CN107550992B - 一种治疗痛风的药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物制剂领域，主要涉及一种治疗痛风的药物及其制备方法，本发明以生大黄、冬虫夏草、水蛭、刺梧桐胶、肌醇六磷酸为原料，制备一种治疗痛风的药物组合物，实验结果表明生大黄、冬虫夏草、水蛭、刺梧桐胶、肌醇六磷酸组合起来，可明显改善MSU对HUVEC细胞存活率的不良影响，抑制ICAM‑1的表达；本发明制备痛风的中药粉末分散均匀、流动性好，提高最终填充胶囊的药品的一致性；采用适当浓度刺梧桐胶在低温条件下形成中药凝胶，与生大黄、冬虫夏草、水蛭有效结合，增强生大黄的祛瘀之效，中和水蛭的破血力，再利用肌醇六磷酸在水浴条件下相互作用，压制水蛭本身的毒性，降低对人体的伤害，同时保持良好的疗效；同时可免去用于赋形剂，降低服用药的体积。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂领域，主要涉及一种治疗痛风的药物及其制备方法。
背景技术
痛风是由单钠尿酸盐(MSU)沉积所致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关。
抗痛风药目前品种不多，临床治疗主要以秋水仙碱、非甾体类抗炎药、激素、促进尿酸排泄药(如丙磺舒、磺吡酮及苯溴马隆)和抑制尿酸合成药(别嘌呤醇)为主，中药配方为辅。抗痛风的中药目前主要采用透骨香、伸筋草、大血藤等，现有的中药配方存在具有一定的副作用，且治疗效果不显著等缺陷。
发明内容
本发明是解决现有技术中治疗痛风的中药配方存在毒副作用大，治疗效果不明显等的问题，提供一种治疗痛风的药物及其制备方法。
为解决上述问题，本发明的技术方案如下：
一种治疗痛风的药物，包括以下重量份配比的原料药，
生大黄：5-15份；
冬虫夏草：2-10份；
水蛭：1-4份。
刺梧桐胶：1-3份；
肌醇六磷酸：1-3份。
优选地，所述治疗痛风的药物，包括以下重量份配比的原料药，
生大黄：10份；
冬虫夏草：5份；
水蛭：2份；
刺梧桐胶：2份；
肌醇六磷酸：2份。
治疗痛风的药物的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，将所述生大黄、冬虫夏草、水蛭分别除杂、洁净、干燥、灭菌、初步打碎成碎块；
步骤二，将处理后的生大黄、冬虫夏草、水蛭分别置于陶瓷罐内，放入直径为5-8mm玛瑙球，将陶瓷罐盖紧后上下震动12-24小时，制成粉末；
步骤三，将中药粉末按所述比例合并于同一陶瓷罐内，放入直径为5-8mm的玛瑙球，将陶瓷罐盖紧后上下震动2-4小时，制得混合中药粉末；
步骤四，配置质量分数为1-3％的刺梧桐胶水溶液，在剧烈搅拌下加入步骤三制得的混合中药粉末，搅拌均匀后，在温度为2-6℃条件下静置24-48小时，形成凝胶状；急速降温至-15℃--17℃冰冻1-3小时，将凝胶放入质量分数为1-3％的肌醇六磷酸水溶液，在30℃水浴条件下静置48-72小时；真空冷冻干燥，研磨成粉末。
优选地，将步骤四制得的粉末进行干法制粒，制备出颗粒状中间体，装入胶囊。
优选地，步骤一所述的碎块长径小于1厘米。
优选地，步骤二所述的粉末粒径小于500微米。
优选地，步骤四所述的颗粒状中间体粒径为3-6毫米。
优选地，步骤四所述急速降温过程在3-5分钟内完成。
相对于现有技术，本发明的优点如下，
