CN107632161A - 转基因蛋白cp4epsps的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法 - Google Patents
转基因蛋白cp4epsps的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107632161A CN107632161A CN201710825336.5A CN201710825336A CN107632161A CN 107632161 A CN107632161 A CN 107632161A CN 201710825336 A CN201710825336 A CN 201710825336A CN 107632161 A CN107632161 A CN 107632161A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cp4epsps
- transgene protein
- pad
- detection
- immuno
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供了一种检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法，所述试纸条包括样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫，所述样品垫与结合垫为玻璃纤维素膜，所述分析膜为硝酸纤维素膜，所述吸水垫为纤维素膜，所述分析膜上设有检测线和质控线，所述样品垫、结合垫、吸水垫依次粘贴在PVC板上，所述结合垫上固定有上转换发光纳米粒子‑转基因蛋白CP4EPSPS单抗1结合物，所述分析膜上的检测线固定有转基因蛋白CP4EPSPS单克隆抗体2，所述质控线固定有二抗。本发明所述的CP4EPSPS的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法实现了转基因蛋白CP4EPSPS的特异性高、简单、快速、低成本的试纸条检测方法，检测方法灵敏度高，检测时间短，适合于各类企业及检测机构。
Description
技术领域
本发明属于转基因检测技术领域，尤其是涉及一种转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条及检测方法。
背景技术
随着科技的发展，转基因产品在我们身边并不少见，尤其是转基因粮食及其衍生产品，CP4EPSPS被应用于多种作物的转基因研究中，包括玉米、大都、棉花、油菜、甜菜和苜蓿。随着各种各样的转基因食品进入市场，转基因食品的安全性受到人们的日益关注，世界各国对转基因食品的安全性存在着较大的正义，日本、欧盟等地区制定了相关法规对转基因食品进行了严格的管理。因此，转基因蛋白的检测逐渐成为研究热点之一。由于转基因检测的特殊性，要求检测方法必须简单、快速，而且成本要低。目前转基因蛋白CP4EPSPS的检测方法主要实用实时定量PCR手段，由于PCR方法学的可靠性取决于DNA的完整性，但是在实验处理的过程中DNA容易发生降解，因此，该方法存在一定的局限性。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在提出一种转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条及检测方法，以实现转基因蛋白CP4EPSPS的简单、快速、低成本的试纸条检测方法。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条，所述试纸条包括样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫，所述样品垫与结合垫为玻璃纤维素膜，所述分析膜为硝酸纤维素膜，所述吸水垫为纤维素膜，所述分析膜上设有检测线和质控线，所述样品垫、结合垫、吸水垫依次粘贴在PVC板上；
所述结合垫上固定有上转换发光纳米粒子-转基因蛋白CP4EPSPS单抗1结合物，所述分析膜上的检测线固定有转基因蛋白CP4EPSPS单克隆抗体2，所述质控线固定有二抗。
进一步的，所述样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫依次以重叠1～2mm的间距交互层叠黏贴到PVC板上，所述试纸条的宽度为4mm。
检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法包括以下步骤：
(1)NaYF4:Yb,Tm/NaYF4上转换纳米粒子的制备；
(2)NaYF4:Yb,Tm/NaYF4的高分子的包覆；
(3)上转换纳米粒子标记抗体；
(4)上转换免疫层析法的试纸条的制作；
(5)结合物溶液的配置和包被；
(6)质控溶液和检测溶液的配置和包被；
(7)双抗体夹心模式UCPs-ICA定量检测转基因蛋白CP4EPSPS；
