CN107475274B - 海带中编码磷酸葡萄糖变位酶的基因、及其蛋白和用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体属于基因工程领域，更具体涉及一种海带中编码磷酸葡萄糖变位酶的基因、及其蛋白和用途。所述的编码基因命名为SjaPGM2基因，SjaPGM2基因的序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的蛋白质命名为SjaPGM2蛋白，序列如SEQ ID NO：2所示，是一种PGM。本发明提供的SjaPGM2蛋白同时兼具相对现有技术更高的催化活力、相对更加优异的金属离子稳定性和热稳定性、更加温和的最适反应温度、以及更高的催化效率，更加适用于改善植物营养品质，本发明为PGM的基因工程应用提供的非常合适的基因和蛋白质资源。

Description

海带中编码磷酸葡萄糖变位酶的基因、及其蛋白和用途

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体属于基因工程领域，更具体涉及一种海带中编码磷酸葡萄糖变位酶的基因、及其蛋白和用途。

背景技术

磷酸葡萄糖变位酶基因(PGM)是普遍存在于生物体内的一种基因，泛存在于植物、动物和微生物中，它所编码的磷酸葡萄糖变位酶(Phosphoglucomutase，PGM)的主要生物学效应是参与催化葡萄糖-1-磷酸(G-1-P)和葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)之间的可逆转化，该作用与生物体的糖代谢密切相关。这一反应机制包括了两个磷酸基的转移反应：首先磷酸基团从磷酸葡萄糖变位酶活性部位中的丝氨酸转移到底物，生成1，6-二磷酸葡萄糖(Glucose-1,6-P)中间体。然后再由中间体将磷酸基团转移回磷酸葡萄糖变位酶，同时完成产物的合成和酶再生过程。在PGM反应中具有专一性的一个步骤是PGM在其催化中心的丝氨酸残基上的自动磷酸化作用，这在有机体糖原的合成以及利用过程中起到中枢的作用。

研究表明，质体型PGM是参加植株淀粉合成的关键酶之一,因此缺乏质体型PGM活性的拟南芥和烟草的突变株则无法积累淀粉；胞质型PGM则与蔗糖的合成与转化有关,在植物的蔗糖分解途径中占有关键位置。由此可见,PGM所参与的反应是连接叶绿体内的卡尔文循环及淀粉代谢和细胞溶质内的蔗糖代谢过程的重要组成部分。

由于PGM在植物的淀粉合成及蔗糖分解途径中的中枢作用，开发或利用PGM基因的生物工程方面的研究具有重要的理论和实际意义。在实际应用中，利用转基因手段使PGM基因在植物中进行正义或反义表达可使植物叶片中的淀粉含量增加或可溶性糖含量增加，这在改善植物营养品质方面具有重要的应用价值。

因此，开发提供数量更多或性质丰富的PGM基因及其蛋白资源可以为PGM的实际应用提供坚实的基础。

目前已经进行性能研究的PGM主要存在以下缺陷：(1)大部分PGM的催化活力相对很低，根本无法用于工业生产，例如文献1和2中公开的PGM；(2)某些催化活力尚可的PGM对金属离子的耐受性相对较差，例如文献3中公开的PGM；(3)某些活力尚可的PGM的最适反应温度过于极端，例如文献2、4和5中公开的PGM，其最适反应温度甚至高达70℃和90℃，而生物体的常规温度在30-37℃左右，过高的温度下植物体将会发生死亡，这就使得这些PGM其在植物体的常规温度下活力明显降低，因此根本不可能在植物体中正常发挥催化活力。

综上所述，尽管目前对PGM资源有一定的开发，然而其数量与性质远远不能满足实际需求。在利用PGM基因工程改善植物营养品质方面的应用中，需要一种兼具高催化活力、高耐受性、以及适用于植物体的温和的最适反应温度的PGM。遗憾的是，目前并没有报道这样PGM资源。

本发明在对海带中的功能基因进行研究时，意外地发现海带中的一种PGM基因不仅催化活力相对更高，并且具有优异的金属离子稳定性和热稳定性，更重要的是，其最适反应温度更加温和，非常适用于植物营养品质改善的PGM基因工程。

文献1：Plant Physiol.2000Apr；122(4):1193-9.The plastidicphosphoglucomutase from Arabidopsis.A reversible enzyme reaction with animportant role in metabolic control.Periappuram C,Steinhauer L,Barton DL,Taylor DC,Chatson B,Zou J.

