培养后用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团、残渣后对细胞进行称重。

5、冷冻破碎后浓缩，即获得荷花干细胞提取物：

(1)分离、解冻：

将培养液用1um过滤器过滤，去掉培养液，将截留的细胞系培养物取出，放入-80℃超低温速冻2h，取出解冻30min；再放入-80℃超低温速冻，依次3次。

(2)细胞破碎、浓缩：

将解冻后的荷花干细胞利用超声波破碎仪破碎细胞，过滤器过滤，收集滤液，旋转式真空蒸发器内浓缩，即为荷花干细胞提取物溶液。

本发明的含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物在护肤品中的应用，其制备方法，包括以下步骤：

(1)将油脂、乳化剂和增稠剂加热至70℃～90℃，搅拌至原料完全溶解得油相；

(2)将保湿剂、去离子水加热至80℃～95℃，搅拌至原料完全溶解，得水相；

(3)将油相和水相混合均匀，搅拌乳化，得到乳化液，调节乳化液的pH为5～8；

(4)在乳化液中添加活性物组分并搅拌均匀，得到祛皱护肤品。

实施例2

一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物的实施例，其包含以下质量百分比的组分：

荷花干细胞提取物0.1％，螺旋藻小分子多肽1％，积雪草提取物2％，油脂(角鲨烷、乳木果油)6％，保湿剂(透明质酸)10％，乳化剂(十二醇硫酸钠、椰子基葡糖苷)2％，增稠剂(纤维素胶、改性淀粉)0.5％，防腐剂(2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇)0.01％，其余为水。

荷花干细胞提取物的制备方法如实施例1所述。

祛皱组合物在护肤品中的应用如实施例1所述。

实施例3

一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物的实施例，其包含以下质量百分比的组分：

荷花干细胞提取物3％，螺旋藻小分子多肽5％，积雪草提取物10％，油脂(自辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油)10％，保湿剂(甘油、1,3-丁二醇，透明质酸)15％，乳化剂(失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷)6％，增稠剂(丙烯酸酯聚合物、纤维素胶、硅酸镁钠)2％，防腐剂(苯扎氯铵)0.01％，其余为水。

荷花干细胞提取物的制备方法如实施例1所述。

祛皱组合物在护肤品中的应用如实施例1所述。

实施例4

一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物的实施例，其包含以下质量百分比的组分：

荷花干细胞提取物2％，螺旋藻小分子多肽3％，积雪草提取物6％，油脂(角鲨烷、乳木果油)10％，保湿剂(甘油、1,3-丁二醇，透明质酸)15％，乳化剂(失水山梨醇脂肪酸脂)6％，增稠剂(丙烯酸酯聚合物)1.5％，防腐剂(苯扎氯铵)0.07％，其余为水。

荷花干细胞提取物的制备方法如实施例1所述。

祛皱组合物在护肤品中的应用如实施例1所述。

实施例5护肤品的效果评价

设置4个实验组，分别为实施例1-4，设置6个对照组。

对照组1：不含荷花干细胞提取物，其他组分及质量百分比如下：

螺旋藻小分子多肽3.5％，积雪草提取物5.5％，油脂(辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油)8％，保湿剂(甘油、1,3-丁二醇，透明质酸)12.5％，乳化剂(失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷)，增稠剂(丙烯酸酯聚合物、羟乙基纤维素、黄原胶)1％，防腐剂(苯甲醇)0.05％，其余为水。

对照组2：不含螺旋藻小分子多肽，其他组分及质量百分比如下：

荷花干细胞提取物2.5％，积雪草提取物6.5％，油脂(辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油)8％，保湿剂(甘油、1,3-丁二醇，透明质酸)12.5％，乳化剂(失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷)，增稠剂(丙烯酸酯聚合物、羟乙基纤维素、黄原胶)1％，防腐剂(苯甲醇)0.05％，其余为水。

对照组3：不含积雪草提取物，其他组分及质量百分比如下：

荷花干细胞提取物3.5％，螺旋藻小分子多肽5.5％，油脂(辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油)8％，保湿剂(甘油、1,3-丁二醇，透明质酸)12.5％，乳化剂(失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷)，增稠剂(丙烯酸酯聚合物、羟乙基纤维素、黄原胶)1％，防腐剂(苯甲醇)0.05％，其余为水。

