CN107343893A

CN107343893A - 海南地不容提取物在制备治疗痛风性关节炎制剂上的应用

Info

Publication number: CN107343893A
Application number: CN201710639690.9A
Authority: CN
Inventors: 张小坡; 金燕; 张彩云; 吴悠楠
Original assignee: Hainan Medical College
Current assignee: Hainan Medical College
Priority date: 2017-07-31
Filing date: 2017-07-31
Publication date: 2017-11-14

Abstract

本发明涉及天然药物化学和医药技术领域，公开了海南地不容提取物在制备治疗痛风性关节炎制剂上的应用。本发明所述的海南地不容提取物，可以显著降低痛风性关节炎大鼠的关节肿胀度，降低大鼠脾体指数、降低大鼠白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞水平，大鼠血中尿酸水平也有明显的下降，对痛风性关节炎治疗效果显著。本发明所述的地不容提取物可以直接使用，也可以添加相应辅料制备成一定剂型的制剂使用。

Description

海南地不容提取物在制备治疗痛风性关节炎制剂上的应用

技术领域

本发明涉及天然药物化学和医药技术领域，具体涉及海南地不容提取物在制备治疗痛风性关节炎制剂上的应用。

背景技术

痛风是一种嘌呤代谢紊乱引起的高尿酸血症疾病。发病的原因是由于体内尿酸积聚过多，沉积在关节的骨和软骨上。其中半数以上的患者首先在第1跖跗关节发病，并出现典型的痛风性关节炎。据统计，痛风性关节炎的患者中，中年男性发病率明显高于女性。而且该病起病急骤，严重者可在夜间疼醒。发病时，关节局部肿胀，皮肤暗红，压痛明显，不敢活动。发病的间歇期可持续数月或者数年，而且随着病情的加重，间歇期越来越短。临床检查表现为血尿酸升高，关节的滑液检查可查到尿酸结晶，严重者可在耳轮、耳垂、关节皮下出现痛风石。由于痛风性关节炎多伴随尿酸结晶的沉积，因此常用的治疗关节炎的药物对通风性关节炎很难发挥作用。临床上，秋水仙可以快速缓解痛风的症状，是治疗痛风的常用药。但是由于秋水仙碱具有一定的毒性，同时还具有导致腹泻和诱发呕吐的副作用，在治疗的过程中给痛风患者带来诸多的风险和不适。

海南地不容(Stephania hainanensis H.S.Lo et.Y.Tsoong)，属于防己科千金藤属山乌龟亚属山乌龟亚组，又名金不换、山乌龟，块根硕大为药用有效部位，是海南当地特有的药材；味道苦涩，性寒，有微毒，具有清热解毒、除疟、止痛等功能。海南地不容是少数民族黎族的传统医药，传统功效常用于清热解毒、抗菌抑炎、镇静止痛等。关于海南地不容的药理学研究目前甚少，多数还只是针对其生物碱成分的高效液相测定或光谱分析，更是未见其药效学的报道。

发明内容

本发明提出海南地不容提取物的在制备治疗痛风性关节制剂中的应用，同时还提出了上述海南地不容提取物的制备方法。

本发明的技术方案是这样实现的：

海南地不容提取物在制备治疗痛风性关节炎制剂上的应用。

进一步，所述的海南地不容提取物为水提取物、乙醇提取物和/或有机溶剂萃取物。

进一步，所述的萃取用有机溶剂为石油醚和/或正丁醇。

进一步，上述海南地不容水提取物的制备方法，包括以下步骤：

取海南地不容药材，粉碎后加入地不容药材质量10-20倍的水，加热至沸腾1-3h，趁热过滤，干燥，得到海南地不容水提取物。

进一步，上述海南地不容乙醇提取物的制备方法，包括以下步骤：

取海南地不容药材，粉碎后放置在容器中，向容器中加入海南地不容质量5-10倍的乙醇，加热回流提取，过滤，得到提取液，提取液过滤即得海南地不容乙醇提取物；所述的乙醇体积浓度为70-95％

进一步，上述海南地不容提有机溶剂萃取物的制备方法，包括以下步骤：

取海南地不容药材，粉碎后放置在容器中，向容器中加入地不容质量5-10倍的乙醇，加热回流提取，过滤，得到提取液，提取液过滤即得海南地不容乙醇提取物；提取液回收乙醇至无醇味烘干，采用有机溶剂萃取，即得海南地不容有机溶剂萃取物。

一种治疗痛风性关节炎的制剂，包括上述海南地不容提取物。

进一步，所述的治疗痛风性关节炎的制剂，还包括药学上可接受的辅料。

进一步，所述的制剂为片剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、注射液或者粉针剂。

本发明的有益效果：

本发明所述的海南地不容提取物，可以显著降低痛风性关节炎大鼠的关节肿胀度，降低大鼠脾体指数、降低痛风模型大鼠白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞水平，大鼠血中尿酸水平也有明显的下降，对痛风性关节炎治疗效果显著。本发明所述的地不容提取物制备方法简便，容易操作，可以直接使用，也可以添加相应辅料制备成一定剂型的制剂使用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为海南地不容提取物在造模24h内对痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀度的影响(x±s，n＝10)。