进一步的，所述步骤(1)NaYF4:Yb,Tm/NaYF4上转换纳米粒子的制备方法如下：
S1：NaYF4:Yb,Tm的制备
往三口烧瓶中加入2～5mL油酸，再加入1.2～3mmol稀土离子氯化物晶体粉末，控制各种稀土元素的摩尔比例为Y:Yb:Tm＝60％:25％:4％。在稀有气体氩气流的保护下，隔绝空气加热到110～130℃，保温20min。迅速加入5～14mL 1-十八烯，然后慢慢加热到150℃，慢慢滴加10mL溶解NH4F和NaOH的甲醇溶液到上述体系中，其中NH4F为6mmol,NaOH为3mmol，滴加完毕50℃继续搅拌40min，慢慢升温至100℃，抽真空，在Ar气保护下迅速升温至300℃，反应60～80min。反应完毕后，冷却至室温，反应产物在5000rpm下离心6min，沉淀用乙醇反复洗涤2-3次，最后将所得产品溶于5mL环己烷中保存待用；
S2：NaYF4:Yb,Tm/NaYF4的制备
将2～5mL油酸加入圆底烧瓶中，再加入0.5mmol YCl3·6H2O晶体粉末，加热到140℃使晶体粉末溶解完全，并除去结晶水，升温到150℃，保温20min，迅速加入5～13mL1-十八烯，并加热到120℃，保温30min，反应完毕并冷却到50℃，此时交替滴加5mL上述NaYF4核的环己烷溶液和4～8mL含有4mmol NH4F、2.5mmol NaOH的甲醇溶液，滴加完毕，恒温搅拌40min,慢慢升温到100℃除尽环己烷和甲醇，迅速升温到300℃反应90min，反应完毕后冷却到室温，烧瓶内的反应产物5000rpm离心5min,沉淀用乙醇反复洗涤2-3次。将所得淡黄色上转换纳米颗粒溶解于10mL氯仿中保存待用。
进一步的，所述步骤(2)的制备方法如下：
准确称取1～5mg两亲性嵌段共聚物于圆底烧瓶中，加入体积比为1：3的氯仿和乙醇的混合溶液，然后加入200uL步骤(1)制备好的上转换纳米粒子，混合均匀，将混合物置于旋转蒸发仪上，保持35℃水浴恒温，减压使其缓慢蒸干，再加入5mL弱碱性的磷酸盐缓冲溶液，悬浊液呈白色，离心洗涤5～10次，离心管底部的粒子用10mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液溶解，得到pH中性的Poly-NaYF4:Yb,Er/NaYF4的悬浊液，4℃避光保存备用。
进一步的，所述步骤(3)的标记方法如下：
取200uL修饰好的已溶于碱性溶液中的上转换纳米粒子悬浊液于离心管中，离心20min后，弃去上清液，把纳米粒子溶于1mL pH 6.5的MES缓冲溶液里，超声混匀，加入现配的1mg/mL EDC和1.5mg/mL NHS，EDC与NHS体积比为3:4，室温静置20min,离心15min，弃去上清液，把活化好的纳米粒子溶于1mL pH 7.4的PB中，超声混匀，加入15uL 5mg/mL大肠杆菌O157:H7单抗到PB中，反应30min，反应完毕后再离心30min，弃去上清液，偶联好单抗的纳米粒子溶于1mL pH 7.4的PB中，超声混匀，得到1mL悬浊液，4℃冰箱避光保存待用。
进一步的，所述步骤(4)试纸条的制作方法如下：
首先把处理过的NC膜粘贴在粘性底板上2.1×30cm的位置，做好包被、烘干；把结合垫沿下方切割线粘贴在粘性底板上0.7×30cm的位置，上端压分析膜下端，与分析膜重叠约1mm；把样品垫粘贴在粘性底板上，下端与PVC边缘线平齐，上端压结合垫下端，重叠约1mm，把吸水纸沿PVC底板上方粘贴在粘性底板上，下端压分析膜上端，重叠约2mm；粘贴好的30cm长的条带用切条机切成每条宽为3mm的条带，每个条带装在塑料卡内。
进一步的，所述步骤(5)结合物溶液的配置和包被方法如下：
分别取1％Tween-20，0.5％BSA，0.5％PVP-K30，1.5％蔗糖，1％海藻糖溶液体积比为(1～3)：(2～4)：(2～4)：(0.5～2)：(1～5)，并取出100uL最终标记好的纳米粒子悬浊液到上述溶液中，加水或PB配置成总体积为1mL的结合物悬浊液，把配置好的这种结合物悬浊液，把它均匀滴在结合垫上，置于25℃烘箱中彻底干燥0.5h。
进一步的，所述步骤(6)把二抗用pH 7.4浓度为50mM的PBS稀释成10μmol/L，作为质控溶液，把转基因蛋白CP4EPSPS单抗用pH 7.4，浓度为50mM的PBS稀释成10μmol/L，作为检测溶液，将NC膜粘贴在塑料底板上，分别把质控溶液与检测溶液用三维平面划膜仪均匀划在NC膜上的质控线和检测线的位置，划好膜后把整块板放在30℃烘箱里干燥30min。
进一步的，所述步骤(7)双抗体夹心模式UCPs-ICA定量检测转基因蛋白CP4EPSPS的具体检测方法如下：
用50mM，pH＝7.4的PBS配制转基因蛋白CP4EPSPS的标准溶液，标准溶液含转基因蛋白CP4EPSPS的浓度依次为0.5μmol/L，1μmol/L，10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L,以pH＝7.4的PBS做空白对照试验，每次取40uL测量溶液滴加到试纸条上测定，反应30min后，用激光共聚焦显微镜对试纸条检测带和质控带扫描，检测荧光强度。
