CN107435033A - 一种有机垃圾降解复合菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种有机垃圾降解复合菌，由蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)HQY‑02、特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)HQY‑03、拟郎比可假丝酵母(Candida pseudolambica)HQY‑06组成，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号分别为CCTCC NO:M2017039、CCTCC NO:M2017041、CCTCC NO:M2017043。本发明的有机垃圾降解复合菌可用于降解有机垃圾中，垃圾减量率高，COD、氨氮、总氮去除率高。
Description
技术领域
本发明涉及一种有机垃圾处理工艺中的生物制剂，特别提供了一种有机垃圾降解复合菌及其应用。
背景技术
复合微生物菌剂，是指两种或者两种以上相互不拮抗且共生的微生物菌种制成的微生物制剂。有机垃圾高效复合菌是指多种具有降解有机垃圾的高效菌种制成的微生物制剂。
目前，我国有机垃圾的处理方法以生物法为主，由于有机垃圾有机质含量高、成分复杂等特点，普通的生物处理法效果较差。所以研究有机垃圾生化处理系统中微生物的组成，筛选出有机垃圾高效降解菌株，了解各菌株的特性，并进行复配培养出高效降解有机垃圾复合菌剂，对优化处理有很大的意义。
发明内容
为了克服现有技术中有机垃圾的生化处理效果差的缺陷，提供一种能产量化生产且性能稳定的高效降解有机垃圾的复合微生物制剂。该生物制剂在不改造处理设备的前提下，能够有效地优化处理系统，高效地降解有机垃圾的COD、氨氮、总氮等参数指标。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是
一种有机垃圾降解复合菌，所述复合菌由蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)HQY-02、特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)HQY-03、拟郎比可假丝酵母(Candidapseudolambica)HQY-06组成
进一步，所述蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)HQY-02，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号为CCTCCNO:M2017039.
所述特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)HQY-03，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号为CCTCC NO:M2017041.
所述拟郎比可假丝酵母(Candida pseudolambica)HQY-06，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号为CCTCCNO:M2017043。
进一步，所述有机垃圾降解复合菌中，所述蔬菜芽孢杆菌HQY-02、特基拉芽孢杆菌HQY-03、拟郎比可假丝酵母HQY-06的有效活菌数之比为20：35：45。
本发明所述的有机垃圾降解复合菌，可以制成不同的菌剂制剂形式，如冻干粉、菌液、菌泥等等，可通过将蔬菜芽孢杆菌HQY-02、特基拉芽孢杆菌HQY-03、拟郎比可假丝酵母HQY-06分别经发酵培养，获得的发酵培养液按照有效活菌数配比混合，采用本领域公知的菌剂制备方法制备得到各类菌剂制剂。发酵液复配后可以直接作为复合菌菌液使用，或者将发酵液离心、取沉淀冷冻干燥，可以制得冻干粉；或者将菌液用载体吸附后过滤，得到菌泥等
本发明还提供所述的有机垃圾降解复合菌在降解有机垃圾中的应用。
进一步，所述有机垃圾是指日常生活垃圾中可分解的有机物质部分。包括食物残渣、动物蹄、角、蛋壳、鱼鳞、毛发、植物枝干、动物尸体、牲畜粪便等。从化学组成上，主要有蛋白质、纤维素、淀粉、脂类和无机盐
进一步，所述应用的方法为：将有机垃圾降解复合菌和有机垃圾加入垃圾处理机中，在常温下搅拌降解反应，垃圾减量率90％以上。
进一步，降解反应的时间为1～3天(优选24～48小时)，垃圾减量率达90％以上，污水出水COD在3000mg/L以下，进一步经水处理设备处理达标后排放。
进一步，所述有机垃圾降解复合菌的投放量为每公斤有机垃圾加入有效活菌总数为(1～10)×107cfu的复合菌(优选3×107cfu)
所述垃圾减量率＝(投入垃圾总质量-降解后未分解残渣质量)/投入垃圾总质量×100％。垃圾减量的部分即为大量污水。
有机垃圾主要被降解为大量污水。
有机垃圾经过复合菌降解后，得到大量污水和少量无法分解的残渣，污水同样经过复合菌降解，cod值从垃圾的10000mg/L以上降解至500～3000mg/L左右，但仍然无法达到排放标准，所得污水后续再经水处理设备处理。采用常规的水处理设备进行处理即可。
