CN106908294A - 一种病理标本的处理方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种病理标本的处理方法，属于标本处理技术领域，其是将取材后的病理组织依次经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色和封固获得病理标本，所述固定是采用固定液将病理组织进行固定，固定时间为4~15小时，所述固定液由苍术醇、乙氧基化乙炔二醇、绿原酸、聚乙烯吡咯烷酮、氯化钠、乙酸乙酯、纯水组成；所述封固是将染色后的病理组织采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的混合物进行封固。本发明所用试剂毒性明显减少，固定效果良好，脱水及透明程度更加易于掌控，使得组织不易变形、变脆、发硬，而且封固完整，着色显著。

Description

一种病理标本的处理方法

技术领域

本发明属于标本处理技术领域，具体涉及一种病理标本的处理方法。

背景技术

活体组织病理诊断是外科的第一诊断，是金标准。医生可以根据标本的检测结果作出正确的诊断，制定疾病下一步的治疗计划。病理报告的准确性在相当程度上对疾病的诊断和治疗起决定性作用。而正确处理病理标本不仅能给病理诊断及临床诊断提供有效的保证，而且也维护了患者身心，杜绝了因不当标本处理带来的纠纷。现有调查显示，手术室现行的标本处理方法不能有效防止护理差错。

病理标本处理中最关键的步骤就是病理标本的固定和保存。病理样本离体后，由于微环境的变化将发生自溶和(或)腐败，使其结构破坏，同时在微观上，细胞退化、自溶。处理样本的目的，就是用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态。更为关键的是，由于需要显微镜观察，因此，病理组织学不仅要求离体样本在宏观方面(如色泽、体积、软硬度等)尽量接近离体前状态，更要求在细胞水平的微观方面要尽量接近活体状态。目前，病理标本最为普遍的处理剂是甲醛溶液和乙醇溶液，然而上述两者均存在明显的缺陷。甲醛易使标本机体发硬、变形、褪色、不保鲜；甲醛溶液中因含有甲醇易聚合产生沉淀，需经常更换；甲醇具有强烈的刺激性气味，其不仅污染环境，还会不同程度地伤害操作者的眼睛和呼吸系统，严重危害人体健康，这对一线医学工作者来说是非常有害的。而含乙醇的保存液长期使用后也会使样本机体发硬，其褪色现象比甲醛更明显；并且这两种溶液保存的样本存在不易造型，运输麻烦的缺陷。

因此，探索低毒、低刺激且效果更好的病理标本处理方法具有重要的学术意义和现实意义。

公开号为105248410A的专利涉及一种生物标本的保存方法，所述方法为将新鲜的待保存生物样本用甲醛溶液浸泡固定10~36h后，使用浓度不低于12%的聚丙烯酰胺凝胶封存；该发明提供的生物标本保存方法先使用甲醛溶液对待保存的生物预处理固定一段时间后，再将处理后的生物使用特定浓度的聚丙烯酰胺凝胶进行封存，封存后的标本能够长期保色保鲜，两年之内颜色和形态保持不变，并且本发明使用的聚丙烯酰胺凝胶为固态，具备无毒，易造型，运输方便的特点。公开号为105519520A的专利公开了一种标本保存液，其组分如下：聚二甲基二烯丙基氯化铵35g，山梨酸钾40g，纳米银8g，柠檬酸30g，甘露醇6g，丙三醇40ml，戊二醛1g，无水乙醇50ml，D-山梨醇3g，香精1g，海藻糖10g，硫酸镁5g，纯净水补满1000mL，利用该保存液处理标本的方法为：先将标本用甲醛固定好，然后浸泡在具有该标本保存液的带盖标本瓶中。该标本保存液可为组织标本保存液长期保存组织标本，标本的软硬度和韧性保持良好，标本保持原始形状和颜色，不变质腐臭，保存液长期使用不需更换，溶液清澈，沉淀少。上述标本的处理方法中仍采用甲醛进行即时固定，而且时间较长，影响处理效率，且安全性依然没有得到有效改善。

发明内容

有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是提供一种病理标本的处理方法，安全系数高，固定效果理想，形态保持良好，提高病理确诊效率。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种病理标本的处理方法，是将取材后的病理组织依次经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色和封固获得病理标本，其中：

