CN107560918A - 一种病理组织标本固定液 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种病理组织标本固定液，属于标本处理技术领域，所述病理组织标本固定液包括以下成分：丙三醇10‑15mL、氯化钠25‑32g、黄连素0.5‑1.2g、薄荷醇0.5‑1.2g、二氯异氰尿酸钠8‑15g、二甲基亚砜2‑3mL、成膜助剂2‑6g、烷基酚聚氧乙烯醚0.5‑1.2g，纯水定容至1000mL。安全环保，无刺激性气味，对常见的细菌具有显著的抑制作用，对病理组织标本固定效果优异。

Description

一种病理组织标本固定液

技术领域

本发明涉及标本处理技术领域，尤其是涉及一种病理组织标本固定液。

背景技术

随着分子病理学技术迅猛发展以及基因检测技术要求的不断提高，组织固定效果越来越重要，这既与疾病的病理学诊断息息相关，又直接关系到疾病 后续的分子检测指标及治疗方式的选择。病理切片制作技术的质量涉及多个环节，病理组织固定是最基本最重要的一个步骤。病理组织固定指利用一些化学试剂处理组织以保存组织或细胞的位置、形态和结构。

传统固定液一直以40%的中性甲醛缓冲水溶液为主，这主要由于甲醛可以长时间并且很好的保存组织形态学结构特征，同时又具有良好的经济效用。 但是甲醛易使标本机体发硬、变形、褪色、不保鲜；甲醛溶液中因含有甲醇易聚合产生沉淀，需经常更换；且甲醛在目前我国有毒化学品控制名单中位列第二， 已经被确定为是致癌和致畸物，甲醛侵入人体的途径主要包括呼吸道吸入、 皮肤黏膜接触及经消化道食入等三种途径，对于病理实验室人员，特别是工作在一线的医生及技术人员长期暴露于甲醛严重超标的环境中，对身体健康造成严重的危害。 因此，探索环保且效果更好的病理标本处理方法具有重要的学术意义和现实意义。

中国专利公开号CN105454219A公开一种病理组织保存固定液，按照重量份的原料包括福尔马林、Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、氯化钠、乙酸和乙醇；以上成分混合而成溶液，作为产品保存固定液，将采集的病理标本和固定液均盛放于容器中，用以保存、固定病理标本。本发明使病理保存固定实现一步到位，显著提高病理组织的保存和固定效果，并且减少对活性物质影响，解决医务人需要临时配制固定液的问题，方便快捷，无需配制，即开即用；但是该固定液中还含有一定量的福尔马林，对人体健康有很大的威胁。

中国专利公开号CN104365581N公开一种公开了一种新型标本保存液，其包含山梨酸钾、纳米银、乙醇、丙三醇、柠檬酸，所述的保存液由山梨酸钾1-5g，纳米银0.1-1g，乙醇100-300ml，丙三醇1-20ml，柠檬酸10-20g，调节pH保持5-6，加纯水定容至1000ml组成。该新型标本保存液能有效地保持标本的原有色泽，各组织肌肉、韧带的柔软，维持良好的韧性和弹性，不含有毒有害物质，是一种绿色环保的液体。但是该保存液中含有大量的乙醇，长期使用易使标本失水，固缩，变形，且原料中具有纳米银，成本较高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种病理组织标本固定液，安全环保，无刺激性气味，对常见的细菌具有显著的抑制作用，对病理组织标本固定效果优异。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇10-15mL、氯化钠25-32g、黄连素0.5-1.2g、薄荷醇0.5-1.2g、二氯异氰尿酸钠8-15g、二甲基亚砜2-3mL、成膜助剂2-6g、烷基酚聚氧乙烯醚0.5-1.2g，纯水定容至1000mL。

进一步的，所述成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比1-2：1混合而成。

进一步的，所述病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇13mL、氯化钠29g、黄连素0.8g、薄荷醇0.9g、二氯异氰尿酸钠11g、二甲基亚砜2.5mL、成膜助剂3g、烷基酚聚氧乙烯醚0.8g，纯水定容至1000mL。

进一步的，所述病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，高速搅拌10-15min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，定容至1000mL，转速低速搅拌25-35min，即得产品。

进一步的，所述高速搅拌的转速为1500-1800r/min，所述低速搅拌的转速为500-800r/min。

本发明的有益效果是：

1、本发明公开一种病理组织标本固定液，以二氯异氰尿酸钠、黄连素和薄荷醇为主要杀菌成分，其中二氯异氰尿酸钠是氧化性杀菌剂中杀菌最为广谱、高效、安全的消毒剂，有极强的杀生作用，可杀灭各种细菌、藻类、真菌和病菌，使用安全、简便、用量少、药效持续时间长。并复配黄连素和薄荷醇复配杀菌消毒，其中黄连素具有显著的抑菌作用；薄荷醇为薄荷精油中的主要成分，具有薄荷香气，掩盖不良气味，医学上具有止痒、止痛、防腐、刺激、麻醉、清凉和抗炎作用，一方面协同杀菌，另一方面能掩盖产品的刺激性。

