CN107541562B - ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用及其试剂盒 - Google Patents

ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用及其试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种ABCC3‑013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用，ABCC3‑013 mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。其可通过检测患者体内（例如外周血）ABCC3‑013 mRNA表达水平来检测患者的氯吡格雷抵抗，为辅助临床治疗、判断预后及疗效提供新方法。本发明还提供了检测氯吡格雷抵抗的试剂盒，其可通过检测患者体内（例如外周血）ABCC3‑013 mRNA表达水平来检测患者的氯吡格雷抵抗。临床实验表明其诊断敏感性为52%，特异性为86%。

Description

ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用 及其试剂盒
技术领域
本发明涉及一种检测药物抵抗的试剂盒，尤其是一种检测氯吡格雷抵抗的试剂盒。
背景技术
氯吡格雷作为抗血小板药物，是冠心病患者经皮冠状动脉介入术 (PCI)植入支架后，用来预防支架内血栓发生的最常用药物，与阿司匹林合用所组成的“双抗血小板治疗”方案是急性冠脉综合征和PCI植入支架后的“金标准”抗血小板治疗方案。氯吡格雷抵抗（或耐受）出现在10-40%的服用氯吡格雷治疗的病人，表现为氯吡格雷的抗血小板作用达不到预期的要求，导致药物疗效差。
现有的血小板聚集试验和血栓弹力图法可在一定程度上评价氯吡格雷抵抗；但是血小板聚集试验重复性较差；血栓弹力图的检测方法的不统一、评价标准不统一，并不能据此指导临床治疗。
目前所采用的病人外周血白细胞DNA检测CYP2C19基因型的方法，仅能反映约10%的病人在服用氯吡格雷后临床疗效的个体差异，诊断或预测价值有限。氯吡格雷抵抗的机制尚不十分清楚，临床上也缺少有效的氯吡格雷抵抗的标记物。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的氯吡格雷抵抗的标记物在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用，以辅助临床治疗、判断预后及疗效。
本发明的另一个目的是提供一种检测氯吡格雷抵抗的试剂盒，以辅助临床治疗、判断预后及疗效。
本发明提供了一种ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用，ABCC3-013 mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明还提供了一种检测氯吡格雷抵抗的试剂盒，其包括对应于ABCC3-013 mRNA的特异性引物、探针、和/或芯片，ABCC3-013 mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
在检测氯吡格雷抵抗的试剂盒的另一种示意性实施方式中，特异性引物包括SEQID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物。
在检测氯吡格雷抵抗的试剂盒的另一种示意性实施方式中，还进一步包括：TRIZOL试剂，氯仿，异丙醇，DEPC水，Oligo dT引物，随机6核苷酸引物，反转录酶，无RNA酶水，反转录缓冲液，Taq 酶，dNTP，Mg2+，SYBR Green I，和ROX参比染料。
多药耐药相关蛋白（MRP3）是ABCC3基因（ATP binding cassette，subfamily C，member 3）表达的产物。临床研究表明，MRP3的高表达与多种抗癌化疗药物的治疗耐受有关。ABCC3基因在RNA转录水平上因剪接变异而产生多种mRNA剪接变异体，其中ABCC3-013剪接变异体是ABCC3基因由于点突变导致mRNA剪接异常而产生的非野生型mRNA剪接变异体。ABCC3-013剪接变异体能够增强MRP3蛋白介导的转运活性。临床研究显示，氯吡格雷抵抗的病人的ABCC3-013 mRNA表达水平显著高于氯吡格雷反应敏感（或正常）的病人的表达水平。因此，可以通过检测患者体内（例如外周血）ABCC3-013 mRNA表达水平来检测患者的氯吡格雷抵抗，辅助临床治疗、判断其疗效和预后。
本发明提供了检测氯吡格雷抵抗的试剂盒，其可通过检测患者体内（例如外周血白细胞）ABCC3-013 mRNA表达水平来检测患者的氯吡格雷抵抗。临床实验表明其诊断敏感性为52%，特异性为86%，可有助于辅助临床治疗、判断其疗效和预后。
附图说明
以下附图仅对发明做示意性说明和解释，并不限定本发明的范围。
图1：血清ABCC3-013 mRNA诊断氯吡格雷抵抗的ROC曲线。
图2：EGFP蛋白在各组细胞中的表达。