本发明以生大黄、冬虫夏草、水蛭、刺梧桐胶、肌醇六磷酸为原料，制备一种治疗痛风的药物组合物，生大黄具备泻热通肠，凉血解毒，逐淤通经等功效，冬虫夏草可以增强机体的免疫力，滋补肺肾，对肺癌、肝癌等有明显的抑制作用，实验结果表明生大黄、冬虫夏草、水蛭、刺梧桐胶、肌醇六磷酸按照本发明的配方组合起来，可明显改善MSU对HUVEC细胞存活率的不良影响，抑制ICAM-1的表达，且毒副作用小；生大黄用于祛瘀以生新，水蛭辅于逐淤之功合其力，冬虫夏草佐与以补虚固正；刺梧桐胶、肌醇六磷酸中和水蛭的破血力，压制水蛭的毒性，同时辅助提高药效，使得本发明的药物药性温和，毒副作用小，药效优良；
本发明仅采用生大黄、冬虫夏草、水蛭、刺梧桐胶、肌醇六磷酸作为原料，在制粉过程产生具有粘性粉体形成辅料效应，从而免去用于赋形剂，降低服用药的体积；
本发明制备痛风的药物组合物的方法，采用玛瑙球球击制粉的方法制备中药粉末，该方法在常温下即可得到均匀分散的中药粉末，单个玛瑙球不会同时重复在药材上打击，因此避免了药材受热破坏，反而增加了药材的活性成分，同时药材的四气五味完全得以保留，且该方法制得的中药粉末分散均匀、流动性好，提高最终填充胶囊的药品的一致性；
本发明制备痛风的药物组合物的方法，采用适当浓度刺梧桐胶在低温条件下形成中药凝胶，与生大黄、冬虫夏草、水蛭有效结合，增强生大黄的祛瘀之效，中和水蛭的破血力，急速冷冻后再利用肌醇六磷酸在水浴条件下相互作用，压制水蛭本身的毒性，降低对人体的伤害，同时保持良好的疗效。
具体实施方式
实施例1：
一种治疗痛风的药物的制备方法，包括以下步骤：
原料配方：生大黄：10份；冬虫夏草：5份；水蛭：2份；刺梧桐胶：2份；肌醇六磷酸：2份；
步骤一，将所述生大黄、冬虫夏草、水蛭分别除杂、洁净、干燥、灭菌、初步打碎成碎块；
步骤二，将处理后的生大黄、冬虫夏草、水蛭分别置于陶瓷罐内，放入直径为5-8mm玛瑙球，将陶瓷罐盖紧后上下震动12-24小时，制成粉末；
步骤三，将中药粉末按所述比例合并于同一陶瓷罐内，放入直径为5-8mm的玛瑙球，将陶瓷罐盖紧后上下震动2-4小时，制得混合中药粉末；
步骤四，配置质量分数为2％的刺梧桐胶水溶液，在剧烈搅拌下加入步骤三制得的混合中药粉末，搅拌均匀后，在温度为4℃条件下静置36小时，形成凝胶状；4分钟内将凝胶温度降温至-16℃，冰冻2小时后，将凝胶放入质量分数为2％的肌醇六磷酸水溶液，在30℃水浴条件下静置60小时；真空冷冻干燥，研磨成粉末。
实施例2：
在痛风药物的原料配方中，生大黄、冬虫夏草、水蛭、刺梧桐胶、肌醇六磷酸各成分的存在和成分范围均是痛风药物实现药效缺一不可的条件。保持实施例1其他条件不变，将原料配方替换为以下各组配方分别制备痛风药物。
A组原料配方：生大黄：5份；冬虫夏草：2份；水蛭：1份；刺梧桐胶：1份；肌醇六磷酸：1份；
B组原料配方：生大黄：15份；冬虫夏草：10份；水蛭：4份；刺梧桐胶：3份；肌醇六磷酸：3份；
C组原料配方：生大黄：10份；冬虫夏草：5份；水蛭：2份；刺梧桐胶：5份；肌醇六磷酸：5份；
D组原料配方：生大黄：10份；冬虫夏草：5份；水蛭：2份；刺梧桐胶：0.5份；肌醇六磷酸：0.5份；
E组原料配方：生大黄：10份；冬虫夏草：5份；水蛭：2份；
F组原料配方：生大黄：10份；冬虫夏草：5份。
实施例3：
在痛风药物的制备方法中，步骤四先将中药粉末-刺梧桐胶水溶液静置形成凝胶，后冷冻并用肌醇六磷酸浸泡的步骤尤为关键，是保证制得痛风药物药效和低毒性的必要步骤之一。保持实施例1其他条件不变，仅仅改变步骤四的处理方式为：配置质量分数为2％的刺梧桐胶水溶液，在剧烈搅拌下加入步骤三制得的混合中药粉末，搅拌均匀后，4分钟内将凝胶温度降温至-16℃，冰冻2小时后，加入质量分数为2％的肌醇六磷酸水溶液，在30℃水浴条件下静置60小时，真空冷冻干燥，研磨成粉末。