所述固定是采用固定液将病理组织进行固定，固定时间为4~15小时，所述固定液的组成为：苍术醇12~15g，乙氧基化乙炔二醇5~10ml，绿原酸10~20g，聚乙烯吡咯烷酮30~70g，氯化钠30~40g，乙酸乙酯5~10ml，纯水补至1000ml；所述脱水是采用体积浓度依次为50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及无水乙醇作为脱水剂，逐步置换出所述固定后的病理组织中的水分；所述透明是将所述脱水后的病理组织依次浸入体积浓度为50%二甲苯和100%二甲苯溶液中进行透明处理；所述包埋是采用透明树脂对浸蜡后的病理组织进行迅速包埋；所述封固是将染色后的病理组织采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的混合物进行封固，所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的质量比为1：0.1~0.5：0.1~0.3。

优选地，所述固定液的组成为：苍术醇13g，乙氧基化乙炔二醇7ml，绿原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化钠32g，乙酸乙酯6ml，纯水补至1000ml。

优选地，所述固定液的组成为：苍术醇14g，乙氧基化乙炔二醇8ml，绿原酸15g，聚乙烯吡咯烷酮50g，氯化钠35g，乙酸乙酯8ml，纯水补至1000ml。

优选地，所述固定时间为5~8小时。

优选地，所述透明树脂为脲醛树脂、环氧乙烯基树脂、二甲基丙烯酸酯中的一种或两种以上的组合。

优选地，所述透明树脂为脲醛树脂与二甲基丙烯酸酯的组合物，所述脲醛树脂与二甲基丙烯酸酯的质量比为4~5：1。

优选地，所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的质量比为1：0.3：0.2。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

1）本发明病理标本的处理方法是在现有病理标本的制作方法基础上进行的改进，以传统病理标本的制作理念为引导，对病理组织在固定、脱水及其透明等步骤中存在的危险性、污染性及其不可控因素较多等问题进行了进一步的探索和研究，对各步骤所采用的试剂、具体方法及其相关性等进行了统筹性的改进。本发明病理组织的固定步骤采用全新的固定液，其中：苍术醇：为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea (Thunb.) DC.的根茎提取物，可通过市售购买获得，具有特有的中药气味，在本发明固定液中起到抑菌、消毒作用；乙氧基化乙炔二醇：为一种非离子型润湿剂，具有超强的润湿作用，能够促进苍术醇、绿原酸等成分快速地流动并润湿病理组织，进而促进固定作用的实现；绿原酸：具有较广泛的抗菌作用，医学上具有抗菌、抗病毒、抗氧化、消炎等作用，通过对加入量的控制，能够有效避免其致敏作用，使其发挥抗菌、抗氧化等作用；聚乙烯吡咯烷酮：具有亲水性、易流动的白色或近乎白色的粉末，具有胶体保护作用、成膜性、粘结性、吸湿性、增溶或凝聚作用，与乙氧基化乙炔二醇等成分配合快速在病理组织的表面及内部成膜，凝聚，辅助强化固定效果；氯化钠：具有调节固定液平衡及脱水杀菌的作用；乙酸乙酯：在乙氧基化乙炔二醇及聚乙烯吡咯烷酮等成分的固定作用下，使固定液具有持久悦人的气味，掩盖不良气味。固定液中各组分组配合理，效果明显，具有防止组织和细胞自溶、渗透、杀菌、防腐等作用，实验结果表明该固定液能够完全替代甲醛溶液，而且性质稳定，无毒副作用。病理标本经固定处理后软硬度适中，无明显收缩发硬现象，韧性良好，无明显变形和褪色；固定过程中，固定液无混浊或沉淀现象发生。采用本发明固定液进行病理组织的固定不但可以避免被动吸入甲醛的危害，还可避免甲醛保存液易挥发、聚合沉淀多需定期更新和补充的麻烦和费用。固定时间根据病理组织的不同，通常为4~15小时，优选为4~8小时。此外，本发明固定液在室温条件下，活性持久，不易发霉，能够作为病理标本的保存液长期使用。