图3：ABCC3-002和ABCC3-013在各稳定转染细胞株中的表达情况。
图4：各稳定转染细胞株的外排转运功能检测。
图5：氯吡格雷敏感反应患者和低反应（抵抗）患者中ABCC3-002和ABCC3-013 mRNA的相对表达水平。
具体实施方式
为了对发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现结合以下实施例说明本发明的具体实施方式。
实施例1：ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用。
一、检测氯吡格雷抵抗的试剂盒，包括如下成分：
TRIZOL试剂，
氯仿，
异丙醇，
DEPC水，
Oligo dT引物（Oligo dT primer），
随机6核苷酸引物（Random 6-mers），
反转录酶（PrimeScript TM RT Enzyme Mix），
无RNA酶水（RNase-free dH2O），
反转录缓冲液（PrimeScript TM buffer），
Taq 酶，dNTP，Mg2+，SYBR Green I（SYBR Premix Ex TaqTM），
ROX参比染料（ROX Reference Dye），和
针对ABCC3-013 mRNA（核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示）的特异性引物SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6。
二、试剂盒的使用方法
提取患者外周血RNA，用qRT-PCR检测其中ABCC3-013 mRNA的含量，具体操作如下所示。
1、外周血RNA的提取：
1）250μl血浆，加入750μl Trizol；
2）摇晃3至5次，用移液器充分吹打后转移至1.5 ml EP管中；
3）室温下静置10 min；
4）加200 μl 氯仿，上下剧烈晃动或者涡旋震动15 s，室温下静置5 min；
5）12,000 × g、4℃离心15 min；
6）吸取含有总RNA的上清转移至新的1.5 ml EP管中，加入500 μl 异丙醇后颠倒混匀，室温下静置10 min；
7）12,000 × g、4℃离心10 min，弃上清；
8）加入1 ml 75 % 乙醇（由DEPC水配制），涡旋振荡混匀；
9）7,500 × g 、4℃离心5 min，弃上清；
10）按照上一步的离心条件进行离心，吸尽多余液体；
11）待RNA略干之后，加20 μl DEPC水，-80℃保存备用。
2、RNA定量与纯度测定
取上述RNA 1 μl，加去离子水99 μl 稀释100倍，测定其在260 nm以及280 nm处的光密度值（即OD260与OD280），并计算二者比值，判断RNA的纯度。比值小于1.6表明样品中含有蛋白质，大于1.9 表明样品纯度很高，介于二者之间表明含有不同程度的DNA。根据测得的OD260值计算稀释前的RNA浓度，公式如下：RNA（μg/μl）= 30×OD260值×稀释倍数/1000。根据实际浓度，用DEPC水将RNA浓度调为1 μg/μl。
3、RNA逆转录为cDNA
反应条件如下：RNA（1μg），1μl Oligo dT primer（50μM），1μl Random 6-mers（100μM），1μl PrimeScript TM RT Enzyme Mix，4μl 5×PrimeScript TM buffer， RNase-freedH2O，总体积20μl。反应条件为37℃ 15 min，85℃ 5s，产物cDNA 4℃保存。
4、荧光定量PCR实验步骤
实时荧光定量PCR（ABI 7500，USA）检测ABCC3-013 cDNA水平，采用SYBR PremixEx TaqTM（TaKaRa Biotech Co.，Ltd，Dalian，China）荧光定量PCR试剂。引物设计见下表1，反应体系20μl包含：1μl cDNA 样本，0.8μl 上游引物（10μM），0.8μl 下游引物（10μM），10μlSYBR Premix Ex TaqTM，0.4μl ROX Reference Dye 和7μl dH2O。PCR循环条件：95℃ 30s，95℃ 5s，60℃ 30s，72℃ 30s，共40个循环。荧光定量PCR的结果以每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数（Ct值）表示。ΔCt= Ct （ABCC3-013）–Ct （GAPDH），采用2-ΔΔCt法计算ABCC3-013的相对表达量。
表1 引物序列
目标 引物
ABCC3-013 上游引物：SEQ ID NO.5；下游引物：SEQ ID NO.6
GAPDH 上游引物：SEQ ID NO.7；下游引物：SEQ ID NO.8
三、有效性
选取100名患者，患者为冠心病人经皮冠脉介入（PCI）植入支架后进行冠状动脉造影复查的病人，口服氯吡格雷75mg/天和阿司匹林100mg/天长达6个月。造影前抽取患者早晨空腹静脉血各两管约3ml，枸橼酸钠（3.2%）抗凝者（蓝盖管）用于ADP诱导的全血血小板聚集率测定，用EDTA抗凝者（红盖管）用于提取血细胞RNA。
