CN107473999A - 微生物的破壁方法及类胡萝卜素产品 - Google Patents
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Abstract
一种微生物的破壁方法及类胡萝卜素产品,涉及类胡萝卜素的生产技术领域。微生物的破壁方法是将微生物干菌体分散于离子液体中,得到破壁产物,将破壁产物进行固液分离,得到破壁菌体和破壁液,使用萃取剂对破壁菌体进行提取,过滤除去菌渣,得到萃取液,进行真空浓缩、洗涤干燥纯化,得到类胡萝卜素产品,收率大于90%,该破壁方法的成本低、条件温和、能耗低,破壁效果好。该制备工艺制得的类胡萝卜素产品收率高。
Description
技术领域
本发明涉及类胡萝卜素的生产技术领域,且特别涉及一种微生物的破壁方法及类胡萝卜素产品。
背景技术
类胡萝卜素是一类具有抗氧化、维生素A前体等生理功能的多烯类化合物,可以作为药品、食品添加剂等。美国等国家已经将其用于维生素A缺乏症、癌症及心血管病的防治,并被FAO和WHO认定为A类营养色素。目前生产类胡萝卜素的方法主要有三种:化学合成法、提取法和微生物发酵法,其中最具发展前景的是微生物发酵法。微生物发酵法是先利用微生物发酵产生菌体,然后将菌体内的有效成分被提取出来。对于微生物而言,其厚壁孢子坚韧的细胞壁影响类胡萝卜素的提取,细胞壁不但阻碍提取溶剂向细胞内渗透,也影响细胞内类胡萝卜素向细胞外扩散。因此,通常先对微生物细胞进行破壁,再提取,微生物破壁程度成为影响类胡萝卜素提取率的关键因素。
国内外对微生物常用的破壁方法有两类,一类是酶法破壁法,一类是物理化学破壁法(如产生破壁、高温高压破壁、酸热法破壁和碱热法破壁等),这些破壁方法都是以最大限度的破碎微生物的细胞壁为目的。但是物理化学破壁法存在条件不易控制,能耗高,对设备存在腐蚀的缺陷;酶法破壁法存在成本高的缺陷。例如:中国专利CN201310116039.5公开了一种雨生红球藻中提取虾青素的方法,该方法采用酸性水溶液对雨生红球藻进行破壁,通过对酸的选择,结合适宜的破壁温度及时间,使破壁方法步骤简单且破壁率高达95%以上,但该方法中细胞的破壁温度较高,导致虾青素不稳定而有效成分损失,且提取过程所需试剂种类较多,耗用量大,且操作步骤繁琐,直接影响提取成本。中国专利CN101381337A采用喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥获得干藻体,而后气流粉碎破壁,所用干燥方式损失大、能耗大。中国专利CN102012363A采用高压均质机在80~90MPa下进行破壁,破壁率为90%,而后采用超临界CO2萃取,萃取温度为60~80℃,萃取时间为2~4h,该法破壁压力高、能耗大;虾青素提取率仅为70%左右。
因此,需要一种成本低、条件温和、能耗低的微生物破壁方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种微生物的破壁方法,此破壁方法成本低、条件温和、能耗低,破壁效果好。
本发明的另一目的在于提供一种类胡萝卜素产品,其收率高。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提出一种微生物的破壁方法,其包括以下步骤:
将微生物干菌体分散于离子液体中,得到破壁产物,离子液体是由有机阳离子与有机或无机阴离子组成,阳离子包含1,3-二烷基取代的咪唑离子、N-烷基取代的吡啶离子、季铵离子和季膦离子中的至少一种,阴离子包含Cl-、Br-、I-、CH3COO-中的至少一种;
将破壁产物进行固液分离,得到破壁菌体和破壁液;
使用萃取剂对破壁菌体进行提取,过滤除去菌渣,得到萃取液,将萃取液进行真空浓缩,再进行纯化,得到类胡萝卜素产品,收率大于90%。
进一步地,在本发明较佳实施例中,向破壁液中加入0.5~2倍体积的溶剂,溶剂选自于水、乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯中的至少一种,将溶解的细胞壁沉淀出来,过滤除去细胞壁,再经过减压蒸馏除去溶剂,以回收离子液体,回收收率大于98%。
