CN107607730B - 用于检测唾液中酒精含量的试剂条、制备方法和试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明属于唾液中酒精检测的技术领域，公开了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条、制备方法和试剂盒。所述试剂条包括牛血清白蛋白和海藻酸钠。所述牛血清白蛋白溶解性好，常温条件下即能充分溶于缓冲液中，进而与乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液均匀混合，防止酶的分解和非特异性吸附；所述海藻酸钠具有粘性，其与牛血清白蛋白混合后，会将牛血清白蛋白紧紧吸附在其表面。牛血清白蛋白和海藻酸钠作为乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶的添加剂共同使用，有效地隔离了空气中的氧气和水分，防止了酶的分解和非特异性吸附，避免了产品检测时产生假阳性的现象，使产品具有更优良的稳定性。

Description

用于检测唾液中酒精含量的试剂条、制备方法和试剂盒

技术领域

本发明属于唾液中酒精检测的技术领域，具体涉及一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条、制备方法和试剂盒。

背景技术

随着汽车工业的快速发展及人民生活水平的迅速提高，机动车辆急剧增加，与此同时交通事故也频频发生。2008年世界卫生组织的事故调查显示，大约50-60％的交通事故与驾驶员酒后驾驶有关。在中国，每年因驾驶员酒后驾车引发的交通事故达数万起，造成死亡的事故中50％以上都与酒后驾车有关。从这个意义上讲，酒精正在成为“马路杀手”。要判断是否属于酒后驾驶，就要对驾驶人员进行体内酒精含量检测。我国国家标准GB19522-2010《车辆驾驶人员血液、呼气酒精含量阈值与检验》规定驾驶员血液中酒精含量达20mg/100mL为酒后驾驶，血液中酒精含量达80mg/100mL为醉酒驾驶。血液中酒精含量检测方法最常用的是采用气相色谱法，该方法测试结果准确，但需要实验室专业人员操作，从抽血到测试完成需要很长时间，且操作过程很繁琐，在被检人员不配合的情况下难以取血，同时测试费用昂贵，难以用于交通执法人员的现场执法和监测。目前，在实际道路上交通执法常采用呼气酒精含量检测仪对驾驶员呼出气体中有无酒精及酒精含量进行检测，然而呼气酒精含量检测仪价格昂贵，同时还要配备一次性呼嘴，不便于每个交通执法人员携带使用，而且每次检测使用后至少有10-15分钟的恢复期以除去上一次检测的气体残留，因此，呼气酒精含量检测仪不能连续使用；此外，驾驶员呼气酒精含量与血液酒精含量之比约为1:2200，因此，受环境及驾驶员呼气方式等的影响，其检测结果的准确度不高。

为此，中国专利CN1904619A公开了一种检测唾液中乙醇含量的试剂条，该试剂条是通过将滤纸依次浸入乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液及TMB/二甲苯溶液中制得，通过试剂条中显色剂被乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶氧化后颜色改变的深浅来半定量地检测唾液中乙醇的含量，该方法简便、反应速度快，适合现场检测。为了增加酶的稳定性，上述文献公开的技术中添加明胶和褐藻胶作为乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶的稳定剂，而明胶是多肽分子混合物，分子量很大，不溶于冷水，因此，将明胶充分溶解于乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液时需要用温水甚至热水，而高温条件下酶容易失去活性，所以，由上述文献公开的技术中制备得到的试剂条在检测过程中容易产生假阴性现象，稳定性不高。此外，上述文献公开的技术中采用TMB/二甲苯溶液作为显色液，而TMB容易结晶析出，进而导致显色不均匀，容易使对比测试出现较大误差，影响检测结果的准确性。

发明内容

因此，本发明要解决的第一个技术问题在于克服现有的用于检测唾液中酒精含量的试剂条稳定性不高的问题，从而提供一种稳定好的用于检测唾液中酒精含量的试剂条；本发明所要解决的第二个技术问题是克服现有的用于检测唾液中酒精含量的试剂条因采用TMB作为显色剂易结晶析出而导致检测结果准确性不好的问题，从而提供一种检测结果准确度高的用于检测唾液中酒精含量的试剂条；进一步地，本发明还提供了上述试剂条的制备方法及包含其的试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条，包括吸附试剂物的试剂条本体和承载该试剂条本体的支持体，其中：所述的试剂物包括：显色剂、乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶及添加剂，所述添加剂为牛血清白蛋白或海藻酸钠中的一种或两种。

