CN107603925A - 一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)，于2017年9月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14612，具有体外降低胆固醇能力、能耐受胃肠道环境、培养液无抗生素耐性、抑制肠内有害的病原菌。

Description

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25及其应用

技术领域

本发明涉及一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25及其应用。

背景技术

胆固醇是动物及人体内重要的物质，在体内有着广泛的生理作用，但过量的胆固醇会对机体产生不利的影响。据医学研究表明，人体血清胆固醇水平过高是引发心脑血管等疾病的主要因素之一。19世纪70年代，研究者发现某些乳酸菌具有降低人体血清胆固醇水平的能力。迄今为止，已有大量实验证实了不同种类乳酸菌的降胆固醇效果。乳酸菌是人体肠道中重要的益生菌，其数量和组成对维持宿主的微生态平衡和提高免疫系统功能起着至关重要的作用。

乳杆菌与人类生活密切相关，是广泛应用于食品发酵、工业乳酸发酵及医疗保健领域的有益微生物之一。发酵乳杆菌作为乳杆菌的一种，不仅能够应用于食品中提高食品的营养价值，还能够定植于人体肠胃发挥益生作用。在目前已公开的文献与专利中，例如CN105132328公开了一种可预防胃溃疡的发酵乳杆菌 Lactobacillus fermentum strainsuo 及其用途。CN103937716A公开了一株对慢性酒精性肝损伤有保护作用的人源发酵乳杆菌grx07及该菌株在发酵乳制品及功能性食品或药品方面的应用。CN101067119A公开了一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌CMS-H002能有效治疗溃疡性结肠炎等直肠或结肠炎性疾病。但是对于具有降低胆固醇能力同时可以产生细菌素的发酵乳杆菌公开专利几乎没有。

本发明从健康婴儿的粪便中分离获得的益生菌中筛选出来具有强降胆固醇功能的发酵乳杆菌。该菌株在耐酸耐胆盐方面比其他乳酸菌有明显的优势，适合肠胃环境并具有增殖能力。无抗生素耐性，具有抗菌活性，能产生细菌素。本发明发酵乳杆菌为开发益生菌产品提供基础。

发明内容

本发明针对以上问题，提供一种具有高效降胆固醇能力的发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)及其应用，主要提供一种可降低胆固醇的发酵乳杆菌菌株和提供所述发酵乳杆菌在食品中的应用。

发明目的通过以下方案实现：一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)，于2017年9月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14612，具有体外降低胆固醇能力、能耐受胃肠道环境、培养液无抗生素耐性、抑制肠内有害的病原菌。

进一步的，发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)16S rDNA全序列为 SEQID No.1所示。

进一步的，发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)降低胆固醇率达到72.29 %；能耐受酸和胆盐，具有一定的增殖能力；发酵乳杆菌inm25(Lactobacillusfermentum)的培养液无抗生素耐性，说明菌株没有携带耐药基因；发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)具有抗菌活性；发酵乳杆菌inm25(Lactobacillusfermentum)可以产生细菌素。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，在制备具有降低胆固醇功能产品中的应用；所述具有降低胆固醇功能的产品为具有降低胆固醇功能的食品、药物、保健品及饲料。

进一步的，发酵乳杆菌用于制备具有降低胆固醇功能的发酵乳产品的应用。

进一步的，发酵乳杆菌单独或与其他菌株混合发酵用于制备具有降低胆固醇功能的发酵乳产品。

进一步的，发酵乳杆菌用于制备具有降低胆固醇功能的活菌制剂的应用。

进一步的，发酵乳杆菌在制备乳酸菌细菌素中的应用。

进一步的，发酵乳杆菌用于制备乳酸菌细菌素在食品中的应用。

进一步的，发酵乳杆菌制备的细菌素可作为防腐剂用于肉制品、奶制品、酒精饮料，或与其他防腐技术结合，作为栅栏技术应用于食品加工和贮藏中。

本发明提供了一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌，该菌株具有很强的体外降低胆固醇能力、能耐受胃肠道环境、培养液无抗生素耐性、抑制肠内有害的病原菌；同时可以产生细菌素。因而发酵乳杆菌inm25具有开发降低胆固醇功能益生产品及所产细菌素作为防腐剂应用于食品方面的潜能。

