CN107632084B - 用于评价肠道脂质积累及其干预试剂或试剂盒及应用和检测 - Google Patents

Abstract

本发明涉及油酸和1‑单油酸甘油酯在制备用于评价受试生物肠道脂质积累及其干预效果的试剂盒和检测方法的新应用。应用本发明的试剂和方法可检测受试生物肠道组织中油酸和1‑单油酸甘油酯的含量。本发明进一步提供了利用气相色谱‑质谱方法检测受试生物肠道组织中油酸和1‑单油酸甘油酯含量的方法，可用于评价肠道脂质积累及其干预效果。本发明的试剂盒和检测方法具有操作简单、可靠、快速、高灵敏度和特异性的特点，易于推广。

Description

用于评价肠道脂质积累及其干预试剂或试剂盒及应用和检测

技术领域

本发明涉及油酸和1-单油酸甘油酯在制备用于评价肠道脂质积累及其干预效果的试剂或试剂盒和检测方法的新应用，属于分析化学、生物化学、药物化学领域。

技术背景

随着经济的发展、生活方式的改变，我国心血管病危险因素流行趋势日益明显，导致心血管病发病率和死亡率不断上升。目前，心血管病占居民疾病死亡的40％以上，为居民首位死因，已成为重大的公共卫生问题，其防治刻不容缓。心血管病与生活方式密切相关，尤其是饮食、吸烟、运动和心理压力。世界卫生组织指出，四分之三的心血管病死亡可由生活方式的改变来避免。因而，心血管病的早期预警和干预，具有重要的意义。

肠道脂质代谢与心血管病发生发展密切相关。肉制品中的脂质成分(如：磷脂酰胆碱、胆碱、甜菜碱、肉碱)进入人体后，由肠道微生物代谢成三甲胺，随后被肝脏中黄素单氧酶3氧化成氧化三甲胺(TMAO)，促进血管组织中巨噬细胞摄取胆固醇，并抑制胆固醇反向转运，从而加速泡沫细胞形成，诱发动脉粥样硬化相关的心血管病，甚至引起死亡。此外，脂质相关代谢物日益广泛地应用于心血管病发生发展的预测。对4007个病人心血管事件进行3年追踪研究发现，血浆TMAO水平越高，患心血管病风险越高，其中，血浆TMAO在6.18μM以上的人发生主要心血管事件(心肌梗塞、中风或死亡)的风险比TMAO在2.43μM以下的人高1.54倍。值得关注的是，白黎芦醇等多酚类物质，可调节脂质代谢、抑制血小板聚集、抗氧化等作用，具有强心血管保护作用。APOE^-/-小鼠实验证实，白黎芦醇可通过重组肠道微生物，减少TMAO水平，增加肝脏胆汁酸合成，从而缓解TMAO诱发的动脉粥样硬化发生发展。因而，肠道脂质积累及其干预效果的评价将有利于心血管病发生发展的分子机制研究、早期预防、干预和术后治疗，从而可降低患病率和死亡率。

油酸是食物及生物体内主要的游离脂肪酸，并是泡沫细胞脂滴中大分子脂质(如：胆固醇酯和甘油三酯)的主要合成原料，参与心血管病发生发展的众多生理过程，并被用于构建细胞脂质积累模型。当前脂质积累及其干预效果的评价大多采用油红O或尼罗红染色，再由光谱检测，该评价方法测定的是脂质混合物，无法将脂质分子彼此分离，导致其灵敏度和特异性低。而游离脂肪酸和单甘油酯经硅烷化衍生后，可由气相色谱-质谱技术实现高效分离，并精确区分碳链长度、不饱和碳键的数量和位置，因而该方法较光谱法具有更高的特异性和灵敏度。此外，液相色谱-质谱技术对液离脂肪酸和单甘油酯同分异体构不饱和键位置的分辨能力不如气相色谱-质谱技术。

基于当前研究现状及不足，本发明采用气相色谱-质谱技术检测油酸和1-单油酸甘油酯，该方法具有操作简单、高重复性、灵敏度和特异性的特点。本发明由正常组、脂质积累组和干预组小鼠肠道组织获得代谢谱，并筛选出油酸和1-单油酸甘油酯作为联合标志物，在制备用于评价肠道脂质积累及其干预效果的试剂盒和检测方法的新用途，该组合标志物表现出优良的诊断灵敏度和特异性。目前尚未发现将油酸和1-单油酸甘油酯联合标志物试剂盒用于评价肠道脂质积累及其干预效果的报道。

