CN107446823B - 一种适合于南方气候条件的室外培养球等鞭金藻的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种适合于南方气候条件的室外培养球等鞭金藻的方法，该方法采用室外白色塑料桶封口充气培养，培养器具包括白色塑料桶、遮盖白色塑料桶桶口的透明塑料盖、气管、气石和泵气装置；方法简单易行、对培养条件要求低、培养成本低且适合于中国南方气候条件的室外大规模培育，满足中国南方海洋经济贝类在繁育季节对重要开口饵料球等鞭金藻的需求。

Description

一种适合于南方气候条件的室外培养球等鞭金藻的方法
技术领域：
本发明涉及水产养殖领域，具体涉及一种适合于南方气候条件的室外培养球等鞭金藻的方法。
背景技术：
球等鞭金藻(Isochrysis galbana)属于金藻门，金藻纲，等鞭金藻目，等鞭金藻科，等鞭金藻属，是一种分布广泛的海洋浮游单细胞藻类，其细胞裸露，形状多变，但大多数呈椭圆形。光学显微镜下，侧面观为长椭圆形或长方形，细胞长4.4-7.1微米，宽2.7-4.4微米，厚2.4-3微米。能活泼运动，运动时作缓慢而稳定的转动或旋涡状运动，且常在一个方向，当运动缓慢时可以看见鞭毛的颤动。主要进行无性二分裂繁殖。由于其个体小，繁殖快，营养丰富，运动速度适中，又无含纤维素的细胞壁，易被贝类幼虫捕捉、吞食和消化吸收，而且不坏水，因而是海洋经济动物人工育苗的理想饵料，广泛应用于牡蛎、扇贝、泥蚶等名贵水产品的开口饵料。
关于球等鞭金藻的培养方法，杨海波等于2015年公开了一种等鞭金藻的培养方法(申请号：201510282183.5)，通过向培养体系中添加终浓度为412-1372mmol/L的甘油，培养至生长平衡期时藻细胞蛋白质的含量和产量最高分别达到细胞干重的32％和0.56g干重/L，分别比对照组提高61.9％和86.7％。但操作比较复杂且成本较高；王培磊等于2016年公开了一种利用LED节能灯和摇床培养球等鞭金藻的方法(申请号：201610156360.X)，采用更科学、合理的营养盐配方，培养的球等鞭金藻细胞内高不饱和脂肪酸EPA、DHA含量高，用于照明的电能消耗降低42％。但对培养条件要求高，只适合于少量室内培养。以上培养方法均不能满足海洋经济贝类在繁育季节对重要开口饵料球等鞭金藻的规模化需求。另外中国南方的气候条件比较特殊，一般有高温、多雨、蚊虫多等特点，至今为止还未建立起一种适合于中国南方气候条件的球等鞭金藻大规模培育方法，成为制约中国南方以金藻为主要开口饵料的海洋经济贝类大规模繁育和养殖的关键因素之一。
发明内容：
本发明的目的是针对现有球等鞭金藻在中国南方大规模培育所存在的问题，提供一种适合于南方气候条件的室外培养球等鞭金藻的方法，采用室外大白桶封口充气培养，方法简单易行、对培养条件要求低、培养成本低且适合于中国南方气候条件的室外大规模培育。
本发明是通过以下技术方案予以实现的：
一种适合于南方气候条件的室外培养球等鞭金藻的方法，其特征在于，包括以下步骤
培养器具：包括白色塑料桶、遮盖白色塑料桶桶口的透明塑料盖、气管、气石和泵气装置；
a、接种前处理：
白色塑料桶和透明塑料盖先用淡水冲洗干净，然后用活性氯含量≥7.5wt％的次氯酸钠溶液进行洗刷和消毒：即按照一升海水中加入0.3-0.4毫升的次氯酸钠溶液的比例在每个塑料桶中加入相应量的次氯酸钠溶液和海水，海水盐度为25‰，用透明塑料盖盖住白色塑料桶过夜浸泡；同时将气管和气石煮沸消毒；然后将气石放于白色塑料桶内，气石与气管一端相连，气管的另外一端与桶外的泵气装置相连，然后充气，加入硫代硫酸钠还原海水中的活性氯，然后再加入营养盐溶液充气使混合均匀后再停止充气，使得白色塑料桶中消毒海水中各种营养盐成分的终浓度分别为：硝酸钠为40-60mg/L，磷酸二氢钾为4-6mg/L，柠檬酸铁为0.4-0.6mg/L，维生素B1为0.2-0.4mg/L，维生素B12为0.2-0.4mg/L；
