CN107652343A - 化合物、缀合物、试剂盒及其在检测雌醇中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了化合物、缀合物、检测雌醇的试剂盒及检测雌醇的试剂盒在检测雌醇中的用途。所述化合物具有式(1)所示的结构，其中，L表示连接臂，R1、R2、R3和R4分别独立地为氢基、羟基、C1～3烷基、C1～3烷氧基、C2～3烯基或C2～3炔基。本发明的化合物能够准确地对雌醇进行检测。

Description

化合物、缀合物、试剂盒及其在检测雌醇中的用途
技术领域
本发明涉及分析领域。具体地，本发明涉及化合物、缀合物、试剂盒及其在检测雌醇中的用途。更具体地，本发明涉及化合物、缀合物、检测雌醇的试剂盒及检测雌醇的试剂盒在检测雌醇中的用途。
背景技术
雌醇是指具有如下母核结构单元的物质，常见的有雌酮、雌二醇和雌三醇。
目前，利用免疫方法检测雌醇的原理为：由于雌醇上没有可以直接连接上标记分子的官能团，需要经过化学合成的方法引入可以直接连接上标记分子的结构(称为连接臂，末端官能团可以为羧基、氨基等)，得到雌醇衍生物。接着，通过化学方法将雌醇衍生物的连接臂连接到标记分子上，制备成雌醇标记分子。在检测过程中，雌醇标记分子与待测样本中的雌醇竞争结合雌醇抗体，利用标记分子直接或者间接产生的光信号，通过赋值校准，获得待测雌醇衍生物的浓度值，从而完成对待测样本中雌醇含量的测定。
然而，目前适用的雌醇衍生物仍有待开发。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。
本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
雌醇上的衍生位点即引入连接臂的位置的选择是难点，既要有合成的可行性，又要保证得到的雌醇衍生物能够与抗体特异性结合。本发明的发明人通过对雌醇的结构进行深入研究发现，通过在雌醇结构的3位碳上的羟基上修饰合成出连接臂得到雌醇衍生物。引入的连接臂不会破坏雌醇的抗原决定簇结构和空间位阻，且雌醇衍生物能够有效地与相应抗体特异性结合，达到准确检测雌醇含量的目的。
有鉴于此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种化合物，所述化合物具有下式所 示的结构。其中，L表示连接臂，R1、R2、R3和R4分别独立地为氢基、羟基、C1～3烷基、C1～3烷氧基、C2～3烯基或C2～3炔基。发明人经过大量实验发现，通过在雌醇结构的3位碳上的羟基上修饰合成出连接臂，得到本发明的化合物——雌醇衍生物，引入连接臂不会破坏雌醇的抗原决定簇结构和空间位阻，且雌醇衍生物能够有效地与相应抗体特异性结合。此外，该化合物容易获得，易于推广应用。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种缀合物。根据本发明的实施例，所述缀合物包括前面所描述的化合物以及标记分子，所述标记分子与所述化合物的连接臂相连。根据本发明实施例的缀合物能够有效地与抗体特异性结合，通过标记分子直接或者间接与检测底物进行反应产生的可检测信号，以准确地确定雌醇的含量。
在本发明的第三方面，本发明提出了一种检测雌醇的试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括前面所描述的缀合物。发明人发现，利用本发明的试剂盒，基于缀合物能够有效地与抗体特异性结合，通过标记分子直接或者间接与检测底物进行反应产生的可检测信号，以准确地确定雌醇的含量。
在本发明的第四方面，本发明提出了前面描述的试剂盒在检测雌醇中的用途。如前所述，根据本发明的实施例，利用本发明的试剂盒能够准确有效地对雌醇进行检测。
此外，根据本发明的实施例，化合物、缀合物、检测雌醇的试剂盒以及试剂盒在检测雌醇中的用途具有下列优点的至少之一：
