CN107436355A - 通过蛋白标志物检测分泌型垂体腺瘤放疗敏感性的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了检测蛋白标志物的表达水平的试剂在制备用于检测分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性的产品中的用途，以及用于检测分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性的试剂盒和蛋白标志物组合。本发明可以通过检测蛋白标志物的表达水平检测出治疗对象对分泌型垂体腺瘤放射治疗的敏感性、分析是否存在放射治疗抵抗，从而为预测患者接受放射治疗后的效果以及指导临床诊疗提供有效依据。

Description

通过蛋白标志物检测分泌型垂体腺瘤放疗敏感性的试剂盒
技术领域
本发明涉及垂体腺瘤蛋白标志物领域，具体地，涉及蛋白标志物在分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性检测中的用途和通过蛋白标志物检测分泌型垂体腺瘤放疗敏感性的试剂盒。
背景技术
垂体腺瘤是神经系统常见肿瘤，约占颅内肿瘤的10％-25％。垂体腺瘤可分为功能型腺瘤和无功能型腺瘤。功能型垂体瘤又叫做分泌型垂体瘤，分为泌乳素腺瘤，生长激素腺瘤，促皮质激素腺瘤，促甲状腺激素腺瘤等，此类腺瘤表现为过度分泌垂体激素，例如生长激素、泌乳素等。部分功能型垂体瘤具有侵袭的生物学特性，手术后易残留和复发。无功能型垂体腺瘤是垂体瘤中最常见的一种脑肿瘤，虽然其为良性肿瘤，但是它的危害很大且极易复发，能够损害患者视力造成突发性失明和影响内分泌功能导致患者不孕不育，严重者也可导致生命危险。临床上的治疗手段主要以手术切除为主，但由于无功能型垂体腺瘤在发展初期缺乏临床症状，直至生长为大腺瘤才被发现，这时垂体瘤已经侵袭或围绕周围组织生长，手术难以完全切除并且极易复发。所以无论是对于功能型垂体腺瘤还是对于无功能型垂体腺瘤手术治疗后的辅助治疗都很有必要。辅助治疗包括放射治疗(例如：伽马刀)及化学治疗，但从目前的病例研究发现，部分患者在伽马刀治疗后并没有取得良好的效果，垂体腺瘤没有缩小，或者是在一段时间后反而增大了，这些症状都预示着在利用伽马刀进行放疗时，产生了放疗抵抗。精准医疗的精髓就是针对不同情况的患者制定个性化的治疗方案，在功能型和无功能型垂体腺瘤中，有放疗敏感的病例，也有放疗抵抗的病例。
目前，对于鉴别和预测垂体腺瘤放射治疗敏感的分子标志物，国内外文献并没有报道，所以临床治疗上，需要此类标志物的发现以更好的服务于垂体腺瘤的放射治疗。
发明内容
本研究应用免疫组织化学方法检测了放射治疗结束后分泌型垂体腺瘤组织中MDM2和RB的表达，惊奇地发现在具有放射治疗敏感的患者中，MDM2和RB表达水平明显高于正常垂体组织。本发明首次发现MDM2和RB可以作为预测分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性的蛋白标志物，为分泌型垂体腺瘤的治疗提供新的参考依据和治疗靶点，提供具有针对性的治疗方案。
本发明提供了检测蛋白标志物的表达水平的试剂在制备用于检测分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性的产品中的用途，其中，所述蛋白标志物为MDM2和/或RB。
优选的，所述蛋白标志物选自表达水平上调指征分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感的蛋白标志物MDM2和RB。
进一步地，检测蛋白标志物的表达水平是通过以下步骤进行的：
1)获得分泌型垂体腺瘤组织样品和正常对照组织样品；以及
2)确定样品中蛋白标志物的表达水平。
其中，步骤2)的方法选自PCR方法、Western印迹、North-Western印迹、免疫吸附测定法、抗体微阵列、组织微阵列、免疫沉淀、原位杂交和其他免疫组织化学技术、放射免疫测定法、免疫放射测定法和免疫酶测定法。
另一方面，本发明提供一种用于检测分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性的试剂盒，其中，所述试剂盒包括检测蛋白标志物的表达水平的试剂，所述蛋白标志物为MDM2和/或RB。
在本发明的一种特别优选的实施方式中，在所述试剂盒中包括检测 MDM2和RB表达水平的试剂。
进一步地，所述试剂为PCR试剂、Western印迹、North-Western印迹、免疫吸附测定法、抗体微阵列、组织微阵列、免疫沉淀、原位杂交和其他免疫组织化学技术、放射免疫测定法、免疫放射测定法、免疫酶测定法的检测试剂。
在使用本发明所述的试剂盒时，将蛋白标志物的表达水平与正常组织样品中蛋白标志物的表达水平进行比较，判断与正常组织样品相比的表达量差异。
当MDM2表达量上调时，指征对放射治疗敏感，不存在放射治疗抵抗。
当RB表达量上调时，指征对放射治疗敏感，不存在放射治疗抵抗。
本发明的一个方面还涉及用于检测分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性的蛋白标志物组合，包括MDM2和RB。
并且MDM2和RB的表达上调，指征为对放射治疗敏感，不存在放射治疗抵抗。
本发明所提供的用途、试剂盒以及蛋白标志物组合可以应用于通过检测蛋白标志物的表达水平检测出治疗对象对分泌型垂体腺瘤放射治疗的敏感性、是否存在放射治疗抵抗，从而为预测患者接受放射治疗后的效果以及指导临床诊疗提供有效依据。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
实施例1
标本的制备：
(1)取分泌型垂体瘤标本(垂体瘤标本来自活检或手术，标本在进行此实验前接受了放射治疗，伽马刀的中心剂量26-33Gy，周边剂量13-16Gy，时间为50-60分钟。)进行蜡块包埋：70％、80％、90％、95％、95％乙醇各放置1小时；100％乙醇放置30分钟，重复一次；二甲苯放置20分钟，重复一次；浸于蜡液中30分钟，重复两次。
(2)将标本蜡块进行切片，厚度大约5um。
(3)切片置于56-60度烤箱中大约0.5-1小时。
免疫组化染色
(1)利用徕卡自动免疫组化仪(型号LEICA BONDⅢ)，对应检测蛋白在电脑上打标签，同时在电脑上操作检测蛋白抗体的工作条件和抗体瓶号。MDM2(货号：ZM-0425)的工作条件：酸修复3分钟，一抗孵育15分钟；RB(货号：ab76298)的工作条件：抗体浓度为1:100，酸修复10分钟，一抗孵育15分钟。以上染色的DAB及苏木素均为徕卡组化工作液，染色时间为2分钟；MDM2购自中杉金桥公司，RB购自Abcam公司；二抗购自徕卡试剂公司。
(2)将打印好的标签贴在玻片上，将玻片放置徕卡自动免疫组化仪上，开始染色程序。
(3)取出片子放置玻片洗脱架子中，自来水下冲水2-5分钟。
(4)将整个洗脱架和片子一起依次从75％、75％、85％、85％、95％、95％乙醇、二甲苯、二甲苯放入，每种液体放置1分钟，全程下来8-10分钟。
(5)封片。
结果判定：
利用徕卡自动扫描仪进行扫描，扫描后进行分析，给出高低表达判读。当MDM2和RB表达颜色2和3分的细胞占比分别达到51％-100％，确定为 高表达，即放疗敏感，由表1的结果可以得知放射治疗敏敏感，不存在放射治疗抵抗的分泌型垂体瘤标本中MDM2和RB的表达上调
表1
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (8)