生物材料保藏

本发明所提供的发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)，于2017年9月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14612，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

说明书附图

图1为发酵乳杆菌inm25的菌落形态图。

图2为发酵乳杆菌inm25革兰氏染色的菌体形态图。

图3为发酵乳杆菌inm25的16S rDNA的电泳鉴定图，图中1和2均为本发明菌株。

图4为OPA法测得胆固醇标准曲线。

图5为GC法测得空白样品（未接菌）胆固醇峰图。

图6为GC法测得对照菌株（嗜酸乳杆菌 ATCC43121）发酵上清液胆固醇峰图。

图7为GC法测得发酵乳杆菌inm25发酵上清液胆固醇峰图。

图8为发酵乳杆菌inm25对抗生素敏感性的平板示例。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明：

实施例1，本发明的一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25(Lactobacillusfermentum)，于2017年9月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14612，具有体外降低胆固醇能力、能耐受胃肠道环境、培养液无抗生素耐性、抑制肠内有害的病原菌。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25，发酵乳杆菌inm25(Lactobacillusfermentum)16S rDNA全序列为 SEQ ID No.1所示。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25，发酵乳杆菌inm25(Lactobacillusfermentum)降低胆固醇率达到72.29%；能耐受酸和胆盐，具有一定的增殖能力；发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)的培养液无抗生素耐性，说明菌株没有携带耐药基因；发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)具有抗菌活性；发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)可以产生细菌素。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，在制备具有降低胆固醇功能产品中的应用；所述具有降低胆固醇功能的产品为具有降低胆固醇功能的食品、药物、保健品及饲料。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，发酵乳杆菌用于制备具有降低胆固醇功能的发酵乳产品的应用。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，发酵乳杆菌inm25单独或与其他菌株混合发酵用于制备具有降低胆固醇功能的发酵乳产品。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，发酵乳杆菌用于制备具有降低胆固醇功能的活菌制剂的应用。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，发酵乳杆菌在制备乳酸菌细菌素中的应用。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，发酵乳杆菌用于制备乳酸菌细菌素在食品中的应用。

一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，发酵乳杆菌制备的细菌素可作为防腐剂用于肉制品、奶制品、酒精饮料，或与其他防腐技术结合，作为栅栏技术应用于食品加工和贮藏中。

实施例2 发酵乳杆菌inm25的筛选及鉴定：

1.一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的筛选

1.1 样品来源

本发明所使用的菌株均从婴儿（0-1岁）粪便样品中分离获得。粪便样品共采集20份，其中所有采样对象在被采样前的至少一个月时间内未服用任何含有活菌的发酵食品和益生菌制剂、未出现腹泻等胃肠道疾病、未服用任何种类的抗生素类药物。

1.2 菌株的分离纯化

取大约5 g新鲜粪便样品用无菌管收集，立即送至实验室进行菌株分离。取1 g样品放入9 mL的MRS液体培养基中，涡旋混匀后于37 ℃下富集培养48 h；然后在超净台中吸取富集液1 mL，用无菌生理盐水进行十倍梯度稀释，选取10^-6、10^-7、10^-8三个稀释梯度，每个梯度取菌液100 uL涂于MRS琼脂培养基上，于37 ℃培养48 h。培养结束后，从琼脂培养基中选择生长有50-150个单菌落的平板，挑取典型菌落，在MRS 琼脂平板上多次划线纯化，直至整个平板上的菌落形态一致，挑取单菌落到MRS液体培养基增菌培养。得到的菌株均在含40 %甘油的MRS液体培养基中于-80℃冷冻保存。