本发明的有机垃圾可用垃圾处理机进行连续处理，在第一次投放有机垃圾时，按照每公斤垃圾加入有效活菌总数为(1～10)×107cfu的有机垃圾复合菌，然后每天收集的有机垃圾连续投放，每天投放垃圾质量在第一次投放的垃圾质量的50％～150％之间，不再投放新的复合菌，污水出水COD定期检测，在3000mg/L以下，排出的污水直接进入水处理系统，用水处理系统处理至排放标准后排放，垃圾处理机连续处理2～3个月，停机清空无法降解的残渣。垃圾处理机再进行新的循环。
进一步，在投放有机垃圾复合菌时，复合菌为菌液形式时，一般需要同时加入吸附载体，使菌液吸附于载体上，所述载体可以为稻壳、秸秆、麸皮、木屑等。
使用本发明的有机垃圾复合菌制能够高效地处理有机垃圾，其中的微生物以有机物为食物进行代谢活动，最后以水和气体的形式排出，垃圾减量率高，得到的残渣少，所得少量残渣留在腔体作为微生物的填料，并且复合菌对垃圾污水中的COD和氨氮降解率也很高，得到的出水后续经常规水处理系统处理即可排放。
本发明的有益效果在于：有机垃圾高效降解复合菌剂中的微生物都属于环境友好型的四类微生物。并且具有特定的处理有机垃圾的菌种成分，例如HQY-06拟郎比可假丝酵母，对有机垃圾中纤维素的降解处理效果极佳。样品中其他份为天然生物培养基，使用安全方便，无毒，无腐蚀，对人畜及动植物无害；同时具有生物降解性，生态安全，无负面环境影响，是常规的微生物复合菌剂产品。
具体实施方式
本发明实质特点可从下述实施例中得以体现，但这些实施例仅作为说明，而不是对本发明进行限制。
实施例1
菌株筛选和鉴定：
⑴菌种筛选：采用选择性培养基筛选有机垃圾反应堆中的菌株；
⑵菌种复筛：对筛选的单个菌株分别进行高效菌筛选；
⑶菌种富集：对高效菌种进行液体富集培养；
⑷复合菌种构建：对菌株进行组合以及试验；
⑸复合菌中的菌种鉴定：对菌株进行分子生物学鉴定。
其中，步骤⑴所述的菌种筛选，本发明提供以下方法：
用无菌移液枪移取10.0mL有机垃圾处理器的生化系统混匀液加到盛有90.0mL无菌水的锥形瓶中，并混匀。接着取1.0mL该稀释液于盛有9.0mL无菌水的试管(-10-2)中充分混匀，然后用无菌移液枪从此试管中吸取1.0mL于另一个9.0mL无菌水的试管(-10-3)中，混合均匀，以此类推制成10-2、10-3、10-4、10-5……10-8、10-9、10-10不同稀释度的菌液。然后涂布到细菌培养基、真菌培养基，在相应条件下培养一定时间。其中所述细菌培养基成分：蛋白胨1％，氯化钠0.5％，酵母膏1％，水100ml，pH 7.0，固体培养基中加入琼脂粉1.5％。其中所述真菌培养基成分：酵母膏1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，固体培养基中加入琼脂粉1.5％。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
细菌培养基培养条件为：37℃固体培养基培养24小时
真菌培养基培养条件为：35℃固体培养基培养48小时
其中，步骤⑵所述的菌种复筛，本发明提供以下方法：
用接种环挑取培养基平皿上形态不同的菌落，进行划线分离。重复操作直至长出单一菌落，接种到培养试管斜面上，培养备用，4℃保存菌株。共分离出22种菌株，并观察菌株的菌落特征以及菌种的镜检情况，最终筛选出13种菌株做培养备用。
以上菌株进行复筛，挑取斜面菌株各加入10ml无菌水，制成悬液，然后吸取1ml菌液于99ml灭过菌的有机垃圾培养液中，30℃，120r/min摇床培养，然后按0.25％的投加量注入到150ml灭过菌的有机垃圾培养液中做试验，30℃，120r/min摇床培养。
所述有机垃圾培养液是模拟实际有机垃圾中各物质浓度含量配置的营养液，成分为有机质45％，总氮4.5％，五氧化二磷2％，氧化钾2％，纯水(定容)，砷0.03％，铅0.04％，铬0.1％。
每8h测定COD、氨氮值，从中筛选降解率高且比较稳定的菌株，共9种。
其中，步骤⑶所述的菌种富集，本发明提供以下方法：
挑取筛选出来的9种斜面菌株各加入10ml无菌水，制成悬液，然后吸取1ml菌液于99ml灭过菌的有机垃圾培养液中，30℃，120r/min摇床培养。
所述有机垃圾培养液同上。
其中，步骤⑷所述的复合菌种构建，本发明提供以下方法：
将富集获得的菌株按一定的体积比进行组合，按0.25％的投加量注入到150ml灭过菌的有机垃圾培养液中做试验，30℃，120r/min摇床培养。每12h测定COD、氨氮值。其中去除率最高的一组48h的COD去除率可达到95.63％、氨氮去除率达到93.67％。
其中，步骤⑸所述的菌种鉴定，步骤如下：
选取步骤(4)中去除率最高的一组组合，将其中的三种菌株进行鉴定，鉴定包括细菌和真菌的分子生物学鉴定，分别如下：
(1)细菌的分子生物学鉴定方法：菌种的液体培养，将复筛后的待测菌株，从划线平板上挑取一环，接种到10ml/50ml的LB液体培养基中，37℃，180rpm恒温摇床培养过夜；待测菌株全基因组DNA的提取及验证，将活化好的液体培养物，采用酚氯仿法抽提基因组DNA。抽提到的DNA用1％的琼脂糖凝胶电泳检验提取结果；16sPCR及验证，使用提取到的DNA作为模板，利用细菌通用引物27F和1492R扩增16srDNA片段。将扩增到的PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳验证扩增效果。