进一步地,在本发明较佳实施例中,萃取剂选自于乙酸乙酯、丙酮、乙醇中的至少一种。
进一步地,在本发明较佳实施例中,微生物干菌体和离子液体的用量比为100g:0.8~1.5L。
进一步地,在本发明较佳实施例中,分散的方法是:将微生物干菌体加入30~50℃的离子液体,在30~50℃的温度下快速机械搅拌30~60min。
进一步地,在本发明较佳实施例中,微生物干菌体的制备方法是:
将微生物培养液进行分离,获得湿菌体;
将湿菌体进行干燥,获得水分低于5%的微生物干菌体。
进一步地,在本发明较佳实施例中,将萃取液进行真空浓缩,得类胡萝卜素粗提物,将类胡萝卜素粗提物纯化的方法是:使用洗涤液对类胡萝卜素粗提物进行充分洗涤纯化,洗涤液的用量为3~5倍体积的类胡萝卜素粗提物,分2~4次洗涤;
将洗涤后的类胡萝卜素粗提物于50~70℃真空干燥1~4h,得到类胡萝卜素产品。
进一步地,在本发明较佳实施例中,洗涤液是质量浓度为40%~90%的乙醇水溶液。
一种类胡萝卜素产品,其采用上述的微生物的破壁方法制得。
进一步地,在本发明较佳实施例中,微生物为雨生红球藻,对应的类胡萝卜素产品为虾青素油酯;微生物为酿酒酵母,对应的类胡萝卜素产品为番茄红素晶体,微生物为三包布拉霉菌,对应的类胡萝卜素产品为β胡萝卜素晶体。
本发明实施例的微生物的破壁方法及类胡萝卜素产品的有益效果是:本发明实施例的微生物的破壁方法是将微生物干菌体分散于离子液体中,得到破壁产物,将破壁产物进行固液分离,得到破壁菌体和破壁液,使用萃取剂对破壁菌体进行提取,过滤除去菌渣,得到萃取液,将萃取液进行真空浓缩,再进行纯化,得到类胡萝卜素粗提物,收率大于90%,该破壁方法的成本低、条件温和、能耗低,破壁效果好。本发明实施例制得的类胡萝卜素产品收率高。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的微生物的破壁方法、类胡萝卜素粗提物及微生物源的类胡萝卜素的制备工艺、类胡萝卜素产品进行具体说明。
本发明实施例提供一种微生物的破壁方法,微生物可以为雨生红球藻或酿酒酵母或三包布拉霉菌,该破壁方法包括以下步骤:
S1破壁:将微生物干菌体分散于离子液体中,得到破壁产物,微生物干菌体和离子液体的用量比为100g:0.8~1.5L,离子液体是由有机阳离子与有机或无机阴离子组成,阳离子包含1,3-二烷基取代的咪唑离子、N-烷基取代的吡啶离子、季铵离子和季膦离子中的至少一种,优选为1,3-二烷基取代的咪唑离子,阴离子包含Cl-、Br-、I-、CH3COO-中的至少一种,优选为Cl-。离子液体又称室温熔融盐,在室温或近室温条件下呈液态,其具有良溶性、强极性、不挥发、不氧化等优良性能,被认为是最具发展潜力的绿色溶剂之一。
本实施例中,分散的方法是:将微生物干菌体加入30~50℃的离子液体,在30~50℃的温度下机械搅拌30~60min。
本实施例中,微生物干菌体的制备方法是:
将微生物培养液进行分离,一般是通过沉淀、过滤或离心,去除发酵液,获得湿菌体。
将湿菌体进行干燥,干燥方式可以是喷雾、鼓风或冷冻,优选为喷雾干燥,获得水分低于5%,优选低于3%的微生物干菌体。
S2固液分离:将破壁产物进行固液分离,固液分离的方法一般是沉淀、离心或过滤,得到破壁菌体和破壁液。
S3提取纯化:使用萃取剂对破壁菌体进行提取,过滤除去菌渣,得到萃取液,将萃取液进行真空浓缩,再进行纯化,得到类胡萝卜素产品,收率大于90%。另外,还可以向破壁液中加入0.5~2倍体积的溶剂,溶剂选自于水、乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯中的至少一种,将溶解的细胞壁沉淀出来,过滤除去细胞壁,再经过减压蒸馏除去溶剂,以回收离子液体,回收收率大于98%。所用的离子液体可以通过加入乙醇等溶剂除去溶解的细胞壁,再经蒸馏除去溶剂后回收重复利用,因此整个过程中不会产生废水,对环境友好。
本实施例中,萃取剂一般选自于乙酸乙酯、丙酮、乙醇中的至少一种,优选为乙酸乙酯,微生物干菌体和萃取剂的用量比为100g:1.5~4L;提取方法是:将破壁菌体加入50~70℃的萃取剂,机械搅拌10~15min。