发明内容

本发明目的是针对当前脂质积累常用试剂盒检测存在的低灵敏度和特异性等问题，提供一种组合的小分子代谢物试剂盒在评价脂质积累及其干预效果的应用，同时提供了可同时检测上述小分子代谢物的方法。

油酸和1-单油酸甘油酯在制备用于评价受试生物肠道脂质积累及其干预效果的试剂或试剂盒中的应用。

所述的试剂或试剂盒用于检测受试生物(人或动物)离体肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯的含量。

所述的试剂或试剂盒为采用气相色谱-质谱方法检测受试生物离体肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯含量的试剂的组合。

一种用于评价肠道脂质积累及其干预效果的试剂或试剂盒，包括：

①标准品：油酸和1-单油酸甘油酯，所述标准品分别用于肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯的定性；

②80-100％甲醇/水(v/v)提取液：所述提取液用于提取肠道组织中的代谢物；

③衍生化试剂：10-20mg/mL甲氧胺吡啶溶液、N-甲基-N-(三甲基硅基)三氟乙酰胺。

受试生物为人或动物。如受试生物包括小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠等实验鼠中一种或二种以上；

脂质积累干预组中，干预试剂包括白黎芦醇、表没食子儿茶素没食子酸酯等中一种或二种以上具有降脂作用的化学成分。

所述的肠道包括：十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠中一种或二种以上肠道的部分或混合组织。

为实现上述目的，本发明以小鼠为模型，以白黎芦醇为干预试剂，采用如下技术方案：

1.小鼠肠道组织样本采集：正常组、脂质积累组和干预组小鼠处死后，采集小鼠肠道组织，保存于-80℃冰箱中备用。

2.采用气相色谱-质谱技术获取小鼠肠道组织代谢轮廓后，筛选差异代谢物，筛选参数包括差异水平p值、变化倍数、诊断灵敏度、特异性和AUC(Area under the cure)值等。

3.筛选出的差异代谢物经二元逻辑回归分析，整合为组合标志物变量，采用ROC(Receiver operating characteristic)曲线评价组合标志物的灵敏度和特异性，获得AUC值。

4.组合标志物用于评价脂质积累：油酸和1-单油酸甘油酯在脂质积累组中显著高于对照组(p＜0.05，two-tailed Mann-Whitney U test)；将油酸和1-单油酸甘油酯的含量代入SPSS软件中二元逻辑回归模块分析，构建二元逻辑回归模型，并得出常数项、油酸和1-单油酸甘油酯在回归模型中的系数，获得方程1；根据方程1，即可得各个样本的分类预测概率。构建的二元逻辑回归模型和方程1如下：

二元逻辑回归模型：样本分类预测概率＝1/[1+e^-(c+K*a+L*b)]

其中，c为常数项；a为油酸含量；b为1-单油酸甘油酯含量；K为油酸在方程中的系数；L为1-单油酸甘油酯在方程中的系数；

二元逻辑回归方程1：样本分类预测概率＝1/[1+e^{-(-42.672+0.003*a-0.001*b)}]

其中，a和b分别表示油酸和1-单油酸甘油酯的含量。

将样本分类预测概率的临界值设为0.5，若样本分类预测概率值＜0.5，则肠道脂质积累不显著；若样本分类预测概率值≥0.5，则肠道脂质积累显著。以样本分类预测概率为变量，进行ROC分析，评价脂质积累的诊断性能，若灵敏度和特异性都≥80.0％，且AUC≥0.8，则诊断性能优良。

5.组合标志物用于评价脂质积累干预效果：油酸和1-单油酸甘油酯在干预组中显著低于脂质积累组(p＜0.05，two-tailed Mann-Whitney U test)；将油酸和1-单油酸甘油酯的含量代入SPSS软件中二元逻辑回归模块分析，构建二元逻辑回归模型，并得出常数项、油酸和1-单油酸甘油酯在回归模型中的系数，获得方程2；根据方程2，即可得各个样本的分类预测概率。构建的二元逻辑回归模型和方程2如下：

二元逻辑回归模型：样本分类预测概率＝1/[1+e^-(c+K*a+L*b)]

其中，c为常数项；a为油酸含量；b为1-单油酸甘油酯含量；K为油酸在方程中的系数；L为1-单油酸甘油酯在方程中的系数；

二元逻辑回归方程2：样本分类预测概率＝1/[1+e^{-(33.22-0.002*a+0.001*b)}]