b、球等鞭金藻的接种：营养盐加完后，取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的球等鞭金藻(耐高温3011品系)进行接种，接种密度8-10万个细胞/毫升，用透明塑料盖封住桶口进行培养，期间间隔充气，充气量以球等鞭金藻细胞浮起不下沉为准，充气时需打开透明塑料盖，培养期间注意补充营养盐。
一般培养至第9天，密度增加至500-600万个细胞/毫升即可停止培养。
此时培养好的球等鞭金藻培养液可以用消毒后的塑料管从白色塑料桶中抽出高浓度的藻液，拉到苗种池进行投喂；用完的塑料桶洗刷干净，加入次氯酸钠溶液过夜消毒后进入下一轮培养。
所述的培养期间注意补充营养盐是培养至第6天，停止充气，从桶口补充营养盐，各成分恢复初始浓度，然后继续培养。
所述的加入硫代硫酸钠还原海水中的活性氯的效果是用余氯检测试剂盒检测。
所述的泵气装置为气泵或空气压缩机。
特别地，本发明还包括培养期间的日常管理和护理：球等鞭金藻的室外培养期间，每天定时查看白色塑料桶中的充气情况、封口情况和藻类生长情况。
可以用消毒后的玻璃吸管吸取少量藻液进行镜检，确认金藻的生长情况。由于南方气候条件经常会出现大雨、台风、高温等情况，另外户外的蚊虫也比较多。
在日常护理中，如果碰到大雨或者大风天气，除了要照常封口外，另外要用透明玻璃瓦对桶口进行遮盖，防止风雨天气造成藻液的污染或死亡；如果碰到高温天气，则需要在塑料桶的上方遮盖一层遮阳网，防止温度变化太大造成藻液的死亡；而用透明塑料盖可以有效防止蚊虫等对藻液造成的污染。
本发明的有益效果如下：
1)本发明用透明塑料盖封闭了桶口，防止了污染。
2)本发明先加满有次氯酸钠的海水，第二天加入硫代硫酸钠再还原，保证了彻底消毒。
3)营养盐溶液的配方简单易行、后期护理的方法简单、培育工具简单，非常适合于低成本的大规模金藻培育。
4)本发明适合于中国南方特殊气候和环境条件的室外大规模培育。
总之，本发明采用室外大白桶封口充气培养，方法简单易行、对培养条件要求低、培养成本低且适合于中国南方气候条件的室外大规模培育，满足中国南方海洋经济贝类在繁育季节对重要开口饵料球等鞭金藻的需求。
本发明的球等鞭金藻(耐高温3011品系)已经文献公开，公开于文献：梁英、冯力霞、田传远.高温胁迫对球等鞭金藻3011和8701叶绿素荧光特性的影响，水产学报，2009年.33(1)37-44.文献中的对球等鞭金藻3011就是本发明的球等鞭金藻(耐高温3011品系)。对球等鞭金藻3011本申请人也持有，保证自本申请的申请日起20年内可以向公众提供。
具体实施方式：
以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
柠檬酸铁营养盐溶液：因柠檬酸铁较难溶解，可加入淡水后在火炉上加热至90℃左右，并不断搅拌至全部溶解即可。
所用化学药品纯度均需为化学纯级别。
实施例1：
培养器具：所述的培养器具包括白色塑料桶、遮盖白色塑料桶桶口的透明塑料盖、气管、气石和气泵，气管和气石煮沸消毒。
2017年6月上旬在中国科学院南海海洋研究所湛江东南试验站，利用8个容积为200升的白色塑料桶进行球等鞭金藻(耐高温3011品系)培养。将白色塑料桶和封桶口的透明塑料盖用淡水冲洗干净并用高浓度次氯酸钠溶液消毒，即每桶加入70毫升的次氯酸钠溶液(活性氯含量≥7.5wt％)并加满盐度为25‰的海水，封口过夜浸泡。第二天上午排出30L的消毒海水，将气石放于白色塑料桶内的消毒海水中，气石与气管一端相连，气管的另外一端与桶外的气泵相连，然后充气。加入5克溶解好的硫代硫酸钠还原，充气10分钟后用余氯检测试剂盒检测还原效果确认还原完全，加入硝酸钠、磷酸二氢钾、柠檬酸铁营养盐溶液各100毫升，维生素B1和B12注射液各800微升。全部营养盐加完后要充气15分钟，使营养盐混合均匀后即可接种。