根据测得的全血血小板聚集率将患者分为两组，其中：
阴性组：对氯吡格雷药物反应敏感组患者，血小板聚集率为0-1欧姆，共50名；
阳性组：对氯吡格雷药物反应不敏感组患者，血小板聚集率>10欧姆，共50名。
根据上述方法实验提取患者外周血RNA，用qRT-PCR检测其中ABCC3-013 mRNA的含量。本发明以50名对氯吡格雷反应敏感组患者血清中ABCC3-013的表达作为（氯吡格雷抵抗）阴性组，50名对氯吡格雷反应不敏感组患者血清中ABCC3-013的表达作为阳性组，分别检测各组ABCC3-013 mRNA的表达，建立血清ABCC3-013诊断氯吡格雷抵抗的ROC曲线（见图1），其约登（Youden）指数J为0.3800。结果显示诊断敏感性为52%，特异性为86%；诊断氯吡格雷抵抗的最佳临界（cutoff）值为>7.029。
实施例2：实验研究。
ABCC3-013 mRNA是ABCC3基因由于点突变导致mRNA剪接异常而产生的非野生型mRNA剪接变异体。以下实验中以ABCC3基因的另一剪接变异体ABCC3-002 mRNA为对照，检验ABCC3-013 mRNA的生物学活性。
1、细胞培养：HepG2细胞培养于高糖型DMEM培养基，含10%灭活胎牛血清、50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素，于37℃、饱和湿度的5% CO2培养箱培养。
2、质粒的构建。
方法：化学合成ABCC3-002（SEQ ID NO.1）和ABCC3-013（SEQ ID NO.2）片段，合成含有EGFP的片段ABCC3-002-EGFP和ABCC3-013-EGFP，同时合成随机片段作为对照组，将合成片段克隆至 TV5 载体。重组载体分别命名为TV5、ABCC3-002、ABCC3-013、TV5-EGFP、ABCC3-002-EGFP 和 ABCC3-013-EGFP。重组质粒进行测序验证。
结果：将构建的重组质粒TV5，ABCC3-002，ABCC3-013，TV5-EGFP，ABCC3-002-EGFP和ABCC3-013-EGFP经测序验证后，证明构建成功。
3、观察重组质粒转染 HepG2 细胞后绿色荧光蛋白的表达。
方法：HepG2 细胞以3×105 的密度接种于六孔板，孵育过夜。重组质粒TV5-EGFP、ABCC3-002-EGFP和ABCC3-013-EGFP通过脂质体Lipofectamine 2000（Invitrogen，Carlsbad，CA，USA）转染至HepG2细胞，转染48h后，荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。
结果：如图2所示，EGFP蛋白在各组细胞中均有表达，进一步验证了表达ABCC3-002和ABCC3-013的重组质粒构建成功。
4、筛选稳定转染 HepG2 细胞系。
方法：HepG2 细胞以3×105 的密度接种于六孔板，孵育过夜。重组质粒TV5、ABCC3-002和ABCC3-013通过脂质体Lipofectamine 2000（Invitrogen，Carlsbad，CA，USA）转染HepG2 细胞，转染48h后，对转染的HepG2 细胞进行倍比稀释接种于96孔板，500 μg/mlG418 （Gibco BRL，Grand Island，NY，USA）筛选单克隆细胞株。选择阳性单克隆进行扩增，RT-PCR鉴定稳定转染单克隆细胞株。稳转重组质粒TV5、ABCC3-002和ABCC3-013的HepG2 细胞分别命名为TV5细胞、002细胞和013细胞。
5、荧光定量PCR检测稳定转染HepG2 细胞系中ABCC3-002和ABCC3-013的表达。
方法：Trizol法分别提取各稳定转染细胞株的总RNA，逆转录成cDNA，反应条件如下：RNA（1μg），1μl Oligo dT primer（50μM），1μl Random 6-mers（100μM），1μlPrimeScript TM RT Enzyme Mix，4μl 5×PrimeScript TM buffer 和 RNase-free dH2O，总体积20μl。实时荧光定量PCR（ABI 7500，USA）检测ABCC3-002和ABCC3-013的表达水平，采用SYBR Premix Ex TaqTM（TaKaRa Biotech Co.，Ltd，Dalian，China）荧光定量PCR试剂。引物设计见下表2，反应体系20μl包含：1μl cDNA 样本，0.8μl 上游引物（10μM），0.8μl 下游引物（10μM），10μl SYBR Premix Ex TaqTM，0.4μl ROX Reference Dye 和7μl dH2O。PCR循环条件：95℃ 30s，95℃ 5s，60℃ 30s，72℃ 30s，共40个循环。荧光定量PCR的结果以每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数（Ct值）表示。ΔCt= Ct (ABCC3-002或ABCC3-013)–Ct(GAPDH)，采用2-ΔΔCt法计算ABCC3-002和ABCC3-013的相对表达量。
