CN111665241B

CN111665241B - 一种酪氨酸检测试纸条及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN111665241B
Application number: CN202010532884.0A
Authority: CN
Inventors: 王继良; 卢锦超
Original assignee: Suzhou Liangchen Biological Instrument Reagent Co ltd
Current assignee: Suzhou Liangchen Biological Instrument Reagent Co ltd
Priority date: 2020-06-12
Filing date: 2020-06-12
Publication date: 2023-03-28
Anticipated expiration: 2040-06-12
Also published as: CN111665241A

Abstract

本发明涉及一种酪氨酸检测试纸条及其制备方法和应用，该酪氨酸检测试纸条包括滤纸及负载在所述滤纸上的酪氨酸酶、蔗糖、白蛋白、Triton X‑100、3,3',5,5'‑四甲基联苯胺和过氧化脲。本发明的酪氨酸检测试纸条，通过在滤纸上增加过氧化脲的负载，过氧化脲的漂白作用可以解决现有的试纸条出现的假阳性问题，使本发明试纸条不易受到维生素、磺胺类药物物质的干扰，检测结果更加准确可靠，不易造成误诊，应用价值高。该酪氨酸检测试纸条可用于尿液中酪氨酸含量的检测，当尿液中含有酪氨酸时，即可通过试纸条显色检测出来，酪氨酸浓度不同，显色结果不同。

Description

一种酪氨酸检测试纸条及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于检测试剂技术领域，具体涉及一种酪氨酸检测试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤的早期诊断和早期治疗是提高肿瘤治愈率的关键。现临床常用的确诊手段有胸透、B超、CT、核磁共振等，常常是伴随着穿刺、抽血等加重病人痛苦甚至有可能发生交叉感染的手段，而且价格昂贵，更重要的是通过这些手段能检测出的肿瘤一般都处于中晚期，给病人带来极大的痛苦和经济负担。所以，研究一种操作简单快捷、成本低、灵敏度高、重复性好的检测方法势在必行。

癌细胞的核苷酸代谢异常会生成一种单羟酚类代谢物，其中具体是指酪氨酸、对羟基苯丙氨酸、色氨酸和5-羟吲哚乙酸，且含量远高于正常人，而这种物质能够通过尿液排放。检测单羟酚类代谢物的含量，可以推断人体是否有患癌症的风险，通过早发现早治疗的手段，免去病人的恐惧和痛苦。如中国专利CN108872222A公开了一种对羟基苯丙氨酸检测试纸条，包括滤纸和负载在滤纸上的酪氨酸酶、4-氨基安替比休、亮绿染料、蔗糖、白蛋白和Triton X-100。该试纸条能够检测对羟基苯丙氨酸的含量，并可以改进为尿液检测试纸条。但尿液中某些微量成分或者因其他病因导致的代谢异常产物，如维生素、磺胺嘧啶等物质，这些物质含量达到一定量时，该试纸条也会显色，导致实际使用中可能会出现假阳性问题，降低了检测的准确性，可能造成误诊，限制了其应用价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种改进的酪氨酸检测试纸条及其制备方法。

本发明还提供一种酪氨酸检测试纸条在尿液中酪氨酸检测试剂盒上的应用。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种酪氨酸检测试纸条，包括滤纸及负载在所述滤纸上的酪氨酸酶、蔗糖、白蛋白和Triton X-100，所述试纸条还包括负载在所述滤纸上的3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）和过氧化脲。

根据本发明的一些实施方面，所述酪氨酸酶、蔗糖、白蛋白、Triton X-100、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化脲溶解于缓冲液中，制得混合液，所述混合液通过浸泡或喷涂施加在所述滤纸上，所述混合液中，所述酪氨酸酶的浓度为1~4kU/mL，所述蔗糖的浓度为0.01~0.1g/mL，所述白蛋白的浓度为0.005~0.05g/mL，所述Triton X-100的浓度为0.01~0.05g/mL，所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.01~0.05mL/mL，所述过氧化脲的浓度为0.01~0.05mg/mL。