优选地，所述牛血清白蛋白与海藻酸钠的质量比为(70～90)：1。

优选地，所述显示剂为洛汾碱或其衍生物。

更优选地，所述衍生物为具有如下式(I)所示的结构：

优选地，所述试剂条本体为不含漂白物质和强氧化性物质的滤纸。

优选地，所述支持体为白色或乳白色的聚氨酯板。

本发明还提供了制备上述用于检测唾液中酒精含量的试剂条的方法，包括：

(1)将滤纸按照试剂条的尺寸加工成型，然后粘贴在支持体上；

(2)将乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液定量均匀浇制在步骤(1)所得的滤纸上，干燥；

(3)将步骤(2)所得的滤纸浸泡在显色液中，取出并干燥。

优选地，所述步骤(2)浇制了酶溶液的滤纸在20～35℃下置于无酸碱污染的环境中自然晾干15～25min；步骤(3)中滤纸在显色液中浸泡的时间为5～15s，后取出干燥3～8min。

优选地，所述显色液为显色剂/二氯甲烷的混合液。

优选地，所述显色液的制备过程为将显色剂充分溶解于二氯甲烷中，使每毫升二氯甲烷中溶有0.005～0.015g显色剂。

优选地，所述乙醇氧化酶和过氧化物酶溶液的制备过程包括：

(1)基液的配制：

将质量比为(70～90)：1的牛血清白蛋白与海藻酸钠，溶于pH为7.3～7.6的0.2mol/L的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠水溶液缓冲液中，使每毫升缓冲液中含有0.15～0.25mg的牛血清白蛋白；

(2)乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液的配制：

将活性单位比为1：(2～8)的乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶加入基液中，使每毫升基液中含有酶的总活性单位为350～550。

本方明还提供了一种检测唾液中酒精含量的试剂盒，所述试剂盒包括上述试剂条或根据上述方法制备的试剂条。

本发明的技术方案，具有如下优点：

(1)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂条，所述试剂条包括牛血清白蛋白和海藻酸钠。所述牛血清白蛋白溶解性好，常温条件下即能充分溶于缓冲液中，进而与乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液均匀混合，防止酶的分解和非特异性吸附；所述海藻酸钠具有粘性，其与牛血清白蛋白混合后，会将牛血清白蛋白紧紧吸附在其表面。牛血清白蛋白和海藻酸钠作为乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶的添加剂共同使用，有效地隔离了空气中的氧气和水分，防止了酶的分解和非特异性吸附，避免了产品检测时产生假阳性的现象，使产品具有更优良的稳定性。

本发明中，所述假阳性是指非酒精含量的液体在规定的时间内也使试剂条显色。

(2)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂条，进一步限定了牛血清白蛋白与海藻酸钠的比例，更好地发挥了两者的稳定协同增效作用。

(3)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂条，采用洛汾碱或其衍生物作为显色剂，与传统的3,3’,5,5-四甲基联苯胺(TMB)显色剂相比，洛汾碱或其衍生物因具有优良的非线性光学(NLO)性能，其显色效果更明显，且该显色剂不容易结晶，显色均匀，检测结果的准确性高。

(4)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂条，采用不含漂白物质的滤纸作为试剂条本体，有效地避免了假阴性现象的发生，以及采用不含强氧化性物质的滤纸作为试剂条本体，避免显色剂被氧化，有效地避免了假阳性现象的发生。

所述假阴性是指酒精含量的液体在规定的时间内应该使试剂条显色，结果却未显色。

(5)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂条，采用白色或乳白色的聚氨酯板作为试剂条的支持体，防止因底色不正常导致对比测试出现较大误差的现象。

(6)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂条的制备方法，所述方法是首先对滤纸加工成型后粘贴在支持体上，然后再进行酶和显色剂的固化操作，该方式避免了因人为接触影响固化后的滤纸；将乙醇氧化酶和过氧化物酶溶液定量均匀浇制在滤纸上，不仅保证了酶溶液在滤纸上铺展的均一性，且有效杜绝了酶溶液的浪费，节约了生产成本；采用挥发性强的二氯甲烷溶液，保证了显色剂在滤纸上展开的均一性；干燥时间短，避免了滤纸在干燥过程中产生边缘效应，并进一步避免试剂条产生假阳性的问题。

(7)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂条的制备方法，所述方法对酶和显色剂固化操作的干燥时间及浸泡时间作了进一步地限定，避免了干燥过程中产生边缘效应的可能，并进一步避免试剂条产生假阳性的问题。

