CN110720452A - 一种优化病理大体标本保存的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种优化病理大体标本保存的方法，包括以下步骤：（1）将保存于传统固定液中的标本取出，置于10%中性福尔马林中浸泡一周；（2）将标本取出，自来水流水冲洗过夜，以去除组织中的甲醛；（3）将标本置于盛有浓度为80%乙醇的容器中复色6‑8小时；（4）将标本从步骤（3）的容器中取出，置于浓度为95%的乙醇中浸泡两小时；（5）置于20%甘油乙酸钠溶液中浸泡一周，使得标本中的乙醇溶出，分离出标本中的沉淀物；（6）取出标本，置于注有新配制的20%甘油乙酸钠保存液的亚克力容器内，标本长期保存。本发明既提高了液体折光率，满足了数码拍摄的需要，又保证了保存液具有较好的流动性和渗透性，避免了大量气泡无法溢出的情况发生。
Description
技术领域
本发明属于标本保存技术领域，涉及一种优化病理大体标本保存的方法，具体涉及优化脂质含量低的病理大体标本保存的方法。
背景技术
普通的病理大体标本保存液一般使用10%福尔马林（4%甲醛溶液），存在保存时间过久后标本褪色，含血量高的组织颜色变得晦暗，以及甲醛气体易挥发，造成环境污染，对人体有害等缺点。
现有环保固定液一般采用乙酸钠或乙酸钾作为防腐剂，添加不同浓度的甘油以增加液体的折光率，有利于将标本保存于亚克力容器内进行数码摄影。但浓度过高的甘油（40%）过于粘稠，难以渗透入组织，并且使得保存液中的气泡难以溢出，影响标本的观察和拍摄效果。
发明内容
本发明提供一种化病理大体标本保存的方法，以解决背景技术中所提出的问题。
为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种优化病理大体标本保存的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将保存于传统固定液中的标本取出，置于10%中性福尔马林中浸泡一周；
（2）将标本取出，自来水流水冲洗过夜，以去除组织中的甲醛；
（3）将标本置于盛有浓度为80%乙醇的容器中复色6-8小时；
（4）将标本从步骤（3）的容器中取出，置于浓度为95%的乙醇中浸泡两小时；
（5）将标本取出，置于20%甘油乙酸钠溶液中浸泡一周，使得标本中的乙醇溶出，分离出标本中的沉淀物；
（6）取出标本，置于最终保存的亚克力容器内，亚克力容器注入有新配制的20%甘油乙酸钠保存液，标本长期保存。
进一步的，所述步骤（1）中所使用的10%中性福尔马林通过将福尔马林原液用PBS稀释十倍制得。
其中，所述福尔马林原液设置为浓度40%的甲醛溶液。
其中，磷酸盐缓冲液（PBS）由以下配方制得，配方如下：
进一步的，所述步骤（5）或步骤（6）中所述的20%甘油乙酸钠溶液，由以下配方制得，配方如下：
进一步的，一种优化病理大体标本保存的方法还包括步骤（7），所述步骤（7）包括以下步骤：每隔1-3个月更换20%甘油乙酸钠保存液。
本发明的上述技术方案的有益效果如下：本发明的一种优化病理大体标本保存的方法，主要采用三水乙酸钠、甘油作为保存液的主要成分，解决了传统病理大体标本保存中大量使用甲醛溶液，造成环境污染，危害人体健康，且长期保存后标本色泽发暗的问题；同时，本发明改良了目前广泛采用的40%甘油乙酸钠保存液的配方，将甘油浓度降低至20%，既提高了液体折光率，满足了数码拍摄的需要，又保证了保存液具有较好的流动性和渗透性，避免了大量气泡无法溢出的情况发生。
附图说明
图1为本发明的实施例中亚克力容器放置标本的示意图。
图2为本发明的实施例中亚克力容器中所采用螺栓和垫圈的结构示意图。
图3为本发明的实施例中所采用的自制灌注器的结构示意图。
图4为本发明的实施例1中处理前的溃疡型肠结核标本图。
图5为本发明的实施例1中经优化病理大体标本保存的方法处理后的溃疡型肠结核标本图。
图6为本发明的实施例2中处理前的心脏肥大标本图。
图7为本发明的实施例2中经优化病理大体标本保存的方法处理后心脏肥大标本图。
图8为本发明的实施例3中处理前的肾盂移行细胞癌标本图。
图9为本发明的实施例3中采用40%甘油乙酸钠固定液处理后的肾盂移行细胞癌标本图。
图10为本发明的实施例3中经优化病理大体标本保存的方法处理后肾盂移行细胞癌标本图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。
一种优化病理大体标本保存的方法，包括以下步骤：
（1）将保存于传统固定液中的标本取出，置于10%中性福尔马林中浸泡一周。
所使用的10%中性福尔马林通过将福尔马林原液用PBS稀释十倍制得。
其中，所述福尔马林原液设置为浓度40%的甲醛溶液。
其中，磷酸盐缓冲液（PBS）由以下配方制得，配方如下：
（2）将标本取出，自来水流水冲洗过夜，以去除组织中的甲醛。去除组织中的甲醛，以避免后续步骤中保存液的浑浊。
