CN107325983A

CN107325983A - 一株微白黄链霉菌及其应用

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Publication number: CN107325983A
Application number: CN201710534622.6A
Authority: CN
Inventors: 马媛媛; 薛泉宏; 来航线
Original assignee: Shaanxi Botai Bioengineering Co ltd
Current assignee: Shaanxi Botai Bioengineering Co ltd
Priority date: 2017-07-03
Filing date: 2017-07-03
Publication date: 2017-11-07
Anticipated expiration: 2037-07-03
Also published as: CN107325983B

Abstract

本发明属于植物病虫害生物防治技术领域，具体公开了一株微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavusT4，该菌于2017年5月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2017237。还公开了该菌株在防治植物病害、农作物土传根系病害以及线虫中的应用，另外还公开了该菌在提高农作物种子活力中的应用。本发明提供的放线菌微白黄链霉菌T4可产植物生长刺激物质吲哚乙酸和植物生长促生物质铁载体，可显著促进农作物的根系生长，增强农作物根系活力，显著提高农作物种子活力；且对包括根结线虫及根系土传病害在内的连作障碍具有良好的修复能力。

Description

一株微白黄链霉菌及其应用

技术领域

本发明涉及植物病虫害生物防治技术领域，具体涉及一株微白黄链霉菌及其应用。

背景技术

连作障碍已成为影响设施园艺及专业化种植产业发展的限制性因素。由连作引起的植物根结线虫病就是连作障碍的一种形式，该病害可造成全世界每年高达1000多亿美元的经济损失。化学农药虽能在一定程度上减轻根结线虫病害，但由于其在农产品中残留危害食品安全，在土壤中残留引起环境污染，导致化学杀线剂在生产上的应用受到限制。

无公害的微生物防治是目前解决植物连作障碍的主要途径之一。筛选植物病虫害生防微生物，探索这些微生物对根结线虫病的防效及其作用机制，是利用微生物防控根结线虫病的基础。

放线菌可产多种抗生素及其他生物活性物质，具有孢子抗逆性强、菌剂保藏时间长及诱导寄主植物产生系统抗性等优点。另外，放线菌中的链霉菌属产生抗生活性物质的菌种比例最高。现已发现的抗菌活性物质中，约70％来源于微生物，而微生物产生的抗菌活性物质中，约70％来源于放线菌，放线菌产生的抗菌活性物质中，70％来源于链霉菌。因此，链霉菌中可能有较高比例的产杀虫物质产生菌。因此，从放线菌中筛选具有杀线虫活性且对农作物具有防病促生作用的多功能放线菌，对包括根结线虫在内的土壤连作障碍修复具有重要意义。但目前生产上尚无可用于根结线虫防治的放线菌制剂。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供1株具有杀线虫及抗病活性且能促进植物生长的多功能放线菌，同时提供该菌在防病促生方面的应用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现。

(一)一株微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4，于2017年5月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO: M 2017237，地址为武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编：430072。

所述微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4的16S rDNA序列如SEQ IDNo.1所示。

所述微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4产次级代谢产物吲哚乙酸和铁载体。

(二)微白黄链霉菌的应用

(1)微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在防治植物病害中的应用。

(2)微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在防治农作物土传根系病害中的应用。

(3)微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在防治线虫中的应用。

(4)微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在防治根结线虫中的应用。

(5)微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在提高农作物种子活力中的应用。

(6)微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在植物促生中的应用。

(7)微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在促进土壤中有益微生物生长和抑制有害微生物生长中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供的放线菌微白黄链霉菌T4可产植物生长刺激物质吲哚乙酸和植物生长促生物质铁载体，可显著促进农作物的根系生长，增强农作物根系活力，显著提高农作物种子活力；另外，本发明提供的微白黄链霉菌T4对包括根结线虫及根系土传病害在内的连作障碍具有良好的修复能力；微白黄链霉菌T4对秀丽隐杆线虫的校正致死率可达95.4％；微白黄链霉菌T4的无细胞发酵滤液对农作物土传根系病害病原真菌尖孢镰刀菌及腐皮镰刀具有较强的拮抗作用，其可促进农作物根区土壤中有益菌生长，并抑制植物病原菌生长。

