CN107326030A

CN107326030A - 一种调控低钾耐受性的wrky转录因子及其应用

Info

Publication number: CN107326030A
Application number: CN201710441652.2A
Authority: CN
Inventors: 江元清; 杨博; 牛芳芳
Original assignee: Northwest A&F University
Current assignee: Northwest A&F University
Priority date: 2017-06-13
Filing date: 2017-06-13
Publication date: 2017-11-07
Anticipated expiration: 2037-06-13
Also published as: CN107326030B

Abstract

本发明公开了一种调控低钾耐受性的WRKY转录因子及其应用，WRKY转录因子的核苷酸如SEQ ID NO:1所示，氨基酸如SEQ ID NO:2所示。本发明还公开了所述调控低钾耐受性的WRKY转录因子在培育耐低钾植物过程中的应用。本发明首次发现拟南芥WRKY6的突变体对低钾处理敏感，而通过花椰菜花叶病毒的35S启动子，驱动AtWRKY6在拟南芥中过表达，经过比较分析转基因植株与野生型，含有本发明的AtWRKY6基因的转基因拟南芥植株的耐低钾能力比野生型Col‑0有明显提高。

Description

一种调控低钾耐受性的WRKY转录因子及其应用

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，具体地说，涉及一种调控低钾耐受性的WRKY转录因子及其应用。

背景技术

钾是植物生长与发育所必需的大量元素之一，参与很多重要的生理与代谢过程。植物缺钾的症状包括生长迟缓、光合作用效率降低、容易倒伏等。在现代农业生产中，大量地使用钾肥等化肥以维持作物的产量与品质正导致两个方面的严重问题：一是污染环境，二是土壤的板结。而我国钾矿资源缺乏，严重依赖进口。而且，由于钾矿的不可再生性，随着资源的耗竭，化肥以及农产品的价格不可避免地会上升。因此，研究植物响应、感受、适应低钾的分子机制，将对培育具有较高钾利用效率的作物新品种具有非常重要的意义。

随着基础分子生物学研究的不断深入以及对植物吸收、转运钾离子的机制的研究，分离克隆调控钾营养利用或耐低钾的基因，利用转基因手段培育钾吸收利用高效或者耐低钾的新品种，可望减少化肥的使用与环境污染，是非常有前景的热点之一。迄今为止，利用基因工程技术开展植物耐盐、抗旱方面的研究已取得了较大的进展。研究表明，将植物或其他生物中与耐盐、耐旱相关的基因转入植物中，其表达产物可以使转基因植物的抗盐、耐旱能力提高。但是，有关耐低钾胁迫的研究，报道很少。

在植物逆境胁迫的信号转导通路中，转录因子发挥着中心调控作用。目前，已鉴定、发现了一些能显著提高植物耐盐、耐旱、耐热能力的转录因子。研究表明，将这些基因在植物中过表达，可以明显提升高植物的抗逆能力。

WRKY转录因子基因最先在植物中被发现，构成一个中等规模的基因家族，它们编码的蛋白一般通过结合到靶基因上的启动子区域的W盒元件而调节靶基因的转录水平。研究表明，WRKY家族的成员参与调控多种生理过程，如抗病反应、盐害、叶片衰老、低磷、脱落酸以及茉莉酸应答等。但是，有关WRKY转录因子在耐低钾方面的研究还没有任何报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种调控低钾耐受性的WRKY转录因子及其应用，首先根据拟南芥根系的表达谱芯片数据，筛选了多个拟南芥的WRKY基因的T-DNA插入突变体在低钾处理下的表型，鉴定了调控低钾敏感性的WRKY6转录因子基因，然后设计基因特异性引物，从拟南芥cDNA中克隆获得WRKY6转录因子全长cDNA，在拟南芥中进行功能验证。

其具体技术方案为：

一种调控低钾耐受性的WRKY转录因子，其核苷酸如SEQ ID NO:1所示，氨基酸如SEQ ID NO:2所示。

本发明所述调控低钾耐受性的WRKY转录因子在培育耐低钾植物过程中的应用。

进一步，所述植物为拟南芥和油菜。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明首次发现拟南芥WRKY6的突变体对低钾处理敏感，而通过花椰菜花叶病毒的35S启动子，驱动AtWRKY6在拟南芥中过表达，经过比较分析转基因植株与野生型，含有本发明的AtWRKY6基因的转基因拟南芥植株的耐低钾能力比野生型Col-0有明显提高。