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

图2为海南地不容提取物对痛风性关节炎大鼠脾指数、肾指数的影响(x±s，n＝10)。

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

图3为海南地不容提取物对痛风性关节炎大鼠白细胞、中性粒细胞及淋巴细胞影响(x±s，n＝10)。

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

图4为海南地不容提取物对痛风性关节炎大鼠血清UA的影响(x±s，n＝10)。

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

图中，①为海南地不容乙醇提取物，②为海南地不容石油醚萃取物，③为海南地不容正丁醇萃取物。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

海南地不容水提取物的制备

称取海南地不容药材1kg，粉碎后放置在容器中，向容器中加入蒸馏水10-20L，加热至沸腾2h，趁热过滤得到海南地不容水提取物25g。

实施例2

取海南地不容药材5kg，粉碎，用体积浓度70-95％的乙醇溶液热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液(2L)，烘干，得到海南地不容的乙醇提取物90g。

实施例3

取海南地不容药材5kg，粉碎，用体积浓度70-95％的乙醇溶液热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液(2L)，将所得乙醇提取浓缩液用水稀释至10L，依次用石油醚(3L×3次)和水饱和的正丁醇(5L×3次)萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物(50g)和正丁醇萃取物(105g)。

实施例4

按实施例1-3任一项中的方法制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例5

按实施例1方法先制得水提取物，按常规口服液制法制成口服液。

实施例7

胶囊剂或颗粒剂的制备方法：按实施例1-3任一项中的方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:8的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。

实施例8

注射液的制备方法：按实施例1制得水提取物，加注射用水充分溶解，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例9

无菌粉针的制备方法：按实施例1的方法先制得水提取物，溶于无菌注射用水中，搅拌使充分溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

不同地不容提取物疗效比较

药物：海南地不容提取物分别按照实施例1～3制得。秋水仙碱片，批号161206，规格0.5mg/s，西双版纳版纳药业有限责任公司；取6片秋水仙碱，研磨，加蒸馏水至200mL，混匀配制成浓度为0.15mg/mL秋水仙碱溶液。微晶尿酸钠(MSU)，参照Coderre方法，194mL蒸馏水加6mL 1mol/L NaOH，煮沸，加1g尿酸，用1mL 1mol/L HCl调pH至7.2，搅拌冷却，4℃冰箱保存24h，去上清，用滤纸将沉淀物水分吸干，放入70℃干燥箱烘2h，取出，刮下粉末，放入研钵内研成细末，用孔径250μm的金属筛过筛，制成MSU粉末备用。

清洁级SD大鼠，雄性，体重200～220g。将大鼠随机分为18组：正常对照组、模型对照组、阳性对照组(秋水仙碱0.0015g·kg-1)、海南地不容提取物①～③(乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物)各设3个剂量组(100mg·kg-1、200mg·kg^-1、300mg·kg-1)，每组10只。造模前给药5d，1次/d，造模后继续给药。受试药组分别灌胃给予不同剂量的海南地不容提取物，正常对照组灌胃给予相应体积的水，阳性对照药灌胃给予相应剂量的秋水仙碱药液。

取1000mg MSU加9mL生理盐水，再加lmL吐温-80，加热搅拌，配制成10mL MSU混悬液(浓度为100mg·mL-1)，给药30min后大鼠右后踝关节屈曲，用手触摸可扪及两骨突部，75％医用酒精局部消毒后，用6号注射针在左右后侧踝关节背侧从45°方向插入胫骨肌腿内侧，将0.1mL MSU混悬液注入到踝关节腔，制备急性痛风性关节炎模型，伸曲、旋转运动2min，正常对照组大鼠用无菌生理盐水代替MSU混悬液。之后按照以下的方法，分别测定大鼠的不同生理指标。

1.1关节肿胀度测定

造模前在大鼠右后足踝关节三叉处外部绕踝关节用记号笔画圈做记号，测量大鼠右足至标记处排水容积两次，取平均值为给药前关节体积；造模后1h、4h、6h、24h测量大鼠右足至标记处排水容积，按公式计算肿胀度。

肿胀度(mL)＝致炎后踝关节排水容积(mL)－致炎前踝关节排水容积(mL)。

1.2血液分析

造模24h，末次给药30min后，测完指定部位的排水容积后，从大鼠眼眶后静脉丛采血5mL，其中4mL室温下自然凝血2h，3500r·min^-1离心10min，吸取血清，参照试剂盒说明书依法测定血清UA、NO含量；另1mL加10μL EDTA抗凝，使用动物血液分析仪依法测定白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数量。

