CN107621543A - Krba1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用、肝癌预后评估试剂盒及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用、肝癌预后评估试剂盒及方法。本发明采用免疫组化方法检测KRBA1蛋白在肝癌组织中的相对表达量，以此判断肝癌患者出现肝癌复发转移的风险。本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用，提示该蛋白能用于制备判断肝癌患者预后的蛋白质分子标记，对于肝癌病人术后监控和序贯治疗也具有重要的指导意义。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用、肝癌预后评估试剂盒及方法。
背景技术
肝癌是指发生于肝脏的癌症。如果是肝脏内的细胞所引发的癌病，称之为“原发性肝癌”；由身体其他器官的癌症转移到肝脏而形成的肝脏恶性肿瘤，称为继发性肝癌，也称“转移性肝癌”。各种中胚叶肿瘤侵润到肝脏，通常称为某某肉瘤肝脏侵润，不包括在继发性肝癌之中。原发性肝癌根据组织学分类可以分为“肝细胞型”、“胆管细胞型”和“混合型”。
肝癌因其恶性度高、病情进展快，病人早期一般没有什么不适，一旦出现症状就诊，往往已属中晚期，故治疗难度大、疗效差，一般发病后生存时间仅为6个月，人称“癌中之王”。
中国是乙肝大国，我国的肝癌多在乙肝肝硬化的基础上发展而来，丙肝病人也在逐渐增加，乙肝后也会发展为肝癌。目前我国发病人数约占全球的半数以上。
肝癌的病因及确切分子机制尚不完全清楚，目前认为其发病是多因素、多步骤的复杂过程，受环境和饮食双重因素影响。流行病学及实验研究资料表明，乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染、黄曲霉素、饮水污染、酒精、肝硬化、性激素、亚硝胺类物质、微量元素等都与肝癌发病相关。继发性肝癌(转移性肝癌)可通过不同途径，如随血液、淋巴液转移或直接侵润肝脏而形成疾病。
KRBA1(KRAB-A domain containing 1)能够影响HIF-1的转录活性。研究表明，在常氧状态下诱导HIF表现，可能造成含有慢性炎性成分的疾病。且已经表明，慢性炎症是自我延续的，并且是因为微环境的异常，而导致转录因子被异常活化的结果。发生在细胞中，生长因子、趋化因子、细胞因子和活性氧平衡的改变，反过提供生长的需要，造成癌症发生与转移。
肝癌做为对人类健康威胁最大的肿瘤之一，至今其发生的分子机制仍不清楚，对肝癌的治疗也缺少特异性的分子靶点，而KRBA1做为十分重要的肿瘤癌基因，目前尚无文献报道KRBA1蛋白与判断肝癌预后或肝癌转移相关。本发明研究发现在肝癌中的KRBA1表达与病人术后预后存在显著的关系，暗示KRBA1可作为肝癌的术后预后的有效预警蛋白。
发明内容
本发明目的在于提供KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用，并提供用于肝癌术后预后评估的试剂盒及方法。
本发明经过广泛而深入的研究，首次发现，采用免疫组化方法检测KRBA1蛋白在肝癌组织中的相对表达量，能够判断肝癌患者出现肝癌复发转移的风险。基于KRBA1蛋白表达量与肝癌复发转移的相关性，以KRBA1蛋白作为预后标记物对其表达量进行检测可以用于指导肝癌的预后判断。
因此，本发明提供了KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用，该应用是以KRBA1蛋白作为分子标记，利用KRBA1单克隆抗体或KRBA1多克隆抗体，结合免疫组化实验试剂，检测KRBA1蛋白在肝癌组织中的相对表达量。
本发明还提供了所述应用中用于肝癌术后预后评估的试剂盒，该试剂盒包括：人源KRBA1单克隆抗体或KRBA1多克隆抗体、免疫组化实验试剂。所述免疫组化实验试剂为本领域免疫组化实验中的常用试剂。
本发明经过研究发现，KRBA1在复发转移肝癌组织中表达高于未复发转移肝癌组织，可以推测KRBA1在肝癌术后复发转移中发挥重要作用。查阅国内外文献，KRBA1与肝癌的发生以及复发转移的相关研究少，在本研究中，KRBA1在肝癌组织中的表达上调，而在癌旁和正常肝组织中则表达下调，且与未复发转移组相比，KRBA1在复发转移组中表达也上调，表明KRBA1可能作为促进因子参与肝癌发生发展过程。通过Kaplan-Meier生存曲线分析，KRBA1表达程度与肝癌患者的预后有关，KRBA1高表达的患者预后不良(P<0.05)。
综上所述，KRBA1在肝癌组织中高表达，KRBA1的高表达与肝癌患者术后复发转移有关。KRBA1可以作为肝癌预后的一个重要候选分子标记物。
优选的，所述人源KRBA1多克隆抗体由序列为SEQ ID NO.1所示的KRBA1蛋白免疫兔子获得，可自行制备，也可采用市购商品。
本发明所述免疫组化实验试剂包括：二甲苯、乙醇、3％H2O2(水溶液)、3％BSA封闭液(以PBS配制)、DAB显色试剂、苏木素、辣根过氧化物酶(用于标记二抗)、PBS(pH7.4)、0.01M EDTA修复液。