2）本发明采用50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及无水乙醇由低浓度至高浓度对固定处理后的病理组织进行梯度脱水，增设脱水梯度，减小梯度之间的浓度差，使脱水力度柔和而彻底，可以有效防止脱水过程中组织的变形或变性。本发明透明过程仍选用二甲苯作为透明剂，与传统不同的是，采用两梯度设置，先用体积浓度为50%二甲苯透明处理1~4小时，再用100二甲苯透明处理0.5~2小时，这样处理能给予病理组织一个缓冲过渡阶段，容易控制透明程度，而且不易导致组织变脆。

3）本发明浸蜡、包埋、切片及染色与常规操作相同，处理时间上较传统处理更短。本发明封固步骤采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的混合物作为封固剂，并且经实践发现当聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的质量比为1：0.1~0.5：0.1~0.3时封固效果更突出，封固快速、完整，无褪色、变形现象，还具有抗菌效果。而且试验发现当聚丙烯酰胺含量较高时，例如：聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的质量比为1：0.05：0.05时，封固花费的时间较长，保色不牢固。

综上，本发明在现有病理组织处理方法的基础上，对固定、脱水、透明及其封固步骤等进行改进，使病理组织的处理过程中所用的试剂毒性明显减少，固定效果良好，脱水及透明程度更加易于掌控，使得组织不易变形、变脆、发硬，而且封固完整，着色显著。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步清楚阐述本发明的内容，但本发明的保护内容不仅仅局限于下面的实施例。在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为彻底的理解。

本发明所涉及的病理组织是指有病变的组织或脏器，并不限定于某一特定组织，本领域技术人员根据普遍知识能够常规选择将某一病理组织采用本发明方法进行处理，并获得预期的效果。

实施例1~实施例5：以取自人体肝脏的病理组织为例

一种病理标本的处理方法，是将取材后的病理组织依次经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色和封固获得病理标本，其中：

固定：采用固定液将病理组织进行固定，固定时间为6小时，所述固定液的组成如表1所示；

脱水：采用体积浓度依次为50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及无水乙醇作为脱水剂，逐步置换出所述固定后的病理组织中的水分，上述浓度的脱水处理时间均为1~3小时；

透明：将所述脱水后的病理组织依次浸入体积浓度为50%二甲苯和100%二甲苯溶液中进行透明处理，其中50%二甲苯溶液透明处理时间为2~4小时，采用100%二甲苯溶液处理至观察到病理组织透明为止；

浸蜡：将所述透明处理后的病理组织浸入熔溶的石蜡中0.5~4小时；

包埋：采用透明树脂对浸蜡后的病理组织进行迅速包埋，所述透明树脂为脲醛树脂与二甲基丙烯酸酯的组合物，所述脲醛树脂与二甲基丙烯酸酯的质量比为4：1；

切片：采用切片刀将包埋后的病理组织切成连续的、厚薄均匀的蜡片，选取平整光滑的蜡片水浴展开，吸去表面水分，及时烘烤；

染色：将烘烤处理后的病理组织进行HE染色，使染色鲜艳、红蓝分明；

封固：将染色后的病理组织采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的混合物进行封固，所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的质量比为1：0.3：0.2。

表1固定液的组成

实施例6~实施例11：以取自人体的肺病理组织为例

一种病理标本的处理方法，是将取材后的病理组织依次经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色和封固获得病理标本，其中：

固定：采用固定液将病理组织进行固定，固定时间为8小时，所述固定液的组成为苍术醇13g，乙氧基化乙炔二醇7ml，绿原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化钠32g，乙酸乙酯6ml，纯水补至1000ml；

脱水：采用体积浓度依次为50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及无水乙醇作为脱水剂，逐步置换出所述固定后的病理组织中的水分，上述浓度的脱水处理时间均保持2~4小时；

透明：将所述脱水后的病理组织依次浸入体积浓度为50%二甲苯和100%二甲苯溶液中进行透明处理，其中50%二甲苯溶液透明处理时间为2~4小时，采用100%二甲苯溶液处理至观察到病理组织透明为止；