实施例4：
在痛风药物的制备方法中，步骤四中中药粉末-刺梧桐胶水溶液须在较低的温度条件下静置形成凝胶，否则无法与刺梧桐胶产生协同作用提高药效减低毒性。保持实施例1其他条件不变，仅仅改变步骤四的处理方式为：配置质量分数为2％的刺梧桐胶水溶液，在剧烈搅拌下加入步骤三制得的混合中药粉末，搅拌均匀后，在室温(25-30℃)条件下静置36小时，形成沉淀物，4分钟内将凝胶温度降温至-16℃，冰冻2小时后，加入质量分数为2％的肌醇六磷酸水溶液，在30℃水浴条件下静置60小时；真空冷冻干燥，研磨成粉末。
实施例5：
在痛风药物的制备方法中，步骤四中急速冷冻的步骤也是成功制备痛风药物的关键步骤之一。
A组：保持实施例1其他条件不变，仅仅改变步骤四的处理方式为：配置质量分数为2％的刺梧桐胶水溶液，在剧烈搅拌下加入步骤三制得的混合中药粉末，搅拌均匀后，在温度为4℃条件下静置36小时，形成凝胶状；将凝胶放入质量分数为2％的肌醇六磷酸水溶液，在30℃水浴条件下静置60小时；真空冷冻干燥，研磨成粉末。
B组：保持实施例1其他条件不变，仅仅改变步骤四的处理方式为：配置质量分数为2％的刺梧桐胶水溶液，在剧烈搅拌下加入步骤三制得的混合中药粉末，搅拌均匀后，在温度为4℃条件下静置36小时，形成凝胶状；4分钟内将凝胶温度降温至-25℃，冰冻2小时后，将凝胶放入质量分数为2％的肌醇六磷酸水溶液，在30℃水浴条件下静置60小时；真空冷冻干燥，研磨成粉末。
C组：保持实施例1其他条件不变，仅仅改变步骤四的处理方式为：配置质量分数为2％的刺梧桐胶水溶液，在剧烈搅拌下加入步骤三制得的混合中药粉末，搅拌均匀后，在温度为4℃条件下静置36小时，形成凝胶状；4分钟内将凝胶温度降温至-10℃，冰冻2小时后，将凝胶放入质量分数为2％的肌醇六磷酸水溶液，在30℃水浴条件下静置60小时；真空冷冻干燥，研磨成粉末。
对比例1：
治疗痛风的中药组合物，由以下重量配比的药用原料制备而成：
大黄15g、通草12g、土元4g、海风藤10g。
上述药用原料的提取方法：按配方比例取药用原料，向药用原料中加水回流提取两次2次，2次的用水体积均为药用原料体积的10倍，2次回流提取时间依次为2h、1h。每次回流完后，过滤并收集滤液，合并2次滤液，得到本实施例药用原料的提取液。将合并后的提取液浓缩至相对密度1.15(80℃)，得实施例1的提取物。
向上述提取物中加入提取物重量2倍重量的可溶性淀粉，制粒，干燥，分装成袋，得到颗粒剂。
实施例6：
将实施例1-5、对比例1制得的中药粉末用于抗痛风炎症实验
现代医学病理研究表面，痛风性关节炎是MSU引起中性粒细胞局部浸润和炎性反应，痛风产生的本质是中性粒细胞(PMN)-血管内皮细胞(HUVEC)黏连增强，HUVEC损伤，其分子生物学基础在于PMN与HUVEC表面黏附分子的相互作用，其中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)与粘附功能关系最密切，是痛风炎症的重要指标之一。
将MSU溶解于DMEM培养液中，制备100ug/ml MSU溶液；
将痛风定胶囊打开胶囊，取出药物溶解于上述100ug/ml MSU溶液中，制备100ug/ml痛风定胶囊溶液；
将实施例1-5、对比例1制得组合物分别溶解于上述100ug/ml MSU溶液中，制备100ug/ml组合物溶液；