白色塑料桶中消毒海水中各种营养盐成分的终浓度分别为：硝酸钠为50mg/L，磷酸二氢钾为5mg/L，柠檬酸铁为0.5mg/L，维生素B1为0.2mg/L，维生素B12为0.2mg/L。取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的球等鞭金藻(耐高温3011品系)进行接种，每桶接入20升球等鞭金藻藻液，接种密度8万个细胞/毫升，然后用透明塑料盖和尼龙绳封住桶口进行培养，间隔充气，充气量以球等鞭金藻细胞浮起不下沉为准。球等鞭金藻的室外白色塑料桶培育期间，要每天定时查看塑料桶中的充气情况、封口情况和藻类生长情况。接种后第二天开始下大雨并且连续下了5天，采用透明玻璃瓦对桶口进行遮盖，每隔3天用消毒后的玻璃吸管吸取少量藻液进行镜检，发现塑料桶中球等鞭金藻生长情况良好无污染，培养至第6天，停止充气，从桶口补充营养盐，使各成分恢复初始浓度，然后继续培养，培养至第9天，密度增加至500-600万个细胞/毫升，停止培养。此时培养好的球等鞭金藻培养液可以用消毒后的塑料管从白色塑料桶中抽出高浓度的藻液，拉到苗种池进行投喂；用完的塑料桶洗刷干净，加入次氯酸钠漂白液过夜消毒后进入下一轮培养。
实施例2：
培养器具：所述的培养器具包括白色塑料桶、遮盖白色塑料桶桶口的透明塑料盖、气管、气石和泵气装置，气管和气石煮沸消毒。
2017年6月下旬在中国科学院南海海洋研究所湛江东南试验站，利用12个容积为100升的白色塑料桶进行球等鞭金藻(耐高温3011品系)培养。将白色塑料桶和封桶口的透明塑料盖用淡水冲洗干净并用高浓度次氯酸钠溶液消毒，每桶加入30毫升的次氯酸钠溶液(活性氯含量≥7.5wt％)并加满盐度为25‰的海水，封口过夜浸泡。第二天上午排出20L的消毒海水，将气石放于白色塑料桶内的消毒海水中，气石与气管一端相连，气管的另外一端与桶外的气泵相连，然后充气。加入溶解好的硫代硫酸钠还原，充气10分钟后用余氯检测试剂盒检测还原效果直至活性氯被完全还原，加入硝酸钠、磷酸二氢钾、柠檬酸铁营养盐溶液各100毫升，维生素B1和B12注射液各800微升。全部营养盐加完后要充气15分钟，使营养盐混合均匀后即可接种。白色塑料桶中消毒海水中各种营养盐成分的终浓度分别为：硝酸钠为40mg/L，磷酸二氢钾为4mg/L，柠檬酸铁为0.4mg/L，维生素B1为0.2mg/L，维生素B12为0.2mg/L。取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的球等鞭金藻(耐高温3011品系)进行接种，每桶接入10升藻液，接种密度10万个细胞/毫升，然后用透明塑料盖和尼龙绳封住桶口进行培养，间隔充气，充气量以球等鞭金藻细胞浮起不下沉为准。球等鞭金藻的室外白色塑料桶培育期间，要每天定时查看塑料桶中的充气情况、封口情况和藻类生长情况。接种后连续几天高温天气，采用高密度遮阳网在桶口上方进行遮盖，每隔3天用消毒后的玻璃吸管吸取少量藻液进行镜检，发现塑料桶中球等鞭金藻生长情况良好无污染，培养至第6天，停止充气，从桶口补充营养盐，使各成分恢复初始浓度，然后继续培养，培养至第9天，密度增加至500-600万个细胞/毫升时停止培养。此时培养好的球等鞭金藻培养液可以用消毒后的塑料管从白色塑料桶中抽出高浓度的藻液，拉到苗种池进行投喂；用完的塑料桶洗刷干净，加入次氯酸钠漂白液过夜消毒后进入下一轮培养。
实施例3：
培养器具：所述的培养器具包括白色塑料桶、遮盖白色塑料桶桶口的透明塑料盖、气管、气石和泵气装置，气管和气石煮沸消毒。