2、本发明的固定液添加有丙三醇，其中丙三醇是具有防腐性、吸湿性和稳定性，能确保病理组织标本不易干燥，比较柔软，结缔组织略呈透明，更重要的是甘油能吸附与其混合的药物，标本内部和表面，使上述药物不易挥发和散失，达到增强上述药物的防腐效果，提高防腐和杀菌能力。而添加少量的海藻酸钠和壳聚糖作为成膜助剂，与丙三醇复合作用，能将产品的杀菌成分吸附在标本的表面或内部成膜，能更好的保护标本。而添加的烷基酚聚氧乙烯醚有助于杀菌成分向标本表面或内部扩散，起到更好的杀菌防腐作用。

3、本发明固定液在室温条件下，性能稳定，不易发霉，对常见的细菌具有显著的抑制作用，与采用甲醛进行保存固定的效果相当。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。

实施例1

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇10mL、氯化钠32g、黄连素0.5g、薄荷醇1.2g、二氯异氰尿酸钠8g、二甲基亚砜2mL、成膜助剂6g、烷基酚聚氧乙烯醚0.5g，纯水定容至1000mL。

其中成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比1：1混合而成。

病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，以1500r/min转速高速搅拌15min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，纯水定容至1000mL，以500r/min转速低速搅拌35min，即得产品。

实施例2

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇11mL、氯化钠31g、黄连素0.6g、薄荷醇1.1g、二氯异氰尿酸钠9g、二甲基亚砜2.2mL、成膜助剂5g、烷基酚聚氧乙烯醚0.6g，纯水定容至1000mL。

其中成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比1：1混合而成。

病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，以1600r/min转速高速搅拌10min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，定容至1000mL，以600r/min转速低速搅拌25min，即得产品。

实施例3

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇12mL、氯化钠30g、黄连素0.7g、薄荷醇1.0g、二氯异氰尿酸钠10g、二甲基亚砜2.4mL、成膜助剂4g、烷基酚聚氧乙烯醚0.7g，纯水定容至1000mL。

其中成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比1.5：1混合而成。

病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，以1700r/min转速高速搅拌14min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，纯水定容至1000mL，以700r/min转速低速搅拌30min，即得产品。

实施例4

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇13mL、氯化钠29g、黄连素0.8g、薄荷醇0.9g、二氯异氰尿酸钠11g、二甲基亚砜2.5mL、成膜助剂3g、烷基酚聚氧乙烯醚0.8g，纯水定容至1000mL。

其中成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比1.5：1混合而成。

病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，以1700r/min转速高速搅拌13min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，纯水定容至1000mL，以800r/min转速低速搅拌30min，即得产品。

实施例5

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇14mL、氯化钠28g、黄连素0.9g、薄荷醇0.8g、二氯异氰尿酸钠12g、二甲基亚砜2.6mL、成膜助剂2g、烷基酚聚氧乙烯醚0.9g，纯水定容至1000mL。

其中成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比2：1混合而成。

病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，以1800r/min转速高速搅拌12min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，纯水定容至1000mL，以500r/min转速低速搅拌25min，即得产品。

实施例6

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇15mL、氯化钠27g、黄连素1.0g、薄荷醇0.7g、二氯异氰尿酸钠13g、二甲基亚砜2.8mL、成膜助剂5g、烷基酚聚氧乙烯醚1.0g，纯水定容至1000mL。

其中成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比2：1混合而成。

病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，以1800r/min转速高速搅拌11min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，纯水定容至1000mL，以600r/min转速低速搅拌25min，即得产品。

实施例7

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇14mL、氯化钠26g、黄连素1.1g、薄荷醇0.6g、二氯异氰尿酸钠14g、二甲基亚砜3mL、成膜助剂4g、烷基酚聚氧乙烯醚1.1g，纯水定容至1000mL。

其中成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比2：1混合而成。

病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，以1500r/min转速高速搅拌13min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，纯水定容至1000mL，以700r/min转速低速搅拌35min，即得产品。

实施例8

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇13mL、氯化钠25g、黄连素1.2g、薄荷醇0.5g、二氯异氰尿酸钠15g、二甲基亚砜2.5mL、成膜助剂3g、烷基酚聚氧乙烯醚1.2g，纯水定容至1000mL。

其中成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比1.5：1混合而成。

病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，以1600r/min转速高速搅拌10min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，纯水定容至1000mL，以800r/min转速低速搅拌30min，即得产品。

对比例1

对比例1与实施例8基本相同，不同之处在于：原料中去掉黄连素具体如下：

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇13mL、氯化钠25g、薄荷醇0.5g、二氯异氰尿酸钠15g、二甲基亚砜2.5mL、成膜助剂3g、烷基酚聚氧乙烯醚1.2g，纯水定容至1000mL。