(8)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂条的制备方法，所述方法采用二氯甲烷溶解显色剂制备显色液，并将滤纸进入该显色液中，因二氯甲烷具有良好的挥发性，故其能带动显色剂在滤纸上迅速均匀铺展，有效保证了显色剂与酶的均匀混合。

(9)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂条的制备方法，乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液的制备时采用磷酸盐缓冲液，该缓冲液不易产生边缘效应和假阴性，控制缓冲液的pH值为7.3～7.6，保证了酶的活性，且避免了因缓冲液偏酸而导致的均匀度不佳和发黄现象，或偏碱而导致的显色不明显。

(10)本发明的用于检测唾液中酒精含量的试剂盒，便于快速检测人体唾液中酒精的含量，且制备工艺简单、价格便宜、操作简便、携带方便，测试结果重复性好、无任何创伤，为交通执法人员的现场执法提供了极大的便利。

具体实施方式

下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。

下述实施例中，乙醇氧化酶购自SIGMA，辣根过氧化物酶购自SIGMA，牛血清白蛋白购自SIGMA，海藻酸钠购自SIGMA，其余常用试剂购自国药基团化学试剂有限公司。

实施例1

本实施例提供了一种洛汾碱衍生物(I)的制备方法，其反应原理为：

在1000mL的圆底烧瓶中分别加入106.5g 4,4'-双(二甲基)苯酯、59g丁香醛、111g乙酸铵和325mL乙酸，搅拌反应3h。反应结束后加入3.6L水和1.2L二氯甲烷，分离有机相，水相用200mL二氯甲烷溶液萃取一次，合并有机相，浓缩至干即得。

实施例2

本实施例提供了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条，其由不含漂白物质和强氧化性物质的滤纸和乳白色PET板组成，滤纸上的试剂成分为：洛汾碱衍生物(I)显色剂、乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶、牛血清白蛋白与海藻酸钠，所述牛血清白蛋白与海藻酸钠的质量比为80：1，其制备过程具体为：

(1)基液的配制：

将20g牛血清白蛋白与0.25g海藻酸钠加入pH为7.4的100mL 0.2mol/L的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠水溶液缓冲液中，充分搅拌至完全溶解为止。

(2)乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液的配制：

将80U乙醇氧化酶和300U辣根过氧化物酶加入10mL基液中，充分混匀备用。

(3)显色液的配制：

准确称取0.1g洛汾碱衍生物(I)加入10mL二氯甲烷中，充分搅拌至完全溶解后密闭保存。

(4)固相化载体的准备：

将滤纸裁切成8.0cm×35cm大小，并将其平整粘贴在双面胶上，后将粘贴在双面胶上滤纸裁切成0.4cm×35cm，待用；取厚度为0.25mm的乳白色PET板，将上述粘有滤纸的双面胶粘贴在PET板的前端，待用。

(5)酶和显色剂的固化：

取上述配制的酶液及粘贴有滤纸的PET板，按照每板需酶溶液700ul的量用移液器进行准确浇制，并用枪头刮匀，放置于无酸碱污染的环境中自然晾干20分钟，所述环境的温度为28℃。

将上述已干燥的滤纸浸入显色液中，约10秒钟后取出垂直晾干5分钟，即得酒精试剂条半成品。

(6)试剂条的组装：

用切纸机将上述酒精条半成品切成宽0.4cm的长条，即制成检测试剂条。

经检测，本实施例的检测试剂条上的酶在18个月内酶仍有活性。

实施例3

本实施例提供了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条，其由不含漂白物质和强氧化性物质的滤纸和白色PET板组成，滤纸上的试剂成分为：洛汾碱衍生物(I)显色剂、乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶、牛血清白蛋白与海藻酸钠，所述牛血清白蛋白与海藻酸钠的质量比为70：1，其制备过程具体为：

(1)基液的配制：

将15g牛血清白蛋白与0.21g海藻酸钠加入pH为7.5的100mL 0.2mol/L的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠水溶液缓冲液中，充分搅拌至完全溶解为止。

(2)乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液的配制：

将56U乙醇氧化酶和450U加入10mL基液中，充分混匀备用。

(3)显色液的配制：

准确称取0.15g洛汾碱衍生物(I)加入10mL二氯甲烷中，充分搅拌至完全溶解后密闭保存。

(4)固相化载体的准备：

将滤纸裁切成8.0cm×35cm大小，并将其平整粘贴在双面胶上，后将粘贴在双面胶上滤纸裁切成0.5cm×35cm，待用；取厚度为0.25mm的乳白色PET板，将上述粘有滤纸的双面胶粘贴在PET板的前端，待用。