其中，a和b分别表示油酸和1-单油酸甘油酯的含量。

将样本分类预测概率的临界值设为0.5，若样本分类预测概率值＜0.5，则肠道脂质积累的干预效果不显著；若样本分类预测概率值≥0.5，则肠道脂质积累的干预效果显著。以样本分类预测概率为变量，进行ROC分析，评价脂质积累干预效果的诊断性能，若灵敏度和特异性都≥80.0％，且AUC≥0.8，则诊断性能优良。

6.评价系统所包括的装置：色谱柱为DB-5MS毛细管柱，柱长30m，内径250μm，膜厚0.25μm；检测仪器为气相色谱-质谱联用仪。

7.确定试剂盒组成：

⑴标准品：油酸和1-单油酸甘油酯，分别用于肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯的定性。

⑵提取液：80％甲醇水溶液(v/v)，用于提取肠道组织代谢物。

⑶衍生化试剂：①20mg/mL甲氧胺吡啶溶液，用于羰基和醛基的肟化反应，可避免α-酮酸脱羧、酮基转化成烯醇，此外，可防止链状糖环化，阻止不同构象的糖之间相互转化。②N-甲基-N-(三甲基硅基)三氟乙酰胺(for GC derivatization，≥98.5％)，用于羟基、羧基、氨基等含活泼氢代谢物的硅烷化反应，生成挥发性或半挥发性、并具有更强稳定性的衍生物，以利于气相色谱-质谱检测。

⑷仪器分析条件：

①气相色谱条件：进样量为1μL，进样口温度300℃，分流比5：1，色谱柱为DB-5MS毛细管色谱柱。载气为高纯氦气，其恒定线速度为40cm/s。色谱柱升温程序：70℃保持3min后，以5℃/min的速率升至300℃，保持10min。

②质谱条件：传输线和离子源温度分别为280℃和230℃。采用电子轰击的离子化方式，电离电压为70eV。采用全扫描(扫描范围：33-600m/z)模式采集质谱数据，质量扫描速率为5张谱图/s。溶剂切割时间为5.3min。检测器电压与调谐电压一致。

⑸质谱数据处理：原始质谱数据导成NetCDF格式后，将XCMS程序导入R2.3.11软件，进行峰匹配和积分，获得肠道组织样本中各个离子峰的面积和保留时间。采用ChromaTOF软件对质谱文件进行重叠峰去卷积、谱库(NIST11，Wiley和Fiehn库)检索和匹配，对代谢物进行定性，并获得每个代谢物的特征离子，再通过标样的保留时间、保留指数、质谱碎片特征，进一步确认定性结果。油酸和1-单油酸甘油酯的特征离子(m/z)分别为339和397，对应的保留时间(min)分别为35.05和43.62。

8.采用肠道组织样本测试本发明的应用效果。以油酸和1-单油酸甘油酯为组合标志物，根据肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯的含量，可正确识别正常组与脂质积累组样本，正确率为100.0％，最优灵敏度和特异性都可达到100.0％，AUC为1.0，表明油酸和1-单油酸甘油酯作为组合标志物可正确识别脂质积累现象，并具有优越的诊断性能(图5)。此外，以油酸和1-单油酸甘油酯为组合标志物，根据肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯的含量，可正确识别脂质积累组与干预组样本，正确率为100.0％，最优灵敏度和特异性都可达到100.0％，AUC为1.0，表明油酸和1-单油酸甘油酯作为组合标志物可正确识别脂质积累的干预效果，诊断性能优越(图5)。

本发明的主要优点在于：

①由于常见光谱检测技术是基于特征官能团信号进行检测，其难以检测具有相同官能团的同系物和同分异构体，因而，通常检测的是脂质混合物，对脂质的分辨能力远不如色谱-质谱检测技术。本发明采用气相色谱-质谱检测技术，能精确区分游离脂肪酸和单甘油酯的碳链长度、不饱和碳键的数量和位置，其对游离脂肪酸和单甘油酯同分异构体不饱和键位置的分辨能力亦强于液相色谱-质谱技术。此外，本发明采用ChromaTOF软件对质谱数据进行重叠峰去卷积，消除重叠峰和杂质峰的干扰，再由谱库(NIST11，Wiley和Fiehn库)检索和匹配，可对代谢物进行很好的定性，并获得每个代谢物的特征离子，消除重叠峰和杂质峰的影响，提高定量准确度。故，本发明采用的方法可对肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯进行高灵敏、高特异性的定性和定量分析。

