CN107474080A - 一种辅酶i的浓缩方法 - Google Patents

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李映峤
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    • C07H1/06—Separation; Purification
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Abstract

本发明属于涉及辅酶I提取领域，提出一种辅酶I的浓缩方法，包括如下步骤：S1、样品溶液配制：将辅酶I溶解于含有乙酸和甲醇的溶剂中，混匀，得辅酶I粗品溶液；S2、纳滤浓缩：将辅酶I粗品溶液转入纳滤浓缩设备的受液桶中，开启纳滤浓缩设备，将辅酶I粗品溶液输入纳滤膜管中，不断循环浓缩的浓缩液。S3、超低温浓缩：将浓缩液经超低温浓缩得最终浓缩液。本发明大大提高了辅酶I粗品溶液的浓缩限度，将其浓缩到冻干前所要求的一定体积；解决了辅酶I生产对温度的苛刻要求，使其物质成分保持稳定，不发生降解或氧化；同时，本发明大大降低了辅酶I原料中的有机溶剂残留。

Description

一种辅酶I的浓缩方法
技术领域
本发明涉及辅酶I提取领域，特别是一种辅酶I的浓缩方法。
背景技术
辅酶I(NAD)，化学名为烟酰胺腺嘌呤二核甘酸或二磷酸烟苷，在哺乳动物体内存在氧化型(NAD+)和还原型(NADH)两种状态，是人体氧化还原反应中重要的辅酶，参与细胞物质代谢、能量合成、细胞DNA修复等多种生理活动，对机体免疫能力有重要作用。在健康状态下，人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸浓度稳定，维持各项细胞正常功能。体内的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸浓度决定了细胞衰老的过程和程度，浓度下降会加速细胞衰老的过程。
辅酶I受热不稳定，对温度非常敏感，储存温度为2-8℃，因此生产中对温度要求比较苛刻，并且在辅酶I冷冻干燥之前，要求辅酶I粗品溶液浓缩到一定的体积，因此必须寻找一种合适的浓缩方法。
目前，生物制品常用的浓缩方式主要有膜浓缩、蒸发浓缩。其中膜浓缩是现在应用比较广泛的，但其缺点是浓缩限度只有20-30％，达不到生物制品对于浓缩体积的要求。传统的蒸发浓缩只适用于一些耐热的酶和小分子生化药的制备；不适用于对温度敏感的生物制品，容易造成活性成分的破坏。因此需要提供一种新的浓缩方法。
发明内容
本发明旨在提供一种辅酶I的浓缩方法；本发明大大提高了辅酶I粗品溶液的浓缩限度，将其浓缩到冻干前所要求的一定体积；解决了辅酶I生产对温度的苛刻要求，使其物质成分保持稳定，不发生降解或氧化；同时，本发明大大降低了辅酶I原料中的有机溶剂残留。
其具体方案为：一种辅酶I的浓缩方法，包括如下步骤：
S1、样品溶液配制：将辅酶I溶解于含有乙酸和甲醇的溶剂中，混匀，得辅酶I粗品溶液；
S2、纳滤浓缩：将辅酶I粗品溶液转入纳滤浓缩设备的受液桶中，开启纳滤浓缩设备，将辅酶I粗品溶液输入纳滤膜管中，不断循环浓缩的浓缩液。
S3、超低温浓缩：将浓缩液经超低温浓缩得最终浓缩液。
在上述的辅酶I的浓缩方法中，S1中，乙酸的质量百分比浓度为0.5-5％，甲醇的质量百分比浓度为1.5-8％，辅酶I与溶剂比例为(0.5-1)g：(60-80)ml。
在上述的辅酶I的浓缩方法中，S2中，纳滤膜为聚醚砜膜，纳滤膜的截留分子量为200-300D。
在上述的辅酶I的浓缩方法中，纳滤浓缩时，工作压力为6-8bar。
在上述的辅酶I的浓缩方法中，浓缩液与辅酶I粗品溶液的体积比为1:4-7。
在上述的辅酶I的浓缩方法中，S3中，超低温浓缩所用设备为旋转蒸发仪。
在上述的辅酶I的浓缩方法中，S3中，浓缩时真空度为5-10mbar、温度为25-35℃、转速为30-50rpm。
在上述的辅酶I的浓缩方法中，S3中，最终浓缩液的体积为浓缩液的1/20。
本发明的有益效果在于：
本发明选用纳滤浓缩对辅酶I粗品溶液进行浓缩后，再进行超低温浓缩，整个浓缩过程均在常温下进行，不会发生性质变化，不会破坏物质生物活性，能够保持物质原有的性质。本发明大大提高了辅酶I浓缩限度，且工艺简单，操作简便，节省能耗。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
为了更加清楚的对本发明进行说明，列举如下实施例来说明本发明的优越性。
实施例1
辅酶I的一种新型浓缩技术，包括如下步骤：
S1、样品溶液配制：将辅酶I溶解于含有0.5％乙酸和1.5％甲醇的溶剂中，得辅酶I粗品溶液A。其中，辅酶I与溶剂体积比为0.5：60。