在96孔板中加入100uL人脐静脉血管内皮细胞HUVEC/DMEM溶液，细胞浓度为1×104cells/well，培养24小时，培养条件：37℃，5％CO2；吸出原培养液，分别加入200uL DMEM培养液、100ug/ml MSU溶液、上述100ug/ml痛风定胶囊溶液、上述实施例1-5、对比例1的100ug/ml组合物溶液；1号96孔板继续培养24小时，2号96孔板继续培养72小时；吸出上层液体，加入5uL MTT(5mg/mL)加入到孔中，孵育4h后，弃去上层溶液。在每孔中加入100μLDMSO，在振荡培养箱中轻微振荡10min，在570nm波长下的测定光强度值(OD)。细胞存活率可以通过下列计算得到：
细胞存活率％＝[OD]test/[OD]control×100％
表一：1号96孔板的细胞存活率
| 组别 | HUVEC细胞存活率％ |
| DMEM培养液(空白对照) | 100.0 |
| MSU | 57.4 |
| 痛风定胶囊 | 112.3 |
| 实施例1 | 188.7 |
| 实施例2(A组) | 179.8 |
| 实施例2(B组) | 184.5 |
| 实施例2(C组) | 142.5 |
| 实施例2(D组) | 122.8 |
| 实施例2(E组) | 113.8 |
| 实施例2(F组) | 102.7 |
| 实施例3 | 76.2 |
| 实施例4 | 84.5 |
| 实施例5(A组) | 87.2 |
| 实施例5(B组) | 92.8 |
| 实施例5(C组) | 119.2 |
| 对比例1 | 122.5 |
表二：2号96孔板的细胞存活率
根据上述结果可知，
表一中，与空白对照组相比，加入MSU的HUVEC细胞存活率大大降低，加入痛风定胶囊溶液、对比例1的组合物溶液HUVEC细胞存活率一定程度提高，而本发明制备的组合物溶液(实施例1、实施例2的A组和B组)HUVEC细胞存活率显著提升，说明本发明制备的药物组合物对治疗痛风具有较好疗效。
表一和表二对比可知，经过72小时的培养，加入本发明制备的组合物溶液(实施例1、实施例2的A组和B组)HUVEC依然具备很高的细胞存活率，而加入痛风定胶囊溶液、对比例1的组合物溶液HUVEC细胞存活率大大降低，而本发明制备的药物组合物对治疗痛风具有很低的毒副作用。
单纯的生大黄+冬虫夏草组合物(实施例2-F组)对HUVEC细胞存活率的提升并无显著作用；而将生大黄、冬虫夏草、水蛭组合起来(实施例2-E组)，虽改善HUVEC细胞存活率，但与痛风定胶囊并无明显优势；在生大黄、冬虫夏草、水蛭的基础上加入一定量的刺梧桐胶、肌醇六磷酸(实施例1、实施例2的A组和B组)，可提高HUVEC细胞存活率，但刺梧桐胶、肌醇六磷酸用量范围不易过大或过小，用量多大(实施例2-C组)制成的组合物虽有疗效，但毒副作用较大，培养72小时后HUVEC细胞存活率大大降低，用量过小(实施例2-D组)对HUVEC细胞存活率的提升无显著作用。
在制备痛风药物的过程中，步骤四应先将中药粉末-刺梧桐胶水溶液在低温条件下，静置24-48小时，形成凝胶，急速冷冻后用肌醇六磷酸在30℃水浴条件下浸泡60小时，温度过高，制备过程中刺梧桐胶不能与组合物中的有效成分很好地相互作用(实施例3)，最终制得痛风药物用于抗痛风炎症实验，HUVEC细胞存活率与空白对照组相比大大降低；静置过程是肌醇六磷酸与各个组分缓慢相互作用的过程，若直接将中药粉末-刺梧桐胶水溶液与肌醇六磷酸混合(实施例4)，最终制得痛风药物用于抗痛风炎症实验，HUVEC细胞存活率与空白对照组相比也将大大降低；未经过急速冷冻过程的组合物(实施例5-A组)也未对HUVEC细胞存活率的提升作用，且冷冻温度也对最终制得的组合物的药效产生影响，冷冻温度过高或过低(实施例5-A组、B组)，HUVEC细胞存活率均无显著提升。