通过将雌醇结构的3位碳上的羟基作为衍生位点，引入连接臂，从而得到本发明的化合物。引入连接臂不会破坏抗原决定簇的结构和空间位阻，所得到的化合物能够有效地与相应抗体特异性结合，且该化合物容易获得，易于推广应用。此外，该化合物能够连接到标记分子上，得到缀合物，并将其应用于雌醇的检测，能够基于免疫检测原理(如显色、光信号变化等)准确地检测样本中雌醇的含量。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和 容易理解，其中：
图1显示了根据本发明一个实施例的检测雌二醇的过程示意图；
图2显示了根据本发明一个实施例的检测雌三醇的过程示意图；
图3显示了根据本发明一个实施例的标准曲线图；
图4显示了根据本发明另一个实施例的标准曲线图；
图5显示了根据本发明又一个实施例的标准曲线图；
图6显示了根据本发明又一个实施例的标准曲线图；
图7显示了根据本发明一个实施例的曲线图；
图8显示了根据本发明另一个实施例的曲线图；以及
图9显示了根据本发明又一个实施例的曲线图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
本发明提出了化合物、缀合物、检测雌醇的试剂盒及其在检测雌醇中的用途，下面将分别对其进行详细描述。
化合物
在本发明的第一方面，本发明提出了一种化合物。化合物具有式(1)所示的结构，其中，L表示连接臂，R1、R2、R3和R4分别独立地为氢基、羟基、C1～3烷基、C1～3烷氧基、C2～3烯基或C2～3炔基。
需要说明的是，关于式(1)所示化合物的连接臂L衍生位点的确定，发明人进行了大量实验研究。
具体地，首先，如下式所示：
发明人发现，以3位碳上的羟基作为衍生位点，能够较容易地引入连接臂L，不会破坏抗原决定簇的结构，且合成的化合物稳定性强，L不易丢失。在该位点引入L所得到的化合物能够有效地与抗原进行特异性结合，进而能够准确地对雌醇进行检测。然而，以其他位点引入连接臂所得到的化合物对雌醇检测的效果不佳。进而，发明人以雌醇3位碳上的羟基作为衍生位点，引入连接臂，从而得到本申请的化合物—雌醇衍生物。
根据本发明的实施例，R1为氢基或羟基，R2为氢基或羟基，R3为氢基，R4为氢基或羟基。根据本发明的一些实施例，化合物具有以下之一的结构：
根据本发明的一些优选实施例，化合物具有以下之一的结构，由此，根据本发明实施例的化合物能够更加有效地与抗原进行特异性结合，进而能够更加准确地对雌醇进行检测。
缀合物
在本发明的第二方面，本发明提出了一种缀合物。本发明化合物可作为式(1)所示化合物的缀合物的形式使用。本文中使用的“缀合物”是指本发明作为式(1)所示化合物通过其连接臂以共价键与标记分子连接而形成的物质。根据本发明实施例的缀合物能够有效地与抗体特异性结合，通过标记分子直接或者间接与检测底物进行反应产生的可检测信号，以准确地确定雌醇的含量。
根据本发明的实施例，对标记分子的种类不作严格限定，可以是生物素、酶、荧光化合物、化学发光化合物或配体等。根据本发明的一些实施例，标记分子包括生物素、酶、吖啶酯或其类似物、吡啶钌或其类似物、异鲁米诺或其类似物、异硫氰酸荧光素或其类似物。由此，能够通过标记分子直接或者间接与检测底物进行反应产生的可检测信号，以准确地确定雌醇的含量。
根据本发明的实施例，对酶的种类不作严格限定。其中，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或乙酰蛋白酶与催化底物特异性反应强，用于免疫检测时效率高，检测结果准确可靠。因而，根据本发明的一些实施例，酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或乙酰蛋白酶。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对化合物所描述的特征和优点同样适用于该缀合物，在此不再赘述。
检测雌醇的试剂盒