本实施例中,将萃取液进行真空浓缩,得类胡萝卜素粗提物,当微生物为雨生红球藻,采用上述破壁方法处理后得到的类胡萝卜素粗提物为虾青素浸膏粗提物;当微生物为酿酒酵母,采用上述破壁方法处理后得到的类胡萝卜素粗提物为番茄红素粗提物;当微生物为三包布拉霉菌,采用上述破壁方法处理后得到的类胡萝卜素粗提物为β胡萝卜素粗提物。将类胡萝卜素粗提物纯化的方法是:
使用洗涤液对上述的类胡萝卜素粗提物进行充分洗涤纯化,洗涤液选用质量浓度为40%~90%,优选为60~70%的乙醇水溶液,洗涤液的用量为3~5倍体积的类胡萝卜素粗提物,分2~4,优选3次洗涤。
将洗涤后的类胡萝卜素粗提物于50~70℃,优选60℃下真空干燥1~4h,优选2h,得到类胡萝卜素产品。
本发明实施例是利用离子液体对纤维素的溶解性,对微生物的细胞壁进行溶解,达到破壁目的。本发明实施例的破壁方法的效果好,收率达到90%以上;相比于传统的物理化学破壁法,本破壁方法条件温和、能耗低;而且破壁所用的离子液体可以回收重复利用,不会产生废水,对环境友好。
本发明实施例还提供一种类胡萝卜素产品,其采用上述的微生物的破壁方法制得。微生物为雨生红球藻,对应的类胡萝卜素产品为虾青素油酯,虾青素有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、预防心脑血管疾病的作用;微生物为酿酒酵母,对应的类胡萝卜素产品为番茄红素晶体,番茄红素具有抗氧化性、对细胞生长代谢起调控作用、调节胆固醇的代谢、保健作用,预防和抑制肿瘤的作用;微生物为三包布拉霉菌,对应的类胡萝卜素产品为β胡萝卜素晶体,β胡萝卜素具有解毒作用,是维护人体健康不可缺少的营养素,在抗癌、预防心血管疾病、白内障及抗氧化上有显著的功能,并进而防止老化和衰老引起的多种退化性疾病。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种虾青素油,其是以雨生红球藻为微生物,并按照以下破壁方法得到:
将雨生红球藻干菌体分散于离子液体中,离子液体是由1-丁基-3-甲基咪唑阳离子和Cl-组成,具体是将100.00g的虾青素含量为3.25%、含水量为3.1%的雨生红球藻干菌体加入1L、435℃的离子液体,在35℃的温度下机械搅拌60min,得到破壁产物。
将破壁产物在3000rmp转速下离心10min分离得到破壁菌体和破壁液。
使用乙酸乙酯对破壁菌体进行提取,具体是将破壁菌体加入2L、60℃的乙酸乙酯,机械搅拌10min,过滤除去菌渣,得到萃取液,将萃取液在40℃下进行真空浓缩得到粘稠的暗红色虾青素浸膏粗提物。使用3倍体积、质量浓度为50%的乙醇水溶液对虾青素浸膏粗提物分3次进行充分洗涤纯化,得到30.12g暗红色虾青素油,虾青素含量为90.14%,虾青素提取率为93.97%。另外,向破壁液中加入0.5L无水乙醇,将溶解的细胞壁沉淀出来,过滤除去细胞壁,再在50℃下减压蒸馏除去乙醇,以回收离子液体用于下一次使用,回收率为98.5%。
实施例2
本实施例提供一种番茄红素晶体,其是以酿酒酵母为微生物,并按照以下破壁方法得到:
将酿酒酵母干菌体分散于离子液体中,离子液体是由1-烯丙基-3-甲基咪唑阳离子和Cl-组成,具体是将100.00g的番茄红素含量为4.23%,含水量为4.5%的酿酒酵母干菌体加入0.8L、45℃的离子液体,在40℃的温度下机械搅拌45min,得到破壁产物。
将破壁产物通过过滤分离得到破壁菌体和破壁液。
使用丙酮对破壁菌体进行提取,具体是将破壁菌体加入3L、60℃的丙酮,机械搅拌10min,过滤除去菌渣,得到萃取液,将萃取液进行真空浓缩后过滤并使用5倍体积、质量浓度为90%的乙醇水溶液对番茄红素粗提物分3次进行充分洗涤纯化,70℃真空干燥1h,得到4.76g番茄红素晶体,含量为81.23%,提取收率为91.41%。另外,向破壁液中加入1.2L异丙醇,将溶解的细胞壁沉淀出来,过滤除去细胞壁,再经过50℃减压蒸馏除去异丙醇,以回收离子液体用于下一次使用,回收率为98.2%。
实施例3