②本发明提供了一种以气相色谱-质谱技术为基础的肠道组织脂质积累及其干预效果的检测试剂盒，可通过检测肠道组织样本中油酸和1-单油酸甘油酯含量准确评价肠道脂质积累及其干预效果。本发明采用离体样本进行检测，具有操作简单、周期短、高灵敏度、高特异性等特点，是现行检测方法的有效补充，并可为脂质积累及其干预的分子过程、相关疾病风险评估等提供有效分析方法。

附图说明

图1：小鼠病理图。N：正常组；L：脂质积累组；I：干预组。

图2：主成分分析中QC样本分布图。QC:质量控制样本；非QC：非质量控制样本。

图3：QC样本中离子峰含量相对标准偏差分布图。

图4：样本主成分分布图。N：正常组；L：脂质积累组；I：干预组。

图5：肠道脂质积累及其干预效果评价。N：正常组；L：脂质积累组；I：干预组。*：p＜0.05，two-tailed Mann-Whitney U test。(A)油酸变化；(B)1-单油酸甘油酯变化；(C)油酸和1-单油酸甘油酯组合标志物评价肠道脂质积累情况；(D)油酸和1-单油酸甘油酯组合标志物评价肠道脂质积累干预效果；(E)油酸和1-单油酸甘油酯组合标志物评价肠道脂质积累的诊断性能；(F)油酸和1-单油酸甘油酯组合标志物评价肠道脂质积累干预效果的诊断性能。

表1游离脂肪酸和单甘油酯的变化。

备注：^a：经标准质谱库质谱图比对进行定性，再由标准样化合物的质谱图、保留时间、保留指数进行验证。^b：根据标准质谱库质谱图比对进行定性。由非参数检验(two-tailed Mann-Whitney U test)进行显著性检验，加粗显示显著性变化(p<0.05)。N：正常组；L：脂质积累组；I：干预组。

具体实施方式

实施例

下面结合实例进一步描述本发明，但所述实施例仅用于说明本发明，而不是限制本发明。熟悉本领域者在不违背本发明方法及思路的前提下，还可做出各种类似的变型或替换，此类似的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

1.小鼠模型的建立

①正常组：5周龄普通C57BL/6J小鼠(6只)适应性喂养1周后，每天喂饲普通鼠料(南京君科生物工程有限公司)16周。②脂质积累组：5周龄APOE^-/-小鼠(C57BL/6J，7只)适应性喂养1周后，每天喂饲高脂饲料(10.0％猪油+4.0％奶粉+2.0％胆固醇+0.5％胆酸钠+普通鼠料，南京君科生物工程有限公司)16周。③干预组：5周龄APOE^-/-小鼠(C57BL/6J，6只)适应性喂养1周后，每天喂饲高脂饲料(10.0％猪油+4.0％奶粉+2.0％胆固醇+0.5％胆酸钠+普通鼠料，南京君科生物工程有限公司)16周，并每天灌胃给予150mg/kg白黎芦醇，正常组和脂质积累组每天灌胃给予等体积的蒸馏水。

2.小鼠主动脉病理检测

随机从正常组、脂质积累组和干预组中各选取3只小鼠，处死后，分离主动脉，油红O染色观察主动脉脂质积累等病理情况。

3.小鼠肠道组织样本采集

正常组(3只)、脂质积累组(4只)和干预组(3只)小鼠处死后，取出整个肠道，肠道内容物清洗干净后，将肠道组织保存于-80℃冰箱中备用。

4.肠道组织样本前处理

将肠道样本剪碎，置于MMP400振荡装置(Restch，Germany)，在25次/s的频率下振荡破碎5.0min，使肠道组织混合均匀。称取15.0mg肠道组织于2.0ml Eppendorf离心管中，先后加入氧化锆小球和600μL 80％甲醇提取液，涡旋30s，置于MMP400振荡装置，在25次/s的频率下振荡破碎1.5min后，于12000rpm，4℃条件下离心15min，取出480μL上清液于1.5ml离心管中，置于真空冷冻干燥机(Thermo Scientific,USA)冻干。

往组织冻干样本中加入50μL甲氧胺吡啶溶液(20mg/mL),涡旋30s后，于37℃水浴中肟化1.5h。随后，加入40μL N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺，于37℃水浴中硅烷化1.0h。最后，于12000rpm，4℃条件下离心15min，取上清液进行后续的仪器分析。

