CN107266531B - Teixobactin及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种teixobactin及其制备方法，包括如下步骤：利用式XVII所示的化合物与Boc‑L‑Ala进行第一接肽反应得到式VII所示的化合物；利用式XVIII所示的化合物与Alloc‑L‑Ser进行第二接肽反应，然后与Fmoc‑L‑Ile进行酯化反应得到式VIII所示的化合物；将式VII和式VIII所示的化合物进行第一缩合及环化反应得到环片段式III所示的化合物；液相合成侧链六肽片段式II所示的化合物；将式III所示的化合物与式II所示的化合物进行第二缩合反应再脱保护得到teixobactin双盐酸盐。本发明是teixobactin首次液相全合成，为天然产物结构修饰奠定了基础。

Description

Teixobactin及其制备方法
技术领域
本发明属于合成化学技术领域，具体涉及一种Teixobactin及其制备方法。
背景技术
在当今抗生素领域，细菌耐药性的产生速度比开发新抗生素的速度还要快，这使得耐药性问题已经成为了一个公共健康问题，迫切需要发现新型抗生素。大多数新型抗生素都是在土壤的微生物中获得的，而这种方式依赖于微生物的实验室培养，但99％的微生物在实验室条件下不可培养，可培养的这部分微生物到20世纪60年代已经被充分研究，在其中发现新的抗生素已经比较困难。显然，99％不可培养的微生物是一个丰富抗生素的宝库，其中有大量未被发现的化合物有望成为新一代的抗菌药。2015年，美国东北大学KimLewis研究团队用一种称为iChip的新装置来分离和培养普通实验室条件下不可培养的细菌，从土壤中一种被命名为Eleftheria terrae的不可培养的革兰氏阴性菌中分离得到一个分子量为1242的化合物，将其命名为teixobactin，进一步结构鉴定确定teixobactin有一个大环酯肽的结构，总共含有11个氨基酸，包括非天然氨基酸L-allo-Enduracididine(简称L-allo-End)，N-甲基-D-苯丙氨酸，以及其它三个D-氨基酸，结构式如下式I所示：
Figure BDA0001363791690000011
Teixobactin对测试的大多数致病菌，包括难治疗的肠球菌、结核分枝杆菌在内的最低抑菌浓度1μg mL-1以下，对艰难梭状芽胞杆菌和炭疽杆菌的活性尤其好，最低抑菌浓度分别为5ng mL-1和20ng mL-1。Teixobactin对金黄色葡萄球菌活性良好，对指数增长末期的细菌杀灭效果好于万古霉素。进一步研究表明teixobactin对肽聚糖合成有很强的抑制，但与DNA、RNA或蛋白质没有作用。长时间在低浓度teixobactin中培养金黄色葡萄球菌也不能得到有耐药性的变异体，这也意味着teixobactin的靶点并非蛋白质。研究表明，与万古霉素一致，teixobactin的靶点是肽聚糖的前体lipid II，而非某个特定的蛋白质，但对于耐万古霉素的肠球菌(含有修饰的lipid II)，teixobactin仍有活性，显示其仍可以结合这类修饰的lipid II。另外，teixobactin也可与革兰氏阳性菌细胞壁中另一种成分磷壁酸的前体lipid III有效结合。
因为teixobactin在抗菌方面卓越的生物活性，也引起了合成化学家的兴趣，许多课题组都对teixobactin及其类似物进行了合成研究，但截止目前仅有两个课题组完成了teixobactin的全合成。2016年Payne课题组完成了teixobactin的固相全合成，首先用固相法合成了十一肽的关环前体，再在液相中完成关大环和脱保护反应。Li课题组合成设计将teixobactin分为大环片段和侧链片段分别合成；其中，大环片段和侧链片段的合成步骤中都涉及固相合成。除了上述全合成研究，多个课题组展开了对teixobactin分子的类似物合成研究。固相全合成teixobactin需要大量保护的氨基酸单体，分子中含有的非天然氨基酸L-allo-End大量制备有一定的困难，因而现有合成方法效率低，大多数课题组选择将其换为易得的Arg氨基酸来合成teixobactin的类似物。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种teixobactin及其制备方法，通过该全新的液相合成方法，解决现有teixobactin固相合成困难、合成效率低的技术问题。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一方面，本发明提供一种teixobactin的制备方法，包括如下步骤：
利用式XVII所示的化合物与Boc-L-Ala进行第一接肽反应得到式VII所示的化合物；
利用式XVIII所示的化合物与Alloc-L-Ser进行第二接肽反应，然后与Fmoc-L-Ile进行酯化反应得到式VIII所示的化合物；
将式VII所示的化合物和式VIII所示的化合物进行第一缩合反应并环化得到环片段式III所示的化合物；
液相合成侧链六肽式II所示的化合物；
将式III所示的化合物与式II所示的化合物进行第二缩合反应再脱保护得到teixobactin双盐酸盐；
其中，上述化合物结构式如下：
Figure BDA0001363791690000031
另一方面，本发明还提供一种teixobactin化合物，其由上述teixobactin的制备方法合成。
本发明提供的teixobactin化合物，根据对teixobactin的逆合成分析，选择D-Thr8和L-Ala9之间的酰胺键作为关环位点高效的合成了大环片段；侧链六肽以“3+3”液相接肽方式合成；二个片段对接后最终经脱保护和HPLC纯化得到天然产物teixobactin。这是teixobactin的首次液相全合成研究，液相全合成为天然产物结构修饰奠定了基础。
具体实施方式
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
对于teixobactin(式I)的逆合成分析如下所示。切断L-Ile6与L-Ser7之间的酰胺键，可以将目标分子分为六肽侧链片段(式II)和五肽大环片段(式III)。其中六肽侧链可以对称性的分解为三肽(式IV)和三肽(式V)。
Figure BDA0001363791690000041
对于大环片段可选择的关环位点包括D-Thr8和L-Ala9之间的酰胺键，L-Ala9和L-allo-End10之间的酰胺键和L-allo-End10和L-Ile11之间的酰胺键，或者L-Ile11和D-Thr8之间的酯键。本发明选择D-Thr8和L-Ala9之间的酰胺键作为关大环的位点得到线性前体(式VI)，这样首先避开了位阻较大的异亮氨酸，其次选择在两个不同构型的氨基酸之间关环可以显著提高效率。关环位点的羧基和氨基使用烯丙酯和Alloc(即烯丙氧羰基)保护，可以在Pd(Ph3P)4/Et2NH条件下同时脱除再关环；也可以选用叔丁酯和Boc(即叔丁氧羰基)，关环反应之前用三氟乙酸处理脱除。五肽关环前体通过“2+3”接肽反应得到。因L-allo-End较难合成，因而将其放在二肽片段式VII中，以减少该片段合成的线性步骤。另外一个三肽片段则是化合物式VIII。
一方面，本发明实施例提供了一种teixobactin的制备方法，包括如下步骤：
S01：利用式XVII所示的化合物与Boc-L-Ala进行第一接肽反应得到式VII所示的化合物；
S02：利用式XVIII所示的化合物与Alloc-L-Ser进行第二接肽反应，然后与Fmoc-L-Ile进行酯化反应得到式VIII所示的化合物；
S03：将式VII所示的化合物和式VIII所示的化合物进行第一缩合反应并环化得到环片段式III所示的化合物；