文献2：J Biochem.2005Aug；138(2):159-66.Characterization of athermostable enzyme with phosphomannomutase/phosphoglucomutase activitiesfrom the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus horikoshii OT3.Akutsu J,ZhangZ,Tsujimura M,Sasaki M,Yohda M,Kawarabayasi Y.

文献3：Biochem J.1997 326(Pt 1):197-203.Studies on recombinantAcetobacter xylinum alpha-phosphoglucomutase.Kvam C,Olsvik ES,McKinley-McKeeJ,Saether O.

文献4：J Appl Microbiol.2010Jan；108(1):39-46.doi:10.1111/j.1365-2672.2009.04396.x.A highly active phosphoglucomutase from Clostridiumthermocellum:cloning,purification,characterization and enhancedthermostability.Wang Y,Zhang YH.

文献5：J Bacteriol.2004Sep；186(18):6070-6.Among multiplephosphomannomutase gene orthologues,only one gene encodes a protein withphosphoglucomutase and phosphomannomutase activities in Thermococcuskodakaraensis.Rashid N,Kanai T,Atomi H,Imanaka T.

发明内容

本发明意料不到地发现海带中的一种磷酸葡萄糖变位酶(Phosphoglucomutase，PGM)同时兼具相对更高的催化活力、相对更加优异的金属离子稳定性和热稳定性、更加温和的最适反应温度、以及更高的催化效率，为PGM的基因工程应用提供的非常合适基因和蛋白质资源。

针对现有技术中存在的不足和缺陷，本发明提供了一种海带(Sacchrinajaponica)中编码磷酸葡萄糖变位酶的基因；在本发明中，所述的编码磷酸葡萄糖变位酶的基因被命名为SjaPGM2基因，所述的SjaPGM2基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列。

另一个方面，本发明提供了一种由上述SjaPGM2基因编码的蛋白质；在本发明中，该蛋白质被命名为SjaPGM2蛋白；所述的SjaPGM2蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示的序列；所述的SjaPGM2蛋白为磷酸葡萄糖变位酶，催化葡萄糖-1-磷酸(G-1-P)和葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)之间的可逆转化。

再一个方面，本发明还提供了含有上述SjaPGM2基因的载体或基因工程细胞。

所述的载体可以为原核细胞表达载体或真核细胞表达载体。

所述的原核表达载体选自大肠杆菌表达载体、枯草芽孢杆菌表达载体、假单胞菌表达载体或乳酸菌表达载体等。

所述的大肠杆菌表达载体可以是pET表达载体。

所述的pET表达载体包括但不限于：pET-22载体、pET-28载体、pET-30载体、pET-32载体、pET-34载体、pET-40载体或pET-42载体等。

所述的枯草芽孢杆菌表达载体包括但不限于：pHT01载体、pHT43载体、pHP13载体、pHY300PLK载体、pMK3载体、pMK4载体、pMA5载体、pHT304载体、pBest502载体或pMUTIN4载体等。

所述的假单胞菌表达载体包括但不限于：pUCP19载体、pUCPSK载体或pYMB03载体等。

所述的乳酸菌表达载体包括但不限于：pMG36e载体、pORI280载体或pVE5523载体等。

所述的真核细胞表达载体选自酵母表达载体、植物细胞表达载体、昆虫细胞表达载体或哺乳动物细胞表达载体等。

所述的酵母表达载体包括但不限于：pPICZA载体、pPICZaA载体、pPIC9k载体、pPIC9k-His载体、pGAPZA载体、pGAPZaA载体、pGAPZalphaA载体、pAO815载体、pPIC9载体、pPIC6A载体、pPIC6aA载体、pAUR123载体、pRS303TEF载体、pRS304载体、pRS305载体、pRS306载体、pY13TEF载体、pY14TEF载体、pY15TEF载体或pY16TEF载体等。

所述的植物表达载体包括但不限于：pCAMBIA3301载体、pCAMBIA3300载体或pEF-GFP载体等。

所述的基因工程细胞包括但不限于：大肠杆菌细胞、枯草芽孢杆菌细胞、假单胞菌细胞、乳酸菌细胞、毕赤酵母细胞、酿酒酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞等。

再一个方面，本发明还提供了上述SjaPGM2基因在改善植物营养品质方面的用途，所述的用途指利用转基因手段使SjaPGM2基因在植物中进行正义或反义表达，进而可使植物叶片中的淀粉含量增加或可溶性糖含量增加。