在本发明的第三方面，本发明提出了一种检测雌醇的试剂盒。根据本发明的实施例，该检测雌醇的试剂盒包括前面所描述的缀合物。发明人发现，利用本发明的试剂盒，基于缀合物能够有效地与抗体特异性结合，且基于其携带的标记分子能够直接或者间接地与检测底物发生反应，产生可检测信号，从而能够准确地检测样本中雌醇的含量。
根据本发明的一些实施例，雌醇包括雌酮、雌二醇或雌三醇。由此，能够有效检测雌酮、雌二醇或雌三醇。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对缀合物所描述的特征和优点同样适用于该检测雌醇的试剂盒，在此不再赘述。
检测雌醇的试剂盒在检测雌醇中的用途
在本发明的第四方面，本发明提出了一种检测雌醇的试剂盒在检测雌醇中的用途。如前所述，根据本发明的实施例，利用本发明的试剂盒能够准确有效地对雌醇进行检测。
根据本发明的一些实施例，试剂盒是采用竞争结合法对样本中的雌醇进行检测。试剂盒中的雌醇衍生物结构与雌醇具有几乎相同的特异性结合的结构，将竞争性地结合抗体。根据本发明的具体实施例，对于一些含量相对较低(例如皮克级别)的雌醇，例如雌二醇，产生的光信号较弱，主要采用下列模式进行检测：先将含有雌醇的样本与雌醇抗体，以及已包被二抗抗体的固相载体进行孵育，结合得到雌醇-雌醇抗体-二抗固相载体复合物，再加入缀合物，与雌醇-雌醇抗体-二抗固相载体复合物进行孵育，缀合物中所携带的雌醇可竞争性取代雌醇-雌醇抗体-二抗固相载体复合物中的雌醇，形成缀合物-雌醇抗体-二抗固相载体复合物，同时仍然存在雌醇-雌醇抗体-二抗固相载体复合物。然后洗涤固相载体以除去未结合在固相载体上的物质，得到缀合物-雌醇抗体-二抗固相载体复合物和雌醇-雌醇抗体-二抗固相载体复合物。注入底物混合，缀合物-雌醇抗体-二抗固相载体复合物可以与底物产生可检测信号(如光信号)，信号强弱与缀合物-雌醇抗体-二抗固相载体复合物含量相关。基于产生光信号大小，计算样本中雌醇的含量。此外，也可以采用下列模式进行检测：首先将含有雌醇的样本与标记有碱性磷酸酶(ALP)的雌醇抗体进行孵育，结合得到碱性磷酸酶-雌醇抗体-雌醇复合物。再加入链霉亲和素固相载体及标记有生物素的雌醇缀合物，进行孵育，缀合物中所携带的雌醇竞争性取代碱性磷酸酶-雌醇抗体-雌醇复合物中的雌醇，形成碱性磷酸酶-雌醇抗体-缀合物-链霉亲和素固相载体复合物，同时仍然存在碱性磷酸酶-雌醇抗体-雌醇复合物。注入底物混合，碱性磷酸酶-雌醇抗体-缀合物-链霉亲和素固相载体复合物可以与底物产生可检测信号(如光信号)，信号强弱与碱性磷酸酶-雌醇抗体-缀合物-链霉亲和素固相载体复合物含量相关。基于产生光信号大小，计算样本中雌醇的含量。
根据本发明的具体实施例，对于含量相对较多(例如纳克级别)的雌醇，例如雌三醇，产生的光信号相对较强，主要采用下列方式进行检测：将含有雌醇的样本、缀合物以及已包被抗体的固相载体进行孵育，缀合物中所携带的雌醇将与样本中的雌醇竞争性结合固相载体上的抗体，形成缀合物-抗体-固相载体复合物及雌醇-抗体-固相载体复合物。然后洗涤固相载体以除去未结合的雌醇和缀合物，得到缀合物-抗体-固相载体复合物和雌醇-抗体-固相载体复合物。注入底物混合，缀合物-抗体-固相载体复合物可以与底物产生可检测信号(如光信号)，信号强弱与缀合物-抗体-固相载体复合物含量成正比。基于产生光信号大小，计算样本中雌醇的含量。固相载体可以为磁微粒、胶体金或纤维素膜。
关于在本文中所使用的术语“已包被抗体的固相载体”，需要说明的是，本领域技术人员能够理解，可以使用任何已知的方式，将抗体直接或者间接包被在固相载体上，例如通过化学键连接到固相载体，或者可以采用二抗体系、链霉亲和素体系、荧光素体系。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对检测雌醇的试剂盒所描述的特征和优点同样适用于检测雌醇的试剂盒在检测雌醇中的用途，在此不再赘述。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