浸蜡：将所述透明处理后的病理组织浸入熔溶的石蜡中0.5~4小时；

包埋：采用透明树脂对浸蜡后的病理组织进行迅速包埋，所述透明树脂的组成如表2所示；

切片：采用切片刀将包埋后的病理组织切成连续的、厚薄均匀的蜡片，选取平整光滑的蜡片水浴展开，吸去表面水分，及时烘烤；

染色：将烘烤处理后的病理组织进行HE染色，使染色鲜艳、红蓝分明；

封固：将染色后的病理组织采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的混合物进行封固，所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的质量比为1：0.3：0.2。

表2透明树脂的组成

实施例12~实施例17：以取自人体的脑病理组织为例

一种病理标本的处理方法，是将取材后的病理组织依次经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色和封固获得病理标本，其中：

固定：采用固定液将病理组织进行固定，固定时间为10小时，所述固定液的组成为苍术醇13g，乙氧基化乙炔二醇7ml，绿原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化钠32g，乙酸乙酯6ml，纯水补至1000ml；

脱水：采用体积浓度依次为50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及无水乙醇作为脱水剂，逐步置换出所述固定后的病理组织中的水分，上述浓度的脱水处理时间均保持3小时；

透明：将所述脱水后的病理组织依次浸入体积浓度为50%二甲苯和100%二甲苯溶液中进行透明处理，其中50%二甲苯溶液透明处理时间为2~4小时，采用100%二甲苯溶液处理至观察到病理组织透明为止；

浸蜡：将所述透明处理后的病理组织浸入熔溶的石蜡中0.5~4小时；

包埋：采用透明树脂对浸蜡后的病理组织进行迅速包埋，所述透明树脂为环氧乙烯基树脂与二甲基丙烯酸酯的组合物，所述环氧乙烯基树脂与二甲基丙烯酸酯的质量比为4：1；

切片：采用切片刀将包埋后的病理组织切成连续的、厚薄均匀的蜡片，选取平整光滑的蜡片水浴展开，吸去表面水分，及时烘烤；

染色：将烘烤处理后的病理组织进行HE染色，使染色鲜艳、红蓝分明；

封固：将染色后的病理组织采用表3所示的封固剂进行封固。

表3封固剂的组成

对比例1

该对比例1所描述的病理标本的处理方法，与实施例2所不同的是：

固定步骤：采用体积浓度为20%的甲醛溶液进行固定，固定时间为10小时，其余步骤同实施例2。

对比例2~对比例4

该对比例2~对比例4所描述的病理标本的处理方法，与实施例2所不同的是：

固定步骤：采用如表4所示的固定液进行固定，固定时间为6小时，其余步骤同实施例2。

表4固定液的组成

对比例5

该对比例5所描述的病理标本的处理方法，与实施例2所不同的是：

固定步骤：采用如下固定液进行固定，固定液的组成为：聚二甲基二烯丙基氯化铵35g，山梨酸钾40g，纳米银8g，柠檬酸30g，甘露醇6g，丙三醇40ml，戊二醛1g，无水乙醇50ml，D-山梨醇3g，香精1g，海藻糖10g，硫酸镁5g，纯净水补满1000mL，固定时间为6小时，其余步骤同实施例2。

对比例6

该对比例6所描述的病理标本的处理方法，与实施例2所不同的是：

透明步骤：将所述脱水后的病理组织浸入体积浓度为100%二甲苯溶液中进行透明处理，至观察到病理组织透明为止；其余步骤同实施例2。

为充分说明本发明对于现有技术的贡献，进行如下效果比对：

实验方案：临床采集乳腺癌组织样本130份，随机分成13组，每组10份，分别采用实施例2、6、7、11、12、13、14及对比例1~6的处理方法制片，显微镜下观察细胞形态、着色及其完整性。

结果评价：①对病理标本处理过程中所产生的气味、刺激性以及毒性进行调查，由参加的医护人员进行评分；②由病理专家对所得病理标本的形态、着色、完整性、判读准确度进行评分；上述各项目的评分区间为1分至5分，按照各指标的强弱程度或优良级别进行打分，分数越高代表该指标越优，分数越低则表明该指标越差，1分、2分、3分、4分、5分依次代表差、一般、较好、良好、优异。上述指标的评分结果见表5所示。

