CN107249572A - 包含褪黑素的局部液体组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新的基于褪黑素的制剂，特别是适用于在医学辅助生殖(例如，体外受精‑IVF)期间进行的子宫内冲洗的褪黑素(或其类似物)的局部液体组合物。褪黑素是众所周知不稳定的，特别是在溶液中。本发明的组合物显示高稳定性，其允许它们在其最终用于抑制或预防胚胎植入失败之前保存较长时间。

Description

包含褪黑素的局部液体组合物
引言
本发明涉及新的基于褪黑素的制剂，特别是褪黑素(或其类似物)的局部液体组合物，其可以用于医学辅助生殖(例如，体外受精-IVF)期间的子宫内冲洗，以促进胚胎植入和/或抑制或预防胚胎植入子宫失败。本发明还尤其涉及所述新的褪黑素制剂的具体用途、制备所述制剂的方法和包括所述制剂的医疗装置。
背景
对于医学辅助生殖(MAR)的需求继续增加，这部分是由于诸如体外受精(IVF)等治疗的可用性的扩大，并且还由于作为生殖障碍的生育问题的日益增加的发病率。
IVF过程涉及在由一个或多个预先获得的卵(卵子)的体外受精，然后由其最终形成的胚胎(多个胚胎)被移植(回)到子宫中以允许胚胎植入发生。通常，IVF过程之前是在卵子(或更典型的几个卵子)从卵巢中被移出之前监测和刺激排卵过程。然后将提取的卵子与实验室中的流体培养基中的精子接触以促进受精。然后将受精卵(合子)在合适的生长培养基中培养数天以形成胚胎(多个胚胎)，之后将胚胎(多个胚胎)最终移植(回)到子宫。然后可以在胚胎(多个胚胎)成功植入子宫后建立妊娠。
MAR技术如IVF的成功取决于复杂的一系列因素，其中一些因素可以容易地被控制，而其他因素则不能。通常，将(通过IVF形成的)多个胚胎移植到子宫，以提高IVF治疗的整体成功率，特别是在生育问题特别明显的情况下。特别地，用多个胚胎使子宫受孕降低完全胚胎植入失败的可能性，因为胚胎中的至少一个将成功地植入子宫内的概率增加。然而，这种策略带来了固有(inherant)的风险，因为多个植入可导致多胎妊娠/多胎分娩，这产生众所周知的危险。因此，在医学辅助生殖领域已经有各种进展，以改善植入率，尤其是减少多胚胎移植及由此产生的相应风险。例如，通过给予药物如黄体酮、孕酮或GnRH激动剂提供黄体支持，以增加植入和早期胚胎发生的成功率。然而，植入率通常仍然太低，无法完全排除多胚胎移植。
将人胚胎植入子宫是一种复杂的机制，其涉及胚胎和子宫内膜上皮二者。附着、粘附和侵入的阶段涉及在该过程中起独特的作用的多种分子，受孕和子宫内膜之间的分子对话意味着细胞之间以及细胞与生化因子之间的相互作用。如果适当表达或抑制这些机制，则这些机制有助于确定子宫内膜对于胚胎的接受性或非接受性状态。
胚胎植入和相关机制在WO 2013/178587(MAXIA等人)中有详细描述，特别是第1页第6行至第6页第17行，将其引入本文作为参考。
尽管当今的MAR技术处于先进状态，但胚胎植入失败仍然是未解决的问题，并且被认为是健康女性不孕的主要原因。使用MAR的植入成功率趋于约25％。因此，子宫接受性不足被认为占所有失败的大约三分之二的原因(胚胎被认为占三分之一的原因)。
引入本文作为参考的WO 2013/178587(MAXIA等人)公开了由于认识到褪黑素在胚胎筑巢(nesting)过程中的关键作用而产生的最近进展。MAXIA等人描述了使用褪黑素(和/或其类似物)以促进胚胎植入和/或减少胚胎植入失败，特别是在患有不孕不育或多次流产的哺乳动物受试者中。特别地，MAXIA等人描述了含有褪黑素的局部子宫冲洗/子宫内膜冲洗组合物，其可以在取卵母细胞时或之后在子宫内有利地局部给予，但是适合地在胚胎移植到所述子宫之前数天给予。这种冲洗显示显著提高植入成功率和相应的怀孕率。
然而，仍然需要优化用于MAR治疗的局部褪黑素制剂，特别是解决制剂稳定性问题(对于其生产、储存、运输和使用的所有阶段)，而不损害(或最小地损害)制剂功效、临床安全性、生产可行性、一致性、成本和质量控制。考虑到这种制剂的各组分之间的微妙平衡和相互作用，这种优化的制剂的开发是一个重大的挑战。因此，本申请人进行了重要的研究和开发，以开发供选择的和/或改进的褪黑素的液体制剂。期望地，任何新的这样的制剂将解决现有技术中固有的至少一个问题。
