CN106381322B - 一种制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法，其是将脱脂南极磷虾粉进行微细粉粹处理和超声辅助水洗，得到预脱氟脱盐的脱脂南极磷虾粉，向其中与其质量比为1：3～20的水，加入蛋白酶，在pH 5.0～10.0、温度25～68℃的条件下酶解2～10h，酶解结束后灭酶，静置冷却过滤得酶解清液，过纳滤膜脱盐脱氟后浓缩，进行喷雾干燥，得到低氟低盐磷虾低聚肽产品。本发明所提供的一种制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法，通过预处理、蛋白酶、纳滤膜、干燥方式等相关优选，使制得的磷虾低聚肽产品品质极高，且得率高可推广于大规模工业化生产，同时也填补了我国在低氟低盐磷虾低聚肽制备的相关技术空白。

Description

一种制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法
技术领域
本发明属于海洋生物深加工领域，具体涉及一种制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法。
背景技术
生活在南大洋的南极大磷虾(euphausia superba)，通常称为南极磷虾，其生物储量达5～10亿吨，是全球单一物种蕴藏最大的生物资源。南极磷虾富含优质蛋白，被誉为“地球上最大的动物蛋白库”。2010年“南极海洋生物养护公约”(CCAMLR)对磷虾的捕捞量限定为62万吨，但当前南极磷虾年捕捞量远远低于这一限额，如若合理开发利用南极磷虾这一生物资源，可缓解当今世界因陆地资源匮乏所带来的资源紧张难题。
南极磷虾的捕捞及开发始于20世纪60年代，由于磷虾体内生物酶类丰富，捕捞后易自溶，因此多在船上经脱水干燥处理加工为磷虾粉。南极磷虾粉中粗蛋白含量高达60％以上，且氨基酸组成比例均衡，必需氨基酸组成模式符合FDA/WHO的标准，是一种优质蛋白源，(2013，我国对南极磷虾的开发研究及其产业化利用现状)但遗憾的是，目前由于磷虾产品的目标市场偏向于作为高端保健品的磷虾油，而磷虾蛋白粉作为生产磷虾油的副产物，多用于水产饲料养殖业，使这一资源得到了极大的浪费。且由于高氟特性，限制了在食品领域的应用。
低聚肽又称寡肽，是指一类由2～10个氨基酸组成，分子量180～1000Da的功能性生物活性肽。在生物体内，低聚肽比蛋白质更易消化，吸收速率快于氨基酸，同时具有独特的生理功能和理化性质。(2001，大豆低聚肽的功能性质及其应用)。低聚肽的来源目前大多集中于植物，如大豆、玉米等，动物源性低聚肽研究相对较少，尤其对南极磷虾低聚肽的开发研究目前尚少。国内专利CN201410629513以南极磷虾为原料，通过水酶法制油的同时获取磷虾蛋白肽，对蛋白肽的分子量的分布难以达到精准控制。国内专利CN20140465244以南极磷虾粉为原料制备水溶性南极磷虾活性肽，通过添加额外脱氟剂，如磷酸钙、磷酸一氢钙等脱除肽溶液中氟化物，操作复杂，而且会带来肽的损失；并且也并未提及水解蛋白肽分子量分布的情况。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法中存在的问题，提出了本发明。
因此，本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种以脱脂南极磷虾粉为原料制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法，其特征在于，包括，将脱脂南极磷虾粉进行微细粉粹处理和超声辅助水洗，得到预脱氟脱盐的脱脂南极磷虾粉，向其中与其质量比为1：3～20的水，加入蛋白酶，在pH 5.0～10.0、温度25～68℃的条件下酶解2～10h，酶解结束后灭酶，静置冷却过滤得酶解清液，过纳滤膜脱盐脱氟后浓缩，进行喷雾干燥，得到低氟低盐磷虾低聚肽产品。