本发明还提供了上述SjaPGM2蛋白在改善植物营养品质方面的用途，所述的用途指使SjaPGM2蛋白在植物细胞中表达或使SjaPGM2蛋白直接进入植物细胞，进而可使植物叶片中的淀粉含量增加或可溶性糖含量增加。

和现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：本发明提供的SjaPGM2基因编码的SjaPGM2蛋白的(1)比活力明显高于现有技术，可高达670～891U/mg；(2)催化效率明显高于现有技术，可达到0.197～0.214；(3)金属离子稳定性明显高于现有技术，高度耐受Mg²⁺、Mn²⁺和Ca²⁺等金属离子；(4)最适反应温度相较于现有技术更加温和，其最适反应温度为30℃，接近正常活植物体的常规温度，非常适用于植物性能改善的PGM基因工程；(5)在最适反应温度下的热稳定性明显高于现有技术，在其最适反应温度30℃保温超过72小时，酶活力没有明显变化，该特征进一步保障了其应用性。

附图说明

图1为实施例2中的聚丙烯酰胺凝胶电泳图，其中泳道1为纯化后的SjaPGM2蛋白。

图2为实施例4中的最适反应pH曲线图。

图3为实施例5中的最适反应温度曲线图。

图4为实施例6中的酶活测定结果图。

具体实施方式

以下实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。对所公开的实施例的下述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例中，而是可以应用于符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的更宽的范围。虽然在本发明的实施或测试中可以使用与本发明中所述相似或等价的任何方法和材料，本文在此处列举优选的方法和材料。

除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。

实施例1海带中SjaPGM2基因的克隆表达和分离纯化

1、从海带胚孢子基因数据库中，得到1个PGM基因，命名为SjaPGM2基因，所述的SjaPGM2基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列。对SjaPGM2基因进行全序列合成(委托上海旭冠生物科技发展有限公司进行合成)，同时在其5'端引入EcoRI酶切位点，3'端引入NotI酶切位点及相应保护碱基，得到SjaPGM2基因序列。

2、将步骤1合成得到的SjaPGM2基因连接至pET32a载体(购自Novagen公司)的EcoRI和NotI位点之间，获得pET32a-SjaPGM2D重组载体；将获得的pET32a-SjaPGM2重组载体转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞(购自Takara公司)中，并涂布于含有100μg/mL氨苄青霉素的LB固体培养平板上，37℃培养过夜；将阳性克隆接种至含有100μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃培养过夜后，以0.1％的接种量，接种至新鲜的含有100μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃培养至菌液OD600为0.4时，加入终浓度为0.5mMIPTG，在25℃、160rpm的诱导条件培养12小时，诱导目的蛋白的表达；诱导结束后将菌液于4℃、12000rpm离心5min，弃上清，收集菌体，用20mL的PBS缓冲液(PBS缓冲液配方为：pH7.4，磷酸二氢钾0.27g、磷酸氢二钠1.42g和氯化钠8g溶解于20mL超纯水中，其中含有100μl浓度为1mM的苯甲基磺酰氟)进行重悬厚，超声破碎；超声破碎结束后，将破碎液于12000rpm条件下冷冻离心10min；将上清液用Ni亲和柱(购自GE公司)进行蛋白纯化，得到重组蛋白，该重组蛋白为SjaPGM2基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，命名为SjaPGM2蛋白，功能为磷酸葡萄糖变位酶。

实施例2重组蛋白的鉴定

对实施例1中的SjaPGM2蛋白以及纯花前的菌液进行SDS聚丙烯酰胺胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳图如图1所示，SjaPGM2蛋白的分子量约为85KD，符合预期大小。

实施例3磷酸葡萄糖变位酶的功能验证和酶活参数测定

酶活测定方法：反应体系体积为200μl，按照表1中的反应体系依次加入除了实施例1获得的重组蛋白SjaPGM2蛋白之外的试剂，混合均匀后于30℃下金属浴2min；孵育后置于紫外分光光度计下测量其340nm处吸光值；随后加入底物葡萄糖-6-磷酸起始反应，且开始计时，在340nm处处分别测定反应0min、6min和12min吸光值的变化；根据吸光值变化所对应的NADP还原成NADPH的量来计算酶活性。

表1 SjaPGM2蛋白的酶活性检测反应体系

测定结果：与空白对照(即在相同的反应体系中不加重组蛋白SjaPGM2蛋白进行反应)相比，NADPH的生成量明显增加，证明实施例2获得的SjaPGM2蛋白具有磷酸葡萄糖变位酶活性。

采用酶活测定方法测定SjaPGM2蛋白的比活力和催化效率，本发明的SjaPGM2蛋白以及目前公开的磷酸葡萄糖变位酶的比活力情况见表2。

表2不同来源的PGM蛋白的酶活参数比较

注：“-”为无相应数据

其中文献6为：Protein Expr Purif.2000Oct；20(1):124-7.Functionalrecombinant rabbit muscle phosphoglucomutase from Escherichia coli.Chae YK,Markley JL.