发明概述
根据本发明的第一方面，提供了局部液体组合物(适合于子宫内冲洗)，所述组合物包含：
褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
缓冲体系；
其中所述组合物任选地还包含一种或多种选自以下的组分：氨基酸(多种氨基酸)；张力剂(多种张力剂)；表面活性剂(多种表面活性剂)；和糖(多种糖)；其中所述组合物任选地还包含一种或多种(另外的)药学上可接受的赋形剂(多种赋形剂)、稀释剂(多种稀释剂)和/或载体(多种载体)。
根据本发明的另一方面，提供了用于子宫内冲洗的局部液体组合物，所述组合物包含：
褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；
缓冲体系；和
包含至少一个硫原子的第一氨基酸。
根据本发明的另一方面，提供了用于子宫内冲洗的局部液体组合物，所述组合物包含：
褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；
缓冲体系；和
表面活性剂；
其中所述组合物具有7至8.5的pH。
根据本发明的另一方面，提供了制备局部液体组合物的方法，所述方法包括任选地以规定的任何量、浓度或形式将以下混合在一起(或以另外的方式形成以下的混合物)：
褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
缓冲体系；
任选地一种或多种选自以下的组分：氨基酸(多种氨基酸)；张力剂(多种张力剂)；表面活性剂(多种表面活性剂)；和糖(多种糖)；和/或
任选地一种或多种(另外的)药学上可接受的赋形剂(多种赋形剂)、稀释剂(多种稀释剂)和/或载体(多种载体)；和
任选地调节与局部液体组合物有关的本文给出的任何一个或多个参数(例如，pH、重量摩尔渗透压浓度(osmolality))。
根据本发明的另一方面，提供了局部液体组合物，其可通过如本文定义的制备局部液体组合物的方法获得，通过如本文定义的制备局部液体组合物的方法获得，或通过如本文定义的制备局部液体组合物的方法直接获得。
根据本发明的另一方面，提供了用于治疗的如本文定义的局部液体组合物。
根据本发明的另一方面，提供了用于治疗不孕不育的如本文定义的局部液体组合物。
根据本发明的另一方面，提供了用于辅助生殖的如本文所定义的局部液体组合物(适合于子宫内冲洗)。
根据本发明的另一方面，提供了用于体外受精治疗的如本文定义的局部液体组合物。
根据本发明的另一方面，提供了用于治疗胚胎植入失败(特别是在辅助生殖治疗期间)的如本文定义的局部液体组合物。
根据本发明的另一方面，提供了用于促进胚胎植入、改善胚胎植入、抑制和/或预防胚胎植入失败、降低胚胎植入失败的概率、促进辅助生殖、提高子宫对胚胎植入的接受性和/或治疗子宫的如本文定义的局部液体组合物。
根据本发明的另一方面，提供了套件(package)或医疗装置，其包括预填充或配置成用于填充如本文所定义的局部液体组合物的无菌容器。
根据本发明的另一方面，提供了多部件试剂盒(a kit of parts)，其包括如本文所定义的套件或医疗装置、如本文所定义的局部液体组合物(任选地包含在套件或医疗装置中)和任选地一套具有关于局部液体组合物的给予(例如，局部给予)的指导的说明书。
根据本发明的另一方面，提供了制备套件或医疗装置的方法，所述方法包括将如本文所定义的局部液体组合物加入套件或医疗装置内。
根据本发明的第十一方面，提供了套件或医疗装置，其可通过如本文定义的制备套件或医疗装置的方法获得，通过如本文定义的制备套件或医疗装置的方法获得，或通过如本文定义的制备套件或医疗装置的方法直接获得。
根据本发明的另一方面，提供了治疗需要该治疗的患者的疾病、病症或医学障碍的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的如本文所定义的局部液体组合物。