2.一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的鉴定

2.1 菌落特征

发酵乳杆菌inm25在MRS琼脂培养基培养48 h后，呈现圆形，直径在0.3-2.0mm之间，乳白色，边缘整齐的湿润菌落，见图1。

2.2 显微镜下形态：

发酵乳杆菌inm25菌落涂片：革兰氏染色呈阳性，杆状，不生芽孢，两端圆形，单个、成对或成链状，见图2。

2.3 益生菌API鉴定结果

采用API 50CH（法国梅里埃公司）生理生化试纸鉴定，结果表明该菌株为发酵乳杆菌。

表1一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25生理生化特性

2.4 16S rDNA鉴定

用Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒提取目标菌株基因组DNA，将提取的乳酸菌基因组DNA作为PCR扩增的模板，采用细菌通用引物27F和1492R进行16S rDNA 的PCR实验，PCR反应扩增结束后，取PCR产物进行琼脂糖凝胶检测拍照，扩增片段长度为1.5kb左右，见图3。将PCR产物送至生工生物工程（上海）有限公司进行测序，结果如SEQ ID NO.1所示，在NCBI网站上进行BLAST序列比对，结果显示该序列与发酵乳杆菌的16S rDNA序列同源性超过99%。

将菌株inm25的序列比对结果和生理生化结果相结合，确定筛选的乳酸菌inm25为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)。

实施例3一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25降胆固醇能力的确认

1.菌株发酵液的制备

将于甘油管中保存的菌株先在MRS琼脂平板上划线活化2-3次，然后挑取单菌落在MRS液体培养基中扩大培养18 h，菌液的浓度达到10⁸ CFU/mL左右。将扩大后的菌悬液以1 %的接种量接种于胆固醇（水溶性）浓度为100 ug/mL的MRS 液体培养基中，于37 ℃培养48 h后得到菌株发酵液，用于后面的测定。

每个菌种做3个平行，每组实验重复3次，同时以不接菌的含有胆固醇的MRS液体培养基作阴性对照，以嗜酸乳杆菌 ATCC 43121作阳性对照菌株。

2.邻苯二甲醛比色法

2.1 标准曲线的绘制

配置胆固醇浓度为20 ug/mL，40 ug/mL，60 ug/mL，80 ug/mL，100 ug/mL的胆固醇标准溶液，4 ℃保存备用。各取0.5 mL标准溶液进行氮吹，加入2 mL邻苯二甲醛溶液，混匀10min静置，再加入1 mL浓硫酸，混匀10 min静置，测550 nm吸光度。空白对照为不加胆固醇溶液的邻苯二甲醛溶液和浓硫酸。以胆固醇浓度为横坐标，吸光值为纵坐标做标准曲线，计算出其线性回归方程为y=3.47x+0.076，相关系数为R²=0.9952。标准曲线如图4所示。

2.2 具体操作方法

将上述的菌株发酵液于5000 r/min离心5 min，得到菌株发酵上清液。取发酵上清液0.5 mL于螺口试管，加10 %氢氧化钾甲醇溶液2 mL，旋紧试管，于75 ℃水浴皂化50 min，期间每10 min震荡一次，皂化完成后，冷却，加入1 mL水，2 mL正己烷（重复萃取一次），旋涡振荡2 min，静置10 min，分层，取上层正己烷层于新试管中，合并两次萃取液（3.5 mL），氮气吹干（50 ℃），加入2 mL邻苯二甲醛溶液，混匀10 min静置，再加入1 mL浓硫酸，混匀 10min静置，测550 nm吸光度。