表2中本发明提供的SjaPGM2蛋白的比活力和催化效率是在使用不同载体的情况下测定的，其中比活力891U/mg和催化效率0.214s^-1μM^-1为本发明实施例1获得的重组SjaPGM2蛋白(也就是使用pET32a载体进行克隆)的实验数据；而670U/mg和催化效率0.197s^-1μM^-1为使用pET28a载体克隆本发明SjaPGM2基因获得的重组SjaPGM2蛋白的实验数据。

根据表2可明显看出，本发明提供的SjaPGM2蛋白的比活力和现有技术相当，甚至高于现有技术；而本发明的SjaPGM2蛋白的催化效率明显高于现有技术。

实施例4最适反应pH值的测定

根据实施例3中的酶活测定方法，分别在不同pH值下(pH 6.0、pH 7.0、pH 8.0、pH9.0、pH 10.0)测定本发明实施例1获得的SjaPGM2蛋白的活性，绘制最适反应pH曲线，最适反应pH曲线如图2所示，根据图2显示：SjaPGM2蛋白的最适反应pH为8。

实施例5最适反应温度和热稳定性的测定

1、根据实施例3中的酶活测定方法，分别在不同温度下(10℃、20℃、30℃、37℃、40℃、50℃、60℃)测定本发明实施例1获得的SjaPGM2蛋白的活性，绘制最适反应温度曲线，最适反应温度曲线如图3所示，根据图3显示：SjaPGM2蛋白的最适反应温度为30℃。本发明提供的SjaPGM2蛋白和目前公开的磷酸葡萄糖变位酶的最适反应温度对比情况见表3。

表3不同来源的PGM蛋白的最适反应温度比较

注：“-”代表数据信息缺失。

2、将本发明实施例获得的SjaPGM2蛋白于其最适反应温度下，也就是30℃下分别孵育12、24、48、72和84小时后，测定其残余活力，结果如表4所示。

表4 SjaPGM2蛋白孵育后的残余活力

由表3可知，目前已经公开的PGM的最适反应温度均较高，有的甚至高达70℃或90℃，一方面在这一温度下会造成植物体的严重伤害或死亡，也就是在植物体的成长生存温度下，这些最适反应温度高的PGM酶活力并不高，不更很好的发挥催化作用；另一方面，虽然这些蛋白在其最适反应温度下的稳定性并不高，例如70℃或90℃，仅仅在该温度下孵育3～6小时活力明显下降(残余活力从100％下降到62～47％)。这两方面使得这个高最适反应温度的PGM并不适合用于实际的基因工程改造，比如用于蔬菜营养品质改善的PGM基因工程。

由表4可知，而本发明提供的SjaPGM2蛋白的最适反应温度为30℃，十分接近植物体的正常生存温度，也就是说其在植物体中能够最大程度地发挥催化活力；而且其在最适反应温度下的稳定性非常高，在30℃孵育24小时酶活没有变化，在孵育72小时后酶活几乎没有变化，在孵育84小时后，酶活仅有非常轻微的变化，也就是说其能够在最适反应温度下长时间维持高催化活力。因此本发明提供的SjaPGM2蛋白非常适用于植物营养品质改善的PGM基因工程。

实施例6金属离子稳定性的测定

在测定体系中分别加入不同种类的金属离子，反应条件设定为温度30℃，pH8.0，将本发明实施例1获得的SjaPGM2蛋白参照照本发明实施例3的酶活测定方法进行酶活力测定，酶活测定结果如图4所示。

从图4以看出，Ca²⁺存在时酶活性最高，Ca²⁺是最适宜金属离子；此外，在Mg²⁺、Mn²⁺存在时也能够维持相对较高(高于75％)的酶活性。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 中国海洋大学