S04：液相合成侧链六肽式II所示的化合物；
S05：将式III所示的化合物与式II所示的化合物进行第二缩合反应再脱保护得到teixobactin双盐酸盐；
其中，上述化合物结构式如下：
Figure BDA0001363791690000051
Figure BDA0001363791690000061
本发明提供的teixobactin化合物，根据对teixobactin的逆合成分析，选择D-Thr8和L-Ala9之间的酰胺键作为关环位点高效的合成了大环片段；侧链六肽以“3+3”液相接肽方式合成；二个片段对接后最终经脱保护和HPLC纯化得到天然产物teixobactin。这是teixobactin的首次液相全合成研究，液相全合成为天然产物结构修饰奠定了基础。
具体地，上述步骤S01中，式XVII所示的化合物的合成过程包括：对式IX所示的化合物的二级羟基进行TBS保护，得到式X所示的化合物；将式X所示的化合物的氮原子邻位的亚甲基氧化为羰基，得到式XI所示的化合物；将式XI所示的化合物的开环生成式XII所示的化合物，然后依次进行光延反应、三甲基膦还原、Cbz保护的胍基化、脱TBS保护、分子内SN2反应，得到式XVII所示的化合物。优选地，首先用TBS(即叔丁基二甲基硅基)保护式IX所示的化合物的二级羟基得到式X所示的化合物，再以RuO2水合物催化氧化氮原子邻位亚甲基为羰基得到内酰胺化合物(式XI所示的化合物)，该反应可以在10-20g规模进行。该内酰胺化合物在氮原子上有一个Boc保护，可以看作是活化的普通酰胺，可以在硼氢化钠/乙醇/缓冲溶液)的作用下开环；其中，缓冲溶液的pH＝7，本发明一实施例中优选缓冲溶液为PBS磷酸盐缓冲溶液，包含Na2HPO4/NaH2PO4，在该优选条件下反应规模可达到5-10g。该反应依赖于反应体系的pH值，本实施例中还原中TBS基团发生了迁移得到式XII所示的化合物，并利用Mitsunobu反应(光延反应)将二级羟基转化为叠氮基团，同时翻转手性中心，粗产物直接用三甲基膦还原，将叠氮转化为氨基产物即式XIII所示的化合物，式XIII所示的化合物与式XIV所示的胍基化试剂反应将氨基转化为Cbz(即苄氧羰基)保护的胍基得式XV所示的化合物，TBAF(即四丁基氟化铵)脱去TBS保护得到一级醇化合物式XVI所示的化合物。用甲磺酰氯将一级羟基转化为易离去的甲磺酸酯，分子内SN2反应关上五元环得到非天然氨基酸式XVII所示的化合物。作为一个具体实施例，通过式IX所示的化合物制备得到式XII所示的化合物的具体反应流程、化学反应式如下所示，整个过程以8步反应、32％总产率合成。
Figure BDA0001363791690000071
具体地，在上述步骤S01中，第一接肽反应过程包括：将式XVII所示的化合物酸性条件下脱除Boc和叔丁酯得到第一中间体；将第一中间体在盐酸/甲醇条件下甲酯化得到第二中间体；将第二中间体再与Boc-L-Ala在PyAOP条件下接肽得式VII所示的化合物，PyAOP即为(3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐。作为一个具体实施例，通过式XVII所示的化合物制备得到式VII所示的化合物的具体反应流程、化学反应式如下所示。
Figure BDA0001363791690000072
具体地，在上述步骤S02中，式VIII所示的化合物的合成过程包括：先将式XVIII所示的化合物与Alloc-L-Ser进行第二接肽反应后，用TBS选择性保护一级羟基得到式XX所示的化合物，然后其二级羟基与Fmoc-L-Ile酯化反应得到式VIII所示的化合物。即D-苏氨酸叔丁酯(式XVIII所示的化合物)与Alloc-L-Ser接肽得到二肽即式XIX所示的化合物，TBS选择性保护一级羟基得到式XX所示的化合物，二级羟基与Fmoc-L-Ile接酯键得到式VIII所示的化合物。具体过程如下。作为一个具体实施例，通过式XVIII所示的化合物制备得到式VIII所示的化合物的具体反应流程、化学反应式如下所示。
Figure BDA0001363791690000081
具体地，在上述步骤S03中，式III所示的化合物的合成过程包括：对式VIII所示的化合物用二乙胺脱除Fmoc(即笏甲氧羰基)保护得式XXI所示的化合物；对式VII所示的化合物用LiOH水解甲酯得式XXII所示的化合物；将式XXI所示的化合物和式XXII所示的化合物在PyAOP作用下缩合，再脱除Boc、叔丁酯和TBS，最后关环得式III所示的化合物。更进一步地，式XXI所示的化合物与式XXII所示的化合物，二者在PyAOP作用下缩合得到保护基调整后的关环前体式VI所示的化合物，该关环前体在三氟乙酸作用下同时脱除Boc、叔丁酯和TBS，并在HATU条件下以75％产率得到大环片段式III所示的化合物；其中，HATU为2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，是一种常用多肽缩合试剂。作为一个具体实施例，通过式VIII所示的化合物和式VII所示的化合物制备得到式III所示的化合物的具体反应流程、化学反应式如下所示。
Figure BDA0001363791690000091
具体地，上述步骤S04中，液相合成侧链六肽片段式II所示的化合物过程为：用侧链Trt(即三苯基甲基)保护的Cbz-D-Gln和D-allo-异亮氨酸甲酯缩合得到式XXIV所示的化合物，然后用LiOH水解甲酯再与L-异亮氨酸甲酯缩合得到式V所示的化合物；Cbz-N-Me-D-苯丙氨酸式和L-异亮氨酸甲酯缩合得到式XXVI所示的化合物，然后用LiOH水解甲酯再与L-丝氨酸甲酯缩合，并用TBS保护游离羟基，得到式IV所示的化合物；将式V所示的化合物和式IV所示的化合物缩合得到式II所示的化合物。六肽的N-端使用Cbz保护，而C-端用甲酯保护策略，D-谷氨酰胺侧链上的酰胺基团用Trt保护，丝氨酸的羟基以TBS保护。上述保护基之间相互正交，可以方便的选择性脱除。三肽式V所示的化合物用二氯化钯/氢气条件脱除Cbz后得到氨基(式XXVII所示的化合物)，水解三肽片段式IV所示的化合物中的甲酯得到羧酸(式XXVIII所示的化合物)。作为一个具体实施例，制备式II所示的化合物具体反应流程、化学反应式如下所示。式XXVII与式XXVIII缩合可以以46％产率得到六肽片段式II所示的化合物，进一步水解C-端甲酯得到羧酸式XXIX所示的化合物，为后续接肽做好准备。
Figure BDA0001363791690000092
Figure BDA0001363791690000101
具体地，上述步骤S05中，第二缩合反应过程如下：式III所示的化合物脱Alloc保护，式II所示的化合物水解C-端甲酯，然后两者缩合得到式XXX所示化合物；将式XXX所示化合物经脱保护、HPLC分离、稀盐酸冻干得到teixobactin的双盐酸盐。优选地，在完成大环和侧链片段的合成后，用四(三苯基膦)钯/二乙胺的条件脱除大环片段式III所示的化合物的Alloc保护基，并与侧链羧酸式XXIX所示的化合物缩合得到式XXX所示化合物。为了进行最后的脱保护，首先酸性的二氯化钯/氢气条件下可脱除三个Cbz和TBS。但该条件酸性较弱，无法脱除Trt。Trt保护基在三氟乙酸/三异丙基硅烷的条件下被脱除。式XXX所示化合物粗产物经HPLC分离得到天然产物teixobactin的双三氟乙酸盐，再用稀盐酸重复冻干三次得到teixobactin双盐酸盐，作为一个具体实施例，通过式III所示的化合物制备得到teixobactin双盐酸盐的具体反应流程、化学反应式如下所示。
Figure BDA0001363791690000111
天然产物teixobactin与合成样品teixobactin的1H NMR数据对比如表1。