附图说明

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明。

图1为微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4的系统发育树；

图2为微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4的菌落形态；

图3为微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4菌体形态的扫描电镜图；其中，A为菌丝体；B为孢子链；C为孢子；D为孢子表面；

图4为微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4代谢产物中的4种植物激素标准样品的气相色谱分析结果图；其中，横坐标为时间，纵坐标为毫吸光度，单位是mAU；a为激动素，b为吲哚-3-乙酸，c为天然脱落酸；d为6-苄氨基嘌呤；

图5为微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4代谢产物中吲哚乙酸的气相色谱分析结果图；其中，横坐标为时间，纵坐标为毫吸光度，单位是mAU； b为吲哚-3-乙酸；

图6为微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4处理与对照盆栽番茄根系分类标准图；其中，a为正常健康根系，b为轻病根，c为重病根。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域的技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。

本发明提供一株放线菌，具体为微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4，该菌于2017年5月4日保藏于在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO: M 2017237。

本实施例所用的试验材料及其对试验材料的处理如下：

(1)杀线虫放线菌：微白黄链霉菌T4，生防链霉菌，分离筛选自中国西北甜瓜健株根区土壤。供试菌剂为固态菌粉，由T4通过固态发酵制备，菌剂的活菌数为1.70×10¹⁰CFUg^-1。

(2)番茄品种：厚皮毛粉802，属茸毛型高秧粉红果。

(3)病土：2014年9月采自陕西省杨陵区孟家寨农户连作4年以上的日光温室染病番茄根区。在番茄盛果期，挑选根结线虫侵害严重的番茄，拔出病株后用取样铲将表层5cm左右的浮土除去，采集根系分布区5～20cm土壤装入塑料自封袋内充分混匀，作为温室盆栽试验的病土接种材料。经贝尔曼浅盘法测定，病土中的线虫密度为80万条·kg^-1。

(4)盆栽土壤：塿土，采集相同类型的非连作健康土壤0～20cm耕层土壤，风干，破碎过10mm筛混匀。

实施例1菌株的筛选及鉴定

1.试验方法：

1.1分离筛选：采用高氏1号琼脂及稀释平皿涂抹法从甜瓜健株根区土壤中分离筛选，该菌株具有抗病促生作用。

1.2菌株鉴定

形态特征：菌落形态，通过稀释平皿涂抹法获得单菌落，观察菌落形态、大小、边缘状况、隆起程度、表面光泽、粘稠度及菌落颜色等特征。细胞形态：扫描电镜观察。16S rDNA序列分析获取序列后，在NCBI数据库中通过Blast 程序进行相似度搜索，采用Mega 5.0软件中的Neighbor-joining法将同源性较高的菌株序列构建系统发育树。

2.试验结果：

Streptomyces albidoflavusT4的16S rDNA序列如下：

GTCGAACGATGAACCGCTTTCGGGCGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATATGACCGTCTGCCGCATGGTGGATGGTGTAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAGTGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCAACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAACGTCTGGAGACAGGCGCCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCCTTGTGGTGCTGGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGTGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGGAGCTGTCGAAGGTGGGACTGGCGAT TGGGACGAA

采用Blast软件在GenBank数据库中进行序列相似性搜索，调取与T4相似性较高的9株链霉菌属相关典型菌株，用CLUSTALX 2.0软件进行序列相似性分析，Neighbor-Joining法构建系统进化树，系统发育树如图1所示。

从图1看出，放线菌T4与微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)和达格斯坦链霉菌(Streptomyces daghestanicus)在同一系统进化分支上，T4与微白黄链霉菌的相似度为99.52％,与达格斯坦链霉菌的相似度为99.31％。综合16S rDNA序列分析结果及形态与生理生化特征，将菌株T4鉴定为微白黄链霉菌 (Streptomyces albidoflavus)。

Streptomyces albidoflavusT4菌落形态见图2，由图可知，菌落直径 12-15mm，菌落表面的气生菌丝形成不完整灰白色皮革状菌膜，菌落中央菌膜缺失，菌落边缘形成约2mm宽的深灰色孢子环，菌落背面呈棕黑色。