其他工艺与实施例8相同。

对比例2

对比例2与实施例8基本相同，不同之处在于：原料中去掉黄连素和薄荷醇，具体如下：

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇13mL、氯化钠25g、二氯异氰尿酸钠15g、二甲基亚砜2.5mL、成膜助剂3g、烷基酚聚氧乙烯醚1.2g，纯水定容至1000mL。

其余工艺与实施例8相同。

对比例3

对比例2与实施例8基本相同，不同之处在于：成膜助剂为海藻酸钠。

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇13mL、氯化钠25g、黄连素1.2g、薄荷醇0.5g、二氯异氰尿酸钠15g、二甲基亚砜2.5mL、成膜助剂3g、烷基酚聚氧乙烯醚1.2g，纯水定容至1000mL。

其中成膜助剂为海藻酸钠。

其余工艺均与实施例8相同。

对比例4

对比例2与实施例8基本相同，不同之处在于：去掉原料中的烷基酚聚氧乙烯醚，具体如下：

一种病理组织标本固定液，包括以下成分：丙三醇13mL、氯化钠25g、黄连素1.2g、薄荷醇0.5g、二氯异氰尿酸钠15g、二甲基亚砜2.5mL、成膜助剂3g，纯水定容至1000mL。

其余工艺均与实施例8相同。

对比例5

对比例5中的病理组织标本固定液为40%甲醛溶液。

性能检测

（1）抑菌实验：称取本发明实施例1-8、对比例1-5制备的固定液置于无菌锥形瓶中作为样品组1-13，以无菌水作为对照组，将上述十四组中分别加入70毫升的磷酸盐缓冲液（0.03moL/L）和5mL铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的菌液，在25℃、200rpm/min条件下，振荡培养1小时，分别于1小时取样，计算细菌数量变化。每批实验重复4次，计算平均抑菌率。

抑菌率的计算：依据公式X=（A-B）/A×100%，X为抑菌率；A为样品组1-13振荡前平均菌落数；B为样品组1-13振荡后平均菌落数。判断标准：对照组振荡前后的菌落数差值要在10以内，试验样品抑菌率与对照组样品抑菌率之差＞26%，可判定该产品有抗菌作用，结果见表1。

其中，铜绿假单胞菌(ATCC 27853)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、白色念珠菌（ATCC 10231）均购自中国科学院微生物研究所。

表1 抑菌及其稳定性实验结果

由表1可以看出，本发明制备的病理组织标本固定液对常见的细菌具有显著的抑制作用，与采用甲醛进行保存固定的效果相当。而对比例1是去掉原料中黄连素，对比例2是去掉了黄连素和薄荷醇，对比例1-2的抑菌率均比实施例8要差，说明黄连素和薄荷醇具有协同增强抑菌效果的作用。对比例3中成膜助剂仅是海藻酸钠，抑菌效果有所下降，持久性也会有所下降；对比例4中去掉原料中的烷基酚聚氧乙烯醚，抑菌性能也有所下降。

（2）性能验证：临床采集乳腺癌组织样本27份，随机分成9组，每组3份，分别采用实施例1-8、对比例5的保存固定液对上述样本进行固定，6个月后再次观察，固定效果见表2。

表2 固定液性能检测

由表2可以看出，本发明实施例1-8制备的病理组织标本固定液进行病理组织的保存固定，6个月保存固定后，触感接近原始状态，无明显硬化或软化现象，气味小，刺激性小，安全性高，适宜长期保存，与对比例5采用甲醛作为保存固定液，效果相当。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (5)

1.一种病理组织标本固定液，其特征在于：包括以下成分：丙三醇10-15mL、氯化钠25-32g、黄连素0.5-1.2g、薄荷醇0.5-1.2g、二氯异氰尿酸钠8-15g、二甲基亚砜2-3mL、成膜助剂2-6g、烷基酚聚氧乙烯醚0.5-1.2g，纯水定容至1000mL。

2.根据权利要求1所述的一种病理组织标本固定液，其特征在于：所述成膜助剂为海藻酸钠和壳聚糖按重量比1-2：1混合而成。

3.根据权利要求1所述的一种病理组织标本固定液，其特征在于：包括以下成分：丙三醇13mL、氯化钠29g、黄连素0.8g、薄荷醇0.9g、二氯异氰尿酸钠11g、二甲基亚砜2.5mL、成膜助剂3g、烷基酚聚氧乙烯醚0.8g，纯水定容至1000mL。

4.根据权利要求1-3任一项所述的病理组织标本固定液，其特征在于：所述病理组织标本固定液由以下步骤制备：

称取氯化钠和500mL纯水混合均匀，得到氯化钠溶液，然后依次加入黄连素和二甲基亚砜混合液，高速搅拌10-15min，然后加入丙三醇、薄荷醇、二氯异氰尿酸钠、成膜助剂和烷基酚聚氧乙烯醚，定容至1000mL，转速低速搅拌25-35min，即得产品。

5.根据权利要求4所述的病理组织标本固定液，其特征在于：所述高速搅拌的转速为1500-1800r/min，所述低速搅拌的转速为500-800r/min。