在该实施例中，按照下列过程合成式(2)所示化合物：
合成路线如下所示：
具体合成步骤如下：
1、合成化合物2：
投料2.72g(0.01mol)17β-雌二醇(化合物1)于100mL干燥冷却反应瓶中，加入40mL二甲基甲酰胺(DMF)，搅拌溶解，再加入3.14g(0.03mol)无水碳酸钾，搅拌下，缓慢滴加2.17g(0.012mol)4-溴丁酸甲酯。滴加完毕，反应4小时。将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，再用饱和食盐水洗三次，接着用无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物2粗品4.7g。
MS：正离子峰：373.6，395.6(+Na峰)；负离子峰：371.5。
2、合成式(2)化合物：
投料上一步得到的化合物2粗品4.7g，加入40mL甲醇溶解，滴加10mL 2M NaOH溶液，滴加完毕，继续搅拌1小时。加入20mL水，减压除去甲醇。剩余水层用甲基叔丁基醚洗三次，留水层转移至反应瓶中，搅拌下用1M HCl调pH＝2，析出白色固体。抽滤得到粗品，重结晶得到2.1g式(2)所示化合物。总产率约为58.5％。
MS：正离子峰：359.5，381.5(+Na峰)；负离子峰：357.4。
实施例2
在该实施例中，按照下列过程合成式(3)所示化合物：
合成路线如下：
具体合成步骤如下：
1、合成化合物5：
投料2.70g(0.01mol)雌酮(化合物4)于100mL干燥冷却反应瓶中，加入40mL DMF，搅拌溶解，再加入3.14g(0.03mol)无水碳酸钾，搅拌下，缓慢滴加2.17g(0.012mol)4-溴丁酸甲酯。滴加完毕，反应4小时。将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，再用饱和食盐水洗三次，然后用无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物5粗品4.6g。
MS：正离子峰：371.5，393.5(+Na峰)；负离子峰：369.5。
2、合成式(3)化合物：
投料上一步得到的化合物5粗品4.6g，加入40mL甲醇溶解，滴加10mL 2M NaOH溶液，滴加完毕，继续搅拌1小时。加入20mL水，减压除去甲醇。剩余水层用甲基叔丁基醚洗三次，留水层转移至反应瓶中，搅拌下，用1M HCl调pH＝2，析出白色固体。抽滤得到粗品，重结晶得到2.3g式(3)所示化合物。总产率约为64.5％。
MS：正离子峰：357.4，379.4(+Na峰)；负离子峰：355.4。
实施例3
在该实施例中，按照下列过程合成式(4)所示化合物：
合成路线
具体合成步骤如下：
1、合成化合物8：
投料2.88g(0.01mol)雌三醇(化合物7)于100mL干燥冷却反应瓶中，加入40mLDMF，搅拌溶解，加入3.14g(0.03mol)无水碳酸钾，搅拌下，缓慢滴加2.17g(0.012mol)4-溴丁酸甲酯。滴加完毕，反应4小时。将反应液倒入冰水中，再用乙酸乙酯萃取三次，合 并有机层，然后用饱和食盐水洗三次，再用无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物8粗品4.9g。
MS：正离子峰：389.7，411.7(+Na峰)；负离子峰：387.8。
2、合成式(4)化合物：
投料上一步得到的化合物8粗品4.9g，加入40mL甲醇溶解，滴加10mL 2M NaOH溶液，滴加完毕，继续搅拌1小时。加入20mL水，减压除去甲醇。剩余水层用甲基叔丁基醚洗三次，留水层转移至反应瓶中，搅拌下，用1M HCl调pH＝2，析出白色固体。抽滤得到粗品，重结晶得到2.3g式(4)所示化合物。总产率约为61.5％。
MS：正离子峰：375.8，397.8(+Na峰)；负离子峰：373.9。
实施例4
在该实施例中，按照下列过程合成式(5)的化合物：