从所有待测肠道样本中，称取等量组织于2.0ml Eppendorf离心管，混合成一个QC(质量控制)样本，置于MMP400振荡装置，在25次/s的频率下振荡3.0min，混合均匀后，分成每份15.0mg的QC样本，取3份QC样本，在后续的振荡破碎提取、离心、冻干、衍生化和气相色谱-质谱分析过程中，与其它分析样本同样处理。

5.气相色谱-质谱分析

气相色谱分析条件：色谱柱为DB-5MS毛细管柱，柱长30m，内径250μm，膜厚0.25μm。进样口温度300℃，进样量1μL，分流比5：1。载气为高纯氦气，其恒定线速度为40cm/s。色谱柱升温程序：初始柱温70℃保持3min后，以5℃/min的速率升至300℃，保持10min。

质谱分析条件：界面温度和离子源温度各为280和230℃，电离方式为电子轰击，电离电压70eV。溶剂切割时间为5.3min，质荷比扫描范围为33-600，质谱扫描频率为5张谱图/s。检测电压与调谐电压一致。

6.质谱数据处理

原始质谱数据导成NetCDF格式后，将XCMS程序导入R2.3.11软件，进行峰匹配和积分，获得样本中各个离子峰的面积和保留时间。采用ChromaTOF软件对质谱文件进行离子峰识别、重叠峰去卷积、谱库(NIST11，Wiley和Fiehn库)检索和匹配，对代谢物进行定性，并获得每个代谢物的特征离子。在峰识别与去卷积处理中，峰宽和信噪比分别设为5s和5。其次，通过标样的保留时间、保留指数、质谱碎片特征，进一步确认定性结果。油酸和1-单油酸甘油酯的特征离子(m/z)分别为339和397，对应的保留时间(min)分别为35.05和43.62。油酸和1-单油酸甘油酯的含量由其原始峰面积除以总峰面积后，乘以1×10⁷的数值表示，进行后续的统计分析。

7.统计分析

由在线软件MetaboAnalyst 3.0进行主成分分析，应用two-tailed Mann-WhitneyU test评价油酸和1-单油酸甘油酯含量在各实验组间的差异水平，用SPSS软件进行二元逻辑回归分析、ROC曲线分析。

8.小鼠主动脉病理结果

与对照组相比，在脂质积累组小鼠的主动脉中可清楚看到斑块显著增多，并出现脂质积聚和大量巨噬细胞；当用白黎芦醇干预后，与脂质积累组相比，可看到干预组小鼠主动脉斑块显著缩小，脂质减少，巨噬细胞数量亦显著降低(图1)。如技术背景所述，由于肠道脂质代谢与动脉粥样硬化发生发展密切相关。随后收集肠道组织样本，用本发明方法进行肠道脂质积累及其干预效果的评价。

9.检测方法重复性和稳定性评价

将本发明方法应用于肠道组织样本分析，由样本主成分分析图上可知，3个QC样本紧密地聚集(图2)。此外，从QC样本中离子峰含量的相对标准偏差(RSD)分布看，在2907个离子中，2490个离子RSD小于15％，占总离子数的85.7％；2586和2746个离子RSD分别小于20和30％，各占总离子数的89.0和94.5％(图3)。综合主成分分析中QC样本分布及QC样本中各个离子峰RSD分布可知，本发明所步及的肠道组织样本代谢物提取、冻干、衍生化、气相色谱-质谱分析等步骤具有高度的重复性、稳定性和可靠性，适合分析肠道组织样本。

10.肠道脂质积累及其干预效果

在脂质积累组小鼠肠道组织中，十二酸、十四酸、十八酸、油酸、花生四烯酸、11,14-二十碳二烯酸、11-二十烯酸和4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸等游离脂肪酸显著高于正常组；1-单十四酸甘油酯、1-单十六酸甘油酯、1-单亚油酸甘油酯、1-单油酸甘油酯和1-单十八酸甘油酯等单甘油酯亦显著高于正常组，表明肠道出现显著的脂质积累现象(p＜0.05，表1和图5)。当用白黎芦醇干预脂质积累时，可看到干预组小鼠肠道组织中十二酸、十四酸、反式-棕榈油酸、亚油酸、油酸、11,14-二十碳二烯酸和11-二十烯酸等游离脂肪酸显著低于脂质积累组；1-单十四酸甘油酯、1-单棕榈油酸甘油酯、1-单十六酸甘油酯、1-单亚油酸甘油酯、2-单亚油酸甘油酯、1-单油酸甘油酯和1-单十八酸甘油酯等单甘油酯亦显著低于脂质积累组，表明肠道脂质积累的干预效应显著(p＜0.05，表1和图5)。随后，在游离脂肪酸和单甘油酯中选择含量高、在对照组与脂质积累组、脂质积累组与干预组之间都有显著变化(p＜0.05)，且变化倍数大于2或小于0.5的油酸和1-单油酸甘油酯作为组合标志物用于评价肠道脂质积累及其干预效果(图5)。