作为本发明所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法的一种优选方案，其中：所述超声辅助水洗，其是保持料水质量比为1:1～20，在温度4～40℃、超声强度0.05～0.09W/cm3、搅拌速率100～800r/min的条件下超声搅拌水洗10～40min，抽滤。
作为本发明所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法的一种优选方案，其中：所述蛋白酶为Alcalase、Flavourzyme、中性蛋白酶PROTIN SD-NY10、碱性蛋白酶NS 37071或碱性蛋白酶PROTIN SD-AY10中的一种或几种，其蛋白酶添加量为底物质量的0.1～5％。
作为本发明所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法的一种优选方案，其中：所述蛋白酶为Alcalase和/或Flavourzyme，其添加方法为向预处理后的物料加入物料质量1～2％的Alcalase，保持pH9.5～10、40～45℃的条件反应130～170min，再添加物料质量2～3％的Flavourzyme，保持pH 8～10、45～50℃的条件反应100～150min。
作为本发明所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法的一种优选方案，其中：所述喷雾干燥，其进风温度为180～230℃，出风温度为80～105℃，进料速度为1～4kg/h。
作为本发明所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法的一种优选方案，其中：所述过纳滤膜，其操作压力为0.4～0.8Mpa，处理温度为10～30℃。
作为本发明所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法的一种优选方案，其中：所述灭酶，其是将混合液升温至75～99℃，灭酶5～30min。
作为本发明所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法的一种优选方案，其中：所述浓缩，其是将固形物含量浓缩至10～20％。
作为本发明所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法的一种优选方案，其中：所述微细粉粹处理，其是采用高精密微细粉碎机进行粉碎，功率为18.5 kW，转速为9000 r/min。
作为本发明所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法的一种优选方案，其中：所述将脱脂南极磷虾粉进行微细粉粹处理，其是将粒径在3 mm以上的脱脂南极磷虾粉粉碎至粒径为15～20μm的微细颗粒。
本发明所具有的有益效果：
(1)本发明经微细粉碎和超声辅助水洗预处理，可脱除原料中10～50％的氟及30～90％盐同时提高水解度，可使得纳滤膜去盐去氟更彻底。
(2)本发明优选喷雾干燥方式，并进一步优选了喷雾干燥的条件，使得产品喷雾干燥后颗粒细、腥味少。
(3)利用本发明制得的磷虾低聚肽产品品质极高，且得率高可推广于大规模工业化生产，同时也填补了我国在低氟低盐磷虾低聚肽制备的相关技术空白。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
研究表明，平均分子量为1kDa和3kDa的吸收速率高于平均分子量20kDa的磷虾低聚肽，平均分子量1kDa的多肽吸收速率高于平均分子量3kDa的多肽。多肽主要通过特殊的肽运转系统被吸收。肽转运的载体主要有肽载体1型(PepT-1)和肽载体2型(PepT-2)，其中PepT-1主要是肠肽转运载体，PepT-2主要是肾脏肽转运载体。PepT-1可转运2～5肽，其中二肽的转运速度最快，五肽以上的肽则不能运转，因此分子量是影响多肽吸收率的关键因素。由此，本领域亟待解决的问题为控制磷虾低聚肽分子量小于1 kDa且降低其中氟、盐含量以提高产品品质。