Figure BDA0001363791690000112
表1
Figure BDA0001363791690000113
Figure BDA0001363791690000121
Figure BDA0001363791690000131
另一方面，本发明实施例还提供了一种teixobactin化合物，其由上述teixobactin的制备方法合成。
另外，如果没有特别说明，本实施例中所有试剂都是从试剂公司购得，未经任何纯化处理直接使用，所有反应是在氮气保护下的无水条件下进行操作。试剂和溶剂纯化参照Purification of Laboratory Chemicals(W.L.F.Armarego,Christina Li Lin Chai,Elsevier Inc.2009)。溶剂使用前均重蒸。四氢呋喃用钠-二苯甲酮体系处理，二氯甲烷和二甲基甲酰胺用氢化钙处理，甲醇用镁屑处理。反应通过TLC监测，使用的薄层硅胶板采用GF254(60-F250，0.2mm，青岛海洋化工厂)，用UV(波长254nm)或碘显色，或者用磷钼酸、茚三酮溶液浸泡，然后加热显色。快速柱层析用青岛海洋硅胶60(230-400mesh ASTM)或者E.Merck硅胶60(230-400mesh ASTM)。一般使用乙酸乙酯和正己烷作为淋洗剂，操作中采用的比例为二者的体积比。1H NMR和13C NMR采用Brüker Avance-500(1H:500MHz,13C:125MHz)核磁共振仪测定，氘代试剂一般使用氘代氯仿，溶剂残留峰：δ-H＝7.26ppm，δ-C＝77.0ppm；高分辨质谱由ABI Q-star Elite高分辨质谱仪测定，使用ESI条件。旋光值由RudolphAutoPol I型旋光仪测定(波长589nm，样品池长100mm，温度20℃)，数据记录格式：浓度(c单位为g/100mL，溶剂)。
本发明先后进行过多次试验，现举一部分试验结果作为参考对发明进行进一步详细描述，下面结合具体实施例进行详细说明。
实施例1化合物式XVII合成
Figure BDA0001363791690000141
将化合物式IX(9.47g,33.0mmol,1.0equiv.)溶解于二氯甲烷(200mL)中，冷却到0℃后，依次加入咪唑(5.53g,82.5mmol,2.5equiv.)，TBSCl(7.46g,49.5mmol,1.5equiv.)和DMAP(0.40g,3.3mmol,0.1equiv.)，室温反应5h。反应用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×100mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到无色油状液体，即化合物式X(12.73g,96％)。Rf＝0.18(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/20)；[α]D 20＝-44.2(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.44–4.35(m,1H),4.30–4.14(m,1H),3.63–3.50(m,1H),3.39–3.22(m,1H),2.21–2.07(m,1H),2.03–1.93(m,1H),1.47–1.38(m,18H),0.86(s,9H),0.04(s,3H),0.04(s,3H)ppm；13CNMR(125MHz,CDCl3)δ172.20,172.12,154.41,154.01,80.93,80.89,79.78,79.57,70.36,69.55,58.73,58.53,54.59,54.25,39.77,38.83,28.39,28.31,27.98,27.94,25.70,17.98,-4.85,-4.89,-4.93ppm；HRMS(m/z):calculated for C20H39NO5SiNa+[M+Na]+:424.2490,found424.2490。
将高碘酸钠(1.87g,8.72mmol,3.5equiv.)溶解于水(20mL)中，再加入二氧化钌水合物(85mg,～0.63mmol,～0.25equiv.)，得到黄色溶液，化合物式X(1.00g,2.49mmol,1.0equiv.)溶解于乙酸乙酯(10mL)中，并加入到上述溶液中，室温反应12h。分液后，水相用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并有机相，依次用饱和亚硫酸钠溶液(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色固体，即化合物式XI(0.80g,77％)。Rf＝0.18(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/20)；[α]D 20＝+36.0(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.46–4.36(m,2H),2.31(ddd,J＝13.0,8.3,1.5Hz,1H),2.16(dt,J＝13.1,9.9Hz,1H),1.50(s,9H),1.47(s,9H),0.89(s,9H),0.16(s,3H),0.12(s,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ172.05,170.20,149.46,83.47,82.40,69.73,55.88,32.16,27.91,25.68,18.24,-4.50,-5.34ppm；HRMS(m/z):calculated for C20H37NO6SiNa+[M+Na]+:438.2282,found 438.2282。
将化合物式XI(5.00g,12.0mmol,1.0equiv.)溶解于乙醇(50mL)中，加入磷酸盐缓冲液(pH＝7.0,25mL)，冷却到0℃后加入硼氢化钠(1.82g,48.0mmol,4.0equiv.)，室温反应3h。减压旋蒸除去乙醇，水相用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并有机相，依次用饱和氯化铵溶液(100mL)和饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到无色油状液体，即化合物式XII(3.48g,69％)。Rf＝0.36(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/10)；[α]D 20＝+18.2(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.40(d,J＝7.4Hz,1H),4.24–4.14(m,1H),3.77(ddt,J＝8.5,5.9,4.2Hz,1H),3.59(dd,J＝10.0,4.1Hz,1H),3.48(dd,J＝10.0,6.2Hz,1H),2.01–1.88(m,1H),1.84–1.73(m,1H),1.44(s,9H),1.42(s,9H),0.88(s,9H),0.05(s,3H),0.05(s,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ171.67,155.47,81.74,79.59,69.06,66.54,52.03,35.60,28.31,27.94,25.84,18.22,-5.41,-5.44ppm；HRMS(m/z):calculated for C20H41NO6SiNa+[M+Na]+:442.2595,found 442.2598.
