CN107348092A - 一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法，包括海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解、木瓜蛋白酶酶解、超滤和冷冻干燥。有益效果为：本发明得到的蛋白粉富含VB1、VB2、Vc等多种维生素和钙、磷、铁等多种矿物质，营养十分丰富；蛋白质分子量小，易被人体吸收，具有优良的抗氧化性，可用于制备功能性食品；本发明以鱼溶浆为原料，既保护了环境，又对资源进行了合理运用，增加了鱼溶浆的附加值。
Description
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，具体是一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法。
背景技术
鱼溶浆是鱼粉生产过程中产生的压榨废水。早期鱼粉生产工艺过程中，鱼溶浆通常不经回收直接向环境中排放，造成了严重的环境污染。鱼溶浆中含有丰富的优质蛋白，据P.J.BECHTEL，Univ.ofAlaska报道，鱼溶浆含蛋白6%，木瓜蛋白酶消化率大于95%，可溶性蛋白占70%，采用适当方法回收后的鱼溶浆蛋白可以用于饲料工业，用作动物饲料的原料。近年来，有关鱼溶浆回收利用的方法已有较多研究，如把鱼溶浆加入鱼粉中烘干(中国专利CN200710030735.9)，或经脱油、脱粘多糖处理后干燥成鱼溶浆蛋白粉(中国专利CN200710120346.5)等。
现有技术如授权公告号为CN102994601B的中国发明专利一种利用海洋胶原蛋白酶MCP-01制备胶原蛋白小肽的方法，包括如下步骤：（1）将海洋胶原蛋白酶MCP-01溶于Tris-HCl缓冲液中，配成酶浓度为0.3～0.5mg/mL的酶液；（2）将牛肌腱I型不可溶胶原蛋白加入酶液中，在水浴锅中反应，在4℃条件下，离心后超滤，制得胶原蛋白小肽。该方法生产的胶原蛋白小肽分子量小但小肽的生物活性不强，功能性较弱。
发明内容
本发明的目的在于提供一种制备方法简单，成本低廉，得到的蛋白产品分子量小，生物活性高的利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法，包括洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解、木瓜蛋白酶酶解、超滤和冷冻干燥。海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解步骤为：在鱼溶浆中加入0.5~0.8%海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶和酶激活剂，超声波辅助酶解，酶解温度为25~35℃，酶解pH为7.0~9.0，酶解时间为30~40min，超声波频率为30~40kHZ，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液。海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶对鱼溶浆蛋白的酶切位点与陆地菌产碱性蛋白酶不同，酶解产生的蛋白质或多肽的形态结构不同，生物活性不同。
酶激活剂为活性多肽，加入量为海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶质量的1~2%，其氨基酸序列为HSHCACTSYYCAKFCGAAKCTHYLCRVLHPGKALCVCVNCSK。上述活性多肽通过氢键作用，附着在海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶的表面，改变其分子构象，显著提高其酶解效率，既可以减少海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶的使用量，减少成本，又可以缩短酶解时间；上述活性多肽对三甲胺、二甲胺等腥味物质有特异性吸附，在酶解的同时完成去腥。
木瓜蛋白酶酶解步骤为：在海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解得到的滤液中加入1.0~1.9%木瓜蛋白酶，超声波辅助酶解，超声波频率为30~40kHZ，酶解温度为50~55℃，酶解pH为6.0~6.7，酶解时间为20~28min，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液。海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶对鱼溶浆蛋白进行初步酶解，改变鱼溶浆蛋白的三级结构，暴露出新的酶切位点。木瓜蛋白酶对鱼溶浆蛋白或多肽进一步酶解，得到的蛋白质或多肽分子量大幅减小，且出现大量不同分子量的蛋白质或多肽。
超滤步骤为：先使用15~20kDa的超滤膜对酶解液超滤，取滤过液，再使用规格为4~6kDa的超滤膜超滤，取滤过液。为了防止膜孔堵塞或膜损害，先采用大孔超滤膜进行超滤，再采用小孔超滤膜超滤，有效去除大分子蛋白和其他大分子杂质，对蛋白质进行纯化。
冷冻干燥步骤为：预冻：-20~-15℃预冻3~5h；冷冻干燥：-20~-15℃，0~4Pa冷冻干燥3~4h，-5~0℃，6~14Pa冷冻干燥1~2h；升华干燥：13~20℃，50~60Pa升华干燥2~3h；解析干燥：5~10℃，3~5Pa解析干燥2~4h，得到蛋白粉产品。上述蛋白粉中还富含VB1、VB2、Vc等多种维生素和钙、磷、铁等多种矿物质，营养十分丰富；蛋白质分子量小，易被人体吸收，具有优良的抗氧化性，可用于制备功能性食品。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明方法制备步骤简单，成本低廉，将海洋产蛋白酶和陆地产蛋白酶相结合，对鱼溶浆蛋白进行酶解，得到形态结构特殊的功能性蛋白粉产品；2）本发明方法制备得到的蛋白粉富含VB1、VB2、Vc等多种维生素和钙、磷、铁等多种矿物质，营养十分丰富；蛋白质分子量小，易被人体吸收，具有优良的抗氧化性，可用于制备功能性食品；2）本发明以鱼溶浆为原料，既保护了环境，又对资源进行了合理运用，增加了鱼溶浆的附加值；3）海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶对鱼溶浆蛋白的酶切位点与陆地菌产碱性蛋白酶不同，酶解产生的蛋白质或多肽的形态结构不同，生物活性不同。