合成路线如下所示：
具体合成步骤如下：
1、合成化合物10：
NaH处理：取20g 60％NaH于250mL干燥烧瓶，用重蒸正己烷洗三次，弃去正己烷层，将NaH用油泵抽干，冲入氮气保护。
24.8g(0.4mol)乙二醇于1000mL干燥冷却三口瓶，氮气保护下加入600mL DMF，搅拌均匀，冰水浴冷却。将7.2g(0.3mol)NaH(处理过)分四次加入到反应瓶中，每次间 隔5～10分钟。加完后，继续搅拌40分钟。将39.0g(0.2mol)溴乙酸叔丁酯溶解于50mL DMF中，缓慢滴加到反应瓶中，滴加完毕，继续搅拌1小时。撤去冰水浴，室温搅拌15小时。滴加入100mL10％醋酸水溶液猝灭反应。将反应液转移到2L分液漏斗中，并将得到的滤液加入到600mL乙酸乙酯和600mL冰饱和食盐水中，振摇分层，分出有机层，水层再用乙酸乙酯萃取两次，每次约250mL，合并有机层，用冰饱和食盐水洗三次，弃去盐水层。乙酸乙酯层浓缩到约200mL后，加入饱和食盐水再洗两次，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，浓缩干，得油状物(化合物10)33.0g。
MS：正离子峰：177.1，199.1(+Na峰)；负离子峰：176.0。
2、合成化合物11：
21.2g(0.2mol)一缩乙二醇于1L干燥烧瓶中，加入500mL四氯化碳，搅拌溶解，冰水浴冷却。缓慢滴加60g(0.22mol)三溴化磷，滴加完毕，继续搅拌1小时，撤去冰水浴，室温搅拌15小时。浓缩除去溶剂。再加入500mL乙酸乙酯溶解，然后用5％碳酸钠水溶液洗四次。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩，得油状物(化合物11)41.4g。
3、合成化合物12：
8.81g化合物10(0.05mol)于250mL干燥冷却三口瓶，氮气保护下加入150mL DMF，搅拌均匀，冰水浴冷却。1.5g(0.0625mol)NaH(处理过)分两次加入到反应瓶中，两次间隔10分钟，加完后，室温搅拌40分钟，停止搅拌，待用。
将23.2g(0.1mol)化合物11置于1000mL干燥三口烧瓶中，加入150mL DMF溶解。搅拌下，将化合物10反应物分五次转移到反应瓶中，每次间隔约15分钟。转移完毕，继续搅拌4小时，得到反应液。向反应液中滴加入20mL 10％醋酸水溶液，搅拌20分钟。升温到约60℃，蒸馏除去溶剂，得深色油状物。过柱纯化，二氯甲烷与甲醇梯度洗脱，得到10.1g化合物12，产率61.7％。
MS：正离子峰：327.1，329.1。
4、合成化合物13：
将2.72g(0.01mol)雌二醇置于100mL干燥冷却反应瓶中，加入40mL DMF，搅拌溶解，加入3.14g(0.03mol)无水碳酸钾。3.93g(0.012mol)化合物12加10mL DMF溶解，搅拌下，滴加至反应瓶中。滴加完毕，反应4小时。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，饱和食盐水洗三次，无水硫酸钠干燥，浓缩，得油状物4.85g。过柱纯化，得到2.8g化合物13。
MS：正离子峰：519.7。
5、合成式(5)所示化合物：
将2g化合物13置于100mL反应瓶，加入40mL二氯甲烷溶解，再加入5mL三氟乙酸，搅拌2小时。浓缩至干，得1.8g式(5)所示化合物。
MS：正离子峰463.6：负离子峰461.7。
实施例5
在该实施例中，按照下列过程合成式(6)所示化合物：
合成路线如下：
具体合成过程与实施例4相同。
化合物15：MS：正离子峰535.7：负离子峰533.6。
式(6)所示化合物：MS：正离子峰479.6，501.7(+Na峰)：负离子峰：477.7。
实施例6
在该实施例中，按照下列过程合成式(7)所示化合物：
合成路线如下所示：
起始原料为17α-雌二醇，合成方法与实例1相同。
实施例7
