CN107255695A - 一种食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法，经过待测酶稀释液的制备、测定试验、空白试验和结果计算四个步骤，完成食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法；本发明的有点在于：本发明简便易于实施，得出的结果较为精准，从而为食品添加剂过氧化氢酶的生产者及使用者评价该酶的当前活力高低提出了可选的解决方案。
Description
技术领域
本发明涉及一种评价方法，具体涉及一种食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法。
背景技术
食品添加剂是为改善食品色、香、味等品质，以及为防腐和加工工艺的需要而加入食品中的人工合成或者天然物质。目前我国食品添加剂有23个类别，2000多个品种，包括酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、着色剂、护色剂、酶制剂、增味剂、营养强化剂、防腐剂、甜味剂、增稠剂、香料等。
过氧化氢酶，是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶, 约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。过氧化氢酶也被用于食品包装，防止食物被氧化，食品添加剂过氧化氢酶与其他酶制剂一样，酶活力通常会随储存时间而降低。
但是，经检索，对食品添加剂过氧化氢酶酶活力的评价却一直没有一个统一的评价方法，不便于贸易双方对产品使用性能进行测评，尤其对食品生产者，不能预测最佳使用量以达到使用预期，造成浪费。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，现提供一种操作简单，评价结果准确性高的食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法，其创新点在于：经过待测酶稀释液的制备、测定试验、空白试验和结果计算四个步骤，完成食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法；具体步骤如下：
（1）待测酶稀释液的制备：准确量取过氧化氢酶1mL，放置于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至100mL刻度线，备用；
（2）测定试验：用移液管准确加入25mL的过氧化氢溶液于250mL三角瓶中，然后将三角瓶放于25℃恒温水浴锅中至恒温，然后用移液管向三角瓶中加入1mL过氧化氢酶稀释液，同时开始准确计时5min，立即加入5mL浓度为10%的硫酸溶液，摇晃均匀，然后用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液滴定于三角瓶内，直至出现粉红色为止，记录高锰酸钾的滴定量V1；
（3）空白试验：用移液管准确加入25mL的过氧化氢溶液于250mL三角瓶中，然后将三角瓶放于25℃恒温水浴锅中至恒温，然后用移液管向三角瓶中加入1mL煮死的过氧化氢酶稀释液，同时开始准确计时5min，立即加入5mL浓度为10%的硫酸溶液，摇晃均匀，然后用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液滴定于三角瓶内，直至出现粉红色为止，记录高锰酸钾的滴定量V0；
（4）结果计算：
式中，X表示过氧化氢酶酶活力，单位为U/mL；V0表示空白试验中消耗的高锰酸钾标准溶液体积，单位为mL；V1表示测试试验中消耗的高锰酸钾标准溶液体积，单位为mL；c表示高锰酸钾标准溶液的浓度，单位为mol/L。
进一步的，所述步骤（2）中的过氧化氢溶液由3mL浓度为30%的过氧化氢经过pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液稀释至500mL而成。
进一步的，所述磷酸盐缓冲溶液由十二水磷酸氢二钠和二水磷酸氢二钠混合而成，所述磷酸盐缓冲溶液的具体制备方法为：分别称取43g十二水磷酸氢二钠和12.4g二水磷酸二氢钠，加入蒸馏水溶解，然后选用蒸馏水定溶至1000mL，即完成了磷酸盐缓冲溶液。
本发明的有益效果如下：本发明简便易于实施，得出的结果较为精准，从而为食品添加剂过氧化氢酶的生产者及使用者评价该酶的当前活力高低提出了可选的解决方案。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
一种食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法，经过待测酶稀释液的制备、测定试验、空白试验和结果计算四个步骤，完成食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法；具体步骤如下：
（1）待测酶稀释液的制备：准确量取过氧化氢酶1mL，放置于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至100mL刻度线，备用；