表2：引物序列
上游引物 下游引物
ABCC3-002 SEQ ID NO.3 SEQ ID NO.4
ABCC3-013 SEQ ID NO.5 SEQ ID NO.6
结果：如图3所示，ABCC3-002剪接变异体在3组细胞中的表达情况：在002细胞中表达显著高于对照组TV5细胞（P<0.05），在013细胞中与对照组TV5细胞相比表达无显著差异。ABCC3-013剪接变异体在3组细胞中的表达情况：在013细胞中表达显著高于对照组TV5细胞（P<0.05），在002细胞中与对照组TV5细胞相比表达无显著差异。
6、转运活性检测。
5–二醋酸羧基荧光素（5-Carboxyfluorescein diacetate，5-CFDA）不是一种荧光探针，但可以通过细胞内的酯酶水解释放荧光阴离子5-羧基荧光素（5-carboxyfluorescein，5-CF）。研究表明，细胞膜上表达的MRP蛋白能够促进5-CF的外排，因此可以通过检测细胞内5-CF的蓄积量来推测ABCC3-002和ABCC3-013是否具有MRP泵的活力。
方法：将TV5细胞、002细胞和013细胞以1×106/孔接种于6孔板，37℃孵育过夜，24h后PBS清洗三次，加入5-CFDA（5μM，BD Biosciences，San Jose，CA，USA）孵育30min，PBS清洗后流式细胞术检测荧光阴离子5-CF的荧光强度，检测各组细胞的平均荧光强度（meanfluorescence intensity，MFI）。
结果：如图4所示，013细胞的5-CF平均荧光强度显著低于对照组TV5细胞（P<0.05），结果提示ABCC3-013剪接变异体能够增强MRP蛋白调节的外排转运功能。
氯吡格雷葡萄糖醛酸结合物是MRP3的底物，而ABCC3-O13因为具有增强的MRP泵活性而增强肝细胞内氯吡格雷葡萄糖醛酸结合物从肝细胞内向细胞外转运。氯吡格雷葡萄糖醛酸结合反应是氯吡格雷代谢的主要途径，ABCC3-O13因增强的泵外排作用而加速氯吡格雷的肝细胞内代谢，而导致氯吡格雷在肝细胞内浓度下降，通过另一个氧化代谢途径而生成的氯吡格雷活性产物减少，氯吡格雷的抗血小板作用减弱，在临床上可表现为氯吡格雷抵抗。
7、临床相关性试验。
选取100名患者，患者为冠心病病人经皮冠脉介入（PCI）植入支架后进行冠状动脉造影复查的病人，口服氯吡格雷75mg/天和阿司匹林100mg/天长达6个月。造影前抽取患者早晨空腹静脉血各两管约3ml，枸橼酸钠（3.2%）抗凝者（蓝盖管）用于ADP诱导的全血血小板聚集率测定，用EDTA抗凝者（红盖管）用于提取血细胞RNA。
根据测得的全血血小板聚集率将患者分为两组，其中：
Q1组：对氯吡格雷药物反应敏感组患者，血小板聚集率为0-1欧姆，共50名；
Q4组：对氯吡格雷药物反应不敏感组患者，血小板聚集率>10欧姆，共50名。
实验提取Q1和Q4组患者外周血RNA，qRT-PCR检测其中ABCC3-002和ABCC3-013的水平（方法参照实施例1，其中ABCC3-002的引物序列为：上游引物SEQ ID NO.3和下游引物SEQID NO.4）。结果如图5所示，Q4组中ABCC3-002和ABCC3-013的表达均高于Q1组，其中ABCC3-013在Q4中的表达显著高于Q1组，两者间差异具有统计学意义（P<0.05）。
以上实验中所用统计学方法：实验资料以平均值±SD表示。各组间均数的差异比较用t检验，重复测量数据采用ANOVA（GraphPad Prism version 5，USA），以P<0.05为有统计学意义。
在本文中，“示意性”表示“充当实例、例子或说明”，不应将在本文中被描述为“示意性”的任何实施方式解释为一种更优选的或更具优点的技术方案。
在本文中，“相等”、“相同”等并非严格的数学和/或几何学意义上的限制，还包含本领域技术人员可以理解的且生产或使用等允许的误差。除非另有说明，本文中的数值范围不仅包括其两个端点内的整个范围，也包括含于其中的若干子范围。
应当理解，虽然本说明书是按照各个实施例描述的，但并非每个实施例仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方案或变更，如特征的组合、分割或重复，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 南京市第一医院
<120> ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用及其试剂盒
<130> 2016
<160> 8
<170> Patent In version 3.3
<210> 1
<211> 1881
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
gcggaggcgg ctccggcgcc cgctctgccc gccgctgggt ccgaccgcgc tcgccttcct 60