微细粉碎是一种物理剪切与研磨方式，将物料通过安装有上百片切割刀片的精密定子与安装有若干动刀片的高速转子，转子在高速运转下使物料在定子与转子之间的微小间隙间受到强烈的物料剪切与研磨作用，能有效减小物料的颗粒大小。在超声辅助水洗前，进行微细粉粹，可提高蛋白质溶解度，同时增大底物表面积，增大酶和底物的接触机会，能提高酶解效果。另一方面经微细粉碎预处理的原料颗粒更加细小，可以减小由于底物浓度升高而增大的黏度对酶解反应的影响。微细粉碎同时具有简单，方便，能耗低，效率高的优点。
分子量分布检测：高效液相泵和1525紫外检测器组成的WATERS高效液相系统，采用TSK Gel2000SWXL(300 mm×7.18 mm，Tosoh，日本)作为分析柱，洗脱液为50 mmol/L磷酸缓冲溶液(pH7.2，50 mmol/L NaCl)，流速为0.5 mL/min，紫外检测器波长220 nm。洗脱液在10000 g离心15 min后，经过0.45μm膜过滤。然后将10μL的磷虾低聚肽溶液上柱，恒流洗脱。以伴清蛋白(75kDa)、牛血清蛋白(67kDa)、溶菌酶(14300 Da)、维生素B12(1350Da)和L-酪氨酸(181.19 Da)的洗脱时间绘制标准曲线。
实施例1
(1)取100g以乙醇萃取脱脂所得的南极磷虾粉(粗蛋白含量68.71％、脂肪含量1.86％，氟含量为1501mg/kg，盐含量3.04％)，采用高精密微细粉碎机进行粉碎至粒径为15～20μm的微细颗粒，功率为18.5 kW，转速为9000 r/min，然后向其中加入600g蒸馏水，于20℃下超声搅拌20min，超声强度0.06W/cm3，搅拌速率200r/min，抽滤得到预脱盐脱氟的脱脂南极磷虾粉，重复上述步骤3次，得到盐含量0.52％，氟含量878mg/kg的南极磷虾粉；
(2)向(1)中所得南极磷虾粉中加入600g蒸馏水，升温至50℃，采用NaOH水溶液调节ph至7，加入0.5g天野中性蛋白酶PROTIN SD-NY10，酶解6小时，然后升温至90℃，灭酶10min，冷却至室温后抽滤得酶解上清液，其中分子量1000Da以下的蛋白质水解物所占比例为81.7％。
(3)将(2)中所得酶解上清液过纳滤膜，操作压力为0.6Mpa，处理温度为20℃，然后浓缩至固形物含量为15％，得到富含低聚肽且低氟低盐的浓缩酶解液。
(4)将(3)中浓缩酶解液经喷雾干燥，喷雾干燥塔进风温度控制180℃，出口温度控制85℃，进料速度为2 kg/h，得到30.2g粉，其中低聚肽含量89％，分子量1000Da以下的蛋白质水解物所占比例为82.2％，氟含量18mg/kg，盐含量0.73％，产品得率30.2％。
实施例2
(1)取100g经亚临界丙烷萃取脱脂所得的南极磷虾粉(粗蛋白含量65.25％、脂肪含量2.01％，氟含量为1235.79mg/kg，盐含量2.98％)，采用高精密微细粉碎机进行粉碎至粒径为15～20μm的微细颗粒，功率为18.5 kW，转速为9000r/min，向其中加入1000g蒸馏水，于30℃下超声搅拌40min，超声强度0.09W/cm3，搅拌速率500r/min，抽滤得到盐含量1.18％，氟含量813mg/kg的南极磷虾粉；
(2)向(1)中所得南极磷虾粉中加入800g蒸馏水，升温至60℃，采用NaOH溶液调节ph至9，加入1.0g诺维信碱性蛋白酶NS 37071，酶解8小时，然后升温至80℃，灭酶20min，冷却至室温后抽滤得酶解上清液；其中分子量1000Da以下的蛋白质水解物所占比例为86.7％。
(3)将(2)中所得酶解上清液过纳滤膜，操作压力为0.4Mpa，处理温度为10℃，然后浓缩至固形物含量为18％，得到富含低聚肽且低氟低盐的浓缩酶解液。