利用本发明所述试剂盒进行肝癌术后预后评估的方法如下：
(1)取肝癌患者病理标本，利用人源KRBA1单克隆抗体或人源KRBA1多克隆抗体，以及免疫组化实验试剂，进行免疫组化染色；
其中，病理标本来自于肝癌患者活检组织或术中、术后的病理取材。免疫组化方法利用SP染色法，具体步骤如下：
(a)制备肝癌组织石蜡切片，60℃烤箱过夜。
(b)切片脱腊。依次浸泡：二甲苯I：10min；二甲苯II：10min；二甲苯III：10min。
(c)切片水化。依次浸泡：无水乙醇：3min；90％(v/v)乙醇：3min；80％乙醇：3min；75％乙醇：3min。
(d)PBS清洗3次，每次5min。
(e)EDTA抗原高压修复：切片放入0.01M EDTA修复液浸泡，沸水浴5min，冷却至室温。PBS清洗3次，每次5min。
(f)加入300μL的3％(w/w)过氧化氢水溶液，37℃10min。PBS清洗3次，每次5min。
(g)加入300μL的3％(w/w)BSA封闭液(PBS配制)，37℃1h。PBS清洗3次，每次5min。
(h)加入一抗：KRBA1抗体浓度：1：500，4℃冰箱放置16h后取出，室温复温15min，然后PBS洗4次，每次5min。
(i)滴加二抗，所述的二抗为辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG(购自福州迈新试剂公司，即用型，无需稀释)，37℃45min。PBS洗4次，每次5min。
(j)PBS洗3次，每次5min。DAB(DAB显色试剂盒，购自上海生工)显色2-10min，镜下观察；双蒸水洗止显色，苏木素复染10s，用自来水冲洗浸泡。
(k)脱水。依次浸泡：75％乙醇：2min；80％乙醇：2min；90％乙醇：2min；无水乙醇：2min。
(L)用电吹风吹干，加入中性树胶，盖玻片覆盖。
(2)利用显微镜和成像装置随机选取肝癌组织和癌旁组织3个视野拍摄，利用Aperio Image Scope软件对组织样本的相片进行扫描，扫描后采用该软件的Algorithms(Positive Pixel Count V9)程序对每个样本进行阳性强度计算，计算数据如下：
(3)每个组织样本的免疫组织化学评分计算为Positivity×Log10[255/Iavg]，其中Positivity＝NPositive/NTotal，即阳性率，计算方法为阳性象素数量/显色总数量；Iavg＝(Iwp+Ip+Isp)/(Nwp+Np+Nsp)，即阳性平均强度，计算方法为阳性平均强度＝(弱阳性象素总强度+阳性象素总强度+强阳性象素总强度)/(弱阳性象素数量+阳性象素数量+强阳性象素数量)，即为该组织的免疫组化评分，用于后续分析。
(4)采用SPSS18.0进行统计分析，检验指标与临床资料之间的计数资料采用Pearson卡方检验，计量资料采用t检验。检测指标与临床预后的分析采用KaPlan-Meier生存分析，对数秩和检验(log-ranktest)比较生存曲线的差别。本发明显示KRBA1蛋白与肝癌的预后具有显著的相关性，为预测肝癌的复发转移及术后的生存率提供一条全新途径，对肝癌患者的预后有重要作用。当癌组织KRBA1免疫组化评分高于0.439时，肝癌易出现复发转移，肝癌患者术后易死亡。
本发明的有益效果主要体现在：本发明研究发现在肝癌中的KRBA1表达与病人术后预后存在显著的关系，暗示KRBA1可作为肝癌的术后预后的有效预警蛋白。因此，本发明提供了KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用，提示该蛋白能用于制备判断肝癌患者预后的蛋白质分子标记，对于肝癌病人术后监控和序贯治疗也具有重要的指导意义。
附图说明
图1为KRBA1在肝癌患者术后1年内无复发转移的组织样本中弱表达；
图2为KRBA1在肝癌患者术后1年内复发转移的组织样本中高表达；
图3为KRBA1在肝癌旁组织中弱表达；
图4为肝癌组织中KRBA1低表达组与高表达组生存曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不限于此：
实施例1
用于肝癌术后预后评估的试剂盒，该试剂盒包括：用于对肝癌组织中的KRBA1蛋白的相对表达量进行检测的人源KRBA1单克隆抗体或KRBA1多克隆抗体、免疫组化实验试剂。其中，免疫组化实验试剂包括：二甲苯、乙醇、3％H2O2、3％BSA封闭液、DAB显色试剂、苏木素、辣根过氧化物酶、PBS以及0.01M EDTA修复液。
本发明所述人源KRBA1多克隆抗体由序列为SEQ ID NO.1所示的KRBA1蛋白免疫兔子获得。可自行制备，也可采用市购商品。
本发明所述免疫组化实验试剂包括：二甲苯、乙醇、3％H2O2(水溶液)、3％BSA封闭液(以PBS配制)、DAB显色试剂、苏木素、辣根过氧化物酶(用于标记二抗)、PBS(pH7.4)、0.01M EDTA修复液。
实施例2
KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用，该应用是利用本发明试剂盒进行肝癌术后预后评估，方法如下：
