CN107313093A - 一种基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料及制备与应用 - Google Patents

一种基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料及制备与应用 Download PDF

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于鹏
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付如民
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Guangdong University of Technology
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Abstract

本发明属于医用生物材料的技术领域,公开了一种基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料及制备与应用。所述方法为首先采用计时电流法在导电基材表面电沉积氯掺杂的聚吡咯;再选用三电极模式,导电金属为对电极、沉积有聚吡咯的导电基材为工作电极,电解质为包含吡咯和生物素的缓冲溶液,采用计时电位法,得到基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料;所述缓冲溶液为中性时,工作电极表面沉积有纳米锥结构的聚吡咯/生物素材料;所述缓冲溶液为酸性或碱性时,工作电极表面沉积有纳米颗粒结构的聚吡咯/生物素材料。所述方法简单,成本低,制备的复合材料的纳米结构稳定,可用于制备高效捕获和释放循环肿瘤癌细胞的材料。

Description

一种基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料及制 备与应用
技术领域
本发明涉及医用生物材料制造技术,具体涉及聚吡咯/生物素纳米结构的制备方法。
背景技术
由于纳米材料的纳米尺寸效应,导电聚吡咯纳米材料表现出优异的化学性质。此外,纳米材料和块状材料不同的电学和物理特性在导电聚吡咯纳米材料的构建中起到至关重要的作用。导电高分子纳米材料的特性在许多方面具有广泛的应用。目前,研究者发明了各种导电高分子纳米材料的制备方法。虽然研究者发明了一些简单新颖的制备方法,先进的控制导电高分子纳米材料的性能的技术方法仍然是一种挑战。
生物素(biotin)广泛分布于生物体中,是动物机体内维持正常生理机能所必需的维生素之一。生物素和卵白素具有极强的亲和力,比体内的抗原-抗体结合力强很多倍,是自然界中目前发现的具有最强亲和力的物质。生物素与亲合素之间的极强的特异性结合发展了一种生物素-亲合素系统(Biotin-Avidin—System,BAS)技术。因此,采用生物素掺杂聚吡咯并且调控聚吡咯纳米结构具有深远的研究价值和应用价值。人们一般采用模板法制备生物素掺杂聚吡咯纳米结构材料。但是该方法涉及去除模板的过程,该过程一般通过碱去除模板,对材料表面的生物分子的活性有着较大的影响,同时该方法比较复杂,同时制备的纳米结构容易倒伏。
本发明制备导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的过程简单,无污染,材料结构稳定。本发明采用电化学方法在在块状材料表面构建不同纳米结构的聚吡咯/生物素膜层。基于纳米效应,该材料有望用于高效捕获和释放循环肿瘤癌细胞。
发明内容
为了克服现有技术的缺点和不足,本发明的首要目的在于提供一种基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法。本发明通过电化学方法将生物素掺杂于聚吡咯,在导电基材表面构建了不同纳米结构的聚吡咯/生物素膜层。
本发明的另一目的在于提供由上述制备方法得到的基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料。
为了达到发明的目的,本发明采用的技术方案是:
一种基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法,包括如下步骤:
(1)导电基材表面电沉积氯掺杂的聚吡咯;
选用三电极模式,导电金属为对电极,导电基材为工作电极,电解质溶液为包含吡咯和氯离子的溶液,采用计时电流法控制电化学反应,氯掺杂的聚吡咯沉积在导电基材表面;
(2)工作电极表面沉积纳米结构的导电聚吡咯/生物素材料;