将化合物式XII(3.76g,8.97mmol,1.0equiv.)溶解于四氢呋喃(50mL)中，冷却到0℃，依次逐滴加入三苯基膦(3.53g,13.46mmol,1.5equiv.)，DEAD(2.11mL,13.46mmol,1.5equiv.)和DPPA(2.89mL,13.46mmol,1.5equiv.)，室温反应2h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，分液后，水相用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到浅黄色油状液体(叠氮化产物与一些不可分离的杂质)。该液体直接溶解在四氢呋喃/水(50mL/5mL)中，冷却到0℃，逐滴加入三甲基膦溶液(1.0M,17.94mL,17.94mmol,2.0equiv.)，室温反应3h。减压旋蒸除去三甲基膦和四氢呋喃，水相用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到无色油状液体，即化合物式XIII(2.86g,两步76％)。Rf＝0.33(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/1)；[α]D 20＝-0.6(c 1.0,CHCl3)；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ5.88(d,J＝8.6Hz,1H),4.31–4.23(m,1H),3.44(dd,J＝9.8,4.6Hz,1H),3.35(dd,J＝9.8,6.5Hz,1H),2.88–2.79(m,1H),1.68–1.58(m,2H),1.41(s,9H),1.39(s,9H),0.84(s,9H),0.00(s,6H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ172.15,155.78,81.51,79.36,68.53,52.12,50.08,36.53,28.29,27.96,25.84,18.22,-5.42,-5.45ppm；HRMS(m/z):calculated for C20H42N2O5SiH+[M+H]+:419.2936,found419.2934.
将化合物式XIII(300mg,0.718mmol,1.0equiv.)溶解于乙腈(10mL)中，加入化合物式XIV(543mg,1.436mmol,2.0equiv.)，室温反应3h。直接浓缩后硅胶柱层析分离得到无色油状液体，即化合物式XV(491mg,94％)。Rf＝0.45(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/10)；[α]D 20＝-31.0(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.69(s,1H),8.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.41–7.27(m,10H),5.55(d,J＝8.0Hz,1H),5.18(q,J＝12.0Hz,2H),5.12(d,J＝2.6Hz,2H),4.40–4.29(m,1H),4.04(s,1H),3.74–3.61(m,2H),2.17–2.05(m,1H),1.97–1.87(m,1H),1.46(s,9H),1.40(s,9H),0.92(s,9H),0.06(s,3H),0.06(s,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ171.36,163.62,155.72,155.23,153.49,136.90,134.73,128.69,128.61,128.32,127.84,127.75,81.71,79.36,68.09,66.95,64.26,51.98,49.50,33.69,28.27,27.95,25.81,18.19,-5.57,-5.59ppm；HRMS(m/z):calculated for C37H56N4O9SiH+[M+H]+:729.3889,found 729.3884.
将化合物式XV(4.34g,5.96mmol,1.0equiv.)溶解于四氢呋喃(50mL)中，冷却到0℃，逐滴加入TBAF溶液(1.0M,11.92mL,11.92mmol,2.0equiv.)，室温反应5h。反应液用乙酸乙酯(200mL)稀释，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色泡沫，即化合物式XVI(3.26g,89％)。Rf＝0.36(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/2)；[α]D 20＝+1.6(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.72(s,1H),8.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.40–7.24(m,10H),5.50(d,J＝7.7Hz,1H),5.18(s,2H),5.08(s,2H),4.29–4.20(m,1H),4.17–4.08(m,1H),3.72(ddd,J＝31.2,11.4,3.7Hz,2H),2.16–2.04(m,1H),1.95–1.86(m,1H),1.45(s,9H),1.40(s,9H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ171.21,163.37,156.15,155.53,153.62,136.66,134.63,128.74,128.66,128.47,128.37,127.99,127.88,82.41,79.86,68.23,67.00,64.18,51.28,50.57,33.91,28.27,27.90ppm；HRMS(m/z):calculatedfor C31H42N4O9H+[M+H]+:615.3025,found615.3027.
将化合物式XVI(2.36g,3.84mmol,1.0equiv.)溶解于二氯甲烷(20mL)中，冷却到0℃，依次逐滴加入二异丙基乙基胺(2.01mL,11.52mmol,3.0equiv.)和甲磺酰氯(0.36mL,4.61mmol,1.2equiv.)，室温反应2h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×50mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色泡沫，即化合物式XVII(2.24g,98％)。Rf＝0.35(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/2)；[α]D 20＝-17.2(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.27(s,1H),7.55–7.19(m,10H),5.38(d,J＝18.7Hz,1H),5.26(s,2H),5.18(s,2H),4.35–4.21(m,1H),4.07–3.89(m,2H),3.61–3.51(m,1H),2.15–2.01(m,1H),1.77–1.63(m,1H),1.45(s,9H),1.43(s,9H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ170.74,170.01,155.77,151.08,150.90,136.69,135.27,128.55,128.31,128.26,128.15,128.06,127.79,82.89,80.28,68.30,67.28,51.46,49.62,42.42,39.81,28.28,27.97ppm；HRMS(m/z):calculated for C31H40N4O8H+[M+H]+:597.2919,found 597.2911.
实施例2化合物式VII合成
Figure BDA0001363791690000171
将化合物式XVII(540mg,0.91mmol,1.0equiv.)溶解于水/三氟乙酸(0.5mL/10mL)中，反应6h。减压旋蒸除去溶剂，得到氨基酸粗产品。在0℃下，将乙酰氯(2mL)逐滴加入甲醇(10mL)，并将上一步得到的氨基酸粗产品溶解在甲醇(2mL)中逐滴加入，室温反应12h。减压旋蒸除去溶剂，得到甲酯粗产品。将甲酯粗产品溶解于二氯甲烷(20mL)中，依次加入Boc-L-Ala(344mg,1.82mmol,2.0equiv.)，二异丙基乙基胺(0.63mL,3.64mmol,4.0equiv.)和PyAOP(1.42g,2.73mmol,3.0equiv.)，室温反应12h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×20mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色泡沫，即化合物式VII(379mg,67％)。Rf＝0.43(silica,乙酸乙酯/正己烷＝2/1)；[α]D 20＝-63.4(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.44–7.24(m,10H),5.47–5.27(m,1H),5.22(s,2H),5.18(s,2H),4.84–4.72(m,1H),4.31–4.09(m,1H),4.07–3.98(m,1H),3.94(t,J＝9.8Hz,1H),3.73(s,3H),3.54–3.41(m,1H),2.15–1.75(m,2H),1.46–1.39(m,9H),1.36(d,J＝7.1Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ174.59,173.65,171.62,171.47,155.53,136.83,134.95,128.66,128.58,128.39,128.35,128.21,127.93,127.77,80.33,79.79,68.45,67.63,67.30,50.24,28.68,28.36,27.94,18.54ppm；HRMS(m/z):calculated for C31H39N5O9Na+[M+Na]+:648.2640,found 648.2654.