(1)取肝癌患者病理标本，利用人源KRBA1单克隆抗体或人源KRBA1多克隆抗体，以及免疫组化实验试剂，进行免疫组化染色；
其中，病理标本来自于肝癌患者活检组织或术中、术后的病理取材。免疫组化方法利用SP染色法，具体步骤如下：
(a)制备肝癌组织石蜡切片，60℃烤箱过夜。
(b)切片脱腊。依次浸泡：二甲苯I：10min；二甲苯II：10min；二甲苯III：10min。
(c)切片水化。依次浸泡：无水乙醇：3min；90％(v/v)乙醇：3min；80％乙醇：3min；75％乙醇：3min。
(d)PBS清洗3次，每次5min。
(e)EDTA抗原高压修复：切片放入0.01M EDTA修复液浸泡，沸水浴5min，冷却至室温。PBS清洗3次，每次5min。
(f)加入300μL的3％(w/w)过氧化氢水溶液，37℃10min。PBS清洗3次，每次5min。
(g)加入300μL的3％(w/w)BSA封闭液(PBS配制)，37℃1h。PBS清洗3次，每次5min。
(h)加入一抗：KRBA1抗体浓度：1：500，4℃冰箱放置16h后取出，室温复温15min，然后PBS洗4次，每次5min。
(i)滴加二抗，所述的二抗为辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG(购自福州迈新试剂公司，即用型，无需稀释)，37℃45min。PBS洗4次，每次5min。
(j)PBS洗3次，每次5min。DAB(DAB显色试剂盒，购自上海生工)显色2-10min，镜下观察；双蒸水洗止显色，苏木素复染10s，用自来水冲洗浸泡。
(k)脱水。依次浸泡：75％乙醇：2min；80％乙醇：2min；90％乙醇：2min；无水乙醇：2min。
(L)用电吹风吹干，加入中性树胶，盖玻片覆盖。
(2)利用显微镜和成像装置随机选取肝癌组织和癌旁组织3个视野拍摄，利用Aperio Image Scope软件对组织样本的相片进行扫描，扫描后采用该软件的Algorithms(Positive Pixel Count V9)程序对每个样本进行阳性强度计算，计算数据如下：
(3)每个组织样本的免疫组织化学评分计算为Positivity×Log10[255/Iavg]，其中Positivity＝NPositive/NTotal，即阳性率，计算方法为阳性象素数量/显色总数量；Iavg＝(Iwp+Ip+Isp)/(Nwp+Np+Nsp)，即阳性平均强度，计算方法为阳性平均强度＝(弱阳性象素总强度+阳性象素总强度+强阳性象素总强度)/(弱阳性象素数量+阳性象素数量+强阳性象素数量)，即为该组织的免疫组化评分，用于后续分析。KRBA1高低表达标准以358例肝癌组织中KRBA1表达评分的中位数(0.439)为界。
(4)采用SPSS18.0进行统计分析，检验指标与临床资料之间的计数资料采用Pearson卡方检验，计量资料采用t检验。检测指标与临床预后的分析采用KaPlan-Meier生存分析，对数秩和检验(log-ranktest)比较生存曲线的差别。
按照上述方法，本发明在358例肝癌病人的肿瘤组织中检测结果如图1-3所示：KRBA1在1年内无复发转移组中弱表达；在复发转移组中高表达(图2)；在癌旁组织中弱表达(图3)。
KRBA1与肝癌患者预后的关系：
通过Kaplan-Meier生存曲线分析，KRBA1的表达程度与肝癌患者的预后相关，如图4所示，KRBA1高表达的患者平均生存期(存活率)低于KRBA1低表达的患者。
实施例3
取某肝癌术后肿瘤样本进行石蜡包埋切片，并利用以上所述的免疫组织化学方法进行检测，经计算，其癌组织的KRBA1免疫组化组织评分为0.621。经过术后随访发现，该患者在术后第9个月发生肝癌复发转移，术第十五个月死亡。
实施例4
取某肝癌术后肿瘤样本进行石蜡包埋切片，并利用以上所述的免疫组织化学方法进行检测，经计算，其癌组织的KRBA1免疫组化组织评分为0.212。经过术后随访发现，该患者在术后1年均未发现转移复发，健在。
由以上试验结果可知，通过采用免疫组化的方法检测KRBA1蛋白分子相对表达量能预测肝癌远处转移风险以及患者术后的生存或死亡。当癌组织KRBA1的免疫组化评分高于0.439时，肝癌易出现复发转移，肝癌患者术后易死亡。显然KRBA1蛋白与肝癌具有相关性，因此，以KRBA1蛋白作为蛋白质分子标记对其表达量进行检测能预测肝癌手术后复发转移等事件，并判断预后。
序列表
<110> 福建师范大学
<120> KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用、肝癌预后评估试剂盒及方法
<130> 1
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1030
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Arg Glu Asn Tyr Glu Thr Leu Val Ser Val Gly Thr Ala Glu Leu
1 5 10 15