分别将实施例1所得到的式(2)所示化合物、实施例2所得到的式(3)所示化合物、实施例3所得到的式(4)所示化合物以及实施例6所得到的式(7)所示化合物按照下列步骤标记碱性磷酸酶，得到缀合物1～4：
向Mes(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液(pH＝4.5)中加入待标记的化合物，终浓度为0.2mg/mL，再加入碱性磷酸酶，终浓度为0.2mg/mL，混匀，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)，终浓度为2mg/mL，混匀；然后加入氮羟基琥珀酰亚胺(NHS)，终浓度为2mg/mL，混匀，25℃下，反应2小时。以pH＝7.5的Tris缓冲液，超滤置换三次，纯化去除过量的雌醇衍生物和交联剂，从而得到缀合物1～4。
实施例8
在该实施例中，选取雌二醇浓度分别为：0，100，500，1700，2700，4800pg/mL的6个样本作为雌二醇校准品，分别记为C0、C1、C2、C3、C4和C5。设置四个实验组，每组实验组中雌二醇兔多抗不同，分别利用实施例7所得到的缀合物1～4对不同雌二醇校准品进行检测，主要过程示意图如图1所示。具体步骤如下：
(1)将雌二醇校准品(35μL)、羊抗兔二抗包被的磁珠(0.3g/L，50μL)、雌二醇兔多抗(50μL)和样本处理液(50μL)混匀后37℃孵育20.5分钟。羊抗兔二抗磁珠结合雌二醇兔多抗，兔多抗再结合样本中的雌二醇抗原，得到磁珠-羊抗兔二抗-雌二醇兔多抗-雌二醇复合物。
(2)再加入缀合物(100μg/L，50uL)，混匀后于37℃孵育11分钟，缀合物中的雌醇结构竞争性取代磁珠-羊抗兔二抗-雌二醇兔多抗-雌二醇复合物中的雌二醇，形成磁珠-羊抗兔二抗-雌二醇兔多抗-缀合物复合物，同时仍然存在磁珠-羊抗兔二抗-雌二醇兔多抗-雌二醇复合物。然后洗涤磁珠以除去未结合的雌二醇和缀合物，得到磁珠-羊抗兔二抗-雌二醇兔多抗-缀合物复合物和磁珠-羊抗兔二抗-雌二醇兔多抗-雌二醇复合物的混合物。
(3)向反应体系中加入发光底物液(3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，简称为AMPPD)(200μL)，37℃孵育12分钟，磁珠-羊抗兔二抗-雌二醇兔多抗-缀合物复合物所携带的碱性磷酸酶，可以催化底物发光，且发光值与碱性磷酸酶含量成正比例关系。记录发光读数。
以雌二醇校准品中雌二醇浓度为横坐标，以该校准品发光读数/C0发光读数的比值(斜率)为纵坐标，绘制标准曲线，如图3～6所示。其中，图3是以兔多抗MR-0606为抗体，图4是以兔多抗MR-0607为抗体，图5是以兔多抗MR-0608为抗体，图6是以兔多抗MR-0614为抗体，均为市售获得。
结果表明，本发明实施例7所得到的缀合物1-4对多种雌二醇抗体具有普适性，能够用于检测样本中的雌二醇含量，而式(2)、式(3)、式(7)所示化合物对应的缀合物1、2、4相比式(4)所示化合物对应的缀合物3，在雌二醇检测中具有更好的效果。
方法学比对测试：
分别采用下列两种方式测定41个待测样本中雌二醇含量：
方式(1)：利用缀合物1，按照上述方法采用迈瑞CL-2000i全自动化学发光免疫分析系统进行雌二醇含量检测。
方式(2)：利用市售获得的罗氏试剂，按照该试剂的说明书采用罗氏COBAS-e411分析系统进行雌二醇含量检测。
结果展示在图7中，其中，可以确定相关系数R2为0.994，接近1.000，说明本发明的缀合物能够有效地测定样本中的雌二醇含量，检测结果与业内认可的试剂盒的检测结果具有很好的相关性。
实施例9
在该实施例中，选取雌三醇浓度分别为：0，0.5，2，7，15，30ng/mL的6个样本作为雌三醇校准品。设置四个实验组，每组实验组中雌三醇鼠单抗(MR-0637)相同，分别利用实施例7所得到的缀合物1～4对不同浓度的雌三醇校准品进行检测，主要过程示意图如图2所示，具体步骤如下：