(5)酶和显色剂的固化：

取上述配制的酶液及粘贴有滤纸的PET板，按照每板需酶溶液700ul的量用移液器进行准确浇制，并用枪头刮匀，放置于无酸碱污染的环境中自然晾干25分钟，所述环境的温度为20℃。

将上述已干燥的滤纸浸入显色液中，约5秒钟后取出垂直晾干3分钟，即得酒精试剂条半成品。

(6)试剂条的组装：

用切纸机将上述酒精条半成品切成宽0.5cm的长条，即制成检测试剂条。

经检测，本实施例的检测试剂条上的酶在15个月内仍有活性。

实施例4

本实施例提供了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条，其由不含漂白物质和强氧化性物质的滤纸和白色PET板组成，滤纸上的试剂成分为：洛汾碱显色剂、乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶、牛血清白蛋白与海藻酸钠，所述牛血清白蛋白与海藻酸钠的质量比为90：1，其制备过程具体为：

(1)基液的配制：

将25g牛血清白蛋白与0.28g海藻酸钠加入pH为7.3的100mL 0.2mol/L的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠水溶液缓冲液中，充分搅拌至完全溶解为止。

(2)乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液的配制：

将150U乙醇氧化酶和300U加入10mL基液中，充分混匀备用。

(3)显色液的配制：

准确称取0.05g洛汾碱加入10mL二氯甲烷中，充分搅拌至完全溶解后密闭保存。其中：洛汾碱的结构为：

(4)固相化载体的准备：

将滤纸裁切成8.0cm×35cm大小，并将其平整粘贴在双面胶上，后将粘贴在双面胶上滤纸裁切成0.4cm×35cm，待用；取厚度为0.25mm的乳白色PET板，将上述粘有滤纸的双面胶粘贴在PET板的前端，待用。

(5)酶和显色剂的固化：

取上述配制的酶液及粘贴有滤纸的PET板，按照每板需酶溶液700ul的量用移液器进行准确浇制，并用枪头刮匀，放置于无酸碱污染的环境中自然晾干15分钟，所述环境的温度为35℃。

将上述已干燥的滤纸浸入显色液中，约15秒钟后取出垂直晾干8分钟，即得酒精试剂条半成品。

(6)试剂条的组装：

用切纸机将上述酒精条半成品切成宽0.4cm的长条，即制成检测试剂条。

经检测，本实施例的检测试剂条上的酶在16个月仍有活性。

实施例5

本实施例提供了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂盒，所述试剂盒包括实施例2-4任一实施例的试剂条。

对比例1

本对比例提供了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条，其由不含漂白物质和强氧化性物质的滤纸和乳白色PET板组成，滤纸上的试剂成分为：洛汾碱衍生物(I)显色剂、乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶、褐藻胶和明胶，所述明胶和褐藻胶的质量比为80：1，其制备过程具体为：

(1)基液的配制：

将20g明胶白与0.25g褐藻胶加入pH为7.4的100mL 0.2mol/L的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠水溶液缓冲液中，充分搅拌至完全溶解为止。

(2)乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液的配制：

将将80U乙醇氧化酶和300U辣根过氧化物酶加入10mL基液中，充分混匀备用。

(3)显色液的配制：

准确称取0.1g洛汾碱衍生物(I)加入10mL二氯甲烷中，充分搅拌至完全溶解后密闭保存。

(4)固相化载体的准备：

将滤纸裁切成8.0cm×35cm大小，并将其平整粘贴在双面胶上，后将粘贴在双面胶上滤纸裁切成0.4cm×35cm，待用；取厚度为0.25mm的乳白色PET板，将上述粘有滤纸的双面胶粘贴在PET板的前端，待用。

(5)酶和显色剂的固化：

取上述配制的酶液及粘贴有滤纸的PET板，按照每板需酶溶液700ul的量用移液器进行准确浇制，并用枪头刮匀，放置于无酸碱污染的环境中自然晾干20分钟，所述环境的温度为28℃。

将上述已干燥的滤纸浸入显色液中，约10秒钟后取出垂直晾干5分钟，即得酒精试剂条半成品。

(6)试剂条的组装：

用切纸机将上述酒精条半成品切成宽0.4cm的长条，即制成检测试剂条。

经检测，本对比例的检测试剂条上的酶在9个月内有活性。

对比例2

本对比例提供了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条，其具体成分以及酶溶液、显色液的配制操作同实施例1，不同之处在于：本对比例中酶和显色剂的固化及试剂条制备操作是按照中国专利文献CN1904619A实施例1的方法进行的，具体为：将滤纸先浸入乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液中，取出滤纸在30℃热风、避光下干燥20min；将显色液滴在已干燥的滤纸上，再经30℃热风、避光下干燥20min。然后将干燥后的滤纸贴在单面含胶的白色聚酯板的前端，用切纸机切成宽度0.5cm的长条，即制成检测试剂条。