相对于现有技术，本发明所述的转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条及检测方法具有以下优势：
(1)本发明所述的转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条检测方法实现了转基因蛋白CP4EPSPS的特异性高、简单、快速、低成本的试纸条检测方法；
(2)本发明所述的转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条检测方法灵敏度高，检测时间短，适合于各类企业及检测机构。
附图说明
构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1为本发明的原理示意图；
图2为本发明实施例所述的NaYF4:Yb,Tm/NaYF4的TEM表征，左为未包高分子，右为包高分子。
图3为本发明实施例所述的试纸条的结构示意图；
其中图A为试纸条组成结构示意图，图B为试纸条装在塑料卡内正在加样的实物图
具体实施方式
下面结合实施例及附图来详细说明本发明。
一种检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条，所述试纸条包括样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫，所述样品垫与结合垫为玻璃纤维素膜，所述分析膜为硝酸纤维素膜，所述吸水垫为纤维素膜，所述分析膜上设有检测线和质控线，所述样品垫、结合垫、吸水垫依次粘贴在PVC板上；
所述结合垫上固定有上转换发光纳米粒子-转基因蛋白CP4EPSPS单抗1结合物，所述分析膜上的检测线固定有转基因蛋白CP4EPSPS单克隆抗体2，所述质控线固定有二抗。
进一步的，所述样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫依次以重叠1～2mm的间距交互层叠黏贴到PVC板上，所述试纸条的宽度为4mm。
检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法包括以下步骤：
(1)NaYF4:Yb,Tm/NaYF4上转换纳米粒子的制备方法如下：
S1：NaYF4:Yb,Tm的制备
往三口烧瓶中加入2～5mL油酸，再加入1.2～3mmol稀土离子氯化物晶体粉末，控制各种稀土元素的摩尔比例为Y:Yb:Tm＝60％:25％:4％。在稀有气体氩气流的保护下，隔绝空气加热到110～130℃，保温20min。迅速加入5～14mL 1-十八烯，然后慢慢加热到150℃，慢慢滴加10mL溶解NH4F和NaOH的甲醇溶液到上述体系中，其中NH4F为6mmol,NaOH为3mmol，滴加完毕50℃继续搅拌40min，慢慢升温至100℃，抽真空，在Ar气保护下迅速升温至300℃，反应60～80min。反应完毕后，冷却至室温，反应产物在5000rpm下离心6min，沉淀用乙醇反复洗涤2-3次，最后将所得产品溶于5mL环己烷中保存待用；
S2：NaYF4:Yb,Tm/NaYF4的制备
将2～5mL油酸加入圆底烧瓶中，再加入0.5mmol YCl3·6H2O晶体粉末，加热到140℃使晶体粉末溶解完全，并除去结晶水，升温到150℃，保温20min，迅速加入5～13mL1-十八烯，并加热到120℃，保温30min，反应完毕并冷却到50℃，此时交替滴加5mL上述NaYF4核的环己烷溶液和4～8mL含有4mmol NH4F、2.5mmol NaOH的甲醇溶液，滴加完毕，恒温搅拌40min,慢慢升温到100℃除尽环己烷和甲醇，迅速升温到300℃反应90min，反应完毕后冷却到室温，烧瓶内的反应产物5000rpm离心5min,沉淀用乙醇反复洗涤2-3次。将所得淡黄色上转换纳米颗粒溶解于10mL氯仿中保存待用。
(2)NaYF4:Yb,Tm/NaYF4的高分子的包覆；
准确称取1～5mg两亲性嵌段共聚物于圆底烧瓶中，加入体积比为1：3的氯仿和乙醇的混合溶液，然后加入200uL步骤(1)制备好的上转换纳米粒子，混合均匀，将混合物置于旋转蒸发仪上，保持35℃水浴恒温，减压使其缓慢蒸干，再加入5mL弱碱性的磷酸盐缓冲溶液，悬浊液呈白色，离心洗涤5～10次，离心管底部的粒子用10mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液溶解，得到pH中性的Poly-NaYF4:Yb,Er/NaYF4的悬浊液，4℃避光保存备用。
(3)上转换纳米粒子标记抗体，取200uL修饰好的已溶于碱性溶液中的上转换纳米粒子悬浊液于离心管中，离心20min后，弃去上清液，把纳米粒子溶于1mL pH 6.5的MES缓冲溶液里，超声混匀，加入现配的1mg/mL EDC和1.5mg/mL NHS，EDC与NHS体积比为3:4，室温静置20min,离心15min，弃去上清液，把活化好的纳米粒子溶于1mL pH 7.4的PB中，超声混匀，加入15uL 5mg/mL大肠杆菌O157:H7单抗到PB中，反应30min，反应完毕后再离心30min，弃去上清液，偶联好单抗的纳米粒子溶于1mL pH 7.4的PB中，超声混匀，得到1mL悬浊液，4℃冰箱避光保存待用。