根据本发明的另一方面，提供了如本文所定义的局部液体组合物在准备用于生育治疗的子宫中的用途。
根据本发明的另一方面，提供了如本文所定义的局部液体组合物在制备用于治疗疾病、病症或障碍的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供了治疗需要该治疗的患者的不孕不育的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的如本文所定义的局部液体组合物。
根据本发明的另一方面，提供了如本文所定义的局部液体组合物在不孕不育治疗中的用途。
根据本发明的第十七方面，提供了如本文所定义的局部液体组合物在制备用于治疗不孕不育的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供了治疗需要该治疗的患者的胚胎植入失败的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的如本文所定义的局部液体组合物。
根据本发明的另一方面，提供了如本文所定义的局部液体组合物用于治疗不孕不育失败的用途。
根据本发明的第十七方面，提供了如本文所定义的局部液体组合物在制备用于治疗胚胎植入失败的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供了在需要该治疗的患者中促进胚胎植入的方法，改善胚胎植入的方法，抑制和/或预防胚胎植入失败的方法，降低胚胎植入失败概率的方法，促进辅助生殖的方法，提高子宫对胚胎植入的接受性的方法和/或治疗子宫的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的如本文所定义的局部液体组合物。
根据本发明的另一方面，提供了如本文所定义的局部液体组合物用于促进胚胎植入、改善胚胎植入、抑制和/或预防胚胎植入失败、降低胚胎植入失败的概率、促进辅助生殖、提高子宫对胚胎植入的接受性和/或治疗子宫的用途。
根据本发明的另一方面，提供了如本文所定义的局部液体组合物在制备用于促进胚胎植入、改善胚胎植入、抑制和/或预防胚胎植入失败、降低胚胎植入失败的概率、促进辅助生殖、提高子宫对胚胎植入的接受性和/或治疗子宫的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供了冲洗和/或灌洗子宫和/或子宫内膜的方法，所述方法包括将本文定义的局部液体组合物局部给予子宫和/或子宫内膜。
根据本发明的另一方面，提供了促进胚胎在子宫内植入的方法，所述方法包括：
(i)使用如本文所定义的局部液体组合物冲洗和/或灌洗子宫和/或子宫内膜；
(ii)将胚胎(例如，通过IVF的一种形式)移植到子宫(适合地在步骤(i)之后，适合地在步骤(i)之后一天或多天)；和
(iii)允许胚胎植入子宫内(和之后任选地监测植入和/或怀孕的进展)。
在另外的方面，本发明提供了局部液体组合物、套件或医疗装置、多部件试剂盒、制备局部液体组合物的方法、制备套件或医疗装置的方法、治疗方法、用于使用的局部液体组合物、和局部液体组合物在制备药物中的用途，基本上如本文所定义(包括前述方面中的任一个)，例外的是，并非特定于“褪黑素”(及其类似物)，而本发明还可以适用于(且因此可以被定义为涉及)促进胚胎植入或以其他方式抑制/预防辅助生殖中的胚胎植入失败的任何活性物质(特别是当用作子宫内冲洗组合物时)。相关的活性物质适合地是已经获得FDA批准的活性物质。因此，出于本发明的这些另外的方面的目的，除非与其不相容，本文对“褪黑素”的任何提及都可以解释为对任何活性物质的提及(不论其涉及绝对的或相对的量、浓度、参数或性质与否)。
适合地，本文定义的组合物、套件和医疗装置用于辅助生殖，特别是用于抑制和/或预防进入到子宫中的胚胎植入失败。这样的组合物、套件和医疗装置适合用于医学或兽医学领域。适合地，这样的组合物、套件和医疗装置用于局部给予，适合地进入到子宫中。组合物、套件和医疗装置适用于辅助哺乳动物受试者(适合地雌性哺乳动物受试者)的生殖，适合地在需要这种治疗的受试者中的生殖，最适合地用于辅助人受试者的生殖。适合地，组合物、套件和医疗装置的局部给予涉及(治疗)有效量的组合物的局部给予。