Leu Pro Leu Ser Ala Phe Leu Ser Pro Ser Glu Pro Gly Arg Ala Val
20 25 30
Gly Gly Gly Ser His Ala Asp Glu Gly Gln Glu Pro Ala Gly Cys Gly
35 40 45
Asp Pro Gln Gly Gly Gln Pro Arg His Ser Leu His Leu Thr Ala Leu
50 55 60
Val Gln Leu Val Lys Glu Ile Pro Glu Phe Leu Phe Gly Glu Val Lys
65 70 75 80
Gly Ala Met Asp Ser Pro Glu Ser Glu Ser Arg Gly Ala Ser Leu Asp
85 90 95
Gly Glu Arg Ala Ser Pro Glu Ala Ala Ala Ala Arg Glu Pro Cys Pro
100 105 110
Leu Arg Gly Leu Leu Ser Cys Leu Pro Asp Gly Pro Thr Ser Gln Pro
115 120 125
His Leu Ala Thr Thr Pro Thr Asp Ser Ser Cys Ser Ser Gly Pro Thr
130 135 140
Gly Asp Gly Val Gln Gly Ser Pro Leu Pro Ile Lys Thr Ala Asp Lys
145 150 155 160
Pro Trp Pro Thr Arg Lys Glu Gly Pro Gly Ala Leu Gly Gly Glu Pro
165 170 175
Ser Pro Pro Thr His Ser Pro Ser Arg Arg Lys Ser His Arg Gly Gln
180 185 190
Glu Arg Gly Thr Ser Glu Ala Gly Ile Ser Pro Gly Asn Ser Pro Leu
195 200 205
Gln Gly Leu Ile Asn Cys Leu Lys Glu Ile Leu Val Pro Gly Pro Arg
210 215 220
His Pro Glu Thr Ser Pro Ser Phe Leu Pro Pro Leu Pro Ser Leu Gly
225 230 235 240
Thr Ser Arg Leu Thr Arg Ala Asp Leu Gly Pro Gly Ser Pro Pro Trp
245 250 255
Ala Val Lys Thr Glu Ala Val Ser Gly Asp Cys Pro Leu Gln Gly Leu
260 265 270
Leu His Cys Leu Lys Glu Leu Pro Glu Ala Gln Asp Arg His Pro Ser
275 280 285
Pro Ser Gly Val Gly Asn Arg Arg Leu Gln Glu Asn Pro Gly Ala Trp
290 295 300
Lys Arg Gly Ser Gly Gly Pro Gly Tyr Leu Leu Thr Pro Pro Pro His
305 310 315 320
Pro Asp Leu Gly Ala Gly Gly Leu Leu Ser Val Lys Met Glu Asn Ser
325 330 335
Trp Val Gln Ser Pro Pro Gly Pro Ala Ser Cys Gln Pro Gly Arg Gln
340 345 350
Pro Leu Ser Pro Ser Ala Thr Gly Asp Thr Arg Gly Val Pro Gln Pro
355 360 365
Ser Trp Gly Pro Glu Ala Gln Ala Ala Ser Ala Ser Ser Ser Pro Leu
370 375 380
Glu Ala Leu Glu Ala Cys Leu Lys Gly Ile Pro Pro Asn Gly Ser Ser
385 390 395 400
Pro Ser Gln Leu Pro Pro Thr Ser Cys Ser Gln Asn Pro Gln Pro Gly
405 410 415
Asp Ser Arg Ser Gln Lys Pro Glu Leu Gln Pro His Arg Ser His Ser
420 425 430
Glu Glu Ala Thr Arg Glu Pro Val Leu Pro Leu Gly Leu Gln Ser Cys
435 440 445
Val Arg Asp Gly Pro Ser Arg Pro Leu Ala Pro Arg Gly Thr Pro Thr
450 455 460
Ser Phe Ser Ser Ser Ser Ser Thr Asp Trp Asp Leu Asp Phe Gly Ser
