CN107383223A - 木耳多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种木耳多糖的提取方法，方法包括蒸汽爆破处理，热水浸提，脱蛋白，醇沉干燥。有益效果为：木耳细胞粗大，壁厚，水提取多糖难以从胞内溶出，本发明首先对木耳进行蒸汽爆破处理，有效地破除了阻碍传质过程的细胞壁，促进了多糖的释放，降低了热水浸提的传质阻力，缩短了提取的时间，提高了木耳多糖的收率，使木耳资源得到了充分的利用，符合绿色环保的要求，且提取方法合理，操作简单，降低了生产成本，为工业化应用提供了有利条件。
Description
技术领域
本发明涉及植物活性成分提取技术领域，尤其是涉及木耳多糖的提取方法。
背景技术
木耳，真菌学分类属担子菌纲，是我国主要栽培食用菌之一，在我国分布很广，其中以南方湖南、湖北和北方黑龙江、吉林地区盛产。色泽黑褐，质地柔软，营养丰富，不仅可以作为烹妊菜肴，而且还具有养血驻颜、防治缺铁性贫血及其他药用功效。木耳富含蛋白质、维生素、粗纤维、钙、铁等营养物质，同时还含有胶原、植物碱、发酵素、卵磷脂、多糖等活性成分。多糖是重要的信息分子，参与机体多种生命活动。大量研究证实多糖具有多种生物学功效，如抗病毒、抗肿瘤、降血糖、降血脂和免疫调节等。多糖类化合物在保健、医药、化妆品和食品添加剂等领域具有广泛的应用前景。运用现代的科学手段研究黑耳多糖的提取工艺对木耳资源的深度开发有促进作用，提高了农副产品的经济效益。
现有技术如授权公告号为CN 103641924 B的中国发明专利，公开了一种从木耳中提取木耳多糖的方法，在预处理中加入纤维素酶，控制酶解条件酶解破除细胞壁，提高了木耳多糖的得率，但酶解过程会产生副产物，降低木耳多糖的纯度，且酶解破除细胞壁所需的时间长，工艺复杂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种木耳多糖的提取方法，该方法克服了现有技术提取率低、提取时间长的缺点。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：木耳多糖的提取方法，包括蒸汽爆破处理，热水浸提，脱蛋白，醇沉干燥。方法合理，操作简单，提取率高，所获得的木耳多糖活性好，降低了生产成本，为工业化应用提供了有利条件。
作为优选，蒸汽爆破处理过程中，取5-6份干木耳，粉碎，加入蒸馏水，调整水料比为12-14％，搅拌30-34min，密封静置7-8h，得预浸液，向预浸液中加入3-6份活性短肽，搅拌10-15min，再进行蒸汽爆破处理，压力控制为2-2.5MPa，维压时间为35-42s，得爆破液。对木耳进行蒸汽爆破处理，可大大促进细胞壁的破裂和多糖的释放，降低了热水浸提的阻力，提高了传质效率，减少了提取的时间，提高了木耳多糖的提取率，使木耳资源得到了充分利用。
作为优选，蒸汽爆破处理过程中所加入的活性短肽的氨基酸序列为：HSHACASYSLCVCVNCSR。蒸汽爆破过程中，细胞壁的空隙中所渗入的蒸汽有限，导致破壁程度不高，活性短肽的加入，促进了蒸汽的渗入，提高了破壁效果，极大地降低了热水浸提的阻力，提高了浸提的效率，使浸提时间大大缩短。
作为优选，热水浸提过程中，向爆破液中加入6-9份水，在92-98℃下浸提40-50min，在转速为8000-10000r/min下离心10-13min，取上清液，得浸提液。以水为溶剂浸提多糖，安全环保，成本低廉，由于蒸汽爆破处理破除了木耳细胞壁，极大地释放了细胞内的多糖，在短时间内便可以达到很好的浸提效果。
作为优选，脱蛋白过程中，将三氯甲烷和正丁醇配制成混合液，其中体积比三氯甲烷/正丁醇=3.4/1-3.7/1，取1-3份浸提液，向其中加入14-18份所配置的混合液，搅拌32-40min，离心分离，取水相。热水浸提过程所得的溶液含有许多游离蛋白质，使多糖的纯度降低，加入三氯甲烷和正丁醇的混合液后，蛋白质会形成沉淀从溶液中析出，提高多糖的纯度，增强产品的生物活性。
作为优选，醇沉干燥过程中，向脱蛋白所得的水相中加入22-25份86%-92%的乙醇溶液，搅拌16-25min，过滤，设置真空度为3000-5000Pa，温度为60-70℃，将滤渣干燥25-35min得多糖提取物。多糖溶于热水而不溶于高浓度的乙醇，在加入86%-92%的乙醇溶液后，木耳多糖以沉淀的形式从水相中析出，所得的木耳多糖纯度高，品质好，提高了产品的经济价值。
与现有技术相比，本发明的优点在于：木耳细胞粗大，壁厚，水提取多糖难以从胞内溶出，本发明首先对木耳进行蒸汽爆破处理，有效地破除了阻碍传质过程的细胞壁，促进了多糖的释放，降低了热水浸提的传质阻力，缩短了提取的时间，提高了木耳多糖的收率，使木耳资源得到了充分的利用，符合绿色环保的要求，且提取方法合理，操作简单，降低了生产成本，为工业化应用提供了有利条件。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明：
实施例1：