<120> 海带中编码磷酸葡萄糖变位酶的基因、及其蛋白和用途

<130> 2017/08/09

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1710

<212> DNA

<213> Sacchrina japonica

<400> 1

atgaaaccgg gcacgtccgg cctgcgaaag aaggtggcgg tatggagcga ggggtgctat 60

ctgaacaact ttgtgcaggg agtgctggac acgttccctc aggaggagct gaagggaagc 120

accatcatcg tctccggaga cgggaggttc tacaacgccc ccgccatcca gacgatcatc 180

aagatggccg cggcgaacgg tgtggggagg gtgtgggtcg gaaagggcgg cctgatgtcg 240

acgccagcgg tgtcggcggt gctccgggag agggagggcg gcgtggctta ccttggtctc 300

gtgttgaccg cgagccacaa ccccggtggc cctgatgagg acttcggcat caagttcaac 360

acggcgagcg gcagtccggc caacgagggg gtcaccgacg ccgtctacgc ccgcacgctg 420

gagcttaaat cgtaccggac ggtagagggt accgctgatg tcaacctaga cgtggtggga 480

aagacgaagg tcgctagcat ggatgtcgag atcatcgacc ctgttgagga atacgtggcc 540

ctgctcaaga cggtcttcga cttccccagc ctaaggtcgc tcctggctcg cccggacttc 600

agcttcgtgt tcgacggaat gcacggcgtc gccggggcct acgccagtcg cgtgtttgtg 660

gacgagctgg gcgcggcgga ggagtctctg ctcaggtgcg accccaggga ggacttcggg 720

ggaagccatc cggacccgaa cctcgcctac gccccggacc tcgtgcgccg gatgggcctt 780

gacggcagtg gccaggcgct ctcgctggct gatggcggcg gccaccccga gcccccgtcg 840

ttgggagccg cggccgacgg cgacgccgac cgcaacatga tcctggggaa gcgtttcttc 900

gttacgccta gcgactccct cgcggtcatc gcggccaacg cggcggcggt gccgtacttc 960

aagcgcgccg gcgggcttgg gggcgcggcc cggagcatgc ccacgagcgg ggcgctggac 1020

agggtgtgct cggcgaaggg agtgcccatg ttcgagacgc ccaccggctg gaagttcttt 1080

ggcaacctca tggacgcaaa agtgctgggc cacgagcgct cgtacgcgcc gttcctctgc 1140

ggggaggaga gcttcgggac ggggtccgac cacgtcaggg agaaggacgg gctgtgggcg 1200

gtgctggcgt ggatgtcggt catcgccgag cggaaccagg gcgagggctt gcctctggtc 1260

ggggtgcagg aaattgtgga ggggcactgg cgggagtacg gcaggaactt ctactccagg 1320

tatgactacg agggcgtcgc ttcggagggt gcggaggcga tgatgaacca ccttcggtcc 1380

ggccccgcgc aggccggaga cgacatgggg tcgggcttcg agctcgaagg catagacgac 1440

ttcgagtaca cggacccgat cgacgggagc gtgtcgaaga atcaggggat tcgcgtcatg 1500

ttcacggacg gatcgagggt ggtcttccgc ctttccggca ccggttccgt gggcgctacc 1560

gtccgcatgt acatcgagaa gtacgagcca gacgtagcca agcaggggtt gatgacggcg 1620

gatgtgctcc gacccttggt cgccatcggc ctggagatgt cgaagctgga atcgtttacc 1680

gggagggcat cccccacggt catcacgtag 1710

<210> 2

<211> 569

<212> PRT

<213> Sacchrina japonica

<400> 2

Met Lys Pro Gly Thr Ser Gly Leu Arg Lys Lys Val Ala Val Trp Ser

1 5 10 15

Glu Gly Cys Tyr Leu Asn Asn Phe Val Gln Gly Val Leu Asp Thr Phe

20 25 30

Pro Gln Glu Glu Leu Lys Gly Ser Thr Ile Ile Val Ser Gly Asp Gly

35 40 45

Arg Phe Tyr Asn Ala Pro Ala Ile Gln Thr Ile Ile Lys Met Ala Ala

50 55 60

Ala Asn Gly Val Gly Arg Val Trp Val Gly Lys Gly Gly Leu Met Ser

65 70 75 80

Thr Pro Ala Val Ser Ala Val Leu Arg Glu Arg Glu Gly Gly Val Ala

85 90 95

Tyr Leu Gly Leu Val Leu Thr Ala Ser His Asn Pro Gly Gly Pro Asp