氨基酸序列为HSHCACTSYYCAKFCGAAKCTHYLCRVLHPGKALCVCVNCSK的活性多肽通过氢键作用，附着在海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶的表面，改变其分子构象，显著提高其酶解效率，既可以减少海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶的使用量，减少成本，又可以缩短酶解时间；上述活性多肽对三甲胺、二甲胺等腥味物质有特异性吸附，在酶解的同时完成去腥。
具体实施例
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法，包括洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解、木瓜蛋白酶酶解、超滤和冷冻干燥。
海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解步骤为：在鱼溶浆中加入0.5~0.8%海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶和酶激活剂，超声波辅助酶解，酶解温度为25~35℃，酶解pH为7.0~9.0，酶解时间为30~40min，超声波频率为30~40kHZ，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液。海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶对鱼溶浆蛋白的酶切位点与陆地菌产碱性蛋白酶不同，酶解产生的蛋白质或多肽的形态结构不同，生物活性不同。
酶激活剂为活性多肽，加入量为海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶质量的1~2%，其氨基酸序列为HSHCACTSYYCAKFCGAAKCTHYLCRVLHPGKALCVCVNCSK。上述活性多肽通过氢键作用，附着在海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶的表面，改变其分子构象，显著提高其酶解效率，既可以减少海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶的使用量，减少成本，又可以缩短酶解时间；上述活性多肽对三甲胺、二甲胺等腥味物质有特异性吸附，在酶解的同时完成去腥。
木瓜蛋白酶酶解步骤为：在海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解得到的滤液中加入1.0~1.9%木瓜蛋白酶，超声波辅助酶解，超声波频率为30~40kHZ，酶解温度为50~55℃，酶解pH为6.0~6.7，酶解时间为20~28min，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液。海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶对鱼溶浆蛋白进行初步酶解，改变鱼溶浆蛋白的三级结构，暴露出新的酶切位点。木瓜蛋白酶对鱼溶浆蛋白或多肽进一步酶解，得到的蛋白质或多肽分子量大幅减小，且出现大量不同分子量的蛋白质或多肽。
超滤步骤为：先使用15~20kDa的超滤膜对酶解液超滤，取滤过液，再使用规格为4~6kDa的超滤膜超滤，取滤过液。为了防止膜孔堵塞或膜损害，先采用大孔超滤膜进行超滤，再采用小孔超滤膜超滤，有效去除大分子蛋白和其他大分子杂质，对蛋白质进行纯化。
冷冻干燥步骤为：预冻：-20~-15℃预冻3~5h；冷冻干燥：-20~-15℃，0~4Pa冷冻干燥3~4h，-5~0℃，6~14Pa冷冻干燥1~2h；升华干燥：13~20℃，50~60Pa升华干燥2~3h；解析干燥：5~10℃，3~5Pa解析干燥2~4h，得到蛋白粉产品。上述蛋白粉中还富含VB1、VB2、Vc等多种维生素和钙、磷、铁等多种矿物质，营养十分丰富；蛋白质分子量小，易被人体吸收，具有优良的抗氧化性，可用于制备功能性食品。
实施例2：
一种利用鱼溶浆生产的蛋白粉产品的方法为：
1）海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解：在鱼溶浆中加入0.7%海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶和酶激活剂，超声波辅助酶解，酶解温度为28℃，酶解pH为8.0，酶解时间为34min，超声波频率为35kHZ，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液。酶激活剂为活性多肽，加入量为海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶质量的1.6%，其氨基酸序列为HSHCACTSYYCAKFCGAAKCTHYLCRVLHPGKALCVCVNCSK；
2）木瓜蛋白酶酶解：在海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解得到的滤液中加入1.8%木瓜蛋白酶，超声波辅助酶解，超声波频率为35kHZ，酶解温度为52℃，酶解pH为6.5，酶解时间为26min，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液；
3）超滤：先使用20kDa的超滤膜对酶解液超滤，取滤过液，再使用规格为5kDa的超滤膜超滤，取滤过液；