11.肠道脂质积累评价

以油酸和1-单油酸甘油酯为组合标志物，基于二元逻辑回归模型，评价肠道脂质积累程度，结果表明，本发明采用的方法可正确地识别脂质积累样本，正确率为100.0％，表明本发明提供的方法可评价肠道是否出现脂质积累现象。此外，应用ROC分析评价本发明检测方法的诊断性能，结果表明，本发明对肠道脂质积累的诊断性能优越，最优灵敏度和特异性都可达到100.0％，AUC为1.0(图5)。

12.肠道脂质积累的干预效果评价

以油酸和1-单油酸甘油酯为组合标志物，基于二元逻辑回归模型，评价肠道脂质积累的干预效果，结果表明，本发明采用的方法可正确地识别脂质积累的干预样本，正确率为100.0％，表明本发明提供的方法可评价肠道脂质积累是否得到有效干预。此外，应用ROC分析评价本发明检测方法的诊断性能，结果表明，本发明对肠道脂质积累的诊断性能优越，最优灵敏度和特异性都可达到100.0％，AUC为1.0(图5)。

13.结论：利用本发明提供的方法可高灵敏、高特异性地检测肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯，并由油酸和1-单油酸甘油酯含量信息，可高灵敏、高特异性地识别高脂饮食诱发的肠道脂质积累，提示受试生物肠道脂质代谢异常，发生心血管病、糖尿病、肝病等疾病的风险上升。此外，根据油酸和1-单油酸甘油酯含量信息，亦可高灵敏、高特异性地识别白黎芦醇对肠道脂质累积的干预作用，其可有效地降低肠道脂质积累，提示白黎芦醇可降低受试生物发生心血管病、糖尿病、肝病等疾病的风险。本发明具有反应条件温和，高重复性和稳定性的特点，可为脂质积累及其干预相关分子过程、动脉粥样硬化等疾病相关分子机制的研究，提供有效的技术支持。

Claims (8)

1.油酸和1-单油酸甘油酯在制备用于评价受试生物肠道脂质积累及其干预效果的试剂或试剂盒中的应用。

2.根据权利要求1所述的油酸和1-单油酸甘油酯在制备用于评价受试生物肠道脂质积累及其干预效果的试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的试剂或试剂盒用于检测受试生物离体肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯的含量。

3.根据权利要求1所述的油酸和1-单油酸甘油酯在制备用于评价受试生物肠道脂质积累及其干预效果的试剂或试剂盒中的应用，其特征在于：所述的试剂或试剂盒为采用气相色谱-质谱方法检测受试生物离体肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯含量的试剂的组合。

4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于：所述肠道包括：十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠中一种或二种以上肠道的部分或混合组织。

5.一种受试生物肠道组织中油酸和1-单油酸甘油酯含量的检测方法，包括以下步骤：

精确称取人或动物离体肠道组织，由含内标的提取液破碎提取；

组织提取液冷冻干燥后，进行衍生化，衍生化试剂为10-20mg/mL甲氧胺吡啶溶液、N-甲基-N-(三甲基硅基)三氟乙酰胺；

采用气相色谱-质谱方法检测组织中油酸和1-单油酸甘油酯的含量；

根据油酸和1-单油酸甘油酯的含量，建立判别模型，评价受试生物肠道脂质积累及其干预效果；

所述的气相色谱条件：进样量为1μL，进样口温度300℃，分流比5：1；色谱柱为DB-5 MS或HP-5 MS毛细管色谱柱；载气为高纯氦气，其恒定线速度为40cm/s；色谱柱升温程序：70℃保持3min后，以5℃/min的速率升至300℃，保持10min。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述的质谱条件：传输线和离子源温度分别为280℃和230℃；采用电子轰击的离子化方式，电离电压为70eV；采用全扫描或选择离子扫描模式采集质谱数据，油酸和1-单油酸甘油酯的特征离子分别为339 m/z和397 m/z，保留时间分别为35.05 min和43.62 min；质量扫描速率为2-5张谱图/s；溶剂切割时间为5.3min；检测器电压与调谐电压一致。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，全扫描范围：33-600m/z。

8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，肠道包括：十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠中一种或二种以上肠道的部分或混合组织。

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