2.3 胆固醇降低率的计算公式：

Y=（1-C₁/C₀）×100%

注：Y—胆固醇降低率

C₀—为阴性对照样品中胆固醇浓度，ug/mL；

C₁—为测试样品中胆固醇浓度，ug/mL。

3.以胆固醇降低率Y为指标，初步筛选胆固醇降低率显著高于嗜酸乳杆菌ATCC43121的菌株，进行气相色谱的验证。

4.气相色谱法

4.1 具体操作方法

将上述的菌株发酵液于5000 r/min离心5 min，得到菌株发酵上清液。用无菌注射器取1 mL发酵上清液，0.22um滤器过滤到气相进样瓶中，将制备好的样品进行气相检测。

4.2 气相色谱法的分析条件

仪器型号为Agilent 7890A；色谱柱（HP-5：30m×0.32mm×0.25μm）；柱温为100℃→300℃（以20℃/min升温12min）；进样口温度为250℃，检测口温度为300℃，恒流1.5ml/min，分流比5:1。

4.3 胆固醇降低率的计算公式：

胆固醇降低率 =（1-S₁/S₀）×100%

S₁—阴性对照样品中胆固醇含量对应的峰面积；

S₀—测试样品中胆固醇含量对应的峰面积。

根据气相色谱峰图中胆固醇所对应的峰面积，即可求得菌株降低胆固醇的能力。

5.如表2所示，本发明筛得的发酵乳杆菌inm25对MRS培养基中的胆固醇降解率达到了72.29%，明显比阳性对照菌株高16.62 %。从而说明发酵乳杆菌inm25具有高效的胆固醇降解能力。

表2 菌株的胆固醇降低率

实施例4一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的耐酸性及耐胆盐性的确认

1.耐酸实验

挑取发酵乳杆菌inm25单菌落在MRS液体培养基中扩大培养18 h，将扩大后菌悬液以1%（v/v）的量接种到MRS肉汤培养基，37 ℃培养18 h后，菌液的浓度达到10⁸ CFU/mL左右。将培养液于4 ℃经5000 r/min离心5 min收集菌体，用磷酸缓冲液（PBS）洗涤2次后，菌体悬浮于pH 3.0的MRS液体培养基中，37 ℃培养3 h。以未进行pH调节的MRS为对照，采用倾注平板法对0 h和3 h样品中的活菌进行计数，倾注后的平板于37 ℃培养48 h，测定其存活率，存活率计算公式如下：

存活率/%=N _t/N ₀×100

上式中，N ₀为测试菌株0 h的活菌数（CFU/mL）；N _t为测试菌株3 h的活菌数（CFU/mL）。

2.耐胆盐实验

将活化扩大后的发酵乳杆菌inm25菌悬液以1 %（v/v）的量接种到MRS肉汤培养基，37℃培养18 h后，菌液的浓度达到10⁸ CFU/mL左右。漩涡混匀，以2 %的量接种到含0.3 %（m/v）牛胆盐的MRS肉汤培养基（对照为不含牛胆盐的MRS肉汤培养基）中，于37 ℃培养3 h。然后采用倾注平板法对样品中的活菌数进行计数。倾注后的平板于37 ℃培养48 h。菌株的胆盐耐受能力用下式表示：

存活率/%=N _t/N ₀×100

上式中，N ₀为对照样品中的活菌数（CFU/mL）；N _t为测试样品中的活菌数（CFU/mL）。

3.以嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）ATCC 43121作为对照，进行上述耐酸、耐胆盐性能测定。

4.如表3所示，发酵乳杆菌inm25的耐酸耐胆盐性能明显优于对照菌株ATCC43121。其在pH为3.0的MRS培养基中的存活率高达121.74 %，在含有0.3 %的牛胆盐的环境中仍具有较高的存活率。实验证明，发酵乳杆菌inm25具备较高的胃肠道生存能力。

表3一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25对酸和胆盐耐受性结果

实施例5一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的抗生素感受性的确认

将培养18 h的发酵乳杆菌inm25菌悬液按1 %的量加入冷却至45 ℃左右的灭过菌的MRS琼脂培养基中，充分混合，定量加入15 mL/皿。待凝固后，用镊子取药敏纸片放于培养基上。将培养皿正面朝上放于37 ℃培养箱中培养24 h。以无抗生素的纸片为空白对照。测量抑菌圈直径。每个重复三次。图6为发酵乳杆菌inm25抗生素敏感性的平板示例。