选用三电极模式,导电金属为对电极、步骤(1)制备的沉积有氯掺杂的聚吡咯的导电基材为工作电极,电解质为包含吡咯和生物素的缓冲溶液,采用计时电位法控制电化学反应,纳米结构的聚吡咯/生物素材料沉积在工作电极上,即得到基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料;所述缓冲溶液为中性时,工作电极表面沉积有纳米锥结构的聚吡咯/生物素材料;所述缓冲溶液为酸性或碱性时,工作电极表面沉积有纳米颗粒结构的聚吡咯/生物素材料。
步骤(1)所述氯离子的源为盐酸或氯化钾,优选盐酸。
步骤(1)和(2)中所述导电金属为铂电极或铜电极,优选为铜电极。
步骤(1)中所述电解质溶液中氯离子的浓度为0.1~0.3mol/L,吡咯的浓度为0.1~0.3mol/L;
步骤(1)中所述电化学反应的时间为10~50s。
步骤(1)中所述电化学反应的电压为0.7~1.2V,优选为0.8V;所述导电基材为钛、导电玻璃等。
步骤(1)中所述氯离子最佳浓度是0.25mol/L,吡咯的最佳浓度是0.2mol/L,最佳反应时间是20秒。
步骤(2)中所述电化学反应的电流为0.5~2.0mA/cm2
步骤(2)中所述电化学反应的时间为10~50min。
步骤(2)中所述吡咯的浓度为0.1~0.3mol/L,生物素的浓度为0.05~0.2mol/L。
步骤(2)中所述吡咯的最佳浓度是0.2mol/L,生物素的最佳浓度是0.1mol/L,最佳反应时间是40min。
步骤(2)中所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液;所述缓冲溶液的pH为3.0~5.5时,聚吡咯/生物素材料的结构是1-50nm的纳米颗粒;所述缓冲溶液的pH为6.8~7.2时,聚吡咯/生物素材料的结构是纳米锥;所述缓冲溶液的pH为7.8~8.5时,聚吡咯/生物素材料的结构是200-1000nm的纳米颗粒。
所述基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料通过上述方法制备得到。
所述复合材料用于制备高效捕获和释放循环肿瘤癌细胞的材料。
本发明具有以下突出优点:
(1)在导电基材采用无污染快捷可控的电化学方法构建不同纳米结构的导电聚吡咯/生物素膜层,实现生物素掺杂于聚吡咯;
(2)本发明的方法简单,成本较低,可大面积制备和生产;
(3)所制备的复合材料中纳米结构稳定,无去模板的步骤,不会影响生物活性分子的活性。
附图说明
图1为实施例1制备的基于导电基材的纳米锥结构聚吡咯/生物素复合材料的SEM图;
图2为实施例2制备的基于导电基材的纳米锥结构聚吡咯/生物素复合材料的SEM图;
图3为实施例3制备的基于导电基材的纳米锥结构聚吡咯/生物素复合材料的SEM图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)片状导电基材钛规格为10×10×1mm3,分别用去离子水、99.7%无水乙醇和99.5%丙酮超清洗基材各20分钟;
(2)选用三电极模式,导电基材为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L,盐酸的浓度为0.25mol/L,采用计时电流法控制电化学反应,反应电位(相对于参比电极)为0.8V,反应时间为20秒,钛电极上沉积一层致密均匀黑色的聚吡咯,将其浸泡在去离子水中以除去表面没有反应的吡咯和盐酸,得到沉积有聚吡咯的钛电极;
(3)选用三电极模式,沉积有聚吡咯的钛电极为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液为吡咯和生物素的缓冲溶液(溶液的pH为6.8,PBS),电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L和生物素的浓度为0.1mol/L,采用计时电位法控制电化学反应,反应电流为1.5mA,反应时间为40分钟,纳米锥结构的聚吡咯/生物素复合物沉积在工作电极表面,得到基于导电基材的纳米锥结构聚吡咯/生物素复合材料。
实施例1制备的基于导电基材的纳米锥结构聚吡咯/生物素复合材料的SEM图如图1所示。从图中可以看出,钛电极表面沉积的材料的结构为高密度的纳米锥结构,且垂直于钛电极表面生长。纳米锥结构顶端外径75nm,垂直高度500nm。本实施例制备的复合材料纳米结构稳定。
实施例2
(1)片状导电基材(导电玻璃)规格为10×10×1mm3,分别用去离子水、99.7%无水乙醇和99.5%丙酮超清洗基材各20分钟;