tgcagccgcg cctcggcccc atggacgccc tgtgcggttc cggggagctc ggctccaagt 120
tctgggactc caacctgtct gtgcacacag aaaacccgga cctcactccc tgcttccaga 180
actccctgct ggcctgggtg ccctgcatct acctgtgggt cgccctgccc tgctacttgc 240
tctacctgcg gcaccattgt cgtggctaca tcatcctctc ccacctgtcc aagctcaaga 300
tggtcctggg tgtcctgctg tggtgcgtct cctgggcgga ccttttttac tccttccatg 360
gcctggtcca tggccgggcc cctgcccctg ttttctttgt cacccccttg gtggtggggg 420
tcaccatgct gctggccacc ctgctgatac agtatgagcg gctgcagggc gtacagtctt 480
cgggggtcct cattatcttc tggttcctgt gtgtggtctg cgccatcgtc ccattccgct 540
ccaagatcct tttagccaag gcagagggtg agatctcaga ccccttccgc ttcaccacct 600
tctacatcca ctttgccctg gtactctctg ccctcatctt ggcctgcttc agggagaaac 660
ctccattttt ctccgcaaag aatgtcgacc ctaaccccta ccctgagacc agcgctggct 720
ttctctcccg cctgtttttc tggtggttca caaagatggc catctatggc taccggcatc 780
ccctggagga gaaggacctc tggtccctaa aggaagagga cagatcccag atggtggtgc 840
agcagctgct ggaggcatgg aggaagcagg aaaagcagac ggcacgacac aaggcttcag 900
cagcacctgg gaaaaatgcc tccggcgagg acgaggtgct gctgggtgcc cggcccaggc 960
cccggaagcc ctccttcctg aaggccctgc tggccacctt cggctccagc ttcctcatca 1020
gtgcctgctt caagcttatc caggacctgc tctccttcat caatccacag ctgctcagca 1080
tcctgatcag gtttatctcc aaccccatgg ccccctcctg gtggggcttc ctggtggctg 1140
ggctgatgtt cctgtgctcc atgatgcagt cgctgatctt acaacactat taccactaca 1200
tctttgtgac tggggtgaag tttcgtactg ggatcatggg tgtcatctac aggaaggctc 1260
tggttatcac caactcagtc aaacgtgcgt ccactgtggg ggaaattgtc aacctcatgt 1320
cagtggatgc ccagcgcttc atggaccttg cccccttcct caatctgctg tggtcagcac 1380
ccctgcagat catcctggcg atctacttcc tctggcagaa cctaggtccc tctgtcctgg 1440
ctggagtcgc tttcatggtc ttgctgattc cactcaacgg agctgtggcc gtgaagatgc 1500
gcgccttcca ggtaaagcaa atgaaattga aggactcgcg catcaagctg atgagtgaga 1560
tcctgaacgg catcaaggtg ctgaagctgt acgcctggga gcccagcttc ctgaagcagg 1620
tggagggcat caggcagggt gagctccagc tgctgcgcac ggcggcctac ctccacacca 1680
caaccacctt cacctggatg tgcagcccct tcctggtgag gcttggcaca gggctgggtc 1740
cctgcctcca gggctctggg tgcccaggca tggccagggc tcattggact ctaccctgac 1800
accacctcca cgctgctcag gtgaccctga tcaccctctg ggtgtacgtg tacgtggacc 1860
caaacaatgt gctggacgcc g 1881
<210> 2
<211> 898
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