(4)上转换免疫层析法的试纸条的制作：首先把处理过的NC膜粘贴在粘性底板上2.1×30cm的位置，做好包被、烘干；把结合垫沿下方切割线粘贴在粘性底板上0.7×30cm的位置，上端压分析膜下端，与分析膜重叠约1mm；把样品垫粘贴在粘性底板上，下端与PVC边缘线平齐，上端压结合垫下端，重叠约1mm，把吸水纸沿PVC底板上方粘贴在粘性底板上，下端压分析膜上端，重叠约2mm；粘贴好的30cm长的条带用切条机切成每条宽为3mm的条带，每个条带装在塑料卡内。
(5)结合物溶液的配置和包被:分别取1％Tween-20，0.5％BSA，0.5％PVP-K30，1.5％蔗糖，1％海藻糖溶液体积比为(1～3)：(2～4)：(2～4)：(0.5～2)：(1～5)，并取出100uL最终标记好的纳米粒子悬浊液到上述溶液中，加水或PB配置成总体积为1mL的结合物悬浊液，把配置好的这种结合物悬浊液，把它均匀滴在结合垫上，置于25℃烘箱中彻底干燥0.5h。
(6)把二抗用pH 7.4浓度为50mM的PBS稀释成10μmol/L，作为质控溶液，把转基因蛋白CP4EPSPS单抗用pH 7.4，浓度为50mM的PBS稀释成10μmol/L，作为检测溶液，将NC膜粘贴在塑料底板上，分别把质控溶液与检测溶液用三维平面划膜仪均匀划在NC膜上的质控线和检测线的位置，划好膜后把整块板放在30℃烘箱里干燥30min。
(7)双抗体夹心模式UCPs-ICA定量检测转基因蛋白CP4EPSPS的具体检测方法如下：
用50mM，pH＝7.4的PBS配制转基因蛋白CP4EPSPS的标准溶液，标准溶液含转基因蛋白CP4EPSPS的浓度依次为0.5μmol/L，1μmol/L，10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L,以pH＝7.4的PBS做空白对照试验，每次取40uL测量溶液滴加到试纸条上测定，反应30min后，用激光共聚焦显微镜对试纸条检测带和质控带扫描，检测荧光强度。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条，其特征在于：所述试纸条包括样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫，所述样品垫与结合垫为玻璃纤维素膜，所述分析膜为硝酸纤维素膜，所述吸水垫为纤维素膜，所述分析膜上设有检测线和质控线，所述样品垫、结合垫、吸水垫依次粘贴在PVC板上；
所述结合垫上固定有上转换发光纳米粒子-转基因蛋白CP4EPSPS单抗1结合物；
所述分析膜上的检测线固定有转基因蛋白CP4EPSPS单克隆抗体2，所述质控线固定有二抗。
2.根据权利要求1所述的检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条，其特征在于：所述样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫依次以重叠1～2mm的间距交互层叠黏贴到PVC板上，所述试纸条的宽度为4mm。
3.权利要求1～2任一项所述的检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：
(1)NaYF4:Yb,Tm/NaYF4上转换纳米粒子的制备；
(2)NaYF4:Yb,Tm/NaYF4的高分子的包覆；
(3)上转换纳米粒子标记抗体；
(4)上转换免疫层析法的试纸条的制作；
(5)结合物溶液的配置和包被；
(6)质控溶液和检测溶液的配置和包被；
(7)双抗体夹心模式UCPs-ICA定量检测转基因蛋白CP4EPSPS。
4.根据权利要求3所述的检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层 析试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)NaYF4:Yb,Tm/NaYF4上转换纳米粒子的制备方法如下：
S1：NaYF4:Yb,Tm的制备
往三口烧瓶中加入2～5mL油酸，再加入1.2～3mmol稀土离子氯化物晶体粉末，控制各种稀土元素的摩尔比例为Y:Yb:Tm＝60％:25％:4％。在稀有气体氩气流的保护下，隔绝空气加热到110～130℃，保温20min。迅速加入5～14mL 1-十八烯，然后慢慢加热到150℃，慢慢滴加10mL溶解NH4F和NaOH的甲醇溶液到上述体系中，其中NH4F为6mmol,NaOH为3mmol，滴加完毕50℃继续搅拌40min，慢慢升温至100℃，抽真空，在Ar气保护下迅速升温至300℃，反应60～80min。反应完毕后，冷却至室温，反应产物在5000rpm下离心6min，沉淀用乙醇反复洗涤2-3次，最后将所得产品溶于5mL环己烷中保存待用；