将化合物式VII(330mg,0.53mmol,1.0equiv.)溶解于四氢呋喃(5mL)中，LiOH·H2O(33mg,0.79mmol,1.5equiv.)溶解于水(5mL)中，并逐滴加入底物的四氢呋喃溶液中，室温反应1h。减压旋蒸除去四氢呋喃，水相用1.0M盐酸酸化至pH＝2，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后得到化合物式XXII粗产物，不需要纯化，直接用于下一步。
实施例3化合物式VIII合成
Figure BDA0001363791690000191
将化合物式XVIII(570mg,3.26mmol,1.0equiv.)溶解于二氯甲烷(50mL)中，依次加入Alloc-L-Ser(616mg,3.26mmol,1.0equiv.)，二异丙基乙基胺(1.70mL,9.78mmol,3.0equiv.)和EDCI(1.25g,6.52mmol,2.0equiv.)，室温反应12h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×50mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色泡沫，即化合物式XIX(790mg,70％)。Rf＝0.24(silica,乙酸乙酯/正己烷＝2/1)；[α]D 20＝-16.4(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.39(d,J＝8.9Hz,1H),6.18(d,J＝7.7Hz,1H),5.93–5.81(m,1H),5.28(dq,J＝17.3,1.6Hz,1H),5.18(dq,J＝10.3,1.3Hz,1H),4.55(d,J＝5.6Hz,2H),4.44(dd,J＝8.9,3.4Hz,1H),4.36(s,1H),4.23(q,J＝5.3,4.7Hz,1H),3.96(dd,J＝11.3,4.2Hz,1H),3.76–3.68(m,1H),1.44(s,9H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ171.28,169.96,156.38,132.45,117.94,82.76,68.19,66.06,63.07,58.57,56.31,27.96,20.08ppm；HRMS(m/z):calculated for C15H26N2O7Na+[M+Na]+:369.1632,found 369.1630.
将化合物式XIX(1.37g,3.96mmol,1.0equiv.)溶解于二氯甲烷(25mL)中，加入咪唑(531mg,7.92mmol,2.0equiv.)，将TBSCl(718mg,4.75mmol,1.2equiv.)溶解于二氯甲烷(25mL)中，在0℃下，加入上述溶液，室温反应2h。反应用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×50mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到无色油状液体，即化合物式XX(1.22g,67％)。Rf＝0.45(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/2)；[α]D 20＝+18.6(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.09(d,J＝8.8Hz,1H),5.94–5.83(m,1H),5.71(d,J＝6.9Hz,1H),5.28(dd,J＝17.2,1.5Hz,1H),5.18(dd,J＝10.4,1.3Hz,1H),4.55(d,J＝5.7Hz,2H),4.45(dd,J＝8.7,3.0Hz,1H),4.27–4.17(m,2H),4.05–3.98(m,1H),3.72(dd,J＝10.0,6.2Hz,1H),2.52(s,1H),1.44(s,9H),1.16(d,J＝6.4Hz,3H),0.85(s,9H),0.05(s,6H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ170.34,169.57,156.02,132.48,117.92,82.41,68.33,65.95,63.25,57.96,56.33,27.95,25.78,19.93,18.18,-5.51,-5.57ppm；HRMS(m/z):calculated for C21H40N2O7SiNa+[M+Na]+:483.2497,found 483.2494.
将化合物式XX((1.22g,2.65mmol,1.0equiv.)溶解于二氯甲烷(20mL)中，依次加入Fmoc-L-Ile(1.12g,3.18mmol,1.2equiv.)，EDCI(1.27g,6.63mmol,2.5equiv.)和DMAP(32mg,0.265mmol,0.1equiv.)，室温反应5h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×20mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色泡沫，即化合物式VIII(1.22g,67％)。Rf＝0.30(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/5)；[α]D 20＝-21.6(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.77(d,J＝7.6Hz,2H),7.62(t,J＝7.5Hz,2H),7.40(td,J＝7.3,1.9Hz,2H),7.32(tt,J＝7.5,1.6Hz,2H),7.04(d,J＝9.2Hz,1H),5.96–5.85(m,1H),5.66(s,1H),5.44(qd,J＝6.4,2.8Hz,1H),5.37(d,J＝9.2Hz,1H),5.31(dq,J＝17.2,1.6Hz,1H),5.22(dq,J＝10.4,1.4Hz,1H),4.70(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),4.60(d,J＝5.7Hz,2H),4.45(dd,J＝10.6,7.3Hz,1H),4.36(dd,J＝10.6,6.9Hz,1H),4.33–4.26(m,1H),4.23(t,J＝7.0Hz,1H),4.08(dd,J＝10.1,3.7Hz,1H),3.77(dd,J＝10.0,5.9Hz,1H),1.94–1.80(m,2H),1.44(s,9H),1.29(d,J＝6.4Hz,3H),1.22–1.10(m,1H),0.97–0.92(m,6H),0.89(s,9H),0.08(s,6H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ170.46,168.02,155.98,143.97,143.81,141.31,132.46,127.68,127.05,125.08,119.95,118.07,82.93,71.75,67.04,66.10,63.15,58.86,55.94,47.27,37.80,27.93,25.83,24.71,18.24,17.16,15.39,11.47,-5.45,-5.53ppm；HRMS(m/z):calculated for C42H61N3O10SiNa+[M+Na]+:818.4018,found818.4015.