465 470 475 480
Pro Val Gly Asn Gln Gly Gln His Pro Gly Lys Gly Ser Pro Pro Gly
485 490 495
Ser Ser Pro Leu Gln Gly Leu Glu Asn Cys Leu Lys Glu Ile Pro Val
500 505 510
Pro Val Leu Arg Pro Ala Trp Pro Cys Ser Ser Ala Ala Asp Arg Gly
515 520 525
Pro Arg Arg Ala Glu Pro Arg Asn Trp Thr Ala Asp Lys Glu Gly Leu
530 535 540
Arg Ala Glu Ala Cys Glu Ser Ala Arg Leu Gly Gln Gly Arg Gly Glu
545 550 555 560
Ala Pro Thr Arg Ser Leu His Leu Val Ser Pro Gln Val Phe Thr Ser
565 570 575
Ser Cys Val Pro Ala Cys His Gln Arg Gly Phe Lys Asp Pro Gly Ala
580 585 590
Thr Arg Pro Gly Val Trp Arg Trp Leu Pro Glu Gly Ser Ala Pro Lys
595 600 605
Pro Ser Pro Leu His Cys Leu Glu Ser Ala Leu Arg Gly Ile Leu Pro
610 615 620
Val Arg Pro Leu Arg Phe Ala Cys Val Gly Gly Pro Ser Pro Ser Pro
625 630 635 640
Ser Pro Gly Ser Ser Ser Ser Phe Ser Gly Ser Glu Gly Glu Asp Pro
645 650 655
Arg Pro Glu Pro Asp Leu Trp Lys Pro Leu Pro Gln Glu Arg Asp Arg
660 665 670
Leu Pro Ser Cys Lys Pro Pro Val Pro Leu Ser Pro Cys Pro Gly Gly
675 680 685
Thr Pro Ala Gly Ser Ser Gly Gly Ser Pro Gly Glu Asp Pro Arg Arg
690 695 700
Thr Glu Pro Arg Tyr Cys Ser Gly Leu Gly Ala Gly Thr Ala Gln Asp
705 710 715 720
Pro Cys Pro Val Ser Gln Leu Glu Lys Arg Pro Arg Val Ser Glu Ala
725 730 735
Ser Arg Gly Leu Glu Leu Gly His Gly Arg Pro Arg Val Ala Ala Lys
740 745 750
Thr His Glu Arg Leu Leu Pro Gln Gly Pro Pro Glu Leu Pro Ser Glu
755 760 765
Ser Pro Pro Pro Glu Leu Pro Pro Pro Glu Ala Ala Pro Pro Val Leu
770 775 780
Pro Ala Ser Ser Leu Gln Pro Pro Cys His Cys Gly Lys Pro Leu Gln
785 790 795 800
Gln Glu Leu His Ser Leu Gly Ala Ala Leu Ala Glu Lys Leu Asp Arg
805 810 815
Leu Ala Thr Ala Leu Ala Gly Leu Ala Gln Glu Val Ala Thr Met Arg
820 825 830
Thr Gln Val Asn Arg Leu Gly Arg Arg Pro Gln Gly Pro Gly Pro Met
835 840 845
Gly Gln Ala Ser Trp Met Trp Thr Leu Pro Arg Gly Pro Arg Trp Ala
850 855 860
His Gly Pro Gly His Arg His Leu Pro Tyr Trp Arg Gln Lys Gly Pro
865 870 875 880
Thr Arg Pro Lys Pro Lys Ile Leu Arg Gly Gln Gly Glu Ser Cys Arg
885 890 895
Ala Gly Asp Leu Gln Gly Leu Ser Arg Gly Thr Ala Arg Arg Ala Arg
900 905 910
Pro Leu Pro Pro Asp Ala Pro Pro Ala Glu Pro Pro Gly Leu His Cys
915 920 925