(2)选用三电极模式,导电基材为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L,盐酸的浓度为0.25mol/L,采用计时电流法控制电化学反应,反应电位(相对于参比电极)为0.8V,反应时间为20秒,导电玻璃电极上沉积一层致密均匀黑色的聚吡咯,将其浸泡在去离子水中以除去表面没有反应的吡咯和盐酸,得到沉积有聚吡咯的导电玻璃电极;
(3)选用三电极模式,沉积有聚吡咯的导电玻璃电极为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液为吡咯和生物素的缓冲溶液(溶液的pH为8.2,PBS),电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L和生物素的浓度为0.1mol/L,采用计时电位法控制电化学反应,反应电流为0.9mA,反应时间为40分钟,纳米颗粒结构的聚吡咯/生物素复合物沉积在工作电极表面,即得到基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料。
实施例2制备的基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料的SEM图如图2所示。从图中可以看出,导电玻璃电极表面沉积的材料的结构为纳米颗粒结构,粒径为200-1000nm。本实施例制备的复合材料纳米结构稳定。
实施例3
(1)片状导电基材钛规格为10×10×1mm3,分别用去离子水、99.7%无水乙醇和99.5%丙酮超清洗基材各20分钟;
(2)选用三电极模式,导电基材为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L,盐酸的浓度为0.25mol/L,采用计时电流法控制电化学反应,反应电位(相对于参比电极)为0.8V,反应时间为20秒,钛电极上沉积一层致密均匀黑色的聚吡咯,将其浸泡在去离子水中以除去表面没有反应的吡咯和盐酸,得到沉积有聚吡咯的钛电极;
(3)选用三电极模式,沉积有聚吡咯的钛电极为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液为吡咯和生物素的缓冲溶液(溶液的pH为5.2,PBS),电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L和生物素的浓度为0.1mol/L,采用计时电位法控制电化学反应,反应电流为2.0mA,反应时间为40分钟,纳米颗粒结构的聚吡咯/生物素复合物沉积在工作电极表面,即得到基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料。
实施例3制备的基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料的SEM图如图3所示。从图中可以看出,钛电极表面沉积的材料的结构为纳米颗粒结构,粒径为1~50nm。本实施例制备的复合材料纳米结构稳定。
实施例4
(1)片状导电基材导电玻璃规格为10×10×1mm3,分别用去离子水、99.7%无水乙醇和99.5%丙酮超清洗基材各20分钟;
(2)选用三电极模式,导电基材为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L,氯化钾的浓度为0.2mol/L,采用计时电流法控制电化学反应,反应电位(相对于参比电极)为0.8V,反应时间为20秒,导电玻璃电极上沉积一层致密均匀黑色的聚吡咯,将其浸泡在去离子水中以除去表面没有反应的吡咯和氯化钾,得到沉积有聚吡咯的导电玻璃电极;
(3)选用三电极模式,沉积有聚吡咯的导电玻璃电极为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液为吡咯和生物素的缓冲溶液(溶液的pH为5.2,PBS),电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L和生物素的浓度为0.1mol/L,采用计时电位法控制电化学反应,反应电流为0.7mA,反应时间为40分钟,纳米颗粒结构的聚吡咯/生物素复合物沉积在工作电极表面,即得到基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料。
实施例4制备的基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料中,导电玻璃电极表面沉积的材料的结构为纳米颗粒结构,粒径为1~50nm。本实施例制备的复合材料纳米结构稳定。
实施例5
(1)片状导电基材钛规格为10×10×1mm3,分别用去离子水、99.7%无水乙醇和99.5%丙酮超清洗基材各20分钟;