100 105 110

Glu Asp Phe Gly Ile Lys Phe Asn Thr Ala Ser Gly Ser Pro Ala Asn

115 120 125

Glu Gly Val Thr Asp Ala Val Tyr Ala Arg Thr Leu Glu Leu Lys Ser

130 135 140

Tyr Arg Thr Val Glu Gly Thr Ala Asp Val Asn Leu Asp Val Val Gly

145 150 155 160

Lys Thr Lys Val Ala Ser Met Asp Val Glu Ile Ile Asp Pro Val Glu

165 170 175

Glu Tyr Val Ala Leu Leu Lys Thr Val Phe Asp Phe Pro Ser Leu Arg

180 185 190

Ser Leu Leu Ala Arg Pro Asp Phe Ser Phe Val Phe Asp Gly Met His

195 200 205

Gly Val Ala Gly Ala Tyr Ala Ser Arg Val Phe Val Asp Glu Leu Gly

210 215 220

Ala Ala Glu Glu Ser Leu Leu Arg Cys Asp Pro Arg Glu Asp Phe Gly

225 230 235 240

Gly Ser His Pro Asp Pro Asn Leu Ala Tyr Ala Pro Asp Leu Val Arg

245 250 255

Arg Met Gly Leu Asp Gly Ser Gly Gln Ala Leu Ser Leu Ala Asp Gly

260 265 270

Gly Gly His Pro Glu Pro Pro Ser Leu Gly Ala Ala Ala Asp Gly Asp

275 280 285

Ala Asp Arg Asn Met Ile Leu Gly Lys Arg Phe Phe Val Thr Pro Ser

290 295 300

Asp Ser Leu Ala Val Ile Ala Ala Asn Ala Ala Ala Val Pro Tyr Phe

305 310 315 320

Lys Arg Ala Gly Gly Leu Gly Gly Ala Ala Arg Ser Met Pro Thr Ser

325 330 335

Gly Ala Leu Asp Arg Val Cys Ser Ala Lys Gly Val Pro Met Phe Glu

340 345 350

Thr Pro Thr Gly Trp Lys Phe Phe Gly Asn Leu Met Asp Ala Lys Val

355 360 365

Leu Gly His Glu Arg Ser Tyr Ala Pro Phe Leu Cys Gly Glu Glu Ser

370 375 380

Phe Gly Thr Gly Ser Asp His Val Arg Glu Lys Asp Gly Leu Trp Ala

385 390 395 400

Val Leu Ala Trp Met Ser Val Ile Ala Glu Arg Asn Gln Gly Glu Gly

405 410 415

Leu Pro Leu Val Gly Val Gln Glu Ile Val Glu Gly His Trp Arg Glu

420 425 430

Tyr Gly Arg Asn Phe Tyr Ser Arg Tyr Asp Tyr Glu Gly Val Ala Ser

435 440 445

Glu Gly Ala Glu Ala Met Met Asn His Leu Arg Ser Gly Pro Ala Gln

450 455 460

Ala Gly Asp Asp Met Gly Ser Gly Phe Glu Leu Glu Gly Ile Asp Asp

465 470 475 480

Phe Glu Tyr Thr Asp Pro Ile Asp Gly Ser Val Ser Lys Asn Gln Gly

485 490 495

Ile Arg Val Met Phe Thr Asp Gly Ser Arg Val Val Phe Arg Leu Ser

500 505 510

Gly Thr Gly Ser Val Gly Ala Thr Val Arg Met Tyr Ile Glu Lys Tyr

515 520 525

Glu Pro Asp Val Ala Lys Gln Gly Leu Met Thr Ala Asp Val Leu Arg

530 535 540

Pro Leu Val Ala Ile Gly Leu Glu Met Ser Lys Leu Glu Ser Phe Thr

545 550 555 560

Gly Arg Ala Ser Pro Thr Val Ile Thr

565

Claims (8)

1.海带中编码磷酸葡萄糖变位酶的基因，其特征在于：所述的基因命名为SjaPGM2基因，所述的SjaPGM2基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列。

2.一种由权利要求1所述的SjaPGM2基因编码的蛋白质，其特征在于：所述的蛋白质命名为SjaPGM2蛋白，所述的蛋白质的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示的序列。

3.如权利要求2所述的蛋白质，其特征在于：所述的蛋白质的功能为磷酸葡萄糖变位酶。

4.含有权利要求1所述SjaPGM2基因的载体。

5.如权利要求4所述的载体，其特征在于：所述的载体为原核细胞表达载体或真核细胞表达载体。

6.如权利要求5所述的载体，其特征在于：所述的原核细胞表达载体为大肠杆菌表达载体。

7.如权利要求5所述的载体，其特征在于：所述的真核细胞表达载体为植物细胞表达载体。

8.含有权利要求1所述的SjaPGM2基因的基因工程细胞。

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