27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
1492R：GGTTACCTTGTTACGACTT
LB液体培养基配方为：胰蛋白胨(Tryptone)10g/L,酵母提取物(Yeast extract)5g/L，氯化钠(NaCl)10g/L，溶剂为去离子水，pH值为7.0。在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min。
(2)真菌的分子生物学鉴定方法：菌种的液体培养，将复筛后的待测菌株，从划线平板上挑取一环，接种到10ml/50ml的YPD液体培养基中，30℃，180rpm恒温摇床培养过夜；待测菌株全基因组DNA的提取，将活化好的液体培养物，采用酚氯仿法抽提基因组DNA，抽提到的DNA用1％的琼脂糖凝胶电泳检验提取结果；18sPCR及验证，利用真菌通用引物NS1和FR1扩增18srDNA片段。之后将扩增片段跑1％琼脂糖凝胶电泳验证扩增效果。
NS1:GTAGTCATATGCTTGTCTC
FR1 AICCATTCAATCGGTAIT
YPD液体培养基配方为：1％Yeast Extract(酵母膏)，2％Peptone(蛋白胨)，2％Dextrose(glucose)(葡萄糖)，溶剂为去离子水，pH值为7.0。在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min。
通过上述方法，本发明筛选得到了三种对有机垃圾降解效率高的菌株，三种菌株的16S rDNA全序列分别如SEQ ID.NO1、SEQ ID.NO2、SEQ ID.NO3所示。三种菌株的16S rRNA序列分析结果，结合生理生化试验结果，在NCBI基因库比对后，确定三种菌株分别为蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)、特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)、拟郎比可假丝酵母(Candida pseudolambica)，并命名为蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)HQY-02、特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)HQY-03，拟郎比可假丝酵母(Candidapseudolambica)HQY-06。
SEQ ID.NO1：
ATGCAAGTCGAGCGAATCTGATGGGAGCTTGCTCCCTGAAGATTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATAACTTTTTTCTTCGCATGAAGGAGAATTGAAAGATGGCTCCGGCTATCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACTTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTATCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAATCTTGCGGCTCAACCGCAAGCGGCCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTTGACCTCCCTAGAGATAGGGATTTCCCTTCGGGGACAGGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGACCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAAAGGGCTGCAAGACCGCGAGGTTTAGCCAATCCCATAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTGGAGCCAGCCGCCGAA
SEQ ID.NO2：
ATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCT
SEQ ID.NO3：
TTCGGCGGCTGGCTCCTAAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTACCGCCCTATTCGAACGGTACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTTGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTGGTAGCCGAAGCCACCTTTTATGTTTGAACCATGCGGTTCAAACAAGCATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTAACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCT
实施例2
不同配方的复合菌剂和单一菌剂的降解效率对比
将筛选出来的三种菌株蔬菜芽孢杆菌HQY-02、特基拉芽孢杆菌HQY-03，拟郎比可假丝酵母HQY-06分别进行发酵培养：接种到营养液中，在35℃，振荡频率为120r/min的条件下培养4天。
所述营养液含有如下组分(每体积营养液中含有)：蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、酵母膏10g/L、葡萄糖10g/L，PH调到7。
发酵得到蔬菜芽孢杆菌HQY-02、特基拉芽孢杆菌HQY-03、拟郎比可假丝酵母HQY-06的培养液中活菌数分别为2*107CFU/mL、3.5*107CFU/mL、4.5*107CFU/mL
取有机垃圾培养液100mL 6份，按照每100mL加入1*107CFU的数量分别加入蔬菜芽孢杆菌HQY-02培养液、特基拉芽孢杆菌HQY-03培养液、拟郎比可假丝酵母HQY-06培养液、复合菌液A、复合菌液B、复合菌液C、复合菌液D。
有机垃圾培养液是模拟实际有机垃圾中各物质浓度含量配置的营养液，成分为有机质45％，总氮4.5％，五氧化二磷2％，氧化钾2％，纯水(定容)，砷0.03％，铅0.04％，铬0.1％。
其中复合菌液A中蔬菜芽孢杆菌HQY-02、特基拉芽孢杆菌HQY-03，拟郎比可假丝酵母HQY-06的有效活菌数之比为20：35：45
复合菌液B中蔬菜芽孢杆菌HQY-02、特基拉芽孢杆菌HQY-03的有效活菌数之比为50：50
复合菌液C中特基拉芽孢杆菌HQY-03，拟郎比可假丝酵母HQY-06的有效活菌数之比为40：60
复合菌液D中蔬菜芽孢杆菌HQY-02、拟郎比可假丝酵母HQY-06的有效活菌数之比为30:70
30℃，120r/min摇床培养，每12h测定COD、氨氮值、总氮值，并计算48h的COD转化率、氨氮、总氮去除率，所得结果如下表1：
表1
表1可以看出，复合菌液A的COD、氨氮、总氮去除效率最高，显著优于单一菌种以及其他复合菌液。
实施例2复合菌制剂用于有机垃圾的降解：
1、复合菌制剂的发酵
发酵包括如下步骤：将筛选出来的三种菌株：蔬菜芽孢杆菌(Bacillusoleronius)HQY-02、特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)HQY-03，拟郎比可假丝酵母(Candida pseudolambica)HQY-06分别接种到营养液接种到营养液中，在35℃，振荡频率为120r/min的条件下培养4天。
所述营养液含有如下组分(每体积营养液中含有)：蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、酵母膏10g/L、葡萄糖10g/L，PH调到7。
所得蔬菜芽孢杆菌HQY-02、特基拉芽孢杆菌HQY-03，拟郎比可假丝酵母HQY-06的培养液中活菌数分别为2*107CFU/mL、3.5*107CFU/mL、4.5*107CFU/mL。
按照蔬菜芽孢杆菌HQY-02、特基拉芽孢杆菌HQY-03，拟郎比可假丝酵母HQY-06的有效活菌数之比为20：35：45，将三种培养液混合，得到复合菌液。复合菌液中的总的有效活菌数为4*107CFU/mL。
2、发酵后复合菌剂的投加
试验地点：虹霓垃圾中转站；有机垃圾主要类别：企业、社区的有机垃圾废弃物。
问题描述：企业、社区的有机垃圾剩余量过大，采用外包收集的方式，收集不及时或者天气温度高，就会滋生蝇类，影响周围的环境卫生。
解决方法：进行就地处理，垃圾处理一体机内加入与待处理垃圾体积比1:1的稻壳(以稻壳为菌液的吸附载体)，按照每公斤垃圾投放3*107CFU的复合菌液，菌液与稻壳搅拌混合充分后，将有机垃圾投放到处理一体机内，常温下搅拌反应，降解反应24小时，垃圾减量率达到90％以上。
且可以进行连续处理，每天收集的垃圾连续投放，每天投放垃圾质量在第一次投放的垃圾质量的50％～150％之间，不需要再投放新的复合菌，污水出水COD定期检测，基本在3000mg/L以下，所得出水后续用水处理系统处理至排放标准后排放。可连续处理2-3个月，一体机内剩余的无法降解的残渣定期2-3个月停机清除一次。然后再进行新的循环。
结果：使用复合菌制剂能够高效地处理有机垃圾，其中的微生物以有机物为食物进行代谢活动，最后以水和气体的形式排出，垃圾减量率高，少量残渣留在腔体作为微生物的填料，且对COD、氨氮、总氮降解率高，排出的污水后续处理容易，采用常规的污水处理系统即可达标排放。
SEQUENCE LISTING
<110> 浙江华庆元生物科技有限公司
<120> 一种有机垃圾降解复合菌及其应用
<130>
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1425
<212> DNA
<213> Bacillus oleronius
<400> 1
atgcaagtcg agcgaatctg atgggagctt gctccctgaa gattagcggc ggacgggtga 60
gtaacacgtg ggtaacctgc ctgtaagact gggataactc cgggaaaccg gggctaatac 120