1.检测蛋白标志物的表达水平的试剂在制备用于检测分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性的产品中的用途，其中，所述蛋白标志物为MDM2和/或RB。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述蛋白标志物为MDM2和RB。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中，检测蛋白标志物的表达水平是通过以下步骤进行的：
1)获得分泌型垂体腺瘤组织样品和正常对照组织样品；
以及
2)确定样品中蛋白标志物的表达水平。
4.根据权利要求3所述的用途，其中，步骤2)的方法选自PCR方法、Western印迹、North-Western印迹、免疫吸附测定法、抗体微阵列、组织微阵列、免疫沉淀、原位杂交和其他免疫组织化学技术、放射免疫测定法、免疫放射测定法和免疫酶测定法。
5.一种用于检测分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性的试剂盒，其中，所述试剂盒包括检测蛋白标志物的表达水平的试剂，所述蛋白标志物为MDM2和/或RB。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述蛋白标志物为MDM2和RB。
7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其中，所述试剂为PCR试剂、Western印迹、North-Western印迹、免疫吸附测定法、抗体微阵列、组织微阵列、免疫沉淀、原位杂交和其他免疫组织化学技术、放射免疫测定法、免疫放射测定法、免疫酶测定法的检测试剂。
8.用于检测分泌型垂体腺瘤放射治疗敏感性的蛋白标志物组合，其中，包括MDM2和RB。
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