Streptomyces albidoflavusT4菌体形态的扫描电镜图见图3。

实施例2 Streptomyces albidoflavusT4促生特性测定

1.试验方法

1.1产吲哚乙酸(IAA)能力：在无菌条件下，挑取平板上己经活化好的Streptomyces albidoflavusT4菌株单菌落转接到高氏1号液体培养基上，30℃，120rpm条件下摇床培养8天，发酵液用离心法除去菌体，所得上清液用微孔滤膜(0.22μm)抽滤除菌，获得无细胞发酵滤液，置4℃冰箱保存备用；以乙酸乙酯作为萃取剂提取T4无细胞发酵滤液中的次级代谢产物，利用蒸馏装置从Streptomyces albidoflavusT4无细胞发酵滤液萃取物中蒸馏出次级代谢产物，通过气相色谱(HPLC)定性分析其次级代谢产物中有无吲哚乙酸。采用 Salkowski比色法测定T4的次级代谢产物中的吲哚乙酸(IAA)产量。

1.2产铁载体能力：吸取离心后的上清液1mL，加入1mL 0.5mol·L^-1盐酸，1mL钼酸钠溶液，1mL 1mol·L^-1氢氧化钠溶液。若颜色变红，且1个小时内保持红色不变，则表明发酵液中含有儿茶酚类铁载体。

2结果与分析

Streptomyces albidoflavusT4无细胞发酵滤液中的活性成分见表1及图4、图 5气相色谱分析结果。

表1 Streptomyces albidoflavusT4促生特性

由图4和图5可知，Streptomyces albidoflavusT4次级代谢产物中含有吲哚乙酸。由表1可知，在Streptomyces albidoflavusT4的次级代谢产物中，吲哚乙酸含量为20.26±0.4mg·L^-1，同时具有产铁载体能力。

吲哚乙酸(IAA)是植物体中最为普遍的生长素类物质，StreptomycesalbidoflavusT4产生这类植物激素，对根系生长作用显著，能增强植物根系活力，使植物获得充分的营养成分，促进植物更好的生长。此外，IAA可提高植物光合作用效率。铁载体对Fe³⁺有极强的络合能力，能捕获Fe³⁺并将其运输进入植物细胞，为植物提供养分Fe，促进植物光合作用。

实施例3 Streptomyces albidoflavusT4杀线虫作用测定

1.试验方法

1.1 Streptomyces albidoflavusT4发酵液制备：在无菌条件下，挑取平板上己经活化好的Streptomyces albidoflavusT4菌株单菌落转接到高氏1号液体培养基上，30℃，120rpm条件下摇床培养8天后取出，发酵液用离心法除去菌体，所得上清液用微孔滤膜(0.22μm)抽滤除菌，获得无细胞发酵滤液，置4℃冰箱保存备用。

1.2秀丽隐杆线虫悬液的制备：向长满线虫的培养皿注入5mL无菌水，摇晃30s后倾斜放置2min，收集富集在培养皿边缘含有大量秀丽隐杆线虫的无菌水于10mL离心管内，振荡器振荡10秒，吸取1mL液体均匀涂布在方格计数板上，立体显微镜下计数。将线虫悬液用M9溶液稀释至5000条/mL。

1.3线虫致死率测定：在96孔板内进行，每孔内加入130μL放线菌 StreptomycesalbidoflavusT4无细胞发酵滤液和20μL秀丽隐杆线虫悬液，24h 后在立体显微镜下观察线虫形态，虫体僵直不动视为死亡。统计各孔内死亡线虫数目，计算致死率，并以加130μL未接菌处理滤液(未接Streptomyces albidoflavusT4的液体培养基经与接菌处理同步离心、微孔滤膜抽滤所得滤液) 和20μL秀丽隐杆线虫悬液处理为对照进行校正，计算校正致死率。致死率和校正致死率分别按照式(1)和式(2)进行。以上致死率测定均重复8次。

校正致死率(％)＝T4致死率－培养液致死率 (2)