(4)将(3)中浓缩酶解液经喷雾干燥，喷雾干燥塔进风温度控制195℃，出口温度控制90℃，进料速度为2kg/h，得到32.2g磷虾低聚肽粉，其中低聚肽含量91％，分子量1000Da以下的蛋白质水解物所占比例为80.1％，氟含量21mg/ppm，盐含量0.59％，产品得率32.2％。
实施例3
(1)取100g经正己烷萃取脱脂所得的南极磷虾粉(粗蛋白含量65.25％、脂肪含量2.98％，氟含量为1964.88mg/kg，盐含量3.01％)，采用高精密微细粉碎机进行粉碎至粒径为15～20μm的微细颗粒，功率为18.5 kW，转速为9000r/min，向其中加入1500g蒸馏水，于40℃下超声搅拌30min，超声强度0.05W/cm3，搅拌速率700r/min，抽滤，此步骤重复两次，得到盐含量1.18％，氟含量1043mg/kg的南极磷虾粉；
(2)向(1)中所得南极磷虾粉中加入900g蒸馏水，升温至60℃，采用NaOH溶液调节ph至9，加入1.0g天野碱性蛋白酶PROTIN SD-AY10，酶解8小时，然后升温至85℃，灭酶15min，冷却至室温后抽滤得酶解上清液；其中分子量1000Da以下的蛋白质水解物所占比例为83.2％。
(3)将(2)中所得酶解上清液过纳滤膜，操作压力为0.8Mpa，处理温度为30℃，然后浓缩至固形物含量为14％，得到富含低聚肽且低氟低盐的浓缩酶解液。
(4)将(3)中浓缩酶解液经喷雾干燥，喷雾干燥塔进风温度为210℃，出风温度为105℃，进料速度为3kg/h，得到34.5g磷虾低聚肽粉，其中低聚肽含量88.3％，分子量1000Da以下的蛋白质水解物所占比例为90.3％，氟含量25mg/ppm，盐含量1.19％，产品得率34.5％。
实施例4
(1)取100g经正己烷萃取脱脂所得的南极磷虾粉(粗蛋白含量65.43％、脂肪含量2.90％，氟含量为1958.76mg/kg，盐含量3.03％)，采用高精密微细粉碎机进行粉碎至粒径为15～20μm的微细颗粒，功率为18.5 kW，转速为9000r/min，向其中加入1400g蒸馏水，于35℃下超声搅拌30min，超声强度0.07W/cm3，搅拌速率600r/min，抽滤，此步骤重复两次，得到盐含量1.18％，氟含量1043mg/kg的南极磷虾粉；
(2)向(1)中所得南极磷虾粉加入其质量1％的Alcalase，保持pH9.5、40℃的条件反应130min，再添加所得南极磷虾粉质量2％的Flavourzyme，保持pH 10、50℃的条件反应100min。在此条件下，分子量1000Da以下的蛋白质水解物为89.8％。然后升温至85℃，灭酶15min，冷却至室温后抽滤得酶解上清液；其中分子量1000Da以下的蛋白质水解物所占比例为89.8％。
(3)将(2)中所得酶解上清液过纳滤膜，操作压力为0.8Mpa，处理温度为20℃，然后浓缩至固形物含量为10％，得到富含低聚肽且低氟低盐的浓缩酶解液。
(4)将(3)中浓缩酶解液经喷雾干燥，喷雾干燥塔进风温度为200℃，出风温度为105℃，进料速度为3kg/h，得到34.5g磷虾低聚肽粉，其中低聚肽含量88.3％，分子量1000Da以下的蛋白质水解物所占比例为90.3％，氟含量25mg/ppm，盐含量1.19％，产品得率44.5％。
超微粉碎后的南极磷虾粉更便于酶和水分的迁移，在南极磷虾粉中分布更均匀，便于酶解和同成分物料分子间的交联，产品最终效果更好。而实验表明，如果粉碎过细，酶解和同成分物料分子间的交联的效率反而降低。
超声辅助清洗是利用超声波在液体中的空化作用、加速作用及直进流作用对物料进行直接或间接作用，使盐氟层被分散、乳化、剥离而达到清洗目的。超声处理温度、强度、时间、搅拌转速等参数均影响着清洗效果同时还要兼顾磷虾粉中蛋白质特性，处理条件不适宜，会破坏蛋白质空间结构，使其舒展变形造成变性，从而导致磷虾粉中蛋白质溶解性降低，间接影响后续处理效果。以此观点出发，本发明优选条件为保持料水质量比为1:1～20，在温度4～40℃、超声强度0.05～0.09W/cm3、搅拌速率100～800r/min的条件下超声搅拌水洗10～40min。