S2：NaYF4:Yb,Tm/NaYF4的制备
将2～5mL油酸加入圆底烧瓶中，再加入0.5mmol YCl3·6H2O晶体粉末，加热到140℃使晶体粉末溶解完全，并除去结晶水，升温到150℃，保温20min，迅速加入5～13mL1-十八烯，并加热到120℃，保温30min，反应完毕并冷却到50℃，此时交替滴加5mL上述NaYF4核的环己烷溶液和4～8mL含有4mmol NH4F、2.5mmol NaOH的甲醇溶液，滴加完毕，恒温搅拌40min,慢慢升温到100℃除尽环己烷和甲醇，迅速升温到300℃反应90min，反应完毕后冷却到室温，烧瓶内的反应产物5000rpm离心5min,沉淀用乙醇反复洗涤2-3次。将所得淡黄色上转换纳米颗粒溶解于10mL氯仿中保存待用。
5.根据权利要求3所述的检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)的制备方法如下：
准确称取1～5mg两亲性嵌段共聚物于圆底烧瓶中，加入体积比为1：3的氯仿和乙醇的混合溶液，然后加入200uL步骤(1)制备好的上转换纳米粒子，混合均匀，将混合物置于旋转蒸发仪上，保持35℃水浴恒温，减压使其缓慢蒸干，再加入5mL弱碱性的磷酸盐缓冲溶液，悬浊液呈白色，离心洗涤5～10次，离心管底部的粒子用10mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液溶解，得到pH中性的Poly-NaYF4:Yb,Er/NaYF4的悬浊液，4℃避光保存备用。
6.根据权利要求求3所述的检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)的标记方法如下：
取200uL修饰好的已溶于碱性溶液中的上转换纳米粒子悬浊液于离心管中，离心20min后，弃去上清液，把纳米粒子溶于1mL pH 6.5的MES缓冲溶液里，超声混匀，加入现配的1mg/mL EDC和1.5mg/mL NHS，EDC与NHS体积比为3:4，室温静置20min,离心15min，弃去上清液，把活化好的纳米粒子溶于1mL pH 7.4的PB中，超声混匀，加入15uL 5mg/mL转基因蛋白CP4EPSPS单抗1到PB中，反应30min，反应完毕后再离心30min，弃去上清液，偶联好单抗的纳米粒子溶于1mL pH 7.4的PB中，超声混匀，得到1mL悬浊液，4℃冰箱避光保存待用。
7.根据权利要求求3所述的检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)试纸条的制作方法如下：
首先把处理过的NC膜粘贴在粘性底板上2.1×30cm的位置，做好包被、 烘干；把结合垫沿下方切割线粘贴在粘性底板上0.7×30cm的位置，上端压分析膜下端，与分析膜重叠约1mm；把样品垫粘贴在粘性底板上，下端与PVC边缘线平齐，上端压结合垫下端，重叠约1mm，把吸水纸沿PVC底板上方粘贴在粘性底板上，下端压分析膜上端，重叠约2mm；粘贴好的30cm长的条带用切条机切成每条宽为3mm的条带，每个条带装在塑料卡内。
8.根据权利要求求3所述的检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)结合物溶液的配置和包被方法如下：
分别取1％Tween-20，0.5％BSA，0.5％PVP-K30，1.5％蔗糖，1％海藻糖溶液体积比为(1～3)：(2～4)：(2～4)：(0.5～2)：(1～5)，并取出100uL最终标记好的纳米粒子悬浊液到上述溶液中，加水或PB配置成总体积为1mL的结合物悬浊液，把配置好的这种结合物悬浊液，把它均匀滴在结合垫上，置于25℃烘箱中彻底干燥0.5h。
9.根据权利要求求3所述的检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(6)把二抗用pH 7.4浓度为50mM的PBS稀释成10μmol/L，作为质控溶液，把转基因蛋白CP4EPSPS单抗用pH 7.4，浓度为50mM的PBS稀释成10μmol/L，作为检测溶液，将NC膜粘贴在塑料底板上，分别把质控溶液与检测溶液用三维平面划膜仪均匀划在NC膜上的质控线和检测线的位置，划好膜后把整块板放在30℃烘箱里干燥30min。
10.根据权利要求求3所述的检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(7)双抗体夹心模式 UCPs-ICA定量检测转基因蛋白CP4EPSPS的具体检测方法如下：