实施例7：
对ICAM-1表达影响
将处于对数生长期的HUVEC用0.25％的胰蛋白酶消化，调整细胞密度为5×109/L，分别接种于4组细胞培养瓶中，编号A、B、C、D，培养24小时后，去除上清溶液，
A培养瓶加入15毫升DMEM培养液；
B培养瓶加入15毫升实施例5中所述100ug/ml MSU溶液；
C培养瓶加入15毫升实施例5中所述100ug/ml痛风定胶囊溶液；
D培养瓶加入15毫升实施例5中所述100ug/ml组合物(实施例1)溶液；
继续培养24小时，用PBS溶液收集细胞，离心去上清，加入CD54单克隆抗体，30min后，用PBS溶液洗涤，分散细胞，应用流式细胞仪检测其阳性细胞百分率(n＝10000)，重复4次，结果如下：
表三：ICAM-1的表达
| 组别 | ICAM-1表达％ |
| DMEM培养液(空白对照) | 7±2 |
| MSU | 276±24 |
| 痛风定胶囊 | 192±20 |
| 实施例1 | 127±13 |
根据表三结果可知，空白对照组几乎没有ICAM-1的表达，加入MSU的细胞ICAM-1的表达最大，痛风定胶囊溶液和实施例1组合物溶液可抑制ICAM-1的表达，且实施例1组合物溶液的抑制能力更佳。
需要说明的是上述实施例仅仅是本发明的较佳实施例，并没有用来限定本发明的保护范围，在上述基础上做出的等同替换或者替代均属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种治疗痛风的药物的制备方法，其特征在于，所述治疗痛风的药物由以下重量份配比的原料药组成：
生大黄：5-15份；
冬虫夏草：2-10份；
水蛭：1-4份；
刺梧桐胶：1-3份；
肌醇六磷酸：1-3份；
所述制备方法，包括以下步骤：
步骤一，将所述生大黄、冬虫夏草、水蛭分别除杂、洁净、干燥、灭菌、初步打碎成碎块；
步骤二，将处理后的生大黄、冬虫夏草、水蛭分别置于陶瓷罐内，放入直径为5-8mm玛瑙球，将陶瓷罐盖紧后上下震动12-24小时，制成粉末；
步骤三，将中药粉末按所述比例合并于同一陶瓷罐内，放入直径为5-8mm的玛瑙球，将陶瓷罐盖紧后上下震动2-4小时，制得混合中药粉末；
步骤四，配置质量分数为1-3％的刺梧桐胶水溶液，在剧烈搅拌下加入步骤三制得的混合中药粉末，搅拌均匀后，在温度为2-6℃条件下静置24-48小时，形成凝胶状；3-5分钟内降温至-15℃～-17℃，冰冻1-3小时，将凝胶放入质量分数为1-3％的肌醇六磷酸水溶液，在30℃水浴条件下静置48-72小时；真空冷冻干燥，研磨成粉末。
2.如权利要求1所述的治疗痛风的药物的制备方法，其特征在于，所述治疗痛风的药物由以下重量份配比的原料药组成：
生大黄：10份；
冬虫夏草：5份；
水蛭：2份；
刺梧桐胶：2份；
肌醇六磷酸：2份。
3.如权利要求1或2任一项所述的治疗痛风的药物的制备方法，其特征在于，将步骤四制得的粉末进行干法制粒，制备出颗粒状中间体，装入胶囊。
4.如权利要求1或2任一项所述的治疗痛风的药物的制备方法，其特征在于，步骤一所述的碎块长径小于1厘米。
5.如权利要求1或2任一项所述的治疗痛风的药物的制备方法，其特征在于，步骤二所述的粉末粒径小于500微米。
6.如权利要求3所述的治疗痛风的药物的制备方法，其特征在于，步骤四所述的颗粒状中间体粒径为3-6毫米。
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