对照组4：不含荷花干细胞提取物和螺旋藻小分子多肽，其他组分及质量百分比如下：

积雪草提取物9％，油脂(辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油)8％，保湿剂(甘油、1,3-丁二醇，透明质酸)12.5％，乳化剂(失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷)，增稠剂(丙烯酸酯聚合物、羟乙基纤维素、黄原胶)1％，防腐剂(苯甲醇)0.05％，其余为水。

对照组5：不含荷花干细胞提取物和积雪草提取物，其他组分及质量百分比如下：

螺旋藻小分子多肽9％，油脂(辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油)8％，保湿剂(甘油、1,3-丁二醇，透明质酸)12.5％，乳化剂(失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷)，增稠剂(丙烯酸酯聚合物、羟乙基纤维素、黄原胶)1％，防腐剂(苯甲醇)0.05％，其余为水。

对照组6：不含螺旋藻小分子多肽和积雪草提取物，其他组分及质量百分比如下：

荷花干细胞提取物9％，油脂(辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油)8％，保湿剂(甘油、1,3-丁二醇，透明质酸)12.5％，乳化剂(失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷)，增稠剂(丙烯酸酯聚合物、羟乙基纤维素、黄原胶)1％，防腐剂(苯甲醇)0.05％，其余为水。

抑制酪氨酸酶活力的测定

按照下表加样，不加酪氨酸酶，将1％熊果苷作为一组样品进行对比，将溶液置于37℃水浴中恒温10min；加入酪氨酸酶，将溶液置于37℃水浴中恒温10min后，于475nm下测量其吸光度值，并与1％熊果苷进行比较。

按式(1)计算样品(包括实施例1-4以及对照组1-6)对酪氨酸酶的相对抑制率(I)，计算结果如表2所示。

式中：A1为空表对照组的吸光度，A2为空白组的吸光度，A3为样品对照组的吸光度，A4为样品组的吸光度。

表1：抑制酪氨酸酶活力测定方法

表2：实验组和对照组的相对抑制率

由表2可知，实验组对酪氨酸酶的抑制率均高于对照组，其实施例效果最后，说明荷花干细胞提取物、螺旋藻小分子多肽、积雪草提取物三种物质以一定的比例混合，能够在祛皱方面协同增效，且对照组中含有荷花干细胞提取物的组合比不含荷花干细胞提取物的组合酪氨酸酶的抑制率高，说明荷花干细胞提取物在祛皱方面起主要功效。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，其特征在于，所述祛皱组合物的活性物组分及质量百分比为荷花干细胞提取物0.1-3％、螺旋藻小分子多肽1-5％、积雪草提取物2-10％。

2.根据权利要求1所述含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，其特征在于，所述祛皱组合物的活性物组分及质量百分比为荷花干细胞提取物1％、螺旋藻小分子多肽3％、积雪草提取物5％。

3.根据权利要求1所述含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，其特征在于，所述螺旋藻小分子多肽的分子量小与5,000Da。

4.一种含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，其特征在于，所述祛皱组合物中还含有以下质量百分比组分：油脂6-10％、保湿剂10-15％，乳化剂2-6％，增稠剂0.5-2％，防腐剂0.01-0.5％，其余为水。

5.根据权利要求4所述含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，其特征在于，所述油脂选自辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、乳木果油中的至少一种。

6.根据权利要求4所述含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，其特征在于，所述保湿剂选自甘油、1,3-丁二醇，透明质酸、丙二醇中的至少一种。

7.根据权利要求4所述含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，其特征在于，所述乳化剂选自失水山梨醇脂肪酸脂、十二醇硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、椰子基葡糖苷中的至少一种。

8.根据权利要求4所述含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，其特征在于，所述增稠剂选自丙烯酸酯聚合物、纤维素胶、羟乙基纤维素、改性淀粉、黄原胶、硅酸镁钠中的至少一种。

9.根据权利要求4所述含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物，其特征在于，所述防腐剂选自2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇、苯扎氯铵、苯甲醇中的至少一种。

10.一种根据权利要求1-9任一项所述的含有荷花干细胞提取物的祛皱组合物在护肤品中的应用，其特征在于：所述护肤品的剂型为膏霜状、乳液状、凝胶状或水剂状。