CN107668027A - 羊精子室温保存稀释液及其制备方法 - Google Patents

羊精子室温保存稀释液及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107668027A
CN107668027A CN201711132786.2A CN201711132786A CN107668027A CN 107668027 A CN107668027 A CN 107668027A CN 201711132786 A CN201711132786 A CN 201711132786A CN 107668027 A CN107668027 A CN 107668027A
Authority
CN
China
Prior art keywords
room temperature
sheep
sperm
dilution
temperature preservation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711132786.2A
Other languages
English (en)
Inventor
苏杰
李喜和
曹贵方
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Inner Mongolia saikexing reproductive biotechnology (Group) Limited by Share Ltd
Original Assignee
Inner Mongolia Saikexing Livestock Breeding And Seed Industry Biotechnology Research Institute Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inner Mongolia Saikexing Livestock Breeding And Seed Industry Biotechnology Research Institute Co Ltd filed Critical Inner Mongolia Saikexing Livestock Breeding And Seed Industry Biotechnology Research Institute Co Ltd
Priority to CN201711132786.2A priority Critical patent/CN107668027A/zh
Publication of CN107668027A publication Critical patent/CN107668027A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

一种羊精子室温保存稀释液及其制备方法，属于动物繁殖技术领域，将Tris、柠檬酸、果糖、海藻糖、维生素E、青霉素、链霉素、纯净水混合均匀，调整PH值至6.60±0.05，使用0.22微米的滤器过滤，取卵黄20ml，放入混合液体中，将液体放用磁力搅拌器进行搅拌2小时，2500g离心60min，吸上清。本发明的优点是：解决羊原精在室温下保存时间短，活力下降快的问题，而提供一种可较长时间保存，并不影响精子的活力，有效提高种公羊精液室温保存的有效存活时间，成分简单、便于操作。