将化合物式VIII(400mg,0.50mmol,1equiv.)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入二乙胺(2.5mL)，室温反应6h。减压旋蒸除去溶剂，用油泵抽1h，化合物式XXI粗产物不需要纯化，直接用于下一步。
实施例4大环片段化合物式III合成
Figure BDA0001363791690000211
将上面得到的化合物式XXI和化合物式XXII溶解于二氯甲烷中，依次加入二异丙基乙基胺(0.44mL,2.50mmol,5.0equiv.)，PyAOP(521mg,1.00mmol,2.0equiv.)，室温反应12h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×50mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色泡沫，即化合物式VI(298mg,51％)。Rf＝0.38(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/1)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.74(s,1H),9.65(s,1H),8.31(d,J＝9.8Hz,1H),7.43–7.29(m,10H),7.25(d,J＝12.1Hz,1H),6.38(s,1H),5.98–5.85(m,1H),5.51–5.39(m,1H),5.35–5.24(m,1H),5.22–5.13(m,4H),4.85–4.68(m,3H),4.63–4.48(m,3H),4.37(dd,J＝7.9,3.8Hz,1H),4.19(t,J＝7.2Hz,1H),4.13–4.02(m,2H),3.96(t,J＝10.0Hz,2H),3.38–3.28(m,1H),2.48(d,J＝13.8Hz,1H),2.34–2.15(m,1H),1.97–1.84(m,1H),1.80–1.70(m,1H),1.69–1.57(m,1H),1.44(d,J＝7.1Hz,3H),1.40(s,9H),1.34(s,9H),1.23(d,J＝6.6Hz,3H),0.94–0.89(m,6H),0.84(s,9H),0.01(s,3H),0.01(s,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ175.39,174.76,170.91,170.85,170.35,169.47,168.09,167.88,155.92,155.68,153.07,150.82,145.07,135.11,134.67,133.09,132.42,128.85,128.76,128.61,128.58,128.29,118.03,117.34,82.76,82.36,78.91,77.31,71.90,70.88,68.49,68.00,66.04,65.38,64.52,63.17,60.05,57.54,57.47,56.61,55.95,55.79,52.69,51.53,51.02,38.06,37.16,35.81,31.89,29.66,29.62,29.32,28.30,28.01,27.85,26.31,25.80,25.40,22.65,19.14,18.24,17.65,17.17,16.81,15.45,14.07,13.60,11.78,-5.52,-5.55ppm；
将化合物式VI36mg,0.031mmol,1.0equiv.)溶解于三氟乙酸/二氯甲烷(2mL/2mL)中，室温反应4h。减压旋蒸除去溶剂，用油泵抽1h，得到脱保护产物粗产品，直接用于下一步反应。将上述粗产品溶解于二甲基甲酰胺(20mL)中，依次加入NMM(68μL,0.62mmol,20equiv.)，HATU(118mg,0.31mmol,10equiv.)，HOAt(21mg,0.155mmol,5equiv.)，室温反应48h。减压旋蒸除去二甲基甲酰胺，残渣重新用二氯甲烷(50mL)溶解，依次用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到黄色固体，即化合物式III(21mg,75％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.46–7.24(m,10H),5.97–5.84(m,1H),5.55(dt,J＝8.2,4.1Hz,1H),5.30(dq,J＝17.3,1.7Hz,1H),5.23(d,J＝16.2Hz,2H),5.20–5.13(m,2H),5.09(d,J＝12.6Hz,1H),4.63–4.56(m,1H),4.56–4.49(m,2H),4.33–4.26(m,1H),4.21(d,J＝8.4Hz,1H),4.11(q,J＝7.4Hz,1H),4.03(d,J＝6.0Hz,2H),3.91(dd,J＝10.8,5.2Hz,1H),3.87–3.77(m,2H),3.76–3.64(m,1H),3.05–2.85(m,1H),2.14(s,2H),1.78(s,1H),1.50(s,1H),1.38(d,J＝7.4Hz,3H),1.28(d,J＝6.5Hz,3H),1.19–1.07(m,1H),0.97–0.79(m,6H)ppm；
实施例5化合物式V合成
Figure BDA0001363791690000221
将化合物式XXIII(200mg,0.38mmol,1.0equiv.)和D-allo-Ile-OMe(103mg,0.57mmol,1.5equiv.)溶解于二氯甲烷(10mL)中，依次加入二异丙基乙基胺(0.27mL,1.52mmol,4.0equiv.)和PyAOP(396mg,0.76mmol,2.0equiv.)，室温反应12h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×20mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色固体化合物式XXIV(235mg,96％)。TLC:Rf＝0.50(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/1)；[α]D 20＝-0.2(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.42–7.14(m,20H),5.98(d,J＝7.1Hz,1H),5.17–5.04(m,2H),4.56(dd,J＝8.6,4.1Hz,1H),4.23(q,J＝6.8Hz,1H),3.66(s,3H),2.62–2.47(m,2H),2.18–2.06(m,1H),2.04–1.95(m,1H),1.95–1.84(m,1H),1.35–1.23(m,1H),1.16–1.05(m,1H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H),0.73(d,J＝7.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ172.53,172.04,171.72,156.21,144.58,136.44,128.76,128.49,128.08,128.03,127.93,127.00,70.73,66.84,55.78,53.89,52.10,36.86,33.43,29.45,26.18,14.49,11.72ppm；HRMS(m/z):calculated for C39H43N3O6Na+[M+Na]+:672.3044,found 672.3052.
将化合物式XXIV(117mg,0.18mmol,1.0equiv.)溶解于四氢呋喃(5mL)中，LiOH·H2O(15mg,0.36mmol,2.0equiv.)溶解于水(5mL)中，并逐滴加入底物的四氢呋喃溶液中，室温反应1h。减压旋蒸除去四氢呋喃，水相用1.0M盐酸酸化至pH＝2，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后得到羧酸粗产物，不需要纯化，直接用于下一步。将羧酸和L-Ile-OMe(49mg,0.27mmol,1.5equiv.)溶解于二氯甲烷(20mL)中，依次加入二异丙基乙基胺(0.13mL,0.72mmol,4.0equiv.)和PyAOP(234mg,0.45mmol,2.5equiv.)，室温反应12h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×20mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色固体，即化合物式V(119mg,88％)。Rf＝0.42(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/1)；[α]D 20＝+22.8(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.40–7.29(m,5H),7.29–7.13(m,15H),6.88(dd,J＝18.7,7.9Hz,2H),6.20(d,J＝5.9Hz,1H),5.14(d,J＝12.2Hz,1H),5.07(d,J＝12.2Hz,1H),4.49(dd,J＝8.2,5.5Hz,1H),4.40(dd,J＝8.5,4.7Hz,1H),4.10–4.01(m,1H),3.61(s,3H),2.62–2.51(m,1H),2.50–2.38(m,1H),2.17–2.06(m,1H),2.06–1.95(m,2H),1.94–1.83(m,1H),1.49–1.36(m,1H),1.34–1.24(m,1H),1.24–1.06(m,2H),0.94–0.81(m,9H),0.76(d,J＝6.9Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ172.28,171.94,171.70,171.15,156.67,144.48,136.24,128.67,128.50,128.24,128.18,127.93,127.04,70.80,67.09,56.80,56.72,55.25,51.86,37.28,36.28,33.55,28.02,26.44,25.27,15.52,14.10,11.61,11.45ppm；HRMS(m/z):calculated for C45H54N4O7Na+[M+Na]+:785.3885,found 785.3882.
将化合物式V(80mg,0.100mmol,1.0equiv.)溶解于甲醇(2mL)中，加入二氯化钯(9mg,0.050mmol,0.5equiv.)，在氢气下室温反应2h。过滤，减压旋蒸除去溶剂，浓缩后得到胺化合物式XXVII粗产物，不需要纯化，直接用于下一步。
实施例6化合物式IV合成
Figure BDA0001363791690000241
将化合物式XXV(200mg,0.64mmol,1.0equiv.)和L-Ile-OMe(174mg,0.96mmol,1.5equiv.)溶解于二氯甲烷(10mL)中，依次加入二异丙基乙基胺(0.45mL,2.56mmol,4.0equiv.)，EDCI(246mg,1.28mmol,2.0equiv)和HOAt(87mg,0.64mmol,1.0equiv.)，室温反应12h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×20mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到无色油状液体，即化合物式XXVI(195mg,69％)。Rf＝0.41(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/5)；[α]D 20＝+90.0(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.39–7.07(m,10H),6.67(d,J＝8.6Hz,1H),5.11(s,2H),5.08–5.01(m,1H),4.98–4.84(m,1H),4.58–4.47(m,1H),3.68(s,3H),3.47–3.28(m,1H),2.97(dd,J＝14.4,9.1Hz,1H),2.90(s,3H),1.88–1.77(m,1H),1.38–1.26(m,1H),1.13–0.97(m,1H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H),0.82(d,J＝6.7Hz,3H)ppm；13CNMR(125MHz,CDCl3)δ171.95,170.19,157.40,137.26,136.53,128.97,127.95,127.62,126.57,67.70,67.51,60.99,60.08,56.58,51.90,37.56,37.37,34.28,33.97,30.99,30.38,25.08,15.52,11.49ppm；HRMS(m/z):calculated for C25H32N2O5Na+[M+Na]+:463.2203,found 463.2204.