优选地，所述混合液中，所述酪氨酸酶的浓度为2~4kU/mL，所述蔗糖的浓度为0.02~0.03g/mL，所述白蛋白的浓度为0.01~0.02g/mL，所述Triton X-100的浓度为0.01~0.02g/mL，所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.015~0.025mL/mL，所述过氧化脲的浓度为0.015~0.025mg/mL。

进一步地，所述缓冲液为磷酸盐水溶液，所述磷酸盐为二水合磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠。

优选地，所述缓冲液中，所述二水合磷酸二氢钠的浓度为0.01~0.05g/mL，所述十二水合磷酸氢二钠的浓度为0.01~0.05 g/mL。更优选地，所述二水合磷酸二氢钠的浓度为0.02~0.03g/mL，所述十二水合磷酸氢二钠的浓度为0.02~0.03g/mL。

根据本发明的一些实施例方面，所述白蛋白为牛血清白蛋白。

根据本发明的一些实施例方面，所述试纸条还包括塑料基板，所述滤纸粘贴在所述塑料基板上。

根据本发明的一些实施例方面，所述滤纸为金标滤纸。

本发明所述的酪氨酸检测试纸条用于检测酪氨酸的显色情况为：若显白色或米色，则为阴性；若显红色，则为阳性。

本发明采取的另一技术方案为：一种上述所述的酪氨酸检测试纸条的制备方法，所述制备方法包括：配制缓冲液，将需要负载在滤纸上的组分溶解在所述缓冲液中制得混合液，将所述混合液通过浸泡或喷涂施加于所述滤纸上，然后烘干。

本发明采取的又另一技术方案为：一种尿液中酪氨酸检测试剂盒，包含标准比色卡，所述试剂盒还包含上述所述的酪氨酸检测试纸条。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

本发明的酪氨酸检测试纸条，通过在滤纸上增加过氧化脲的负载，过氧化脲的漂白作用可以解决现有的试纸条出现的假阳性问题，使本发明试纸条不易受到维生素、磺胺类药物物质的干扰，检测结果更加准确可靠，不易造成误诊，应用价值高。

本发明的酪氨酸检测试纸条可用于尿液中酪氨酸含量的检测，当尿液中含有酪氨酸时，即可通过试纸条显色检测出来，酪氨酸浓度不同，显色结果不同。

附图说明

图1为实施例1的试纸条和对比专利的试纸条检测酪氨酸标准溶液的显色结果示意图；

图2为实施例1和实施例2的试纸条检测酪氨酸标准溶液的显色结果示意图；

图3为实施例1的试纸条和对比专利的试纸条检测维生素水溶液的显色结果示意图；

图4为实施例1和实施例2的试纸条检测维生素水溶液的显色结果示意图；

图5为实施例1的试纸条和对比专利的试纸条检测磺胺嘧啶水溶液的显色结果示意图；

图6为实施例1和实施例2的试纸条检测磺胺嘧啶水溶液的显色结果示意图；

图7为实施例1的试纸条和对比专利的试纸条检测葡萄糖水溶液的显色结果示意图；

图8为实施例1和实施例2的试纸条检测葡萄糖水溶液的显色结果示意图。

具体实施方式

不需进一步详细说明，认为本领域熟练技术人员借助前面的描述，可以最大程度的利用本发明。因此，下面提供的实施例仅仅是进一步阐明本发明而已，并不意味着以任何方式限制本发明范围。

实施例1

本实施例提供的酪氨酸检测试纸条，该试纸条包括滤纸和负载在滤纸上的酪氨酸酶、蔗糖、牛血清白蛋白和Triton X-100、TMB和过氧化脲。

具体地，通过以下方法制备得到：

（1）称取2.137g一水合磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O)和2.26g十二水合磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)混合加水至80mL，获得磷酸盐缓冲液；

（2）称取300KU酪氨酸酶干粉，加入步骤（1）的缓冲液中；

（3）然后加入2mL TMB；

（4）然后加入1.5g牛血清白蛋白、2.5g蔗糖和1.5g Triton X-100，获得混合溶液，

（5）然后加入2mg过氧化脲，制得混合溶液，加纯化水定容至100mL。混合溶液中，一水合磷酸二氢钠的浓度为2.137g/mL、十二水合磷酸氢二钠的浓度为2.26g/mL、酪氨酸酶的浓度为3kU/mL、TMB的浓度为0.02mL/mL、蔗糖的浓度为0.025g/mL、牛血清白蛋白的浓度为0.015g/mL、Triton X-100的浓度为0.015 g/mL、过氧化脲的浓度为0.02 mg/mL。