Description

羊精子室温保存稀释液及其制备方法
技术领域
本发明属于动物繁殖技术领域，具体涉及一种将羊原精稀释后在室温长期保存的羊精子室温保存稀释液及其制备方法。
背景技术
与牛相比，羊精虽然已经开发出冷冻保存技术，但是生产费用高、冻后精子活力差、受胎率低，使得液态保存成为羊精保存的主要方式。液态保存分为低温保存与常温保存。低温保存的优点在于精液保存时间长，缺点为需要专门的低温设备，为了方便运输，设备体积不宜过大，但也导致设备低温维持时间有限，不方便远距离运输；常温精子保存时间短，但不需要特别的低温设备，比较适合短距离的精子运输。稀释液主要包括Tris-柠檬酸-糖类、EDTA-柠檬酸钠-糖类、柠檬酸盐-糖类三大类。糖类主要葡萄糖、果糖、蔗糖等，不同糖类在动物品种、各种配方、稀释方法、储存温度时会有不同效果，有些研究将几种糖类混合加入，低温下效果好的保存稀释液在室温时使用效果无法达到最佳。目前，几种羊精子室温保存稀释液与羊精子的稀释比例一般是在2-10倍，稀释液稀释精子后的有效存活时间(精子活力大于0.3的存活时间)一般在36h左右，精子存活时间在48h左右，因此开发出能够在室温较长时间保存精子的稀释液有重要价值。本发明的目的是开发一种能够将羊精液稀释并在常温下较长时间保存的稀释液。
发明内容
本发明解决的问题是羊原精稀释常温保存的问题，提供一种羊精子室温保存稀释液及制备方法，能够使羊原精在室温下较长时间保存，并不影响精子的活力，有效的提高了种公羊精液的利用率。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的；一种羊精子室温保存稀释液，其特征在于：它由以下组份组成：
调整PH值至6.60±0.05。
一种羊精子室温保存稀释液的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：
(1)配置试剂
混合均匀，调整PH值至6.60±0.05，使用0.22微米的滤器过滤，
(2)取卵黄20ml，放入步骤(1)液体中，将液体放用磁力搅拌器进行搅拌2小时，2500g离心60min，吸上清。
本发明的优点和有益效果是：解决羊原精在室温下保存时间短，活力下降快的问题，而提供了一种可较长时间保存，并不影响精子的活力，有效提高种公羊精液室温保存的有效存活时间，成分简单、便于操作。
具体实施方式
实施例1：一种绵羊低温稀释保存液的制备方法，它包括以下步骤：
1、配制试剂
调整PH值至6.60±0.05，使用0.22微米的滤器过滤；
(2)取卵黄20ml，加到步骤(1)液体中，将液体放用磁力搅拌器进行搅拌2小时，2500g水平离心60min，吸上清；
2、精液检测
选取两只健康种公绵羊，使用假阴道法采精，精液为乳白色，无异味，镜下检测活力分别为0.65和0.6，过滤后使用密度仪检测原精实际浓度分别为羊1是10.3亿/ml，体积为3.2ml；羊2是11亿/ml，体积为1.8ml；
3、精液稀释
用步骤1制备的稀释液32.96ml将步骤2精液检测后的羊1精液稀释为1亿/ml，稀释液19.8ml将羊2精液稀释为1亿/ml，分别混匀后，然后放入22度室温保存，
精子活力检测：预先把载玻片和盖玻片放在37℃加热板上预热10分钟，用移液器离心管取15μl样品滴在载玻片上，压片后置于显微镜下镜检，选择压片均匀的样品区域，一个压片取5个视野，中间1个，四周各取1个，分别计数活精子数和死精子数，并计算活力；
活力＝活精子数/活精子数与死精子数的和
羊1精子活力为0.65，精子有效存活时间为96h，羊2精子活力为0.6，精子的有效存活时间为72h。说明不同活力羊精稀释保存后存活时间有差异。但是，仍可较长时间保存，且不影响精子活力，且种公羊精液室温保存的有效存活时间有效提高。
实施例2：一种羊精子室温保存稀释液配置制备方法，它包括以下步骤：
1、配制试剂
调整PH值至6.60±0.05，使用0.22微米的滤器过滤；
(2)取20ml卵黄，加到步骤(1)液体中，将液体放用磁力搅拌器进行搅拌2小时，2500g水平离心60min，吸上清；
2、精液检测
使用假阴道法采精，精液为乳白色，无异味，镜下检测活力为0.65，过滤后使用密度仪检测原精实际浓度为12.3亿/ml，体积为2.2ml，共27.06亿精子，
3、精液稀释
将步骤2检测的原精液平均分为两份，第一份13.53亿羊原精，用步骤1配置的室温稀释液13.53ml，将羊精液稀释为1亿/ml，第二份13.53亿羊原精用步骤1配置的室温稀释液6.765ml，将羊精液稀释为2亿/ml，分别放入19度室温保存；
精子活力检测：预先把载玻片和盖玻片放在37℃加热板上预热10分钟，用移液器离心管取15μl样品滴在载玻片上，压片后置于显微镜下镜检，选择压片均匀的样品区域，一个压片取5个视野，中间1个，四周各取1个，分别计数活精子数和死精子数，并计算活力；
活力＝活精子数/活精子数与死精子数的和
在室温19度下，羊精子分别稀释12倍时，精子存活时间120h，稀释6倍时，精子存活时间96h，使用该羊精子室温保存稀释液，可较长时间保存，且不影响精子活力，且种公羊精液室温保存的有效存活时间有效提高。

Claims (2)

1.一种羊精子室温保存稀释液，其特征在于：它由以下组份组成：
调整PH值至6.60±0.05。
2.一种权利要求1所述羊精子室温保存稀释液的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：
(1)配置试剂
调整PH值至6.60±0.05，使用0.22微米的滤器过滤，
(2)取卵黄20ml，加到步骤(1)液体中，将液体放用磁力搅拌器进行搅拌2小时，2500g离心60min，吸上清。
CN201711132786.2A 2017-11-15 2017-11-15 羊精子室温保存稀释液及其制备方法 Pending CN107668027A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711132786.2A CN107668027A (zh) 2017-11-15 2017-11-15 羊精子室温保存稀释液及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711132786.2A CN107668027A (zh) 2017-11-15 2017-11-15 羊精子室温保存稀释液及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107668027A true CN107668027A (zh) 2018-02-09

Family

ID=61149406

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711132786.2A Pending CN107668027A (zh) 2017-11-15 2017-11-15 羊精子室温保存稀释液及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107668027A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110463687A (zh) * 2019-07-10 2019-11-19 安徽农业大学 一种羊精液的保存液以及保存方法
CN114788516A (zh) * 2022-04-08 2022-07-26 扬州大学 羊类精液稀释液及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103222458A (zh) * 2013-04-08 2013-07-31 陕西石羊集团蒲城畜牧发展有限公司 一种猪性别控制精子及其制备方法和应用
CN103548812A (zh) * 2013-10-30 2014-02-05 西北农林科技大学 奶山羊精液常温及低温保存稀释液