用50mM，pH＝7.4的PBS配制转基因蛋白CP4EPSPS的标准溶液，标准溶液含转基因蛋白CP4EPSPS的浓度依次为0.5μmol/L，1μmol/L，10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L,以pH＝7.4的PBS做空白对照试验，每次取40uL测量溶液滴加到试纸条上测定，反应30min后，用激光共聚焦显微镜对试纸条检测带和质控带扫描，检测荧光强度。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710825336.5A CN107632161A (zh) | 2017-09-14 | 2017-09-14 | 转基因蛋白cp4epsps的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710825336.5A CN107632161A (zh) | 2017-09-14 | 2017-09-14 | 转基因蛋白cp4epsps的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107632161A true CN107632161A (zh) | 2018-01-26 |
Family
ID=61099908
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710825336.5A Pending CN107632161A (zh) | 2017-09-14 | 2017-09-14 | 转基因蛋白cp4epsps的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107632161A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108441219A (zh) * | 2018-03-16 | 2018-08-24 | 中肽生化有限公司 | 一种粒径可控的上转换荧光材料制备方法 |
| CN109444422A (zh) * | 2018-12-17 | 2019-03-08 | 福建省立医院 | 一种基于upt-lf定量测定血清pivka-ii的检测卡及其构建方法及应用 |
| CN111239409A (zh) * | 2020-01-19 | 2020-06-05 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 用于o型口蹄疫病毒抗体定量检测的上转换发光免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN111735957A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-10-02 | 深圳市光与生物科技有限公司 | 一种基于上转换发光技术定量检测psa的免疫层析检测卡 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104449662A (zh) * | 2014-11-11 | 2015-03-25 | 合肥工业大学 | 一种油溶性上转换荧光纳米材料的表面修饰方法 |
| CN105486854A (zh) * | 2015-09-29 | 2016-04-13 | 南方医科大学 | 一种信号放大方法及相关装置 |
| CN105717295A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-29 | 北京市农林科学院 | 一种快速检测转cp4-epsps基因植物及其衍生品的试纸条 |
-
2017
- 2017-09-14 CN CN201710825336.5A patent/CN107632161A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104449662A (zh) * | 2014-11-11 | 2015-03-25 | 合肥工业大学 | 一种油溶性上转换荧光纳米材料的表面修饰方法 |
| CN105486854A (zh) * | 2015-09-29 | 2016-04-13 | 南方医科大学 | 一种信号放大方法及相关装置 |
| CN105717295A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-29 | 北京市农林科学院 | 一种快速检测转cp4-epsps基因植物及其衍生品的试纸条 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| GUICHENG，JIANG，ET AL.: "An Effective Polymer Cross-Linking Strategy To Obtain Stable Dispersions of Upconverting NaYF4 Nanoparticles in Buffers and Biological Growth Media for Biolabeling Applications", 《LANGMUIR》 * |