1.3生化及组织学指标

在玻璃纸上用锐利的刀片从大鼠右踝关节背侧快速切断筋膜，切取踝关节三叉处除骨的全部软组织及软骨，称重并加9倍量的冰生理盐水制成10％组织匀浆，3500r·min^-1离心10min，吸取上清，参照试剂盒说明书依法测定总蛋白、NO含量；处死取脾脏、肾脏，称重，计算脾体系数和肾体系数。

以上测定数据采用统计学分析，计量资料数据结果以x±s表示，组间比较采用t检验。具体结果分析如下。由于水提取物实验数据和乙醇提取物几乎一致，差异很小，为了便于对照分析，对实验结果进行统计分析的时候只选取了乙醇提取物。

2.1海南地不容提取物对痛风性关节炎大鼠关节肿胀度的影响

与正常对照组相比，模型组大鼠踝关节肿胀度在造模后1-6h内均显著升高(P<0.01)，说明造模成功。

造模后1h，与模型组相比，秋水仙碱组、海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物各剂量组大鼠踝关节肿胀度均显著下降(P<0.01)；造模后4h，与模型组相比，秋水仙碱组、海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物各剂量组大鼠踝关节肿胀度均显著下降(P<0.01)；造模后6h，与模型组相比，秋水仙碱组、海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物高剂量组大鼠踝关节肿胀度均显著下降(P<0.05)；海南地不容提取物乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物中，低剂量组大鼠踝关节肿胀度亦有不同程度降低的趋势。

可以看出，本发明所述的地不容提取物在100-300mg·kg^-1剂量范围内，对大鼠关节肿胀具有显著的消肿效果。结果见图1。

2.2海南地不容提取物对痛风性关节炎大鼠脾体指数、肾体指数的影响

与正常对照组相比，模型组肾体指数明显降低，脾体指数明显升高(P<0.05、0.01)；与模型对照组相比，秋水仙碱组大鼠肾体指数显著升高，脾体指数显著降低(P<0.05)；海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物高剂量组肾体指数明显上升(P<0.01)，海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物各剂量组脾体指数均有不同程度的下降(P<0.05、0.01)。提示海南地不容提取物具有提高免疫能力和抗氧化能力的作用，有助于痛风的改善见图2。

2.3对痛风性关节炎大鼠全血中血细胞水平的影响

与正常对照组相比，模型对照组的白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量有升高的趋势；与模型组相比秋水仙碱和海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物高剂量组大鼠的白细胞、中性粒细胞合淋巴细胞数量明显减少(P<0.05、0.01)，海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物其余各剂量组均有降低趋势。这些生化指标的显著降低，提示海南地不容提取物具有显著的抗炎作用见图3。

2.4对痛风性关节炎大鼠血清UA水平的影响

各组大鼠血尿酸值结果显示，与正常对照组相比，模型组血尿酸值明显升高(P<0.05)；与模型组相比，海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物中高剂量组大鼠血尿酸明显下降(P<0.05)。见图4。

上述试验结果表明，本发明所述的海南地不容水提取物、乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物对大鼠痛风性关节炎具有治疗作用。

不同剂量地不容提取物药效的比较

分别配置不同浓度的海南地不容水提取物、乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物，参照1.1中所述的方法，测定不同浓度对大鼠肿胀度的影响，肿胀度计算公式＝(给药组足踝体积-正常组足踝体积)/正常组足踝体积×100％。其结果如表1所示。

表1不同浓度的提取物对大鼠肿胀度的影响(％)

随着剂量的加大，各提取物对大鼠的消肿效果逐步提高，但是考虑到药物剂量过大，容易产生各种副作用及耐药性，因此，用药剂量选择100-1000mg/Kg为宜。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.海南地不容提取物在制备治疗痛风性关节炎制剂上的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的海南地不容提取物为水提取物、乙醇提取物和/或有机溶剂萃取物。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯和/或正丁醇。

4.一种海南地不容水提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.一种海南地不容乙醇提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

取海南地不容药材，粉碎后放置在容器中，向容器中加入海南地不容质量5-10倍的乙醇，加热回流提取，过滤，得到提取液，提取液过滤即得海南地不容乙醇提取物；所述的乙醇体积浓度为70-95％。

6.一种海南地不容提有机溶剂萃取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.一种治疗痛风性关节炎的制剂，其特征在于：包含权利要求4-6任一项制得的海南地不容提取物。

8.如权利要求7所述的一种治疗痛风性关节炎的制剂，其特征在于：所述的治疗痛风性关节炎的制剂，还包括药学上可接受的辅料。

9.如权利要求7所述的一种治疗痛风性关节炎的制剂，其特征在于：所述的制剂为片剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、注射液或者粉针剂。