Ser Ser Ser Gln Gln Leu Leu Ser Ser Thr Pro Ser Cys His Ala Ala
930 935 940
Pro Pro Ala His Pro Leu Leu Ala His Thr Gly Gly His Gln Ser Pro
945 950 955 960
Leu Pro Pro Leu Val Pro Ala Ala Leu Pro Leu Gln Gly Ala Ser Pro
965 970 975
Pro Ala Ala Ser Ala Asp Ala Asp Val Pro Thr Ser Gly Val Ala Pro
980 985 990
Asp Gly Ile Pro Glu Arg Pro Lys Glu Pro Ser Ser Leu Leu Gly Gly
995 1000 1005
Val Gln Arg Ala Leu Gln Glu Glu Leu Trp Gly Gly Glu His Arg Asp
1010 1015 1020
Pro Arg Trp Gly Ala His
1025 1030
Claims (6)
1.KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用，其特征在于：以KRBA1蛋白作为分子标记，利用人源KRBA1单克隆抗体或人源KRBA1多克隆抗体，结合免疫组化实验试剂，检测KRBA1蛋白在肝癌组织中的相对表达量。
3.根据权利要求2所述的KRBA1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用，其特征在于：所述人源KRBA1多克隆抗体由序列为SEQ ID NO.1所示的KRBA1蛋白免疫兔子获得。
4.应用于肝癌术后预后评估的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括用于对肝癌组织中的KRBA1蛋白的相对表达量进行检测的人源KRBA1单克隆抗体或人源KRBA1多克隆抗体，以及免疫组化实验试剂。
5.根据权利要求4所述的应用于肝癌术后预后评估试剂盒，其特征在于：所述免疫组化实验试剂包括：二甲苯、乙醇、3%H2O2、3%BSA封闭液、DAB显色试剂、苏木素、辣根过氧化物酶、PBS以及0.01M EDTA修复液。
6.一种基于权利要求4所述的试剂盒进行肝癌术后预后评估的方法，其特征在于：其包括以下步骤：
（1）取肝癌患者病理标本，利用人源KRBA1单克隆抗体或人源KRBA1多克隆抗体，以及免疫组化实验试剂，进行免疫组化染色；
（2）利用显微镜和成像装置随机选取肝癌组织和癌旁组织3个视野拍摄为数码照片；
（3）利用Aperio Image Scope软件对组织样本进行扫描，扫描后采用该软件的Algorithms程序对每个样本进行阳性强度计算，换算为该样品的免疫组织化学评分；
（4）通过所得到的评分评估患者术后的预后情况。
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140342946A1 (en) * | 2011-12-31 | 2014-11-20 | Moni Abraham Kuriakose | Diagnostic tests for predicting prognosis, recurrence, resistance or sensitivity to therapy and metastatic status in cancer |
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2017
- 2017-08-30 CN CN201710759180.5A patent/CN107621543B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140342946A1 (en) * | 2011-12-31 | 2014-11-20 | Moni Abraham Kuriakose | Diagnostic tests for predicting prognosis, recurrence, resistance or sensitivity to therapy and metastatic status in cancer |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 上海润裕生物科技有限公司: "KRBA1蛋白抗体", 《WWW.APP17.COM/SUPPLY/OFFERDETAIL/6435393.HTML》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110286219A (zh) * | 2019-04-16 | 2019-09-27 | 福建师范大学 | 死亡相关蛋白激酶1在制备肾透明细胞癌术后预后评估试剂盒中的应用 |
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