S2、纳滤浓缩：将溶液A转入纳滤浓缩设备的受液桶中，开启纳滤浓缩设备，工作压力为6bar，将溶液A输入截留分子量为200D的纳滤膜管中，不断循环浓缩得浓缩液B。其中，所得浓缩液B的体积为溶液A的1/7。
S3、超低温浓缩：将浓缩液B用旋转蒸发仪进行减压浓缩，参数设定：真空度5mbar、温度25℃、转速30rpm，得最终浓缩液C。
实施例2
辅酶I的一种新型浓缩技术，包括如下步骤：
S1、样品溶液配制：将辅酶I溶解于含有1.0％乙酸和2.5％甲醇的溶剂中，得辅酶I粗品溶液A。其中，辅酶I与溶剂体积比为0.7：75。
S2、纳滤浓缩：将溶液A转入纳滤浓缩设备的受液桶中，开启纳滤浓缩设备，设定工作压力为6.5bar，将溶液A输入截留分子量为200D的纳滤膜管中，不断循环浓缩得浓缩液B。其中，所得浓缩液B的体积为溶液A的1/6。
S3、超低温浓缩：将浓缩液B用旋转蒸发仪进行减压浓缩，参数设定：真空度6mbar、温度27℃、转速36rpm，得最终浓缩液C。
实施例3
辅酶I的一种新型浓缩技术，包括如下步骤：
S1、样品溶液配制：将辅酶I溶解于含有2.1％乙酸和3.5％甲醇的溶剂中，得辅酶I粗品溶液A。其中，辅酶I与溶剂体积比为0.65：79。
S2、纳滤浓缩：将溶液A转入纳滤浓缩设备的受液桶中，开启纳滤浓缩设备，设定工作压力为7.5bar，将溶液A输入截留分子量为300D的纳滤膜管中，不断循环浓缩得浓缩液B。其中，所得浓缩液B的体积为溶液A的1/5。
S3、超低温浓缩：将浓缩液B用旋转蒸发仪进行减压浓缩，参数设定：真空度7mbar、温度29℃、转速40rpm，得最终浓缩液C。
实施例4
辅酶I的一种新型浓缩技术，包括如下步骤：
S1、样品溶液配制：将辅酶I溶解于含有4.0％乙酸和5.7％甲醇的溶剂中，得辅酶I粗品溶液A。其中，辅酶I与溶剂体积比为0.9：65。
S2、纳滤浓缩：将溶液A转入纳滤浓缩设备的受液桶中，开启纳滤浓缩设备，设定工作压力为7.0bar，将溶液A输入截留分子量为300D的纳滤膜管中，不断循环浓缩得浓缩液B。其中，所得浓缩液B的体积为溶液A的1/4。
S3、超低温浓缩：将浓缩液B用旋转蒸发仪进行减压浓缩，参数设定：真空度8mbar、温度32℃、转速45rpm，得最终浓缩液C。
实施例5
辅酶I的一种新型浓缩技术，包括如下步骤：
S1、样品溶液配制：将辅酶I溶解于含有5.0％乙酸和8.0％甲醇的溶剂中，得辅酶I粗品溶液A。其中，辅酶I与溶剂体积比为1.0：80。
S2、纳滤浓缩：将溶液A转入纳滤浓缩设备的受液桶中，开启纳滤浓缩设备，设定工作压力为8.0bar，将溶液A输入截留分子量为300D的纳滤膜管中，不断循环浓缩得浓缩液B。其中，所得浓缩液B的体积为溶液A的1/4.5。
S3、超低温浓缩：将浓缩液B用旋转蒸发仪进行减压浓缩，参数设定：真空度10mbar、温度35℃、转速50rpm，得最终浓缩液C。
试验例1
测定实施例1-5浓缩得到的辅酶I浓缩液中所含辅酶I的纯度及残留溶剂，并与单独纳滤浓缩或者单独蒸发浓缩的结果作比较，结果如下表：
由上表可知，本发明的纯度高，基本没有溶剂残留。
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种辅酶I的浓缩方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、样品溶液配制：将辅酶I溶解于含有乙酸和甲醇的溶剂中，混匀，得辅酶I粗品溶液；
S2、纳滤浓缩：将辅酶I粗品溶液转入纳滤浓缩设备的受液桶中，开启纳滤浓缩设备，将辅酶I粗品溶液输入纳滤膜管中，不断循环浓缩的浓缩液。
S3、超低温浓缩：将浓缩液经超低温浓缩得最终浓缩液。
2.根据权利要求1所述的辅酶I的浓缩方法，其特征在于，S1中，乙酸的质量百分比浓度为0.5-5％，甲醇的质量百分比浓度为1.5-8％，辅酶I与溶剂比例为(0.5-1)g：(60-80)ml。
3.根据权利要求1所述的辅酶I的浓缩方法，其特征在于，S2中，纳滤膜为聚醚砜膜，纳滤膜的截留分子量为200-300D。
4.根据权利要求3所述的辅酶I的浓缩方法，其特征在于，纳滤浓缩时，工作压力为6-8bar。
5.根据权利要求4所述的辅酶I的浓缩方法，其特征在于，浓缩液与辅酶I粗品溶液的体积比为1:4-7。
6.根据权利要求1所述的辅酶I的浓缩方法，其特征在于，S3中，超低温浓缩所用设备为旋转蒸发仪。
7.根据权利要求6所述的辅酶I的浓缩方法，其特征在于，S3中，浓缩时真空度为5-10mbar、温度为25-35℃、转速为30-50rpm。
8.根据权利要求7所述的辅酶I的浓缩方法，其特征在于，S3中，最终浓缩液的体积为浓缩液的1/20。
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