2.结果与分析

由表2可知，Streptomyces albidoflavusT4对秀丽隐杆线虫24h致死率达到95.4％。

表2 Streptomyces albidoflavusT4在24h内的杀线虫活性

注：同列不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。

实施例4 Streptomyces albidoflavusT4对病原真菌的抑制率测定

1.测定方法：

1.1无细胞发酵滤液制备：将T4以一定比例的接种量接种到装有60mL高氏1号液体培养基的250mL三角瓶中，28℃、160r/min摇床振荡培养8d，以不接放线菌高氏1号液体培养基为对照。发酵结束后，发酵液先经定性滤纸粗滤，所得滤液用微孔滤膜(0.22μm)抽滤除菌，得无细胞发酵滤液，置该滤液于灭菌容器中4℃保藏备用。

1.2相对抑菌率测定：采用生长速率法

含无细胞发酵滤液平皿制备：将T4无细胞发酵滤液与冷却至50℃左右的 PDA培养基按1：4体积比混合均匀倒平板，以不接菌的PDA培养基(CK：振荡培养8d的灭菌高氏1号液体培养基与PDA培养基按1：4体积比混合)为对照，待培养基凝固后接种。

接种：将提前培养好的病原菌平皿用直径为7mm灭菌打孔器打成菌饼，用竹签挑取病原菌菌饼接种在含无细胞发酵滤液及对照平皿中央，每处理设3 个重复皿，28℃正置培养4d，每隔24h测量1次菌落直径(用十字交叉法测量，取平均值)，并据式(3)计算相对抑菌率。

2.结果与分析

从表3可知，Streptomyces albidoflavusT4无细胞发酵滤液对农作物土传根系病害病原真菌尖孢镰刀菌及腐皮镰刀有较强的拮抗作用，抑菌率分别为 21.2％-25.2％及5.4％-10.1％，表明该菌的代谢产物除对线虫有杀虫作用外，对农作物根腐病害病原菌也有一定抑制作用，对减轻根系病害有一定效果。

表3 Streptomyces albidoflavusT4对病原真菌腐皮镰刀菌(F.solani.)和尖孢镰刀菌(F.oxysporum)的相对抑菌率％

实施例5 Streptomyces albidoflavusT4对种子活力的影响测定

1.试验方法

分别用无菌水(CK)、T4无细胞发酵滤液原液以及稀释10倍、100倍、500 倍的发酵液浸泡番茄和玉米种子24h，根据科技文献《对种子活力测定方法—TTC定量法的改进》采用改良后的TTC法测定种子活力。

2.试验结果及分析

由表4可知，Streptomyces albidoflavusT4处理番茄种子活力较对照增加113％，玉米种子活力较对照增加14.4％，与对照差异均显著(P＜0.05)。即 StreptomycesalbidoflavusT4发酵滤液可提高番茄、玉米种子活力。

表4 Streptomyces albidoflavusT4对番茄和玉米种子活力的影响

注：同行不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。

实施例6 Streptomyces albidoflavusT4的促生防病效果测定

1.盆栽试验方法

1.1试验方案及实施

设2个处理：①CK：每盆装20kg健康土壤(采自小麦田20cm耕层土壤，该土壤中无连作番茄根区大量存在的根结线虫及其他病原菌)。②T4：每盆装 20kg健康土壤，再按1.0g/kg用量均匀拌入20g Streptomyces albidoflavusT4固态菌粉，充分混匀。试验于2016年5月至10月在杨凌金麒麟生物科技有限公司大棚内进行。在底部直径×顶部直径×高为10cm×20cm×14cm的小花盆内育苗，按1.5kg/盆量装入健康土壤，在其上覆盖0.5kg病土(采自连作番茄根结线虫严重侵染病株根区，该土壤中有大量根结线虫及能引起根系病害的病原真菌)，将15粒番茄种子均匀播种在病土土层中，并覆盖少量病土。待出苗后保留3株番茄幼苗，常规管理，生长45天后用铲子小心将生长在病土上的植株连根铲起，将根系上携带病土的植株移栽至25cm×35cm×40cm大花盆内。试验于2016 年5月5日播种，2016年10月5日收获。每处理均重复8盆，3株/盆。