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103222458A (zh) * 2013-04-08 2013-07-31 陕西石羊集团蒲城畜牧发展有限公司 一种猪性别控制精子及其制备方法和应用
CN103548812A (zh) * 2013-10-30 2014-02-05 西北农林科技大学 奶山羊精液常温及低温保存稀释液

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
朱兴贵等: "《动物繁殖技术》", 31 December 2012 *
李延春主编: "《夏洛莱羊养殖与杂交利用》", 31 December 2003 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110463687A (zh) * 2019-07-10 2019-11-19 安徽农业大学 一种羊精液的保存液以及保存方法
CN110463687B (zh) * 2019-07-10 2021-07-27 安徽农业大学 一种羊精液的保存液以及保存方法
CN114788516A (zh) * 2022-04-08 2022-07-26 扬州大学 羊类精液稀释液及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Silva et al. Cryopreservation of boar sperm comparing different cryoprotectants associated in media based on powdered coconut water, lactose and trehalose
Slabbert et al. Large volume cryoprotectant‐free vitrification: An alternative to conventional cryopreservation for human spermatozoa
CN107668027A (zh) 羊精子室温保存稀释液及其制备方法
EP3150702A3 (en) Devices, solutions and methods for sample collection
CN105258999A (zh) 一种单细胞透射电镜制样方法
Shahverdi et al. Effect of extender and equilibration time on post thaw motility and chromatin structure of buffalo bull (Bubalus bubalis) spermatozoa
CN103299987A (zh) 一种猪精液常温保存的稀释液及其制备方法
Cam et al. Comparison of chemical characteristics of fresh and pasteurised juice of gilaburu (Viburnum opulus L.)
Martínez-Soto et al. Assessment of two thawing processes of cryopreserved human sperm in pellets
CN107821384A (zh) 绵羊精液高倍低温稀释保存液及制备方法
WO2012032853A1 (ja) 藻類細胞の調製方法及び化学物質の毒性評価用キット
CN104244991A (zh) 放射性药物合成方法
CN115191426B (zh) 提高猪精液冷冻保存品质的方法
Tiwari et al. Filtration techniques are advantageous over colloidal centrifugation in improving freezability of low-quality buffalo bull (Bubalus bubalis) ejaculates
CN106750429A (zh) 一种洋葱多糖‑明胶复合膜的制备工艺
Scherzer et al. Freezing equine semen: the effect of combinations of semen extenders and glycerol on post‐thaw motility
CN109387643A (zh) 一种血糖分析仪通用型全血血糖质控品及其制备方法
Calmels et al. Automated washing of autologous hematopoietic stem cell grafts after thawing does not impair engraftment
CN102747034A (zh) 一种用于体外分离纯化有核细胞的方法和试剂盒
CN102986653B (zh) 牦牛细管冻精制作方法
CN114788516A (zh) 羊类精液稀释液及其制备方法
Papassavas et al. A strategy of splitting individual high volume cord blood units into two half subunits prior to processing increases the recovery of cells and facilitates ex vivo expansion of the infused haematopoietic progenitor cells in adults
CN208313634U (zh) 一种环境监测用水质采样器
WO2018218341A1 (en) System and method for collecting and preserving blood samples for subsequent antibody-independent imaging
CN204469733U (zh) 一种双层真空试管

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20180712

Address after: 011517 Sheng Le economic Park, Helingeer, Hohhot, the Inner Mongolia Autonomous Region, Sheng Le modern service industry gathering area Jinsheng road and Yun Valley Road intersection.

Applicant after: INNER MONGOLIA SAIKEXING LIVESTOCK BREEDING AND SEED INDUSTRY BIOTECHNOLOGY RESEARCH INSTITUTE CO., LTD.

Applicant after: Inner Mongolia saikexing reproductive biotechnology (Group) Limited by Share Ltd

Address before: 011517 Sheng Le economic Park, Helingeer, Hohhot, the Inner Mongolia Autonomous Region, Sheng Le modern service industry gathering area Jinsheng road and Yun Valley Road intersection.

Applicant before: INNER MONGOLIA SAIKEXING LIVESTOCK BREEDING AND SEED INDUSTRY BIOTECHNOLOGY RESEARCH INSTITUTE CO., LTD.

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180209