附图说明

图1是拟南芥中WRKY6基因的RT-PCR扩增，泳道1-3分别表示加cDNA模板、蒸馏水对照以及双蒸水对照的扩增结果，M表示1kb的DNA分子量标准(Fermentas)；

图2是拟南芥WRKY6基因的T-DNA插入突变体的PCR鉴定；

图3是拟南芥WRKY6基因的突变体与过表达株系的鉴定与表型分析，其中，图3A是突变体SALK_012997的T-DNA插入位置示意图，图3B是突变体的RT-PCR验证；图3C是过表达株系的定量RT-PCR筛选；图3D是突变体、野生型以及两个过表达株系在正常的培养基平板以及低钾(LK)处理平板上的表型分析；图3E是来自图3D图的主根延伸长度的统计分析，不同字母显示差异显著。

图4是拟南芥WRKY6基因的突变体与过表达株系在低钾生长条件下的耐受性分析。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

本发明涉及的拟南芥耐低钾的基因，名称为AtWRKY6，其基因座位是At1g62300,编码的蛋白含有553个氨基酸残基。

含有本发明基因的表达载体、转基因植株也在本发明的保护范围之内。

本发明的保护范围还包括基因AtWRKY6在培育耐低钾植物中的应用，该植物为拟南芥和油菜。

利用拟南芥AtWRKY6基因提高植物耐低钾的方法，是将AtWRKY6构建到过表达载体pCsGFPBT,然后导入宿主植物的细胞、组织或植株个体，得到具有耐低钾性能的植株。

以上所说的植物宿主为拟南芥和油菜。

WRKY转录因子基因是植物以及个别低等生物所特有的一类基因，其编码的蛋白序列中具有保守的WRKY结构域而得名。研究表明，WRKY转录因子调控植物的非生物逆境应答与耐受性能等方面起着重要的作用。比如，在拟南芥中过表达水稻的OsWRKY45、OsWRKY72基因后会引起ABA诱导基因的高表达，进而使植物更加抗旱、耐盐。在水稻中过表达OsWRKY45后，会增加它的抗旱性。大豆中过表达GmWRKY54，也会增加其对干旱、盐害的抗性，而过表达GmWRKY21基因的转基因拟南芥对冷害会更加耐受，过表达GmWRKY13的转基因植物则对盐害和渗透逆境更加敏感。拟南芥中过表达AtWRKY25、AtWRKY33的转基因植物的耐盐性增加。AtWRKY6、AtWRKY42以及AtWRKY75调节低磷胁迫的耐受性。

实施例1AtWRKY6基因cDNA序列的克隆与序列测定

1.根据TAIR公用数据库设计基因特异性的两个引物，以拟南芥Col-0生态型的cDNA为模板扩增基因的编码区，引物序列为：AtW6-F'：5'-TTAGGTCATGAAC AGA GGA TGGTCT GGT CTC-3'，AtW6-R:5’-CGC GGATCC CTA TTG ATT TTT GTT GTT TCC TTC-3’。

2.PCR反应体系(50μL)

10X Pfu buffer 5μL

cDNA模板：1μL

dNTPs(10mM each)1μL

Primerl(20μΜ)1μL

Primer2(20μΜ)1μL

Pfu(Fermentas)0.5μL

ddH₂0加至终体积50μL

3.PCR反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性1min，50℃复性lmin，72℃延伸1min49sec，循环35次；72℃延伸10min。

4. 1％琼脂糖凝胶电泳

PCR扩增产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测后发现在1.7kbp处有一条目的条带如附图1所示。