磷虾蛋白包括肌球蛋白和肌动蛋白，肌球蛋白是肌肉中含量最高的蛋白质，它由两条相同的重链(223 kD)和两条轻链(22 kD和18 kD)所组成。肌球蛋白的两条轻链和重链的一部分分别构成了分子中的两个球状头部，重链的尾巴则相互缠绕形成一条长的α-螺旋结构。不同的蛋白酶对底物有不同的特异性酶切位点，同一种底物蛋白经不同的蛋白酶作用，所得到水解产物的理化性质和生物活性可能具有较大差别。经过大量实验研究，优选为蛋白酶为Alcalase、Flavourzyme、中性蛋白酶PROTIN SD-NY10、碱性蛋白酶NS 37071或碱性蛋白酶PROTIN SD-AY10中的一种或几种，进一步优选为Alcalase、Flavourzyme，其添加方法为先添加Alcalase再Flavourzyme。
酶水解明显提高了蛋白的溶解性，这是由于肽的小分子数以及肽键断裂产生的离子化氨基和羟基，使酶解产物的亲水性增强，从而提高了溶解性，在水相体系中，酶只能作用于溶解状态的底物，若底物的水溶性较差，导致酶解效率降低。于此，水解度为磷虾蛋白质水解程度的重要参数，也是控制磷虾低聚肽分子量大小的重要参数。本发明通过研究发现，酶解过程中pH值、温度、加酶量均对水解度有着同程度的影响。蛋白的酶解过程中，羧基和氨基的数量会随着肽键的打断而不断增大，而羧基的产生会导致体系的pH值不断下降，若不人为干预，则蛋白酶的活性无法保持在最佳状态，同时磷虾蛋白在碱性条件下具有较好的溶解性，但过高pH也会使蛋白酶失活影响酶解。酶是蛋白质，高温使酶蛋白的变性速度加快，有活力的酶量减少，导致酶反应速率下降，但是温度的升高也能加快酶促反应的速率，酶反应的最适温度就是这两个过程平衡的结果。在酶促反应体系中，当底物浓度超过酶浓度而使酶饱和的时候，反应速度与酶浓度变化呈正比例关系。但是加酶量的增大同时也会导致成本的增加，并且当加酶量较小时，还可以通过延长酶解时间来达到彻底水解的目的，因此需要选择一个合适的加酶量，既保证了酶解的完全进行，同时控制了经济成本。随着加酶量的增大，酶解速度明显加快，但是酶解速率的加快和水解度的提高并不是与加酶量同倍数增加。基于此，本发明优选酶解pH为5.0～10.0、温度为25～68℃，蛋白酶添加量为底物质量的0.1～5％。
随着酶解时间的增加，酶解体系的水解度也会随之增大，酶解产物中分子量较大的组分含量降低，反之分子量小的组分含量升高，有利于低聚肽的制备。但是一味的延长酶解时间也会使酶解产物中游离氨基酸含量升高，非但无法达到预期效果，还会导致经济成本增大。基于此，本发明优选酶解时间为2～10h。结合上述所言，本发明进行了进一步优选，其是向预处理后的物料加入物料质量1～2％的Alcalase，保持pH9.5～10、40～45℃的条件反应130～170min，再添加物料质量2～3％的Flavourzyme，保持pH 8～10、45～50℃的条件反应
100～150min。在此条件下，分子量1000Da以下的蛋白质水解物最高可致89.8％。
纳滤膜的传递机制主要有筛分和扩散，脱盐脱氟效果易受温度影响。氟离子主要通过扩散传递，温度升高时溶液中的离子活性升高，吸附在纳滤膜表面的离子增多，使膜表面的荷电密度增加，对氟离子的截留率增大，而另一方面氟离子以及其他盐离子在溶液中以水合离子的形式存在，温度升高水合离子半径减小，透过率增大，脱氟脱盐率减小。基于此，本发明纳滤膜工作温度优选为10～30℃。
实施例5
将实施例4中经喷雾干燥所得产品与选用实施例4中的方法采用传统工艺冷冻干燥得产品进行感官评定分析。结果见下表。
特性 冷冻干燥 喷雾干燥
形态 粉末，颗粒较大 精细粉末
杂质 无肉眼可见杂质 无肉眼可见杂质
气味 腥味 无腥味