（3）将标本置于盛有浓度为80%乙醇的容器中复色6-8小时。乙醇复色利用了乙醇的还原性使得血红蛋白回复正常色泽，复色的具体时间可根据复色效果而定。
（4）将标本从步骤（3）的容器中取出，置于浓度为95%的乙醇中浸泡两小时。
（5）将标本取出，置于20%甘油乙酸钠溶液中浸泡一周，使得标本中的乙醇溶出，分离出标本中的沉淀物。步骤（3）、（4）、（5）中所采用浸泡容器应当避免采用亚克力容器，可采用普通玻璃容器，以防止乙醇分子进入亚克力容器的PMMA分子链，导致PMMA溶胀，出现开裂的现象。
（6）取出标本，置于最终保存的亚克力（聚甲基丙烯酸甲酯，PMMA）容器内，亚克力容器注入有新配制的20%甘油乙酸钠保存液，标本长期保存。优选的，亚克力容器选择白色透明的容器。
所述步骤（5）或步骤（6）中所采用的20%甘油乙酸钠溶液，由以下配方制得，配方如下：
优选的，在20%甘油乙酸钠溶液中加入1ml福尔马林原液，可以防止保存液中的真菌生长。
在本发明中，步骤（6）所采用的亚克力容器如图1所示，步骤（6）中将标本置入亚克力容器的具体过程如下：将亚克力容器清洗晾干，置入标本后注入保存液没过标本，在容器上缘均匀涂上亚克力粘合剂（氯仿溶解聚甲基丙烯酸甲酯），将容器上盖粘上晾干过夜。容器上盖留两小孔，并通过螺栓和垫圈（见图2）封闭小孔。通过打开小孔，使用自制的灌注器（见图3）进行保存液的定期更换。
（7）每隔1-3个月更换20%甘油乙酸钠保存液。定期更换保存液可以有效解决部分标本含血量较高，保存一段时间后会使保存液呈现逐渐加深的黄色的问题。
本发明主要针对脂质含量低的标本，脂质含量高的标本由于脂质溶出而使保存液变浑浊。由于热胀会使保存液自小孔内溢出，故保存液不易加满。
实施例1
溃疡型肠结核标本
溃疡型肠结核原标本长期浸泡于10%福尔马林固定液中，标本色泽晦暗，如图4所示，经本发明的优化保存方法处理及保存后，标本回复接近新鲜标本的色泽，如图5所示。
实施例2
心脏肥大标本
心脏肥大原标本长期浸泡于10%福尔马林固定液中，标本色泽晦暗，如图6所示，经本发明处理后，标本回复接近新鲜标本的色泽，如图7所示。
实施例3
肾盂移行细胞癌癌标本
肾盂移行细胞癌癌原标本长期浸泡于10%福尔马林固定液中，标本色泽晦暗，如图8所示，经本发明处理后，标本回复接近新鲜标本的色泽。用40%甘油乙酸钠保存液后，容器内出现大量气泡，且一周后气泡任未消失，如图9所示；后改用本发明中使用的20%甘油乙酸钠，容器内气泡几乎完全消失，如图10所示，20%甘油乙酸钠保存液具有较好的流动性和渗透性，避免了大量气泡无法溢出的情况发生。
将标本图片转化为8通道灰度图片后，利用图像分析软件ImageJ对各张图片进行图像分析，得出各张图片的标本区域的像素浓度（integrated density，IntDen），计算方法为：ΔIntDen = IntDen标本- IntDen背景，该数值反映了标本的透亮度，在更换本发明使用的保存液后，标本的透亮度均有所增加，具体数值如下表1所示：
表1 图4-图10中标本透亮度的具体数值
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种优化病理大体标本保存的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将保存于传统固定液中的标本取出，置于10%中性福尔马林中浸泡一周；
（2）将标本取出，自来水流水冲洗过夜，以去除组织中的甲醛；
（3）将标本置于盛有浓度为80%乙醇的容器中复色6-8小时；
（4）将标本从步骤（3）的容器中取出，置于浓度为95%的乙醇中浸泡两小时；
（5）将标本取出，置于20%甘油乙酸钠溶液中浸泡一周，使得标本中的乙醇溶出，分离出标本中的沉淀物；
（6）取出标本，置于最终保存的亚克力容器内，亚克力容器注入有新配制的20%甘油乙酸钠保存液，标本长期保存。
2.根据权利要求1所述的一种优化病理大体标本保存的方法，其特征在于，所述步骤（1）中所使用的10%中性福尔马林通过将福尔马林原液用PBS稀释十倍制得。
3.根据权利要求2所述的一种优化病理大体标本保存的方法，其特征在于，所述福尔马林原液设置为浓度40%的甲醛溶液。
4.据权利要求2所述的一种优化病理大体标本保存的方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液（PBS）由以下配方制得，配方如下：
5.根据权利要求1所述的一种优化病理大体标本保存的方法，其特征在于，所述步骤（5）或步骤（6）中所述的20%甘油乙酸钠溶液，由以下配方制得，配方如下：
。
6.根据权利要求1所述的一种优化病理大体标本保存的方法，其特征在于，还包括步骤（7），所述步骤（7）包括以下步骤：每隔1-3个月更换20%甘油乙酸钠保存液。
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