5.扩增片段的回收、酶切以及与pCsGFPBT载体的链接

对扩增条带采用Omega Bio-tek公司的琼脂糖胶回收试剂盒，步骤按说明书进行。

植物表达载体pCsGFPBT是含有CaMV35S启动子和HPT II(潮霉素)植物选择标记基因的双元载体，在其多克隆位点上含有限制性内切酶NcoI和BamHI位点。用限制性内切酶NcoI和BamHI双酶切载体pCsGFPBT；同时，用BspHI和BamHI双酶切目的基因片断。完全酶切的载体在1％琼脂糖凝胶上电泳分离后，经胶回收，然后与双酶切的目的基因片段连结，构建获得植物表达载体pCsGFPBT-AtWRKY6。

(I)质粒pCsGFPBT空载体和目的基因片断双酶切体系如下：

NcoI(或者BspHI)0.5μL

BamHI 0.5μL

pCsGFPBT载体或目的基因片段5μL

I0X Buffer 1.5μL

ddH₂O To 15μL

于37℃恒温水浴锅酶切3小时；

酶切产物的电泳与回收:双酶切完成后，以IXTAE为电泳缓冲液，将酶切产物进行1％琼脂糖凝胶电泳。在紫外透射仪下用洁净刀片切下pCsGFPBT中载体的11kb大片段，琼脂糖凝胶回收试剂盒(Omega Bio-tek)回收目的条带；目的基因片段用PCR产物纯化试剂盒(Omega Bio-tek)回收。

连接：经酶切的pCsGFPBT载体片段和目的基因片段以摩尔比1:3的比例进行16℃连接2小时；

采用常规的CaCl₂介导的热激法转化大肠杆菌DH5α感受态细胞之后，通过菌落PCR筛选阳性克隆，

本实验所用的pCsGFPBT载体，根据GenBank中的登录号DQ370426设计了上下游测序引物，所以可以用这两个引物对插入片段进行扩增，对重组质粒进行鉴定；

PCR程序：94℃预变性1min；94℃变性1min，50℃复性1min，72℃延伸l.5min，循环35次；72℃延伸10min；

PCR扩增产物用1％琼脂糖电泳检测，然后挑取两个阳性克隆摇菌，用质粒小量提取试剂盒(Omega Bio-tek)提取质粒。重组质粒送至生物公司采用ABI3730仪器双向测序。

农杆菌感受态的制备与转化

采用CaCl₂法制备根癌农杆菌GV3101的感受态细胞，采用冻融法将上述pCsGFPBT-AtWRKY6重组质粒转入农杆菌细胞。涂于含34μg/ml利福平、25μg/ml庆大霉素、50μg/ml Kan的YEB培养基平板上，28℃倒置暗培养2天。

如图2所示，菌落PCR鉴定验证重组质粒确已转入农杆菌。

菌体PCR所用引物以及扩增条件等同上述。

转基因功能验证一拟南芥转化、筛选及表型分析

拟南芥的遗传转化

首先小量培养转化后的农杆菌，然后转入大量(330ml)培养，直至OD600达到1.2。离心收集菌体，等量重悬于含有5％蔗糖、1/2x MS以及0.03％SilwetL-77的溶液中，将约5周的处于盛花前期的野生型拟南芥Col-0倒扣并使所有花序浸入悬浮菌液中，轻轻搅动蘸花30sec，取出花盆侧放于托盘中，盖盖，将托盘置暗处放置14h,然后取出营养钵并直立放置,恢复光照,继续培养植株至成熟并收获种子。

阳性植株的筛选：T1代种子用次氯酸钠溶液(包括0.03％Tween-20)消毒后，点播在1/2xMS选择培养板(含有30mg/L潮霉素)上，于4℃下层积2天，移入培养室中培养，7天后挑选潮霉素(Roche)抗性植株(长出真叶1～2对，根伸长至培养基中)并移栽到营养钵中，培养直至种子成熟，采用同样的方法筛选T2代种子得到T3代植株，并在T2代植物中挑选抗性比为3:1的单拷贝插入独立株系，并获得纯合T3代株系进行转基因拟南芥的分子检测和表型鉴定；

转基因拟南芥的RT-PCR鉴定与高表达株系的筛选

采用Plant RNA kit(Omega Bio-tek)提取野生型(Col-0)与T2代植物叶片的总RNA，经过NanoDrop1000定量后，各取2.5μg总RNA，采用RevertAid First Strand cDNASynthesis Kit(Fermentas)进行逆转录反应，按说明书进行。