（6）将金标滤纸充分浸入步骤（5）制得混合溶液中，取出后将其置于烘箱中于37℃烘120分钟；裁切成小块粘贴在塑料基板上，制得试纸条。

实施例2

本实施例提供的酪氨酸检测试纸条，与实施例1的不同之处在于：混合溶液中，过氧化脲的浓度为0.04mg/mL。

实施例3效果验证试验

2.1 变色试验

A、将按照实施例1制备的酪氨酸检测试纸条与对比专利的CN108872222A的对羟基苯丙氨酸试纸条浸入测试样品中取出，变色结果如图1所示，其中，测试样品的浓度为0mg/L、50mg/L、100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L、250 mg/L、324 mg/L、500 mg/L的酪氨酸标准溶液。

通过图1可知，当测试样品为纯化水时（即测试样品的浓度为0），实施例1的试纸条和对比专利的试纸条均呈白色，当测试样品的浓度为50 mg/L时，实施例1的试纸条和对比专利的试纸条均开始变色，且当测试样品的浓度为100mg/L时，实施例1的试纸条显淡红色，且浓度越高，红色越深；而对比专利的试纸条在测试样品的浓度为50mg/L时，显淡红色，且浓度越高，红色越深。可见，实施例1的试纸条与对比专利的试纸条灵敏性一致。

B、将按照实施例1和实施例2制备的酪氨酸检测试纸条浸入上述测试样品中取出，变色结果如图2所示。图2中，实施例2的试纸条在测试样品浓度为200mg/L时，试纸条显红色，且浓度越高，红色越深。而测试样品浓度为150mg/L、100mg/L、50mg/L、0mg/L时，实施例2的试纸条均成白色。

实施例2的过氧化脲浓度过高，对于该显色的样品（150mg/L、100mg/L、50mg/L），都不显色，容易产生假阴性，实施例2的过氧化脲浓度不是最佳过氧化脲浓度。

2.2 添加干扰物质后实施例1和实施例2的试纸条与对比专利的试纸条的试验

2.2.1 添加维生素

测试样品为纯化水中添加维生素，其中，测试样品的浓度为0mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL的维生素溶液。

A、将实施例1制备的酪氨酸检测试纸条与对比专利的CN108872222A的对羟基苯丙氨酸试纸条浸入测试样品中取出，变色结果如图3所示，图3中，测试样品浓度为0mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL时，实施例1的试纸条均不显色，均成白色；而测试样品浓度为0.5mg/mL时，对比专利的试纸条开始显淡红色，且浓度越高，颜色越深。

通过图3可知，在测试样品中，维生素的含量达到0.5 mg/mL时，对比专利的试纸条产生变色，可能产生假阳性，而实施例1的试纸条在维生素的含量高达2 mg/mL时，试纸条也没有变色，可见，实施例1的试纸条检测不受维生素的影响。

B、将实施例1和实施例2制备的酪氨酸检测试纸条浸入测试样品中取出，变色结果如图4所示。图4中，测试样品浓度高达2mg/mL时，实施例1和实施例2的试纸条也没有变色，均成白色，可见，实施例2的试纸条检测也不受维生素的影响，实施例1和实施例2都不会产生假阳性。

2.2.2 添加磺胺嘧啶

测试样品为纯化水中添加磺胺嘧啶，其中，测试样品的浓度为0 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL的磺胺嘧啶溶液。

A、将实施例1制备的酪氨酸检测试纸条与对比专利的CN108872222A的对羟基苯丙氨酸试纸条浸入测试样品中取出，变色结果如图5所示，图5中，测试样品的浓度为0mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL时，实施例1的试纸条均不显色，均成白色；而测试样品浓度为1mg/mL时，对比专利的试纸条开始显淡红色，且浓度越高，颜色越深。