1.2番茄植株存活率调查

于收获期统计各个处理番茄植株存活率，存活率按照式(4)计算。

1.3番茄生物量测定

将整盆土倾倒于塑料薄膜上并使之分散，将植株从土壤中小心挖出，尽可能保持植株完整无损及根系上附着土壤不脱落，将植株置于无菌塑料袋内带回实验室，抖落并收集根上附着的土壤，用于根区土壤微生物分析；小心洗净根系，拍照后用小刀将根系上的须根部分切下，用精度0.01g天平分别测定每株番茄根系上的须根(具有吸收水分养分功能)及所余畸形膨大根(无吸收能力)的鲜质量。同步测定株高、茎粗及茎叶鲜质量。

1.4番茄根系受病害程度测定

将根系按照其被根结线虫侵染程度分为正常健康根系(未被根结线虫侵染，形态上无膨大与畸变)、轻病根(须根上有少量根结)和重病根(根结多且膨大畸变，几乎无须根)，根系分类标准见图6。将病根数占总根数的比例称为根系发病率(％)。

1.5微生物区系分析

根区土壤样品采集：将1.3中从番茄根系上抖落并收集到自封袋中的根系表面附着土壤称为根区土壤。该土壤来自根系密集分布区，其中的微生物种类及数量与根系生物学及生理生化特性关系密切，能真实反映番茄收获时根系表面及根系周围土壤的微生物现状。

微生物分离计数：采用稀释平皿培养法进行。细菌用牛肉膏蛋白胨琼脂，真菌用PDA，放线菌用高氏1号琼脂。将优势细菌、真菌及放线菌纯化后斜面保藏，用于进一步鉴定。

1.6 T4及根区土壤优势菌鉴定

优势菌指土壤微生物分离测数时平皿内数量较多、在皿内菌落总数中所占比例较高的微生物。挑取优势菌种的典型菌落，纯化后采用rDNA-ITS序列分析技术，参照科技文献《Rapid identifi cation of fungi by sequencing the ITS1 and ITS2 regions usingan automated capillary electrophoresis system》中的方法鉴定优势真菌；采用16SrRNA序列分析技术，参照《放线菌系统学：原理、方法及实践》中的方法进行优势细菌、优势放线菌以及T4的鉴定。

将对照与处理的差异称为菌剂效应，用⊿CK/％表示，按式(5)计算；样品中某种优势细菌占该样品细菌总数的比例P(％)按式(6)计算；某种优势真菌与放线菌所占比例计算与细菌相同。采用Duncan’s法进行差异显著性分析。

2.试验结果及分析

2.1 Streptomyces albidoflavusT4对番茄生长及发病率的影响

T4对番茄植株生长的影响情况如表5所示。由表5可知，T4处理番茄死亡率为0，较CK降低100％，株高较对照显著增加9.6％(P＜0.05)。茎粗较 CK增加20.0％(P＜0.05)。T4处理番茄茎叶鲜质量较对照增加15.4％。

T4对番茄植株根系的发病率的影响结果如表6所示。由表6可知，T4处理番茄根系腐烂率较CK降低41％；发病率较CK降低45％；具有吸收功能的须根部分鲜质量较CK显著增加76％(P＜0.05)。

表5各处理番茄死亡率、株高、茎粗及鲜质量(n＝24株)

注：同列不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。

表6各处理根系发病率、腐烂率及根系鲜质量

2.2 T4对番茄根区土壤微生物种类及数量的影响

从番茄根区土壤中共分离获得7株优势菌，其中优势细菌3株，优势真菌3株，优势放线菌1株。采用16Sr RNA和rDNA-ITS序列分析技术分别对优势细菌、优势放线菌和优势真菌进行分类鉴定，结果见表7。

表7番茄根区土壤中的优势微生物

番茄根区优势菌数量及微生物总量见表8。

由表8可知，T4处理后番茄根区土壤中细菌总量较CK增加14％。其中，对番茄具有抗病促生作用的优势细菌解淀粉芽孢杆菌较CK增加35％；植物根瘤菌台湾贪铜菌较对照增加17％；短小芽孢杆菌较CK增加100％。

T4处理后番茄根区土壤中真菌总量较对照降低16％，差异均显著(P＜ 0.05)。其中植物病原真菌尖孢镰刀菌较CK显著降低38％(P＜0.05)，石榴叶霉病病原菌数量较对照虽有增加，与对照无显著差异。

由表8可知，T4处理后番茄根区土壤中放线菌总量较对照虽有减少，与对照无显著差异；T4处理的根区土壤中出现了较多的有益优势放线菌灰色链霉菌。

由上述实施例6可知，向盆栽土壤中施入T4菌剂可使番茄死亡率大幅降低，并促进番茄生长。T4菌剂拌土处理番茄株高及茎粗均显著高于CK(P＜ 0.05)。另外，T4可减轻番茄根系被根结线虫侵染程度，主要表现在根结病发病率较CK降低45％，根系腐烂率较CK降低41％。

表8番茄根区优势菌数量及微生物总量

注：同行不同小写字母表示差异显著(P＜0.05).