就本发明的任何特定方面描述的任何特征，包括任选的、适合的和优选的特征，也可以是本发明的任何其他方面的特征，包括任选的、适合的和优选的特征。
发明详述
定义
除非另有说明，说明书和权利要求书中使用的以下术语具有以下所述的以下含义。
在本申请文件的整个说明书和权利要求中，词语“包含(comprise)”和“含有(contain)”及其变型是指“包括但不限于”，并且其不旨在(并且不)排除其他部分、添加剂、组分、整数或步骤。在本申请文件的整个说明书和权利要求中，单数包括复数，除非上下文另有要求。特别地，在使用不定冠词的情况下，申请文件应理解为考虑复数以及单数，除非上下文另有要求。
结合本发明的具体方面、实施方案或实施例描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应理解为适用于本文描述的任何其他方面、实施方案或实施例，除非与其不相容。本申请文件(包括任何所附权利要求书、摘要和附图)中公开的所有特征和/或如所公开的任何方法或过程的所有步骤可以以任意组合进行组合，除了其中至少一些这样的特征和/或步骤相互排斥的组合以外。本发明不限于任何前述实施方案的细节。本发明延及本申请文件(包括任何所附权利要求书、摘要和附图)中公开的特征中的任何新的一种，或任何新的组合，或延及如所公开的任何方法或过程的步骤中的任何新的一种或任何新的组合。
读者的注意力涉及与本申请文件同时提交的或在本申请文件之前提交的与本申请有关的并且与本申请文件一起公开供公众查阅的所有资料和文件，并且所有这些资料和文件的内容被引入本文作为参考。
为了避免疑义，在此指出，本申请文件中先前在标题“背景”下公开的信息与本发明相关，并且将被作为本发明的公开内容的一部分来阅读。
适合地，除非另有说明，在提及可能依赖压力和/或温度的参数(例如pH、pKa等)或材料状态(例如液态、气态等)的情况下，适合地在没有进一步阐明的情况下，这种提及是指在标准环境温度和压力(SATP)下的所述参数。SATP是298.15K(25℃，77°F)的温度和100kPa(14.504psi，0.987atm)的绝对压力。
除非另有说明，本文中对“平均”值的任何提及旨在涉及平均值。
本文中，术语“缓冲液”或“缓冲溶液”通常是指包含酸(通常为弱酸，例如，磷酸或一种或多种磷酸氢盐物质)及其共轭碱(例如，磷酸盐，例如，磷酸钠或其衍生物)的混合物，或供选择地包含碱(通常是弱碱，例如，组氨酸)及其共轭酸(例如，质子化的组氨酸盐)的混合物的水溶液。在添加少量的强酸或强碱时，由于“缓冲剂”带来的“缓冲作用”，“缓冲溶液”的pH将仅非常轻微地改变。
在本文中，“缓冲体系”包含一种或多种缓冲剂和/或其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)，并且更适合地包含一种或多种缓冲剂及其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)。除非另有说明，本文规定的与“缓冲体系”有关的任何浓度(即缓冲浓度)适合地指缓冲剂(多种缓冲剂)和/或其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)的组合浓度。换言之，本文规定的与“缓冲体系”有关的浓度适合地指所有相关的缓冲物质(即彼此处于动态平衡的物质，例如，磷酸盐(多种磷酸盐)/磷酸(多种磷酸))的组合浓度。因此，磷酸盐和/或组氨酸缓冲体系的给定的浓度通常涉及组氨酸和组氨酸的咪唑鎓形式和/或磷酸盐(多种磷酸盐)和/或磷酸(多种磷酸)的组合浓度。在磷酸盐缓冲体系的情况下，这样的浓度通常参考磷酸盐(包括任何磷酸氢盐，例如，磷酸一氢盐、磷酸二氢盐和/或磷酸三氢盐)的投入量直接计算。在组氨酸的情况下，该浓度通常参考组氨酸或其盐的投入量直接计算。包含相关的缓冲体系的组合物的总体pH通常反映每种相关缓冲物质的平衡浓度(即缓冲剂(多种缓冲剂)与其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)的平衡)。