定量RT-PCR筛选高表达株系

以10倍稀释的cDNA为模板，进行定量PCR反应，采用SYBR Premix Ex TaqTM‖(Perfect Real Time,TaKaRa)试剂盒，在ABI7500仪器上进行。引物如下：

AtUBQ10-F：5’-GTTCCAATCTATGAGGGATACACGC-3’

AtUBQ10-R:5’-AGAAGTTCGACTTGTCATTAGAAAGAAA-3’

AtWRKY6-F:5’-TACCACCACGGCGGCGGCTAACAT-3’

AtWRKY6-R：5'-GAAACGGCGCGGAGGCTGAGATTG-3'。

PCR体系

2X SYBR Green I mix 5μL

Primerl(20μΜ)0.2μL

Primer2(20μΜ)0.2μL

ddH₂O 2.6μL

cDNA模板2μL

Total Volume 10μL

PCR程序

95℃2min；94℃30s；60℃1min；35cycles。

根据内参基因AtUBQ10的扩增情况，计算目的基因在各个转基因株系相对野生型Col-0的表达倍数。

转基因拟南芥的表型鉴定

将T3代纯合的拟南芥株系的种子与野生型Col-0以及突变体种子，分别用次氯酸钠溶液消毒2分钟，然后用无菌水漂洗4次，点播于1/2xMS(含有1％蔗糖)培养基平板上，于4℃层积处理2天，然后放在温室中竖直生长4天，22℃培养，14h/10h光周期,光强100μmol·m^-2·s^-1。然后，将萌发4天的拟南芥幼苗(对照及转基因株系)用灭菌过的镊子小心移至1/2x MS以及只含有100μM K⁺(部分硝酸钾与磷酸二氢钾分别用硝酸铵与磷酸二氢铵代替)的类似1/2xMS的培养基表面，竖直培养3天观察表型，结果表明转AtWRKY6基因的拟南芥植株的根系生长明显比野生型的对照好，且根长明显长于野生型对照植株的根长(图3)。说明本发明的拟南芥基因AtWRKY6有助于提高植物的耐低钾的能力。此外，对各个基因型，进行倒置培养分析，以便更好地检测对于钾缺乏的敏感性。结果发现两个过表达株系均较野生型、GFP对照以及突变体株系具有更好的耐受低钾胁迫的能力(图4)。各个基因型首先在正常的1/2MS培养基上竖直生长4天，然后移苗至正常以及低钾(100μM K⁺)培养基上倒置生长7天。上下栏分别表示突变体、野生型、两个过表达株系以及转GFP对照基因的株系分别在正常的培养基平板以及低钾(LK)处理平板上的表型分析。

突变体的鉴定

从美国ABRC购得AtWRKY6基因的T-DNA插入突变体SALK_012997种子，播种在营养土表面，4℃层积处理两天后放置于温室萌发，对四周龄的幼苗，取一片真叶，用常规的2％CTAB法提取基因组DNA，溶解于1xTE缓冲液中。利用Taq酶、两对引物(LB+RP、LP+RP)，以野生型Col-0与突变体的基因组DNA作为模板，进行常规PCR扩增，然后进行1％琼脂糖凝胶电泳，根据带型筛选出纯合的突变体株系。

所用引物序列如下：

LP：5’-GAACGTATTAGCCAATCACGC-3’

RP:5’-TGTGGACGTGTCATAATTTGG-3’

LB：5’-ATTTTGCCGATTTCGGAAC-3’。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到技术方案的简单变化或等效替换均属于本发明的保护范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 西北农林科技大学