4）冷冻干燥步骤为：预冻：-18℃预冻4h；冷冻干燥：-18℃，3Pa冷冻干燥3.4h，-4℃，10Pa冷冻干燥1.7h；升华干燥：16℃，55Pa升华干燥2.7h；解析干燥：8℃，4Pa解析干燥3h，得到蛋白粉产品。上述蛋白粉中还富含VB1、VB2、Vc等多种维生素和钙、磷、铁等多种矿物质，营养十分丰富；蛋白质分子量小，易被人体吸收，具有优良的抗氧化性，可用于制备功能性食品。
实施例3：
一种利用鱼溶浆生产的蛋白粉产品的方法为：
1）海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解：在鱼溶浆中加入0.6%海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶和酶激活剂，超声波辅助酶解，酶解温度为30℃，酶解pH为8.0，酶解时间为30min，超声波频率为30kHZ，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液。酶激活剂为活性多肽，加入量为海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶质量的1.2%，其氨基酸序列为HSHCACTSYYCAKFCGAAKCTHYLCRVLHPGKALCVCVNCSK；
2）木瓜蛋白酶酶解：在海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解得到的滤液中加入1.4%木瓜蛋白酶，超声波辅助酶解，超声波频率为30kHZ，酶解温度为52℃，酶解pH为6.3，酶解时间为24min，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液；
3）超滤：先使用20kDa的超滤膜对酶解液超滤，取滤过液，再使用规格为5kDa的超滤膜超滤，取滤过液；
4）冷冻干燥步骤为：预冻：-18℃预冻4h；冷冻干燥：-18℃，3Pa冷冻干燥3.4h，-4℃，10Pa冷冻干燥1.7h；升华干燥：16℃，55Pa升华干燥2.7h；解析干燥：8℃，4Pa解析干燥3h，得到蛋白粉产品。上述蛋白粉中还富含VB1、VB2、Vc等多种维生素和钙、磷、铁等多种矿物质，营养十分丰富；蛋白质分子量小，易被人体吸收，具有优良的抗氧化性，可用于制备功能性食品。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 浙江丰宇海洋生物制品有限公司
<120> 一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
His Ser His Cys Ala Cys Thr Ser Tyr Tyr Cys Ala Lys Phe Cys Gly
1 5 10 15
Ala Ala Lys Cys Thr His Tyr Leu Cys Arg Val Leu His Pro Gly Lys
20 25 30
Ala Leu Cys Val Cys Val Asn Cys Ser Lys
35 40
Claims (6)
1.一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法，包括洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解、木瓜蛋白酶酶解、超滤和冷冻干燥，其特征在于：所述的海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解步骤为：在鱼溶浆中加入0.5~0.8%海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶和酶激活剂，超声波辅助酶解，酶解温度为25~35℃，酶解pH为7.0~9.0，酶解时间为30~40min，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液。
2.根据权利要求1所述的一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法，其特征在于：所述的酶激活剂为活性多肽，加入量为海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶质量的1~2%，其氨基酸序列为HSHCACTSYYCAKFCGAAKCTHYLCRVLHPGKALCVCVNCSK。
3.根据权利要求1所述的一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法，其特征在于：所述的超声波频率为30~40kHZ。
4.根据权利要求1所述的一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法，其特征在于：所述的木瓜蛋白酶酶解步骤为：在海洋氧化短杆菌产碱性蛋白酶酶解得到的滤液中加入1.0~1.9%木瓜蛋白酶，超声波辅助酶解，酶解温度为50~55℃，酶解pH为6.0~6.7，酶解时间为20~28min，酶解结束后灭酶，过滤，取滤液。
5.根据权利要求1所述的一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法，其特征在于：所述的超滤步骤为：先使用15~20kDa的超滤膜对酶解液超滤，取滤过液，再使用规格为4~6kDa的超滤膜超滤，取滤过液。
6.根据权利要求1所述的一种利用鱼溶浆生产蛋白粉产品的方法，其特征在于：所述的冷冻干燥步骤为：预冻：-20~-15℃预冻3~5h；冷冻干燥：-20~-15℃，0~4Pa冷冻干燥3~4h，-5~0℃，6~14Pa冷冻干燥1~2h；升华干燥：13~20℃，50~60Pa升华干燥2~3h；解析干燥：5~10℃，3~5Pa解析干燥2~4h，得到蛋白粉产品。
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