在本文中，术语“缓冲剂”是指缓冲液或缓冲溶液的酸或碱(通常是弱酸或弱碱)组分。缓冲剂有助于将给定溶液的pH维持在预定值或接近预定值，并且通常选择缓冲剂以补充预定值。缓冲剂适合地为产生期望的缓冲作用的单一化合物，尤其是当所述缓冲剂与适合量的(取决于期望的预定pH)其相应的“酸/碱共轭物”混合(并适合地能够与其进行质子交换)时，或如果所需量的其相应的“酸/碱共轭物”原位形成—这可以通过添加强酸或强碱直到达到所需的pH来实现。举例来说：
·磷酸盐“缓冲剂”适合地为与其酸/碱共轭物，磷酸适合地混合的磷酸盐，例如，磷酸钠(其可以包括一种磷酸盐或两种或多种磷酸盐的混合物，如磷酸一钠、磷酸氢二钠和/或磷酸三钠的混合物)。这样的缓冲体系可以通过简单地使给定量的磷酸盐(多种磷酸盐)与给定量的磷酸混合来形成。然而，供选择地，这样的缓冲液可以通过将给定量的碱，适合地为强碱(例如，氢氧化钠)添加到磷酸，直到达到期望的pH(且因此达到乙酸钠/乙酸的期望的平衡)来形成。在本文中，除非有相反说明，给出的关于磷酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲剂的任何浓度适合地指缓冲剂(多种缓冲剂)(例如，磷酸钠(多种磷酸钠))和/或其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)(例如，磷酸)的组合浓度。技术人员能够容易地计算这样的浓度。这样的浓度可以通过参考缓冲剂(多种缓冲剂)和酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)的组合浓度计算，其中缓冲体系通过简单地将缓冲剂(多种缓冲剂)和酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)混合在一起来形成。供选择地，在通过使缓冲剂(多种缓冲剂)或酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)中任一种与pH调节剂(例如，强酸或强碱)混合以产生各自的混合物来形成缓冲体系的情况下，这样的浓度可以适合地通过分别参考缓冲剂(多种缓冲剂)或酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)的起始量/浓度来计算。例如，在使用与pH调节剂(例如，氢氧化钠)混合直到达到期望的pH的已知量/浓度的磷酸形成缓冲体系的情况下，可以参考磷酸的初始量计算缓冲体系的浓度。
·组氨酸“缓冲剂”是游离氨基酸组氨酸。由于氨基酸如组氨酸是两性的，且因此能够表现为酸和碱两者，所以“缓冲剂”仅仅是两性化合物本身(适合地为两性离子形式)。然而，组氨酸缓冲体系或缓冲溶液可以任选地加入除了组氨酸之外的一定量的酸(适合地是强酸，如盐酸)或碱(适合地是强碱，如氢氧化钠)，直至达到期望的pH值。因此，存在的一些组氨酸可以显示与两性离子氨基酸不同的质子化状态。在本文中，除非有相反说明，关于组氨酸缓冲体系给出的任何浓度适合地指缓冲剂(例如，组氨酸)和/或其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)(例如，组氨酸的咪唑鎓形式)的组合浓度。技术人员能够容易地计算这样的浓度，并且通过简单参考组氨酸或其酸/碱共轭物(例如，组氨酸盐酸盐)的投入量来计算。这样的浓度可以通过参考缓冲剂(多种缓冲剂)和酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)的组合浓度计算，其中缓冲体系通过简单地将缓冲剂(多种缓冲剂)和酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)混合在一起来形成。