<120> 一种调控低钾耐受性的WRKY转录因子及其应用

<160> 9

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1662

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atggacagag gatggtctgg tctcactctt gattcatctt ctcttgatct tttaaaccct 60

aatcgtattt ctcataagaa tcaccgacgt ttctcaaatc ctttggcgat gtctagaatt 120

gacgaagaag atgatcagaa gacgagaata tcaaccaacg gtagtgaatt taggtttccg 180

gtgagtctct caggtattcg tgatcgtgaa gatgaagatt tttcatctgg cgttgctgga 240

gataatgacc gtgaagttcc cggcgaagtg gatttcttct ccgacaagaa atctagggtt 300

tgtcgtgaag acgacgaagg atttcgtgtg aagaaggaag aacaagatga tcgaacggac 360

gtaaataccg gtttgaatct tcgaacaact ggtaatacaa agagtgatga gtcaatgatc 420

gatgatggag aatcttccga aatggaagat aagcgtgcga aaaatgagtt ggtgaaatta 480

caagatgagt tgaagaaaat gacaatggat aatcaaaagc ttagagaatt gcttacacaa 540

gttagcaaca gttacacttc acttcagatg catcttgttt cactaatgca gcaacagcaa 600

caacagaaca ataaggtaat agaagctgct gagaagcctg aggagacgat agtaccaagg 660

caatttattg atttaggccc tacgagagca gtaggtgagg ccgaggatgt gtcaaattct 720

tcatccgaag atagaactcg ttcggggggt tcttctgcag ccgagaggcg tagtaacggg 780

aagagacttg ggcgtgaaga aagccccgaa actgagtcca acaaaattca gaaggtgaat 840

tctactaccc cgacgacatt tgatcaaacc gctgaagcta cgatgaggaa agcccgtgtc 900

tccgttcgtg cccgatcgga agctccgatg ataagcgatg gatgtcaatg gagaaaatat 960

ggccagaaga tggccaaagg gaatccttgt ccgcgggcat attaccgctg cacgatggcc 1020

acgggctgtc ccgttcgcaa acaagttcaa cgttgcgcgg aagacagatc aattctgatt 1080

acaacctacg agggaaacca taaccatccg ttgccgccag ccgcggtagc catggcttct 1140

accaccacgg cggcggctaa catgttgcta tccgggtcaa tgtctagtca cgacgggatg 1200

atgaacccta caaatttact agctagggct gttcttcctt gctccacaag catggcaaca 1260

atctcagcct ccgcgccgtt tccaaccgtc acattagacc tcacccactc acctccgcct 1320

cctaatggtt ccaatccttc ctcttccgcg gctaccaaca acaaccacaa ctcactgatg 1380

cagcggccgc aacaacaaca acagcaaatg acgaacttac ctccgggaat gctacctcat 1440

gtaataggcc aggcattgta taaccaatcc aagttctcgg ggctgcagtt ctctggtggc 1500

tctccctcga cggcagcgtt ttctcagtca cacgcggtgg ctgatacaat aacggcactc 1560

acagctgacc cgaatttcac ggcggctctt gcagccgtta tttcttctat gatcaatggt 1620

acgaaccacc acgacggcga aggaaacaac aaaaatcaat ag 1662

<210> 2

<211> 553

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Met Asp Arg Gly Trp Ser Gly Leu Thr Leu Asp Ser Ser Ser Leu Asp