如表4所示，发酵乳杆菌inm25对青霉素G、氨苄青霉素、头孢唑林、红霉素、复方新诺明和氯霉素呈现极度敏感，抑菌圈直径都大于20 mm。对于丁胺卡那、庆大霉素和氟哌酸呈现低敏性，抑菌圈直径小于10 mm。实验表明，发酵乳杆菌inm25对这10中常用的抗生素不耐受，无耐药基因存在。

表4发一种具有降胆固醇功能的酵乳杆菌inm25对抗生素敏感性结果

实施例6一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的病原菌抑制能力的确认

采用国际通用琼脂扩散法测定乳酸菌抗菌活性。将10 mL LB琼脂培养基倒入无菌培养皿中，冷却后做为下层培养基。将培养18 h的指示菌菌悬液按1 %的量加入冷却至45 ℃左右的灭过菌的LB琼脂培养基中，充分混合，定量加入10 ml/皿。在上面摆放灭过菌的的牛津杯。待上层培养基冷凝后，轻轻拔掉牛津杯。定量以100μL/孔加入发酵乳杆菌inm25上清液样品，并且以pH 6.0的磷酸缓冲液（PBS）作为对照。挑选出小孔周围有明显抑菌圈的菌株，测量抑菌圈直径，每个重复三次。

如表5所示，发酵乳杆菌inm25的代谢产物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肠炎沙门氏菌均有一定的抑制作用，并优于ATCC 43121的抑菌效果。可见这株菌的代谢产物具有抑菌特性。

表5一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25对病原菌抑制能力的结果

实施例7一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25细菌素的制备

1.一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25发酵上清液的制备

用接种环将发酵乳杆菌inm25接种于100 mL MRS液体培养基中，放置37 ℃培养箱中培养18 h。再以2 %的接种量转接到已灭菌的250 mL MRS 液体培养基中。放置在细菌培养箱中以37 ℃，培养18 h。所得到发酵液离心漂洗2 次，每次20 min，离心速度为10000 r/min。之后弃去细胞收集上清液。用2 M NaOH将样品pH值调至6.0，再经0.45 μm滤膜过滤后，即可得到无菌发酵上清液，保存在4 ℃冰箱备用。

2.硫酸铵沉淀

向发酵乳杆菌inm25发酵上清液中缓慢搅拌加入预先称量好的(NH₄)₂SO₄固体粉末至所40 %、 60 % 和80 % 饱和度，加入过程用磁力搅拌器搅拌。之后样品放置在4 ℃下过夜以便达到充分沉淀。在4 ℃下离心 20 min，转速10000 r/min，分离沉淀。再用50 mmol/L pH6.0 的磷酸缓冲液（PBS） 溶解沉淀。最后将样品保藏在4℃冰箱中待用。

3. G-25葡聚糖凝胶层析

取硫酸铵盐处理后所得的粗细菌素溶液过0.22 μm滤膜后缓慢加进柱子中，流速为1.0mL/min，用超纯水洗脱，同时在280 nm处检测收集蛋白组分，并用Bacl₂检测收集到的蛋白组分是否有盐残留，未与Bacl₂产生沉淀的蛋白组分即为纯化后的细菌素溶液，将其收集。

4.冷冻浓缩

将过葡聚糖凝胶层析后收集的细菌素溶液使用真空冷冻浓缩。细菌素溶液于-80℃超低温冰箱预冻不少于个2 h后，迅速取出放入真空冷冻干燥机中进行抽真空处理，真空度维持约0.1 P。浓缩程度约倍5体积后，减压取出细菌素，放入4 ℃冰箱，待其冻结状态缓慢溶解。即可得到发酵乳杆菌inm25的细菌素。