经检测，本对比例的检测试剂条上的酶在10个月有活性。

对比例3

按照中国专利文献CN1904619A实施例1的方法生产的检测试剂条。

经检测，本对比例的检测试剂条上的酶在8个月内有活性。

对比例4

本对比例提供了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条，其由不含漂白物质和强氧化性物质的滤纸和乳白色PET板组成，滤纸上的试剂成分为：洛汾碱衍生物(I)显色剂、乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶，其制备过程同实施例1。

经检测，本对比例的检测试剂条上的酶在4个月内有活性。

对比例5

本对比例提供了一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条，其由不含漂白物质和强氧化性物质的滤纸和乳白色PET板组成，滤纸上的试剂成分为：TMB显色剂、乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶、牛血清白蛋白与海藻酸钠，其制备过程同实施例1。

经检测，本对比例的检测试剂条上的酶在18个月内仍有活性。

实验例1

分别对本发明实施例2-4及对比例1-5的检测试剂条进行现场测试，检测方法为：检测时将唾液收集在收集器皿中，用试纸沾取唾液，试纸在唾液中沾湿1～2s即取出，放置2min后观察试纸外观颜色的变化，如果试纸颜色变成红色，则说明样本中有乙醇存在。拿试纸的色卡和试纸显色做对比，色卡上的每个色块都表明了相应的浓度值。如果试纸没有变色，说明样本中没有乙醇。做500次检测试验，并将所有测试的结果与气象色谱顶空法(GC/MS)检测比较，统计是否有假阳性现象。

统计结果为：500次检测试验中：本发明实施例2的检测试剂条未发现一例假阳性结果，实施例3及实施例4的检测试剂条仅发现两例假阳性结果，对比例1的检测试剂条每100例至少发现13例以上出现阳性结果，对比例2的检测试剂条每100例至少发现10例以上出现阳性结果，对比例3的检测试剂条每100例至少发现16例以上出现阳性结果，对比例4的检测试剂条每100例至少发现20例以上出现阳性结果，对比例5的检测试剂条每100例至少出现6例以上出现阳性结果，4例以上出现阴性结果。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举，而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (7)

1.一种用于检测唾液中酒精含量的试剂条的制备方法，所述试剂条包括吸附试剂物的试剂条本体和承载该试剂条本体的支持体，其特征在于，包括：

（1）将滤纸按照试剂条的尺寸加工成型，然后粘贴在支持体上；

（2）将乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液定量均匀浇制在步骤（1）所得的滤纸上，干燥；

（3）将步骤（2）所得的滤纸浸泡在显色液中，取出并干燥；

所述显色液为显色剂/二氯甲烷的混合液；所述的试剂物包括：显色剂、乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶及添加剂，所述添加剂为牛血清白蛋白和海藻酸钠；所述牛血清白蛋白与海藻酸钠的质量比为（70 ~ 90）：1；所述显色剂为洛汾碱衍生物；所述洛汾碱衍生物具有如下式（I）所示的结构：

。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述试剂条本体为不含漂白物质和强氧化性物质的滤纸。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述支持体为白色或乳白色的聚氨酯板。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）浇制了酶溶液的滤纸在20~35℃下置于无酸碱污染的环境中自然晾干15~25min；步骤（3）中滤纸在显色液中浸泡的时间为5~15s，后取出干燥3~8min。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述显色液的制备过程为将显色剂充分溶解于二氯甲烷中，使每毫升二氯甲烷中溶有0.005~0.015g显色剂。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液的制备过程包括：

（1）基液的配制：

将质量比为（70 ~ 90）：1的牛血清白蛋白与海藻酸钠，溶于pH为7.3~7.6的0.2mol/L的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠水溶液缓冲液中，使每毫升缓冲液中含有0.15~0.25mg的牛血清白蛋白；

（2）乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶溶液的配制：

将活性单位比为1：（2~8）的乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶加入基液中，使每毫升基液中含有酶的总活性单位为350~550。

7.一种检测唾液中酒精含量的试剂盒，其特征在于，包括根据权利要求1-6任一项所述的方法制备的试剂条。