1 5 10 15

Leu Leu Asn Pro Asn Arg Ile Ser His Lys Asn His Arg Arg Phe Ser

20 25 30

Asn Pro Leu Ala Met Ser Arg Ile Asp Glu Glu Asp Asp Gln Lys Thr

35 40 45

Arg Ile Ser Thr Asn Gly Ser Glu Phe Arg Phe Pro Val Ser Leu Ser

50 55 60

Gly Ile Arg Asp Arg Glu Asp Glu Asp Phe Ser Ser Gly Val Ala Gly

65 70 75 80

Asp Asn Asp Arg Glu Val Pro Gly Glu Val Asp Phe Phe Ser Asp Lys

85 90 95

Lys Ser Arg Val Cys Arg Glu Asp Asp Glu Gly Phe Arg Val Lys Lys

100 105 110

Glu Glu Gln Asp Asp Arg Thr Asp Val Asn Thr Gly Leu Asn Leu Arg

115 120 125

Thr Thr Gly Asn Thr Lys Ser Asp Glu Ser Met Ile Asp Asp Gly Glu

130 135 140

Ser Ser Glu Met Glu Asp Lys Arg Ala Lys Asn Glu Leu Val Lys Leu

145 150 155 160

Gln Asp Glu Leu Lys Lys Met Thr Met Asp Asn Gln Lys Leu Arg Glu

165 170 175

Leu Leu Thr Gln Val Ser Asn Ser Tyr Thr Ser Leu Gln Met His Leu

180 185 190

Val Ser Leu Met Gln Gln Gln Gln Gln Gln Asn Asn Lys Val Ile Glu

195 200 205

Ala Ala Glu Lys Pro Glu Glu Thr Ile Val Pro Arg Gln Phe Ile Asp

210 215 220

Leu Gly Pro Thr Arg Ala Val Gly Glu Ala Glu Asp Val Ser Asn Ser

225 230 235 240

Ser Ser Glu Asp Arg Thr Arg Ser Gly Gly Ser Ser Ala Ala Glu Arg

245 250 255

Arg Ser Asn Gly Lys Arg Leu Gly Arg Glu Glu Ser Pro Glu Thr Glu

260 265 270

Ser Asn Lys Ile Gln Lys Val Asn Ser Thr Thr Pro Thr Thr Phe Asp

275 280 285

Gln Thr Ala Glu Ala Thr Met Arg Lys Ala Arg Val Ser Val Arg Ala

290 295 300

Arg Ser Glu Ala Pro Met Ile Ser Asp Gly Cys Gln Trp Arg Lys Tyr

305 310 315 320

Gly Gln Lys Met Ala Lys Gly Asn Pro Cys Pro Arg Ala Tyr Tyr Arg

325 330 335

Cys Thr Met Ala Thr Gly Cys Pro Val Arg Lys Gln Val Gln Arg Cys

340 345 350

Ala Glu Asp Arg Ser Ile Leu Ile Thr Thr Tyr Glu Gly Asn His Asn

355 360 365

His Pro Leu Pro Pro Ala Ala Val Ala Met Ala Ser Thr Thr Thr Ala

370 375 380

Ala Ala Asn Met Leu Leu Ser Gly Ser Met Ser Ser His Asp Gly Met

385 390 395 400

Met Asn Pro Thr Asn Leu Leu Ala Arg Ala Val Leu Pro Cys Ser Thr

405 410 415

Ser Met Ala Thr Ile Ser Ala Ser Ala Pro Phe Pro Thr Val Thr Leu

420 425 430

Asp Leu Thr His Ser Pro Pro Pro Pro Asn Gly Ser Asn Pro Ser Ser

435 440 445

Ser Ala Ala Thr Asn Asn Asn His Asn Ser Leu Met Gln Arg Pro Gln

450 455 460

Gln Gln Gln Gln Gln Met Thr Asn Leu Pro Pro Gly Met Leu Pro His

465 470 475 480

Val Ile Gly Gln Ala Leu Tyr Asn Gln Ser Lys Phe Ser Gly Leu Gln

485 490 495

Phe Ser Gly Gly Ser Pro Ser Thr Ala Ala Phe Ser Gln Ser His Ala

500 505 510

Val Ala Asp Thr Ile Thr Ala Leu Thr Ala Asp Pro Asn Phe Thr Ala

515 520 525

Ala Leu Ala Ala Val Ile Ser Ser Met Ile Asn Gly Thr Asn His His

530 535 540

Asp Gly Glu Gly Asn Asn Lys Asn Gln

545 550

<210> 3

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gttccaatct atgagggata cacgc 25

<210> 4

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

agaagttcga cttgtcatta gaaagaaa 28

<210> 5

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

taccaccacg gcggcggcta acat 24

<210> 6

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

gaaacggcgc ggaggctgag attg 24

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

gaacgtatta gccaatcacg c 21

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

tgtggacgtg tcataatttg g 21

<210> 9

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

attttgccga tttcggaac 19

Claims

1.一种调控低钾耐受性的WRKY转录因子，其特征在于，其核苷酸如SEQ ID NO:1所示，氨基酸如SEQ ID NO:2所示。

2.权利要求1所述调控低钾耐受性的WRKY转录因子在培育耐低钾植物过程中的应用。

3.根据权利要求2所述调控低钾耐受性的WRKY转录因子在培育耐低钾植物过程中的应用，其特征在于，所述植物为拟南芥和油菜。