（2）测定试验：用移液管准确加入25mL的过氧化氢溶液于250mL三角瓶中，然后将三角瓶放于25℃恒温水浴锅中至恒温，然后用移液管向三角瓶中加入1mL过氧化氢酶稀释液，同时开始准确计时5min，立即加入5mL浓度为10%的硫酸溶液，摇晃均匀，然后用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液滴定于三角瓶内，直至出现粉红色为止，记录高锰酸钾的滴定量V1；
（3）空白试验：用移液管准确加入25mL的过氧化氢溶液于250mL三角瓶中，然后将三角瓶放于25℃恒温水浴锅中至恒温，然后用移液管向三角瓶中加入1mL煮死的过氧化氢酶稀释液，同时开始准确计时5min，立即加入5mL浓度为10%的硫酸溶液，摇晃均匀，然后用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液滴定于三角瓶内，直至出现粉红色为止，记录高锰酸钾的滴定量V0；
（4）结果计算：
式中，X表示过氧化氢酶酶活力，单位为U/mL；V0表示空白试验中消耗的高锰酸钾标准溶液体积，单位为mL；V1表示测试试验中消耗的高锰酸钾标准溶液体积，单位为mL；c表示高锰酸钾标准溶液的浓度，单位为mol/L。
过氧化氢溶液由3mL浓度为30%的过氧化氢经过pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液稀释至500mL而成。
磷酸盐缓冲溶液由十二水磷酸氢二钠和二水磷酸氢二钠混合而成，磷酸盐缓冲溶液的具体制备方法为：分别称取43g十二水磷酸氢二钠和12.4g二水磷酸二氢钠，加入蒸馏水溶解，然后选用蒸馏水定溶至1000mL，即完成了磷酸盐缓冲溶液。
本发明简便易于实施，得出的结果较为精准，从而为食品添加剂过氧化氢酶的生产者及使用者评价该酶的当前活力高低提出了可选的解决方案。
上述实施例只是本发明的较佳实施例，并不是对本发明技术方案的限制，只要是不经过创造性劳动即可在上述实施例的基础上实现的技术方案，均应视为落入本发明专利的权利保护范围内。
Claims (3)
1.一种食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法，其特征在于：经过待测酶稀释液的制备、测定试验、空白试验和结果计算四个步骤，完成食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法；具体步骤如下：
（1）待测酶稀释液的制备：准确量取过氧化氢酶1mL，放置于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至100mL刻度线，备用；
（2）测定试验：用移液管准确加入25mL的过氧化氢溶液于250mL三角瓶中，然后将三角瓶放于25℃恒温水浴锅中至恒温，然后用移液管向三角瓶中加入1mL过氧化氢酶稀释液，同时开始准确计时5min，立即加入5mL浓度为10%的硫酸溶液，摇晃均匀，然后用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液滴定于三角瓶内，直至出现粉红色为止，记录高锰酸钾的滴定量V1；
（3）空白试验：用移液管准确加入25mL的过氧化氢溶液于250mL三角瓶中，然后将三角瓶放于25℃恒温水浴锅中至恒温，然后用移液管向三角瓶中加入1mL煮死的过氧化氢酶稀释液，同时开始准确计时5min，立即加入5mL浓度为10%的硫酸溶液，摇晃均匀，然后用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液滴定于三角瓶内，直至出现粉红色为止，记录高锰酸钾的滴定量V0；
（4）结果计算：
说明: 说明: IMG_256
式中，X表示过氧化氢酶酶活力，单位为U/mL；V0表示空白试验中消耗的高锰酸钾标准溶液体积，单位为mL；V1表示测试试验中消耗的高锰酸钾标准溶液体积，单位为mL；c表示高锰酸钾标准溶液的浓度，单位为mol/L。
2.根据权利要求1所述的一种食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法，其特征在于：所述步骤（2）中的过氧化氢溶液由3mL浓度为30%的过氧化氢经过pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液稀释至500mL而成。
3.根据权利要求2所述的一种食品添加剂过氧化氢酶酶活力评价方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲溶液由十二水磷酸氢二钠和二水磷酸氢二钠混合而成，所述磷酸盐缓冲溶液的具体制备方法为：分别称取43g十二水磷酸氢二钠和12.4g二水磷酸二氢钠，加入蒸馏水溶解，然后选用蒸馏水定溶至1000mL，即完成了磷酸盐缓冲溶液。
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| CN104297185A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-01-21 | 西安米亿生物科技有限公司 | 过氧化氢酶活性的检测方法 |
| CN106706839A (zh) * | 2015-07-24 | 2017-05-24 | 中国农业大学 | 一种利用土壤过氧化氢酶表征土壤重金属污染的方法 |
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