tgcccccgat gaggaccaag ggcacctgga ggacagctgg accgcgttgg aaggtgcaga 60
ggataaggag gcactgctga ttgaagacac actcagcaac cacacggatc tgacagacaa 120
tgatccagtc acctatgtgg tccagaagca gtttatgaga cagctgagtg ccctgtcctc 180
agatggggag ggacagggtc ggcctgtacc ccggaggcac ctgggtccat cagagaaggt 240
gcaggtgaca gaggcgaagg cagatggggc actgacccag gaggagaaag cagccattgg 300
cactgtggag ctcagtgtgt tctgggatta tgccaaggcc gtggggctct gtaccacgct 360
ggccatctgt ctcctgtatg tgggtcaaag tgcggctgcc attggagcca atgtgtggct 420
cagtgcctgg acaaatgatg ccatggcaga cagtagacag aacaacactt ccctgaggct 480
gggcgtctat gctgctttag gaattctgca agggttcttg gtgatgctgg cagccatggc 540
catggcagcg ggtggcatcc aggctgcccg tgtgttgcac caggcactgc tgcacaacaa 600
gatacgctcg ccacagtcct tctttgacac cacaccatca ggccgcatcc tgaactgctt 660
ctccaaggac atctatgtcg ttgatgagcg cttctatgca gccacatcac ggcaactgaa 720
gcggctggaa tcagtcagcc gctcacctat ctactcccac ttttcggaga cagtgactgg 780
tgccagtgtc atccgggcct acaaccgcag ccgggatttt gagatcatca gtgatactaa 840
ggtggatgcc aaccagagaa gctgctaccc ctacatcatc tccaaccggt ggctgagc 898
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 3
taggtccctc tgtcctggct 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 4
gggacccagc cctgtgccaa 20
<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 5
acacttccct gaggctgggc gtcta 25
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 6
ctgcatagaa gcgctcatca acgac 25
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 7
acggatttgg tcgtattggg 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
cgctcctgga agatggtgat 20

Claims (1)

1.ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用，所述ABCC3-013 mRNA的核苷酸序列对应的DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
CN201610489596.5A 2016-06-29 2016-06-29 ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用及其试剂盒 Active CN107541562B (zh)

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Homo sapiens mRNA for multidrug resistance protein 3 (ABCC3)，GenBank: Y17151.2;Konig,J.;《NCBI Genbank》;20081007;序列表 *
Increased clopidogrel response is associated with ABCC3 expression: A pilot study;André Ducati Luchessi;《Clinica Chimica Acta》;20120218;第413卷(第3-4期);417-421 *

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