本实施例提供一种β胡萝卜素晶体,其是以三包布拉霉为微生物,并按照以下破壁方法得到:
将三包布拉霉干菌体分散于离子液体中,离子液体是由1-丁基-3-甲基咪唑阳离子和Br-组成,具体是将100.00g的β胡萝卜素含量为4.89%,含水量为2.8%的三包布拉霉干菌体加入0.8L、50℃的离子液体,在50℃的温度下机械搅拌30min,得到破壁产物。
将破壁产物通过过滤分离得到破壁菌体和破壁液。
使用乙酸乙酯对破壁菌体进行提取,具体是将破壁菌体加入4L、70℃的乙酸乙酯,机械搅拌10min,过滤除去菌渣,得到萃取液,将萃取液进行真空浓缩,过滤并使用5倍体积、质量浓度为70%的乙醇水溶液对番茄红素粗提物分3次进行充分洗涤纯化,70℃真空干燥1h,得到4.54gβ胡萝卜素晶体,含量为97%,提取收率为90.06%。另外,向破壁液中加入1.6L丙酮,将溶解的细胞壁沉淀出来,过滤除去细胞壁,再经过50℃减压蒸馏除去丙酮,以回收离子液体用于下一次使用,回收率为99.2%。
综上所述,本发明实施例的微生物的破壁方法的成本低、条件温和、能耗低,破壁效果好;制得的类胡萝卜素产品收率高。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围,而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种微生物的破壁方法,其特征在于,其包括以下步骤:
将微生物干菌体分散于离子液体中,得到破壁产物,所述离子液体是由有机阳离子与有机或无机阴离子组成,所述阳离子包含1,3-二烷基取代的咪唑离子、N-烷基取代的吡啶离子、季铵离子和季膦离子中的至少一种,所述阴离子包含Cl-、Br-、I-、CH3COO-中的至少一种;
将所述破壁产物进行固液分离,得到破壁菌体和破壁液;
使用萃取剂对所述破壁菌体进行提取,过滤除去菌渣,得到萃取液,将所述萃取液进行真空浓缩,再进行纯化,得到类胡萝卜素产品,收率大于90%。
2.根据权利要求1所述的微生物的破壁方法,其特征在于,向所述破壁液中加入0.5~2倍体积的溶剂,所述溶剂选自于水、乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯中的至少一种,将溶解的细胞壁沉淀出来,过滤除去细胞壁,再经过减压蒸馏除去溶剂,以回收离子液体,回收收率大于98%。
3.根据权利要求1所述的微生物的破壁方法,其特征在于,所述萃取剂选自于乙酸乙酯、丙酮、乙醇中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的微生物的破壁方法,其特征在于,所述微生物干菌体和所述离子液体的用量比为100g:0.8~1.5L。
5.根据权利要求1所述的微生物的破壁方法,其特征在于,所述分散的方法是:将微生物干菌体加入30~50℃的离子液体,在30~50℃的温度下快速机械搅拌30~60min。
6.根据权利要求1所述的微生物的破壁方法,其特征在于,所述微生物干菌体的制备方法是:
将微生物培养液进行分离,获得湿菌体;
将湿菌体进行干燥,获得水分低于5%的微生物干菌体。
7.根据权利要求1所述的微生物的破壁方法,其特征在于,将所述萃取液进行真空浓缩,得类胡萝卜素粗提物,将所述类胡萝卜素粗提物纯化的方法是:使用洗涤液对所述类胡萝卜素粗提物进行充分洗涤纯化,洗涤液的用量为3~5倍体积的类胡萝卜素粗提物,分2~4次洗涤;
将洗涤后的类胡萝卜素粗提物于50~70℃真空干燥1~4h,得到类胡萝卜素产品。
8.根据权利要求7所述的微生物的破壁方法,其特征在于,所述洗涤液是质量浓度为40%~90%的乙醇水溶液。
9.一种类胡萝卜素产品,其特征在于,其采用如权利要求1至8中任一项所述的微生物的破壁方法制得。
10.根据权利要求9所述的类胡萝卜素产品,其特征在于,所述微生物为雨生红球藻,对应的类胡萝卜素产品为虾青素油酯;所述微生物为酿酒酵母,对应的类胡萝卜素产品为番茄红素晶体,所述微生物为三包布拉霉菌,对应的类胡萝卜素产品为β胡萝卜素晶体。
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