(2)选用三电极模式,导电基材为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L,氯化钾的浓度为0.2mol/L,采用计时电流法控制电化学反应,反应电位(相对于参比电极)为0.8V,反应时间为20秒,钛电极上沉积一层致密均匀黑色的聚吡咯,将其浸泡在去离子水中以除去表面没有反应的吡咯和氯化钾,得到沉积有聚吡咯的钛电极;
(3)选用三电极模式,沉积有聚吡咯的导电玻璃电极为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液为吡咯和生物素的缓冲溶液(溶液的pH为5.2,PBS),电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L和生物素的浓度为0.1mol/L,采用计时电位法控制电化学反应,反应电流为1.5mA,反应时间为40分钟,纳米颗粒结构的聚吡咯/生物素复合物沉积在工作电极表面,即得到基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料。
实施例5制备的基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料中,钛电极表面沉积的材料的结构为纳米颗粒结构,粒径为1~50nm。本实施例制备的复合材料纳米结构稳定。
实施例6
(1)片状导电基材钛规格为10×10×1mm3,分别用去离子水、99.7%无水乙醇和99.5%丙酮超清洗基材各20分钟;
(2)选用三电极模式,导电基材为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L,氯化钾的浓度为0.2mol/L,采用计时电流法控制电化学反应,反应电位(相对于参比电极)为0.8V,反应时间为20秒,钛电极上沉积一层致密均匀黑色的聚吡咯,将其浸泡在去离子水中以除去表面没有反应的吡咯和氯化钾,得到沉积有聚吡咯的钛电极;
(3)选用三电极模式,沉积有聚吡咯的导电玻璃电极为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液为吡咯和生物素的缓冲溶液(溶液的pH为6.8,PBS),电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L和生物素的浓度为0.1mol/L,采用计时电位法控制电化学反应,反应电流为0.9mA,反应时间为40分钟,纳米锥结构的聚吡咯/生物素复合物沉积在工作电极表面,即得到基于导电基材的纳米锥结构聚吡咯/生物素复合材料。本实施例制备的复合材料纳米结构稳定。
实施例7
(1)片状导电基材(导电玻璃)规格为10×10×1mm3,分别用去离子水、99.7%无水乙醇和99.5%丙酮超清洗基材各20分钟;
(2)选用三电极模式,导电基材为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L,氯化钾的浓度为0.2mol/L,采用计时电流法控制电化学反应,反应电位(相对于参比电极)为0.8V,反应时间为20秒,导电玻璃电极上沉积一层致密均匀黑色的聚吡咯,将其浸泡在去离子水中以除去表面没有反应的吡咯和盐酸,得到沉积有聚吡咯的导电玻璃电极;
(3)选用三电极模式,沉积有聚吡咯的导电玻璃电极为工作电极,铜片为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,电解质溶液为吡咯和生物素的缓冲溶液(溶液的pH为7.8,PBS),电解质溶液中吡咯的浓度为0.2mol/L和生物素的浓度为0.2mol/L,采用计时电位法控制电化学反应,反应电流为1.5mA,反应时间为40分钟,纳米颗粒结构的聚吡咯/生物素复合物沉积在工作电极表面,即得到基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料。
实施例7制备的基于导电基材的纳米颗粒结构聚吡咯/生物素复合材料中,导电玻璃电极表面沉积的材料的结构为纳米颗粒结构,粒径为200-1000nm。本实施例制备的复合材料纳米结构稳定。
应用:
实施例1制备的材料浸泡在10mL的EDC(0.095g)和NHS(0.061g)水溶液中,活化45分钟之后用超纯水冲洗3次。被活化的聚吡咯/生物素纳米锥结构膜浸泡在50μL的链霉亲和素(20μg/mL)水溶液中常温培养1小时,然后取出用超纯水冲洗3次。最后接枝链霉亲和素的聚吡咯浸泡在生物素改性的EpCAM抗体溶液(10μg/mL,1倍PBS为溶剂)中,在4℃环境中培养12个小时。用PBS溶液清洗3次之后,样品浸泡于BSA蛋白质溶液(1wt%,1倍PBS为溶剂)中室温培养1小时,减少非特异性结合。最后用PBS洗三次。培养人结肠癌细胞HCT-116、人乳腺癌细胞MCF7和宫颈癌细胞Hela细胞的培养基包含体积分数为10%的胎牛血清(FBS)的α-MEM培养基。HCT-116、MCF-7和Hela细胞培养在37℃,5%CO2的恒温培养箱中,根据溶液状况,保持2天换一次培养基。当细胞铺展密度达到70-80%时,对细胞进行传代或者接种于材料表面,细胞接种密度是2×105个/mL。共培养15分钟之后,HCT116细胞和MCF7细胞在材料表面大量粘附,HCT116细胞在材料表面的细胞密度为260±25/mm2,MCF7细胞在材料表面的细胞密度为252±18/mm2。相反的,Hela细胞在短时间内很难粘附在EpCAM抗体功能化的聚吡咯纳米锥结构表面,在材料表面的细胞密度只有41±9/mm2

Claims (10)

1.一种基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)导电基材表面电沉积氯掺杂的聚吡咯;
选用三电极模式,导电金属为对电极,导电基材为工作电极,电解质溶液为包含吡咯和氯离子的溶液,采用计时电流法控制电化学反应,氯掺杂的聚吡咯沉积在导电基材表面;
(2)工作电极表面沉积纳米结构的导电聚吡咯/生物素材料;
选用三电极模式,导电金属为对电极、步骤(1)制备的沉积有氯掺杂的聚吡咯的导电基材为工作电极,电解质为包含吡咯和生物素的缓冲溶液,采用计时电位法控制电化学反应,纳米结构的聚吡咯/生物素材料沉积在工作电极上,即得到基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料;所述缓冲溶液为中性时,工作电极表面沉积有纳米锥结构的聚吡咯/生物素材料;所述缓冲溶液为酸性或碱性时,工作电极表面沉积有纳米颗粒结构的聚吡咯/生物素材料。
2.根据权利要求1所述基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法,其特征在于:步骤(2)中所述缓冲溶液的pH为3.0~5.5时,聚吡咯/生物素材料的结构是1-50nm的纳米颗粒;所述缓冲溶液的pH为6.8~7.2时,聚吡咯/生物素材料的结构是纳米锥;所述缓冲溶液的pH为7.8~8.5时,聚吡咯/生物素材料的结构是200-1000nm的纳米颗粒。
3.根据权利要求1所述基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法,其特征在于:
步骤(1)所述氯离子的源为盐酸或氯化钾;
步骤(1)和(2)中所述导电金属为铂电极或铜电极。
4.根据权利要求3所述基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法,其特征在于:步骤(1)所述氯离子的源为盐酸;
步骤(1)和(2)中所述导电金属为铜电极。
5.根据权利要求1所述基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法,其特征在于:步骤(2)中所述电化学反应的电流为0.5~2.0mA/cm2
步骤(1)中所述电化学反应的电压为0.7~1.2V。
6.根据权利要求1所述基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述电解质溶液中氯离子的浓度为0.1~0.3mol/L,吡咯的浓度为0.1~0.3mol/L;
步骤(2)中所述吡咯的浓度为0.1~0.3mol/L,生物素的浓度为0.05~0.2mol/L。
7.根据权利要求1所述基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述电化学反应的时间为10~50s;步骤(2)中所述电化学反应的时间为10~50min。
8.根据权利要求6或7所述基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述氯离子浓度为0.25mol/L,吡咯的浓度为0.2mol/L,步骤(1)中电化学反应时间为20秒;
步骤(2)中所述吡咯的浓度为0.2mol/L,生物素的浓度为0.1mol/L,步骤(2)中电化学反应时间为40min。
9.一种由权利要求1~8任一项所述的制备方法得到的基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料。
10.根据权利要求9所述基于导电基材的纳米结构聚吡咯/生物素复合材料的应用,其特征在于:所述复合材料用于制备高效捕获和释放循环肿瘤癌细胞的材料。
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