将化合物式XXVI(1.50g,3.41mmol,1.0equiv.)溶解于四氢呋喃(20mL)中，LiOH·H2O(286mg,6.82mmol,2.0equiv.)溶解于水(20mL)中，并逐滴加入底物的四氢呋喃溶液中，室温反应1h。减压旋蒸除去四氢呋喃，水相用1.0M盐酸酸化至pH＝2，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后得到羧酸粗产物，不需要纯化，直接用于下一步。将羧酸和L-Ser-OMe(796mg,5.12mmol,1.5equiv.)溶解于二氯甲烷(20mL)中，依次加入二异丙基乙基胺(2.97mL,17.05mmol,5.0equiv.)和PyAOP(3.55g,6.82mmol,2.0equiv.)，室温反应12h。反应用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×50mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色固体(1.35g,75％)。Rf＝0.41(silica,乙酸乙酯/正己烷＝2/1)；[α]D 20＝+65.2(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.40–7.06(m,10H),6.79–6.63(m,1H),5.18–4.99(m,2H),4.83(t,J＝8.0Hz,1H),4.69–4.46(m,2H),4.32(t,J＝7.6Hz,1H),4.01–3.91(m,1H),3.90–3.81(m,1H),3.74(s,3H),3.40–3.27(m,1H),3.17–3.06(m,1H),3.06–2.96(m,1H),2.85(s,3H),1.86(s,1H),1.47–1.33(m,1H),1.13–0.96(m,1H),0.94–0.77(m,6H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ171.26,171.17,170.95,170.74,170.63,157.28,157.21,156.08,137.08,136.53,136.28,136.13,128.95,128.87,128.66,128.55,128.49,128.14,128.04,127.95,127.69,127.04,126.69,67.76,67.69,67.10,62.67,61.26,58.06,56.88,54.79,54.75,54.65,52.60,52.51,38.84,36.46,34.35,31.59,26.34,24.72,15.42,14.26,11.58,11.17ppm；HRMS(m/z):calculated forC28H37N3O7Na+[M+Na]+:550.2524,found 550.2526.
将前述产物(105mg,0.20mmol,1.0equiv.)溶解于二氯甲烷(5mL)中，冷却到0℃后，依次加入咪唑(54mg,0.80mmol,4.0equiv.)和TBSCl(60mg,0.40mmol,2.0equiv.)，室温反应4h。反应用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，分液后，水相用二氯甲烷(3×10mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色泡沫，即化合物式IV(121mg,94％)。Rf＝0.49(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/2)；[α]D 20＝+77.2(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.40–7.06(m,10H),6.70(d,J＝8.3Hz,1H),6.53(d,J＝8.0Hz,1H),5.17–4.86(m,3H),4.65–4.57(m,1H),4.35(dd,J＝8.4,5.6Hz,1H),4.05(ddd,J＝12.8,10.2,2.9Hz,1H),3.82(ddd,J＝10.1,6.8,3.1Hz,1H),3.74(d,J＝8.7Hz,3H),3.38(dd,J＝14.4,7.1Hz,1H),2.98(dd,J＝14.3,9.3Hz,1H),2.89(s,3H),1.90–1.78(m,1H),1.44(ddt,J＝10.7,7.7,3.9Hz,1H),1.11(ddt,J＝14.4,9.5,7.3Hz,1H),0.94–0.79(m,15H),0.03(s,3H),0.03(s,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ170.39,170.09,169.64,157.21,137.24,136.52,128.95,128.82,128.54,128.47,128.43,128.04,127.97,127.91,127.75,127.63,126.59,67.54,63.22,60.80,57.62,56.52,54.40,54.26,52.33,52.25,37.78,37.49,34.40,34.27,30.83,26.22,25.65,24.89,18.11,15.18,11.65,11.48,-5.55,-5.74ppm；HRMS(m/z):calculated for C34H51N3O7SiNa+[M+Na]+:664.3388,found 664.3396.
将化合物式IV(60mg,0.094mmol,1.0equiv.)溶解于甲苯(5mL)中，加入三甲基氢氧化锡(86mg,0.470mmol,5.0equiv.)，70℃反应24h。用乙酸乙酯(20mL)稀释，饱和氯化铵溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到羧酸化合物式XXVIII粗产物，不需要纯化，直接用于下一步。
实施例7侧链六肽片段化合物式II合成
Figure BDA0001363791690000271
将上面得到的化合物式XXVII和化合物式XXVIII溶解于二甲基甲酰胺(5mL)中，依次加入二异丙基乙基胺(98μL,0.564mmol,6.0equiv.)和PyAOP(147mg,0.282mmol,3.0equiv.)，室温反应12h。减压旋蒸除去溶剂，重新用二氯甲烷(50mL)溶解，用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色固体，即化合物式II(53mg,46％)。Rf＝0.32(silica,乙酸乙酯/正己烷＝1/1)；[α]D 20＝+30.6(c 1.0,CHCl3)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.48–6.99(m,25H),6.85(s,1H),6.71(s,1H),6.25(dd,J＝24.7,8.7Hz,1H),5.11(q,J＝11.9,11.4Hz,2H),4.59–4.42(m,1H),4.41–4.28(m,2H),4.28–4.16(m,2H),3.94(d,J＝6.3Hz,1H),3.73(d,J＝6.9Hz,1H),3.64(s,3H),3.23(dd,J＝13.9,6.0Hz,1H),3.10(dd,J＝13.9,10.2Hz,1H),2.71(d,J＝26.5Hz,1H),2.56(d,J＝7.2Hz,1H),2.53–2.41(m,1H),2.26–2.15(m,1H),2.13–2.06(m,1H),1.98–1.83(m,2H),1.48–1.35(m,2H),1.23–1.13(m,2H),1.12–0.99(m,2H),0.96–0.74(m,27H),0.04(s,6H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ172.78,172.08,171.92,171.30,171.16,170.34,170.03,157.17,144.57,136.85,136.03,130.84,129.01,128.77,128.71,128.61,128.54,128.22,127.85,126.92,126.78,70.71,67.78,65.52,64.32,63.43,62.59,60.33,59.15,57.75,57.15,56.91,56.78,56.54,56.09,53.49,52.11,52.02,37.72,37.57,37.40,37.15,36.40,36.26,34.35,34.08,33.62,31.90,30.66,30.59,29.66,29.62,29.31,28.02,26.30,26.18,25.80,25.22,25.16,25.03,24.80,23.15,18.17,15.73,15.59,15.52,15.43,15.25,14.50,14.25,14.16,11.58,11.52,11.42,11.37,11.19,-5.43,-5.49ppm；HRMS(m/z):calculated for C70H95N7O11SiNa+[M+Na]+:1260.6751,found1260.6746.