实施例8一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25发酵剂的制备

将发酵杆菌inm25的原始菌种接种于11 %的脱脂乳（115 ℃灭菌20 min）中，37℃培养18-24 h至凝乳，连续活化两代，作为母发酵剂。将母发酵剂按3 %-5 %接种量接种于11%的的脱脂乳（115 ℃灭菌20 min）中，37 ℃培养18-24 h至凝乳，此时活菌数可达到10⁹-10¹⁰cfu/mL，即得到发酵乳杆菌inm25发酵剂。

实施例9利用一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25制备功能性发酵乳

将预处理后的牛乳加热到60 ℃左右，加入6 %蔗糖，经充分溶解后，在20 MPa压力下进行均质。然后经95 ℃、5 min条件下热处理后，冷却至38 ℃。按5 %接种量接入按实施例7制备的发酵乳杆菌inm25发酵剂，在37 ℃下发酵14-18 h至凝乳，冷却后于4 ℃冷藏，即得到发酵乳杆菌inm25的功能发酵乳。

实施例10利用一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25制备降胆固醇菌粉

用接种环将发酵乳杆菌inm25接种于50 mL MRS液体培养基中，放置37 ℃培养箱中培养18 h。再以5 %的接种量转接到已灭菌的250 mL MRS 液体培养基中。放置在细菌培养箱中以37 ℃，培养24 h。所得发酵液离心，之后弃去上清液收集菌体沉淀，用无菌磷酸缓冲液（PBS）漂洗菌体2 次，每次10 min，离心速度为5000 r/min。即可得到发酵乳杆菌inm25菌体沉淀。

分别称取海藻糖4.1 g、谷氨酸钠2.8 g、蔗糖8 g溶于10 mL 40 ℃蒸馏水中，采用0.22 um微孔滤膜过滤除菌后加入到90 mL无菌水中，备用。取脱脂乳粉15 g溶于蒸馏水中，得到15 %脱脂乳粉溶液100 mL，110 ℃灭菌备用。

将上述制备的发酵乳杆菌inm25菌体沉淀按1:5的比例与保护剂溶液充分混匀，即制得菌悬液。取5 mL菌悬液分装入10 mL无菌带塞玻璃瓶中，放在-70 ℃下预冻，2 h后取出置于真空冷冻干燥机中冻干，冻干条件为真空度5 Pa、隔板加热温度20 ℃、冷阱温度为-55℃，冻干30 h后破碎即可得到发酵乳杆菌inm25菌粉。

虽然本发明已通过参考优选的实施例进行了描述，但是，本领域普通技术人员应当了解，可以不限于上述实施例的描述，在权利要求书的范围内，可作出形式和细节上的各种变化。

序列表

<110> 浙江一鸣食品股份有限公司

<120> 一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25及其应用

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1510

<212> DNA

<213> 发酵乳杆菌 inm25 （Lactobacillus fermentum）

<400> 1

caggatgaac gccggcggtg tgcctaatac atgcaagtcg aacgcgttgg cccaattgat 60

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gaagtcgtac 1510

序列表

<110> 浙江一鸣食品股份有限公司

<120> 一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25及其应用

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<170> SIPOSequenceListing 1.0

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<211> 1510

<212> DNA

<213> 发酵乳杆菌 inm25 (Lactobacillus fermentum)