喷雾干燥所得的低聚肽粉颗粒精细，颜色为乳白色，冷冻干燥所得的低聚肽粉颗粒粗糙，颜色稍稍偏黄，且腥味较喷雾干燥大，这可能是由于喷雾干燥过程中温度较高，一部分腥味物质受热挥发。两种干燥方式所得低聚肽产品均无结块。在喷雾干燥中进料速度过高，出口温度会降低，挂壁现象随之严重，收集困难，大量粘附在接受瓶中，这是由于进料速度增加，出口温度降低，致使喷雾干燥的黏度增大，使得水分含量增加，水分活度相应增加，黏度过大致使磷虾低聚肽粉不容易溶解，溶解度下降，需同时考虑能耗问题、干燥效果以及挂壁现象。进风温度高，则出口温度高，温度过高，有焦糊现象，水分含量、水分活度降低的同时，溶解度显著降低。当进风温度低时，挂壁现象随之严重，收集困难，大量粘附在接受瓶中，不利于对低聚肽成品的收集。基于各方面权衡，本发明优选喷雾干燥进风温度为180～230℃，进料速度为1～4kg/h。
由此可见，本发明经微细粉碎和超声辅助水洗预处理，可脱除原料中10～50％的氟及30～90％盐同时提高水解度，可使得纳滤膜去盐去氟更彻底。本发明优选喷雾干燥方式，并进一步优选了喷雾干燥的条件，使得产品喷雾干燥后颗粒细、腥味少。另外，研究表明，平均分子量为1kDa以下的磷虾低聚肽在体内吸收速率高，且本发明所提供的一种制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法，通过预处理、蛋白酶、纳滤膜、干燥方式等相关优选，控制制得的磷虾低聚肽中分子量1000Da以下的大于80％，同时确保盐含量小于2％，氟含量小于30ppm，产品得率在30～45％，可见利用本发明制得的磷虾低聚肽产品品质极高，且得率高可推广于大规模工业化生产，同时也填补了我国在低氟低盐磷虾低聚肽制备的相关技术空白。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (5)

1.一种制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法，其特征在于：包括，
将脱脂南极磷虾粉进行微细粉粹处理和超声辅助水洗，得到预脱氟脱盐的脱脂南极磷虾粉，向其中加入与其质量比为1:3～20的水，加入蛋白酶酶解，酶解结束后灭酶，静置冷却过滤得酶解清液，过纳滤膜脱盐脱氟后浓缩，进行喷雾干燥，得到低氟低盐磷虾低聚肽产品；
其中，所述微细粉粹处理，其是将粒径在3mm以上的脱脂南极磷虾粉粉碎至粒径为15～20μm的微细颗粒；所述超声辅助水洗，其是保持料水质量比为1:1～20，在温度4～40℃、超声强度0.05～0.09W/cm3、搅拌速率100～800r/min的条件下超声搅拌水洗10～40min，抽滤；所述加入蛋白酶，其加入的蛋白酶为Alcalase和Flavourzyme，其添加方法为向预处理后的物料加入物料质量1～2％的Alcalase，保持pH9.5～10、40～45℃的条件反应130～170min，再添加物料质量2～3％的Flavourzyme，保持pH 8～10、45～50℃的条件反应100～150min；所述喷雾干燥，其进风温度为180～230℃，出风温度为80～105℃，进料速度为1～4kg/h。
2.如权利要求1所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法，其特征在于：所述过纳滤膜，其操作压力为0.4～0.8Mpa，处理温度为10～30℃。
3.如权利要求1所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法，其特征在于：所述灭酶，其是将混合液升温至75～99℃，灭酶5～30min。
4.如权利要求1或2所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法，其特征在于：所述浓缩，其是将固形物含量浓缩至10～20％。
5.如权利要求1所述制备低氟低盐磷虾低聚肽的方法，其特征在于：所述微细粉粹处理，其是采用高精密微细粉碎机进行粉碎，功率为18.5kW，转速为9000r/min。
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