| 谭贵良等: "《现代分子生物学及组学技术在食品安全检测中的应用》", 30 June 2014 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108441219A (zh) * | 2018-03-16 | 2018-08-24 | 中肽生化有限公司 | 一种粒径可控的上转换荧光材料制备方法 |
| CN109444422A (zh) * | 2018-12-17 | 2019-03-08 | 福建省立医院 | 一种基于upt-lf定量测定血清pivka-ii的检测卡及其构建方法及应用 |
| CN111239409A (zh) * | 2020-01-19 | 2020-06-05 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 用于o型口蹄疫病毒抗体定量检测的上转换发光免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN111735957A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-10-02 | 深圳市光与生物科技有限公司 | 一种基于上转换发光技术定量检测psa的免疫层析检测卡 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107632161A (zh) | 转基因蛋白cp4epsps的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法 | |
| CN109633144B (zh) | 一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条 | |
| JP3126383B2 (ja) | 簡易な分析装置 | |
| Di Nardo et al. | A fluorescent immunochromatographic strip test using Quantum Dots for fumonisins detection | |
| CN101470114B (zh) | 胶体金免疫层析法的增敏检测方法及应用 | |
| CN109239361B (zh) | 一种心肌肌钙蛋白i的检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN107632156A (zh) | 检测大肠杆菌o157:h7的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法 | |
| EP2284538B1 (en) | Biosensor | |
| CN108398562A (zh) | 胱抑素c荧光微球免疫层析定量检测试纸条及试纸卡 | |
| JP5583092B2 (ja) | イムノクロマトグラフィー用試験キット、これを用いた検出方法 | |
| JP2008501124A (ja) | マクロおよびミクロマトリックスの迅速な検出および定量方法および装置 | |
| CN111303878B (zh) | 一种基于双激发双发射的上转换发光纳米颗粒制备、层析试纸条及检测方法 | |
| EP2290367A1 (en) | Method for detecting objective substance and kit for detecting objective substance | |
| CN113567666A (zh) | 一种荧光微球标记的免疫层析法新型冠状病毒检测试纸条及其制备方法和应用 | |
| TW494238B (en) | Chromatographic test pieces and chromatographic assay | |
| CN112315511A (zh) | 眼表液采集器及眼表疾病诊断装置 | |
| JP4990692B2 (ja) | イムノクロマトグラフィー測定法及びキット | |
| CN208172009U (zh) | 一种时间分辨荧光免疫层析试纸条 | |
| CN103712963B (zh) | 一种荧光分析方法和装置 | |
| JP3841559B2 (ja) | 免疫学的検査方法および免疫学的検査キット | |
| CN107247141A (zh) | 一种测定孔雀石绿的免疫荧光检测卡及其制备方法与应用 | |
| CN113514636A (zh) | 一种新冠中和抗体荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法 | |
| CN112903648A (zh) | 双波长发射的上转换纳米颗粒、联合胶体金免疫层析试纸及其应用 | |
| CN219799468U (zh) | 一种侧向层析试纸条、检测试剂卡及检测试剂盒 | |
| JP2000028612A (ja) | 免疫学的検査方法および免疫学的検査キット |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180126 |