(i)将雌三醇校准品(20μL)、羊抗鼠抗体磁珠(0.1g/L，50μL)、缀合物(100μg/L，50μL)和雌三醇鼠单抗(0.13mg/L，50μL)混匀后37℃孵育20.5分钟，形成磁珠-羊抗鼠二抗-雌三醇鼠单抗-雌三醇复合物和磁珠-羊抗鼠二抗-雌三醇鼠单抗-缀合物复合物的混合物。其中雌三醇与缀合物相互竞争结合雌三醇鼠单抗，存在反比例函数关系。然后洗涤磁珠以除去未结合的雌三醇和缀合物，得到磁珠-羊抗鼠二抗-雌三醇鼠单抗-雌三醇复合物和磁珠-羊抗鼠二抗-雌三醇鼠单抗-缀合物复合物的混合物。
(ii)向反应体系中加入发光底物液(3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，简称为AMPPD)(200μL)，37℃孵育12分钟，磁珠-羊抗鼠二抗-雌三醇鼠单抗-缀合物复合物所携带的碱性磷酸酶，可以催化底物发光，且发光值与碱性磷酸酶含量成正比例关系。记录发光读数。
按照上述(i)和(ii)的步骤对不同浓度雌三醇校准品依次进行检测。
以雌三醇校准品中雌三醇浓度为横坐标，以该校准品发光读数/C0发光读数的比值(斜率)为纵坐标，绘制标准曲线，如图8所示。
结果表明，本发明实施例7所得到的缀合物1～4对雌三醇抗体具有一定的特异性，能够用于测定样本中的雌三醇含量。相比而言，式(4)所示化合物对应的缀合物3在雌三醇检测中具有更好的效果。
方法学比对测试：
分别采用下列两种方式测定41个待测样本中雌三醇含量：
方式(1)：利用缀合物3，按照上述方法采用迈瑞CL-2000i全自动化学发光免疫分析系统进行雌三醇含量检测。
方式(2)：利用市售获得的罗氏试剂，按照该试剂的说明书采用罗氏COBAS-e411分析系统进行雌三醇含量检测。
结果展示在图9中，其中，可以确定相关系数R2为0.983，接近1.000，说明本发明的缀合物能够有效地测定样本中的雌三醇含量，检测结果与业内认可的试剂盒的检测结果与业内认可的试剂盒的检测结果具有很好的相关性。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、 或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种化合物，其特征在于，具有下式所示的结构：
其中，L表示连接臂，
R1、R2、R3和R4分别独立地为氢基、羟基、C1～3烷基、C1～3烷氧基、C2～3烯基或C2～3炔基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1为氢基或羟基，R2为氢基或羟基，R3为氢基，R4为氢基或羟基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有以下之一的结构：
优选地，所述化合物具有以下之一的结构：
4.一种缀合物，其特征在于，所述缀合物包括权利要求1～3任一项所述的化合物以及标记分子，所述标记分子与所述化合物的连接臂相连。
5.根据权利要求4所述的缀合物，其特征在于，所述标记分子包括生物素、酶、吖啶酯或其类似物、吡啶钌或其类似物、异鲁米诺或其类似物、异硫氰酸荧光素或其类似物。
6.根据权利要求5所述的缀合物，其特征在于，所述酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或乙酰蛋白酶。
7.一种检测雌醇的试剂盒，其特征在于，包括权利要求4～6任一项所述的缀合物。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述雌醇包括雌酮、雌二醇或雌三醇。
9.权利要求7或8所述试剂盒在检测雌醇中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述试剂盒是采用竞争结合法对样本中的雌醇进行检测。
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