大量研究表明，土壤发生“真菌化”是土壤质量下降的一个重要标志，而番茄连作栽培使根区土壤细菌/真菌数量比例显著降低。本发明实施例5发现，T4 使番茄根区土壤中细菌总量增加，真菌总量显著降低(P＜0.05)。由此可见， T4可抑制连作番茄根区土壤“真菌化”，防止土壤质量下降。解淀粉芽孢杆菌能抑制植物病原真菌，对番茄具有抗病促生作用，T4处理使根区土壤中解淀粉芽孢杆菌数量较CK增加。短小芽孢杆菌对番茄种子萌发、根系生长及幼苗的株高和株重具有明显的促进作用，并可诱导番茄产生抗病性，T4处理后短小芽孢杆菌较CK增加100％。灰色链霉菌可产生杀虫抗生素-缬氨霉素，而灰色链霉菌仅在T4处理后的根区土壤中作为优势菌被检出。尖孢镰刀菌是世界性分布的土传病原真菌，能引发植物严重的枯萎病，T4使该植物病原菌数量较CK显著降低。综上所述，T4可促进番茄根区土壤中有益菌生长，并抑制植物病原菌生长。

综上，本发明提供的微白黄链霉T4对番茄具有抗病促生作用，由上述各实施例试验结果可知，微白黄链霉T4可能通过产生吲哚乙酸和铁载体提高番茄种子活力、促进番茄生长，产生具有杀线活性的化合物，从而降低番茄根系根结线虫病发病率及病根腐烂率，改变并优化番茄根区土壤微生物群落结构，提高土壤质量，实现对番茄的抗病促生作用。

虽然，本说明书中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 陕西博秦生物工程有限公司

<120> 一株微白黄链霉菌及其应用

<130> 2017

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1418

<212> DNA

<213> Streptomyces albidoflavus T4

<400> 1

gtcgaacgat gaaccgcttt cgggcgggga ttagtggcga acgggtgagt aacacgtggg 60

caatctgccc tgcactctgg gacaagccct ggaaacgggg tctaataccg gatatgaccg 120

tctgccgcat ggtggatggt gtaaagctcc ggcggtgcag gatgagcccg cggcctatca 180

gcttgttggt gaggtagtgg ctcaccaagg cgacgacggg tagccggcct gagagggcga 240

ccggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtggggaata 300

ttgcacaatg ggcgaaagcc tgatgcagcg acgccgcgtg agggatgacg gccttcgggt 360

tgtaaacctc tttcagcagg gaagaagcga aagtgacggt acctgcagaa gaagcgccgg 420

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ggcgtaaaga gctcgtaggc ggcttgtcac gtcggttgtg aaagcccggg gcttaacccc 540

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Claims

1.一株微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4，于2017年5月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2017237。

2.根据权利要求1所述的微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4，其特征在于，所述微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4的16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4，其特征在于，所述微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4产次级代谢产物吲哚乙酸和铁载体。

4.权利要求1-3中任一项所述的微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在防治植物病害中的应用。

5.权利要求1-3中任一项所述的微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在防治农作物土传根系病害中的应用。

6.权利要求1-3中任一项所述的微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在防治线虫中的应用。

7.权利要求1-3中任一项所述的微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在防治根结线虫中的应用。

8.权利要求1-3中任一项所述的微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在提高农作物种子活力中的应用。

9.权利要求1-3中任一项所述的微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在植物促生中的应用。

10.权利要求1-3中任一项所述的微白黄链霉菌Streptomyces albidoflavus T4在促进土壤中有益微生物生长和抑制有害微生物生长中的应用。