表5指标评价结果

由表5可以看出，采用本发明实施例2制备病理标本，气味、刺激性以及毒性等均评价良好，而且所得病理标本形态保存良好，未发生明显的膨胀、固缩等变化，有利于判读准确度的提高。实施例6及实施例7分别采用脲醛树脂、环氧乙烯基树脂作为透明树脂包埋剂，较实施例2的组合使用来说，在形态及着色的保持上有所下降。实施例11采用环氧乙烯基树脂与二甲基丙烯酸酯作为透明树脂包埋剂，较实施例6、7来说稍有改善，但是仍然劣于实施例2。实施例12~14采用不同的封固剂进行封固处理，在病理标本的形态、着色、完整性等方面与实施例2相比均存在不同程度的差异。

对比例1采用甲醛作为固定液，尽管病理标本效果较好，但是气味、刺激性及其毒性方面均较差。对比例2~4改变固定液的组成，发现制作的病理标本均不利于判读准确率的提高。而对比例5采用与本发明完全不同的组配固定液进行固定处理，发现依然与本发明实施例2存在明显的区别。对比例6在透明处理时直接采用100%二甲苯进行透明处理，也不利于判读准确率的提高。

综合上述分析，本发明病理标本的处理方法用于处理病理组织，有利于保持病理组织的原状、保持其完整性以及着色的牢固性等，总而提高病理组织判读的准确率，而且将本发明所得病理标本储存6个月后进行显微观察发现变化不明显，无肉眼可见的霉点、腐点、膨胀或固缩等现象。本发明病理组织的处理方法各步骤相互协同，对病理标本的安全、快速、准确制作具有积极的效果。

临床应用

取20个病理标本，其中：宫颈活检4个；胃镜活检7个，肠镜组织活检5个，乳腺纤维腺瘤3个，子宫腺肌病 1 个。病理标本的处理方法按照实施例2进行。

结果表明：上述20个病理标本制片效果理想，病理组织保持完整，无残片等现象，而且镜下观察清晰，均经病理医师阅片，确定符合诊断要求。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (7)

1.一种病理标本的处理方法，是将取材后的病理组织依次经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色和封固获得病理标本，其特征在于：

所述固定是采用固定液将病理组织进行固定，固定时间为4~15小时，所述固定液的组成为：苍术醇12~15g，乙氧基化乙炔二醇5~10ml，绿原酸10~20g，聚乙烯吡咯烷酮30~70g，氯化钠30~40g，乙酸乙酯5~10ml，纯水补至1000ml；所述脱水是采用体积浓度依次为50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及无水乙醇作为脱水剂，逐步置换出所述固定后的病理组织中的水分；所述透明是将所述脱水后的病理组织依次浸入体积浓度为50%二甲苯和100%二甲苯溶液中进行透明处理；所述包埋是采用透明树脂对浸蜡后的病理组织进行迅速包埋；所述封固是将染色后的病理组织采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的混合物进行封固，所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的质量比为1：0.1~0.5：0.1~0.3。

2.如权利要求1所述的病理标本的处理方法，其特征在于：所述固定液的组成为：苍术醇13g，乙氧基化乙炔二醇7ml，绿原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化钠32g，乙酸乙酯6ml，纯水补至1000ml。

3.如权利要求1所述的病理标本的处理方法，其特征在于：所述固定液的组成为：苍术醇14g，乙氧基化乙炔二醇8ml，绿原酸15g，聚乙烯吡咯烷酮50g，氯化钠35g，乙酸乙酯8ml，纯水补至1000ml。

4.如权利要求1~3任一项所述的病理标本的处理方法，其特征在于：所述固定时间为5~8小时。

5.如权利要求1所述的病理标本的处理方法，其特征在于：所述透明树脂为脲醛树脂、环氧乙烯基树脂、二甲基丙烯酸酯中的一种或两种以上的组合。

6.如权利要求5所述的病理标本的处理方法，其特征在于：所述透明树脂为脲醛树脂与二甲基丙烯酸酯的组合物，所述脲醛树脂与二甲基丙烯酸酯的质量比为4~5：1。

7.如权利要求1所述的病理标本的处理方法，其特征在于：所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮与二甲苯的质量比为1：0.3：0.2。