将化合物式II(10mg,0.0081mmol,1.0equiv.)溶解于甲苯(2mL)中，加入三甲基氢氧化锡(7mg,0.0405mmol,5.0equiv.)，70℃反应24h。用乙酸乙酯(20mL)稀释，饱和氯化铵溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到羧酸化合物式XXIX粗产物，不需要纯化，直接用于下一步。
实施例8 Teixobactin化合物式I的合成：
Figure BDA0001363791690000281
将化合物式III(10mg,0.0113mmol,1.0equiv.)和四(三苯基膦)钯(3mg,0.0028mmol,0.25equiv.)溶解于二氯甲烷(1mL)中，冷却至0℃，加入二乙胺(10μL)室温反应1h。减压旋蒸除去溶剂，浓缩后得到胺粗产物，不需要纯化，直接用于下一步。将上面得到的胺化合物与化合物式XXIX溶解于二甲基甲酰胺(1mL)中，依次加入二异丙基乙基胺(14μL,0.0810mmol,10.0equiv.)，EDCI(9mg,0.0486mmol,6.0equiv.)和HOAt(2mg,0.0162mmol,2.0equiv.)，室温反应12h。减压旋蒸除去溶剂，重新用二氯甲烷(50mL)溶解，用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后硅胶柱层析分离得到白色固体，即化合物式XXX(14mg,86％)。
将化合物式XXX(6mg,0.003mmol,1.0equiv.)溶解于甲醇(2mL)中，加入二氯化钯(1mg,0.006mmol,2.0equiv.)，在氢气下室温反应6h。过滤，减压旋蒸除去溶剂，得到Trt保护的天然产物teixobactin，不需要纯化，直接用三氟乙酸/二氯甲烷(1mL/0.5mL)溶解，加入三异丙基硅烷(0.1mL)，室温反应6h。减压旋蒸除去溶剂，直接用HPLC分离。洗脱剂：乙腈(加0.1％三氟乙酸)/水(加0.1％三氟乙酸)。洗脱梯度：5％至95％乙腈/水。流速：1mL/min。保留时间：15.38min。得到的产物经低温冻干得到teixobactin的双三氟乙酸盐，再用5mM盐酸反复溶解，低温冻干三次，得到teixobactin的双盐酸(1.5mg,40％)。1H NMR和13C NMR数据见表1。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种teixobactin的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
利用式XVII所示的化合物与Boc-L-Ala进行第一接肽反应得到式VII所示的化合物；
利用式XVIII所示的化合物与Alloc-L-Ser进行第二接肽反应，然后与Fmoc-L-Ile进行酯化反应得到式VIII所示的化合物；
将式VII所示的化合物和式VIII所示的化合物进行第一缩合反应并环化得到环片段式III所示的化合物；
液相合成侧链六肽片段式II所示的化合物；
将式III所示的化合物与式II所示的化合物进行第二缩合反应再脱保护得到teixobactin双盐酸盐；
其中，上述化合物结构式如下：
Figure FDA0002192666000000011
Figure FDA0002192666000000021
2.如权利要求1所述的teixobactin的制备方法，其特征在于，式XVII所示的化合物的合成过程包括：
对式IX所示的化合物的二级羟基进行TBS保护，得到式X所示的化合物；
将式X所示的化合物的氮原子邻位的亚甲基氧化为羰基，得到式XI所示的化合物；
将式XI所示的化合物的开环生成式XII所示的化合物，然后依次进行光延反应、三甲基膦还原、Cbz保护的胍基化、脱TBS保护、分子内SN2反应，得到式XVII所示的化合物；其中，上述化合物结构式如下：
Figure FDA0002192666000000022
3.如权利要求2所述的teixobactin的制备方法，其特征在于，将式XI所示的化合物的开环生成式XII所示的化合物的步骤中，开环生成体系包括硼氢化钠、乙醇和缓冲溶液，且所述缓冲溶液的pH＝7。
4.如权利要求1所述的teixobactin的制备方法，其特征在于，所述第一接肽反应过程包括：
将式XVII所示的化合物酸性条件下脱除Boc和叔丁酯得到第一中间体；
将所述第一中间体在盐酸/甲醇条件下甲酯化得到第二中间体；
将所述第二中间体再与Boc-L-Ala在PyAOP条件下接肽得式VII所示的化合物。
5.如权利要求1所述的teixobactin的制备方法，其特征在于，式VIII所示的化合物的合成过程包括：先将式XVIII所示的化合物与Alloc-L-Ser进行第二接肽反应后，用TBS选择性保护一级羟基得到式XX所示的化合物，然后其二级羟基与Fmoc-L-Ile酯化反应得到式VIII所示的化合物；其中，式XX所示的化合物结构式如下：
Figure FDA0002192666000000031
6.如权利要求1所述的teixobactin的制备方法，其特征在于，式III所示的化合物的合成过程包括：
对式VIII所示的化合物用二乙胺脱除Fmoc保护得式XXI所示的化合物；
对式VII所示的化合物用LiOH水解甲酯得式XXII所示的化合物；
将式XXI所示的化合物和式XXII所示的化合物在PyAOP作用下缩合，再脱除Boc、叔丁酯和TBS，最后关环得式III所示的化合物；其中，上述化合物结构式如下：
Figure FDA0002192666000000032
7.如权利要求1所述的teixobactin的制备方法，其特征在于，式II所示的化合物的合成过程包括：
用侧链Trt保护的Cbz-D-Gln和D-allo-异亮氨酸甲酯缩合得到式XXIV所示的化合物，然后用LiOH水解甲酯再与L-异亮氨酸甲酯缩合得到式V所示的化合物；
用Cbz-N-Me-D-苯丙氨酸和L-异亮氨酸甲酯缩合得到式XXVI所示的化合物，然后用LiOH水解甲酯再与L-丝氨酸甲酯缩合，并用TBS保护游离羟基，得到式IV所示的化合物；
将式V所示的化合物和式IV所示的化合物缩合得到式II所示的化合物；其中，上述化合物结构式如下：
Figure FDA0002192666000000041
8.如权利要求1所述的teixobactin的制备方法，其特征在于，所述第二缩合反应过程包括：
将式III所示的化合物脱Alloc保护，式II所示的化合物水解C-端甲酯，然后两者缩合得到式XXX所示化合物；
将式XXX所示化合物经脱保护、HPLC分离、稀盐酸冻干得到teixobactin双盐酸盐；其中，式XXX所示的化合物结构式如下：
Figure FDA0002192666000000051
9.如权利要求8所述的teixobactin的制备方法，其特征在于，式XXX所示的化合物脱保护过程包括：在酸性的二氯化钯/氢气条件下脱除Cbz和TBS，在三氟乙酸/三异丙基硅烷条件下脱除Trt。
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