<400> 1

caggatgaac gccggcggtg tgcctaatac atgcaagtcg aacgcgttgg cccaattgat 60

tgatggtgct tgcacctgat tgattttggt cgccaacgag tggcggacgg gtgagtaaca 120

cgtaggtaac ctgcccagaa gcgggggaca acatttggaa acagatgcta ataccgcata 180

acagcgttgt tcgcatgaac aacgcttaaa agatggcttc tcgctatcac ttctggatgg 240

acctgcggtg cattagcttg ttggtggggt aacggcctac caaggcgatg atgcatagcc 300

gagttgagag actgatcggc cacaatggga ctgagacacg gcccatactc ctacgggagg 360

cagcagtagg gaatcttcca caatgggcgc aagcctgatg gagcaacacc gcgtgagtga 420

agaagggttt cggctcgtaa agctctgttg ttaaagaaga acacgtatga gagtaactgt 480

tcatacgttg acggtattta accagaaagt cacggctaac tacgtgccag cagccgcggt 540

aatacgtagg tggcaagcgt tatccggatt tattgggcgt aaagagagtg caggcggttt 600

tctaagtctg atgtgaaagc cttcggctta accggagaag tgcatcggaa actggataac 660

ttgagtgcag aagagggtag tggaactcca tgtgtagcgg tggaatgcgt agatatatgg 720

aagaacacca gtggcgaagg cggctacctg gtctgcaact gacgctgaga ctcgaaagca 780

tgggtagcga acaggattag ataccctggt agtccatgcc gtaaacgatg agtgctaggt 840

gttggagggt ttccgccctt cagtgccgga gctaacgcat taagcactcc gcctggggag 900

tacgaccgca aggttgaaac tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat 960

gtggtttaat tcgaagctac gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatctt gcgccaaccc 1020

tagagatagg gcgtttcctt cgggaacgca atgacaggtg gtgcatggtc gtcgtcagct 1080

cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca acccttgtta ctagttgcca 1140

gcattaagtt gggcactcta gtgagactgc cggtgacaaa ccggaggaag gtggggacga 1200

cgtcagatca tcatgcccct tatgacctgg gctacacacg tgctacaatg gacggtacaa 1260

cgagtcgcga actcgcgagg gcaagcaaat ctcttaaaac cgttctcagt tcggactgca 1320

ggctgcaact cgcctgcacg aagtcggaat cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg 1380

tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac catgagagtt tgtaacaccc 1440

aaagtcggtg gggtaacctt ttaggagcca gccgcctaag gtgggacaga tgattagggt 1500

gaagtcgtac 1510

Claims (10)

1.一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)，于2017年9月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.14612，具有体外降低胆固醇、能耐受胃肠道环境、培养液无抗生素耐性、抑制肠内有害的病原菌的效果。

2.根据权利要求1所述的一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25，其特征在于：发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)16S rDNA全序列为 SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25，其特征在于：发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)降低胆固醇率达到72.29 %；能耐受酸和胆盐，具有增殖能力；发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)的培养液无抗生素耐性，菌株没有携带耐药基因；发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)具有抗菌活性；发酵乳杆菌inm25(Lactobacillus fermentum)能够产生细菌素。

4.一种根据权利要求1所述的具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，其特征在于：在制备具有降低胆固醇功能产品中的应用；所述具有降低胆固醇功能的产品为具有降低胆固醇功能的食品、药物、保健品及饲料。

5.根据权利要求4所述的一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，其特征在于：发酵乳杆菌用于制备具有降低胆固醇功能的发酵乳产品的应用。

6.根据权利要求4所述的一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，其特征在于：发酵乳杆菌单独或与其他菌株混合发酵用于制备具有降低胆固醇功能的发酵乳产品。

7.根据权利要求4所述的一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，其特征在于：发酵乳杆菌用于制备具有降低胆固醇功能的活菌制剂的应用。

8.根据权利要求4所述的一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，其特征在于：发酵乳杆菌在制备乳酸菌细菌素中的应用。

9.根据权利要求4所述的一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，其特征在于：发酵乳杆菌用于制备乳酸菌细菌素在食品中的应用。

10.根据权利要求4所述的一种具有降胆固醇功能的发酵乳杆菌inm25的应用，其特征在于：发酵乳杆菌制备的细菌素作为防腐剂用于肉制品、奶制品、酒精饮料，或与其他防腐技术结合，作为栅栏技术应用于食品加工和贮藏中。