cggataactt ttttcttcgc atgaaggaga attgaaagat ggctccggct atcacttaca 180
gatggacccg cggcgcatta gctagttggt gaggtaacgg ctcaccaagg cgacgatgcg 240
tagccgactt gagagggtga tcggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg 300
ggaggcagca gtagggaatc ttccgcaatg gacgaaagtc tgacggagca acgccgcgtg 360
agtgatgaag gttttcggat cgtaaaactc tgttgttagg gaagaacaag tatcgttcga 420
atagggcggt accttgacgg tacctaacca gaaagccacg gctaactacg tgccagcagc 480
cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc cggaattatt gggcgtaaag cgcgcgcagg 540
cggtttctta agtctgatgt gaaatcttgc ggctcaaccg caagcggcca ttggaaactg 600
ggagacttga gtgcagaaga ggagagtgga attccacgtg tagcggtgaa atgcgtagag 660
atgtggagga acaccagtgg cgaaggcgac tctctggtct gtaactgacg ctgaggcgcg 720
aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgagtg 780
ctaagtgtta gagggtttcc gccctttagt gctgcagcta acgcattaag cactccgcct 840
ggggagtacg gccgcaaggc tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg 900
gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac caggtcttga catcctcttg 960
acctccctag agatagggat ttcccttcgg ggacaggagt gacaggtggt gcatggttgt 1020
cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgacctt 1080
agttgccagc attcagttgg gcactctaag gtgactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt 1140
ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga 1200
tggtacaaag ggctgcaaga ccgcgaggtt tagccaatcc cataaaacca ttctcagttc 1260
ggattgtagg ctgcaactcg cctacatgaa gccggaatcg ctagtaatcg cggatcagca 1320
tgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca cgagagtttg 1380
taacacccga agtcggtgag gtaacctttg gagccagccg ccgaa 1425
<210> 2
<211> 1420
<212> DNA
<213> Bacillus tequilensis
<400> 2
atgcaagtcg agcggacaga tgggagcttg ctccctgatg ttagcggcgg acgggtgagt 60
aacacgtggg taacctgcct gtaagactgg gataactccg ggaaaccggg gctaataccg 120
gatggttgtt tgaaccgcat ggttcaaaca taaaaggtgg cttcggctac cacttacaga 180
tggacccgcg gcgcattagc tagttggtga ggtaacggct caccaaggca acgatgcgta 240
gccgacctga gagggtgatc ggccacactg ggactgagac acggcccaga ctcctacggg 300
aggcagcagt agggaatctt ccgcaatgga cgaaagtctg acggagcaac gccgcgtgag 360
tgatgaaggt tttcggatcg taaagctctg ttgttaggga agaacaagta ccgttcgaat 420
agggcggtac cttgacggta cctaaccaga aagccacggc taactacgtg ccagcagccg 480