2017年6月下旬在中国科学院南海海洋研究所湛江东南试验站，利用12个容积为100升的白色塑料桶进行球等鞭金藻(耐高温3011品系)培养。将白色塑料桶和封桶口的透明塑料盖用淡水冲洗干净并用高浓度次氯酸钠溶液消毒，每桶加入40毫升的次氯酸钠溶液(活性氯含量≥7.5wt％)并加满盐度为25‰的海水，封口过夜浸泡。第二天上午排出20L的消毒海水，将气石放于白色塑料桶内的消毒海水中，气石与气管一端相连，气管的另外一端与桶外的气泵相连，然后充气。加入溶解好的硫代硫酸钠还原，充气10分钟后用余氯检测试剂盒检测还原效果直至活性氯被还原完全，加入硝酸钠、磷酸二氢钾、柠檬酸铁营养盐溶液各100毫升，维生素B1和B12注射液各800微升。全部营养盐加完后要充气15分钟，使营养盐混合均匀后即可接种。白色塑料桶中消毒海水中各种营养盐成分的终浓度分别为：硝酸钠为60mg/L，磷酸二氢钾为6mg/L，柠檬酸铁为0.6mg/L，维生素B1为0.4mg/L，维生素B12为0.4mg/L。取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的球等鞭金藻(耐高温3011品系)进行接种，每桶接入10升藻液，接种密度10万个细胞/毫升，然后用透明塑料盖和尼龙绳封住桶口进行培养，间隔充气，充气量以球等鞭金藻细胞浮起不下沉为准。球等鞭金藻的室外白色塑料桶培育期间，要每天定时查看塑料桶中的充气情况、封口情况和藻类生长情况。接种后连续几天高温天气，采用高密度遮阳网在桶口上方进行遮盖，每隔3天用消毒后的玻璃吸管吸取少量藻液进行镜检，发现塑料桶中球等鞭金藻生长情况良好无污染，培养至第6天，停止充气，从桶口补充营养盐，使各成分恢复初始浓度，然后继续培养，培养至第9天，密度增加至500-600万个细胞/毫升时停止培养。此时培养好的球等鞭金藻培养液可以用消毒后的塑料管从白色塑料桶中抽出高浓度的藻液，拉到苗种池进行投喂；用完的塑料桶洗刷干净，加入次氯酸钠漂白液过夜消毒后进入下一轮培养。

Claims (1)

1.一种适合于广东气候条件的室外培养球等鞭金藻的方法，其特征在于，所述的球等鞭金藻是球等鞭金藻耐高温3011品系，包括以下步骤：
培养器具：白色塑料桶、遮盖白色塑料桶桶口的透明塑料盖、气管、气石和泵气装置；所述的泵气装置为气泵或空气压缩机；
a、接种前处理：
白色塑料桶和透明塑料盖先用淡水冲洗干净，然后按照一升海水中加入0.3-0.4毫升的次氯酸钠溶液的比例在每个塑料桶中加入相应量的次氯酸钠溶液和海水，用透明塑料盖盖住白色塑料桶过夜浸泡；同时将气管和气石煮沸消毒；然后将气石放于白色塑料桶内，气石与气管一端相连，气管的另外一端与桶外的泵气装置相连，然后充气，加入硫代硫酸钠还原海水中的活性氯，然后再加入营养盐溶液充气使混合均匀后再停止充气，使得白色塑料桶中消毒海水中各种营养盐成分的终浓度分别为：硝酸钠为40-60mg/L，磷酸二氢钾为4-6mg/L，柠檬酸铁为0.4-0.6mg/L，维生素B1为0.2-0.4mg/L，维生素B12为0.2-0.4mg/L；所述的海水盐度为25‰；
b、球等鞭金藻的接种：营养盐加完后，取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的球等鞭金藻进行接种，接种密度8-10万个细胞/毫升，用透明塑料盖封住桶口进行培养，期间间隔充气，充气量以球等鞭金藻细胞浮起不下沉为准，充气时需打开透明塑料盖，培养期间注意补充营养盐；所述的注意补充营养盐是培养至第6天，停止充气，往白色塑料桶中补充营养盐，其各成分恢复初始浓度，然后继续培养；
还包括培养期间的日常管理和护理，球等鞭金藻的室外培养期间，每天定时查看白色塑料桶中的充气情况、封口情况和藻类生长情况；所述的查看藻类生长情况是用消毒后的玻璃吸管吸取少量藻液进行镜检，确认球等鞭金藻的生长情况；在日常护理中，如果碰到大雨或者大风天气，除了要照常封口外，另外要用透明玻璃瓦对桶口进行遮盖；如果碰到高温天气，则需要在塑料桶的上方遮盖遮阳网。
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球等鞭金藻3011絮凝效应的研究;柯爱英等;《安徽农业科学》;20101231;第38卷(第29期);第16271页左栏最后一段 *

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