木耳多糖的提取方法，包括以下步骤：首先是蒸汽爆破处理：取5份成熟、无病虫害的干木耳，用中药粉碎机粉碎，放入敞口容器中，加入蒸馏水，调整水料比为12％，搅拌30min，用保鲜膜封口密封，静置7h，得预浸液，向预浸液中加入3份活性短肽，搅拌10min，再进行蒸汽爆破处理，压力控制为2MPa，维压时间为35s，得爆破液。对木耳进行蒸汽爆破处理，可大大促进细胞壁的破裂和多糖的释放，降低了热水浸提的阻力，减少了提取的时间，提高了木耳多糖的提取率；下一步是热水浸提：向爆破液中加入6份水，设置水浴锅温度为92℃，搅拌浸提40min，在转速为8000r/min下离心10min，取上清液，得浸提液。以水为溶剂浸提，安全经济，且由于蒸汽爆破处理极大地释放了细胞内的多糖，在短时间内便可以达到很好的浸提效果；下一步是脱蛋白：将三氯甲烷和正丁醇配制成混合液，其中体积比三氯甲烷/正丁醇=3.4/1，取1份浸提液，向其中加入14份所配置的混合液，搅拌32min，在4200r/min下离心分离10min，取水相。热水浸提过程所得的溶液含有许多游离蛋白质，使多糖的纯度降低，加入三氯甲烷和正丁醇的混合液后，蛋白质会形成沉淀从溶液中析出，提高多糖的纯度，增强产品的生物活性；最后是醇沉干燥：向脱蛋白过程所得的水相中加入22份86%的乙醇溶液，搅拌16min，过滤收集沉淀，设置真空度为3000Pa，温度为60℃，将滤渣干燥25min得多糖提取物。在加入高浓度的乙醇溶液后，木耳多糖形成沉淀，实现了产物的分离。
实施例2：
木耳多糖的提取方法，包括以下步骤：
1)蒸汽爆破处理：取6份干木耳，粉碎，加入蒸馏水，调整水料比为14％，搅拌34min，密封静置8h，得预浸液，向预浸液中加入6份活性短肽，搅拌15min，再进行蒸汽爆破处理，压力控制为2.5MPa，维压时间为42s，得爆破液。对木耳进行蒸汽爆破处理，可大大促进细胞壁的破裂和多糖的释放，降低了热水浸提的阻力，提高了传质效率，减少了提取的时间，提高了木耳多糖的提取率，使木耳资源得到了充分利用；
2)热水浸提：向爆破液中加入9份水，在98℃下浸提50min，在转速为10000r/min下离心13min，取上清液，得浸提液。以水为溶剂浸提多糖，安全环保，成本低廉，由于蒸汽爆破处理破除了木耳细胞壁，极大地释放了细胞内的多糖，在短时间内便可以达到很好的浸提效果；
3)脱蛋白：将三氯甲烷和正丁醇配制成混合液，其中体积比三氯甲烷/正丁醇=3.7/1，取3份浸提液，向其中加入18份所配置的混合液，搅拌40min，离心分离，取水相。热水浸提过程所得的溶液含有许多游离蛋白质，使多糖的纯度降低，加入三氯甲烷和正丁醇的混合液后，蛋白质会形成沉淀从溶液中析出，提高多糖的纯度，增强产品的生物活性；
4)醇沉干燥：向脱蛋白所得的水相中加入25份92%的乙醇溶液，搅拌25min，过滤，设置真空度为5000Pa，温度为70℃，将滤渣干燥35min得多糖提取物。在加入高浓度的乙醇溶液后，木耳多糖形成沉淀，实现了产物的分离。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 兰溪市哥特生物技术有限公司
<120> 木耳多糖的提取方法
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
His Ser His Ala Cys Ala Ser Tyr Ser Leu Cys Val Cys Val Asn Cys
1 5 10 15
Ser Arg
Claims (7)
1.木耳多糖的提取方法，包括蒸汽爆破处理，热水浸提，脱蛋白，醇沉干燥，其特征在于：所述蒸汽爆破处理过程为：取5-6份干木耳，粉碎，加入蒸馏水，调整水料比为12-14％，搅拌30-34min，密封静置7-8h，得预浸液，向预浸液中加入3-6份活性短肽，搅拌10-15min，再进行蒸汽爆破处理，压力控制为2-2.5MPa，维压时间为35-42s，得爆破液。
2.根据权利要求1所述的木耳多糖的提取方法，其特征在于：所述的活性短肽的氨基酸序列为：HSHACASYSLCVCVNCSR。
3.根据权利要求1所述的木耳多糖的提取方法，其特征在于：所述的热水浸提过程为：爆破液中加入6-9份水，在92-98℃下浸提40-50min，离心分离得浸提液。
4.根据权利要求3所述的木耳多糖的提取方法，其特征在于：所述的离心分离过程中转速为8000-10000r/min，时间为10-13min。
5.根据权利要求1所述的木耳多糖的提取方法，其特征在于：所述的脱蛋白过程为：将三氯甲烷和正丁醇配制成混合液，其中体积比三氯甲烷/正丁醇=3.4/1-3.7/1，取1-3份浸提液，向其中加入14-18份所配置的混合液，搅拌32-40min，离心分离，取水相。
6.根据权利要求1所述的木耳多糖的提取方法，其特征在于：所述的醇沉干燥过程为：向脱蛋白所得的水相中加入22-25份86%-92%的乙醇溶液，搅拌16-25min，过滤，将滤渣真空干燥得多糖提取物。
7.根据权利要求6所述的木耳多糖的提取方法，其特征在于：所述的醇沉干燥过程中真空干燥的条件为：真空度为3000-5000Pa，温度为60-70℃，时间为25-35min。
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