cggtaatacg taggtggcaa gcgttgtccg gaattattgg gcgtaaaggg ctcgcaggcg 540
gtttcttaag tctgatgtga aagcccccgg ctcaaccggg gagggtcatt ggaaactggg 600
gaacttgagt gcagaagagg agagtggaat tccacgtgta gcggtgaaat gcgtagagat 660
gtggaggaac accagtggcg aaggcgactc tctggtctgt aactgacgct gaggagcgaa 720
agcgtgggga gcgaacagga ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac gatgagtgct 780
aagtgttagg gggtttccgc cccttagtgc tgcagctaac gcattaagca ctccgcctgg 840
ggagtacggt cgcaagactg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga 900
gcatgtggtt taattcgaag caacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tcctctgaca 960
atcctagaga taggacgtcc ccttcggggg cagagtgaca ggtggtgcat ggttgtcgtc 1020
agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt gatcttagtt 1080
gccagcattc agttgggcac tctaaggtga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg 1140
atgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtgctac aatggacaga 1200
acaaagggca gcgaaaccgc gaggttaagc caatcccaca aatctgttct cagttcggat 1260
cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagctg gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc 1320
gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccacgag agtttgtaac 1380
acccgaagtc ggtgaggtaa ccttttagga gccagccgct 1420
<210> 3
<211> 1413
<212> DNA
<213> Candida pseudolambica
<400> 3
ttcggcggct ggctcctaaa aggttacctc accgacttcg ggtgttacaa actctcgtgg 60
tgtgacgggc ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcggcatgc tgatccgcga 120
ttactagcga ttccagcttc acgcagtcga gttgcagact gcgatccgaa ctgagaacag 180
atttgtggga ttggcttaac ctcgcggttt cgctgccctt tgttctgtcc attgtagcac 240
gtgtgtagcc caggtcataa ggggcatgat gatttgacgt catccccacc ttcctccggt 300
ttgtcaccgg cagtcacctt agagtgccca actgaatgct ggcaactaag atcaagggtt 360
gcgctcgttg cgggacttaa cccaacatct cacgacacga gctgacgaca accatgcacc 420
acctgtcact ctgcccccga aggggacgtc ctatctctag gattgtcaga ggatgtcaag 480
acctggtaag gttcttcgcg ttgcttcgaa ttaaaccaca tgctccaccg cttgtgcggg 540
cccccgtcaa ttcctttgag tttcagtctt gcgaccgtac tccccaggcg gagtgcttaa 600
tgcgttagct gcagcactaa ggggcggaaa ccccctaaca cttagcactc atcgtttacg 660
gcgtggacta ccagggtatc taatcctgtt cgctccccac gctttcgctc ctcagcgtca 720
gttacagacc agagagtcgc cttcgccact ggtgttcctc cacatctcta cgcatttcac 780