通过图5可知，在测试样品中，磺胺嘧啶的含量达到1 mg/mL时，对比专利的试纸条产生变色，可能产生假阳性，而实施例1的试纸条在磺胺嘧啶的含量高达2 mg/mL时，试纸条也没有变色，可见，实施例1的试纸条检测不受磺胺嘧啶的影响。

B、将实施例1和实施例2制备的酪氨酸检测试纸条浸入测试样品中取出，变色结果如图6所示。图6中，测试样品浓度高达2mg/mL时，实施例1和实施例2的试纸条也没有变色，均成白色，可见，实施例2的试纸条检测也不受磺胺嘧啶的影响，实施例1和实施例2都不会产生假阳性。

2.2.3 添加葡萄糖

测试样品为纯化水中添加葡萄糖，其中，测试样品的浓度为0 mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL的葡萄糖溶液。

A、将实施例1制备的酪氨酸检测试纸条与对比专利的CN108872222A的对羟基苯丙氨酸试纸条浸入测试样品中取出，变色结果如图7所示，图7中，当测试样品的浓度高达20mg/mL时，实施例1和对比专利的试纸条均不显色，均为白色。

通过图7可知，在测试样品中葡萄糖的含量高达20 mg/mL时，实施例1的试纸条和对比专利的试纸条也没有变色，可见，实施例1的试纸条和对比专利的试纸条检测均不受葡萄糖的影响。

B、将实施例1和实施例2制备的酪氨酸检测试纸条浸入测试样品中取出，变色结果如图8所示。图8中，测试样品浓度高达20mg/mL时，实施例1和实施例2的试纸条也没有变色，均成白色，可见，实施例2的试纸条检测也不受葡萄糖的影响。

综上，本发明试纸条与对比专利试纸条相比，不易受到维生素、磺胺类药物的干扰，排除了假阳性，检测结果更准确可靠。而实施例1和实施例2的试纸条，都不易受维生素、磺胺类药物以及葡萄糖的干扰，避免了检测过程中的假阳性，当由于实施例2的过氧化脲浓度过高，易产生假阴性，因此实施例1的配方可做作为实际应用的最终配方，检测结果更准确可靠。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

Claims

1.一种酪氨酸检测试纸条，包括滤纸及负载在所述滤纸上的酪氨酸酶、蔗糖、白蛋白和Triton X-100，其特征在于：所述试纸条还包括负载在所述滤纸上的3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化脲；

所述酪氨酸酶、蔗糖、白蛋白、Triton X-100、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化脲溶解于缓冲液中，制得混合液，所述混合液通过浸泡或喷涂施加在所述滤纸上，所述混合液中，所述酪氨酸酶的浓度为2~4kU/mL，所述蔗糖的浓度为0.02~0.03g/mL，所述白蛋白的浓度为0.01~0.02g/mL，所述Triton X-100的浓度为0.01~0.02g/mL，所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.015~0.025mL/mL，所述过氧化脲的浓度为0.015~0.025mg/mL；

所述缓冲液为磷酸盐水溶液，所述磷酸盐为二水合磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠，所述缓冲液中，所述二水合磷酸二氢钠的浓度为0.02~0.03g/mL，所述十二水合磷酸氢二钠的浓度为0.02~0.03 g/mL。

2.根据权利要求1所述的酪氨酸检测试纸条，其特征在于：所述白蛋白为牛血清白蛋白。

3.根据权利要求1所述的酪氨酸检测试纸条，其特征在于：所述试纸条还包括塑料基板，所述滤纸粘贴在所述塑料基板上。

4.根据权利要求1所述的酪氨酸检测试纸条，其特征在于：所述滤纸为金标滤纸。

5.一种权利要求1~4中任一项所述的酪氨酸检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：配制缓冲液，将需要负载在滤纸上的组分溶解在所述缓冲液中制得混合液，将所述混合液通过浸泡或喷涂施加于所述滤纸上，然后烘干。

6.一种尿液中酪氨酸检测试剂盒，包含标准比色卡，其特征在于：所述试剂盒还包含权利要求1~4中任一项所述的酪氨酸检测试纸条。