cgctacacgt ggaattccac tctcctcttc tgcactcaag ttccccagtt tccaatgacc 840
ctccccggtt gagccggggg ctttcacatc agacttaaga aaccgcctgc gagcccttta 900
cgcccaataa ttccggacaa cgcttgccac ctacgtatta ccgcggctgc tggcacgtag 960
ttagccgtgg ctttctggtt aggtaccgtc aaggtaccgc cctattcgaa cggtacttgt 1020
tcttccctaa caacagagct ttacgatccg aaaaccttca tcactcacgc ggcgttgctc 1080
cgtcagactt tcgtccattg cggaagattc cctactgctg cctcccgtag gagtctgggc 1140
cgtgtctcag tcccagtgtg gccgatcacc ctctcaggtc ggctacgcat cgttgccttg 1200
gtgagccgtt acctcaccaa ctagctaatg cgccgcgggt ccatctgtaa gtggtagccg 1260
aagccacctt ttatgtttga accatgcggt tcaaacaagc atccggtatt agccccggtt 1320
tcccggagtt atcccagtct tacaggcagg ttacccacgt gttactcacc cgtccgccgc 1380
taacatcagg gagcaagctc ccatctgtcc gct 1413
Claims (10)
1.一种有机垃圾降解复合菌，其特征在于所述复合菌由蔬菜芽孢杆菌(Bacillusoleronius)HQY-02、特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)HQY-03、拟郎比可假丝酵母(Candida pseudolambica)HQY-06组成；
所述蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)HQY-02，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号为CCTCC NO:M2017039；
所述特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)HQY-03，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号为CCTCC NO:M2017041；
所述拟郎比可假丝酵母(Candida pseudolambica)HQY-06，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号为CCTCC NO:M2017043。
2.如权利要求1所述的有机垃圾降解复合菌，其特征在于所述蔬菜芽孢杆菌HQY-02、特基拉芽孢杆菌HQY-03、拟郎比可假丝酵母HQY-06的有效活菌数之比为20：35：45。
3.如权利要求1～2之一所述的有机垃圾降解复合菌在降解有机垃圾中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：将有机垃圾降解复合菌和有机垃圾加入垃圾处理机中，在常温下搅拌降解反应，垃圾减量率90％以上。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述有机垃圾降解复合菌的投放量为每公斤有机垃圾加入有效活菌总数为(1～10)×107cfu的复合菌。
6.如权利要求4或5述的应用，其特征在于所述有机垃圾降解后得到大量污水和少量无法分解的残渣，污水的cod值经复合菌降解至3000mg/L以下，经水处理设备处理达标后排放。
7.一种用于制备权利要求1所述的有机垃圾降解复合菌的蔬菜芽孢杆菌(Bacillusoleronius)HQY-02，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号为CCTCC NO:M2017039。
8.一种用于制备权利要求1所述的有机垃圾降解复合菌的特基拉芽孢杆菌(Bacillustequilensis)HQY-03，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号为CCTCC NO:M2017041。
9.一种用于制备权利要求1所述的有机垃圾降解复合菌的拟郎比可假丝酵母(Candidapseudolambica)HQY-06，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2017年2月16日，保藏编号为CCTCC NO:M2017043。
10.如权利要求1所述的有机垃圾降解复合菌制成的有机垃圾降解复合菌菌剂，所述菌剂包括冻干粉、菌液或菌泥。
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