供选择地，在通过使缓冲剂(多种缓冲剂)或酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)中任一种与pH调节剂(例如，强酸或强碱)混合以产生各自的混合物来形成缓冲体系的情况下，这样的浓度可以适合地通过分别参考缓冲剂(多种缓冲剂)或酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)的起始量/浓度来计算。例如，在使用与pH调节剂(例如，氢氧化钠)混合直到达到期望的pH的已知量/浓度的组氨酸形成缓冲体系的情况下，可以参考组氨酸的初始量计算缓冲体系的浓度。同样地，在使用与pH调节剂(例如氢氧化钠)混合直到达到期望的pH的已知量/浓度的组氨酸咪唑鎓盐(例如组氨酸盐酸盐)形成缓冲体系的情况下，同样适用—在这种情况下，可以通过参考组氨酸咪唑鎓盐的初始量来计算缓冲体系的浓度。
在本文中，“酸/碱共轭物”是指特定“缓冲剂”的共轭酸或共轭碱(在特定pH下任何一个都是相关的—通常是本发明上下文中的共轭酸)。磷酸盐缓冲剂(例如，磷酸钠)的酸/碱共轭物适合地为磷酸(但是这可以适合地包括较高级磷酸氢盐，如磷酸一氢盐或磷酸二氢盐，其为磷酸盐或其较低级磷酸氢盐的潜在共轭酸)。组氨酸缓冲剂(例如，组氨酸)的酸/碱共轭物适合地为组氨酸的咪唑鎓形式，适合地为组氨酸的咪唑鎓盐。组氨酸的咪唑鎓形式在本文中可以称为“咪唑鎓-组氨酸”，并且具有以下结构：
组氨酸的咪唑鎓盐可以被称为组氨酸-咪唑鎓盐，并且基本上具有除了相关的抗衡离子以外的如上所示的相同的结构。
在本文中，术语“缓冲物质”是指彼此处于动态平衡(并且彼此质子交换)的给定缓冲体系的特定物质(不包括任何相关的抗衡阴离子或抗衡阳离子—即忽略磷酸盐(多种磷酸盐)/磷酸(多种磷酸)体系的钠抗衡离子，以及忽略组氨酸/咪唑鎓-组氨酸体系的氯或氢氧根抗衡离子)。例如，磷酸根、磷酸一氢根和磷酸二氢根阴离子和磷酸可以一起构成“磷酸盐缓冲体系”的“磷酸盐缓冲液物质”(但是根据pH，一些在缓冲体系内可能比其他更占优势)。供选择地和/或另外地，组氨酸和咪唑鎓-组氨酸可以一起构成“组氨酸缓冲体系”的“组氨酸缓冲物质”。
由于通过参考重量定义缓冲体系的(无论是绝对的还是相对的)量通常有些困难(因为总重量将取决于期望的pH，这将影响存在的抗衡离子的量)，因此在本文中，基于重量的量反而可以参考相关或任意“缓冲物质”的理论重量来确定。至少两种物质通常(以仅可以通过参考pH确定的相对量)存在于任何给定组的“缓冲物质”中，各自具有不同的分子量(其通常仅相差1，但是对于磷酸盐缓冲液而言，可以存在多种磷酸盐物质)。因此，出于本申请文件的目的，为了实现可行的重量计算和参考，任何给定组的“缓冲物质”的重量作为仅基于缓冲物质之一的理论重量给出。根据所讨论的缓冲体系，这可以便利地是缓冲物质中酸性最强的(即在任何给定的pH下最多质子化的形式)或缓冲物质中碱性最强的(即在任何给定的pH下最少质子化的形式)，或可以简单地为缓冲物质之一。举例来说，在磷酸盐体系中，磷酸盐缓冲物质可以由磷酸盐阴离子(忽略抗衡阳离子)和磷酸(和/或一种或多种相应的磷酸氢盐)组成。因此可以这样计算“缓冲物质”的重量，就如同磷酸是缓冲体系中存在的唯一物质(即使磷酸盐物质明显与磷酸一起存在，并且即使在给定pH下仅有最少的磷酸实际存在)。因此，对涉及“磷酸盐缓冲物质”的重量或重量比的任何提及适合地指缓冲体系内的磷酸等同物的理论重量。因此，在通过将pH调节剂(例如，氢氧化钠)添加到固定量的磷酸来形成组合物的情况下，无论最终pH如何，都可以将磷酸的原始重量视为“缓冲物质”的重量。供选择地，如果已知缓冲体系的浓度(即摩尔浓度)(或如果通过将酸性pH调节剂如磷酸添加到固定量的磷酸盐物质来形成相关的缓冲体系)，则该浓度可以通过参考相关缓冲物质(例如，磷酸)的酸性最强的形式的分子量被转化为“缓冲物质”的重量，并忽略还存在磷酸根阴离子的事实。借助供选择的实例，在组氨酸缓冲体系中，组氨酸缓冲物质可以由组氨酸和咪唑鎓-组氨酸阳离子组成。因此，“缓冲物质”的重量这样计算，就如同组氨酸是存在于缓冲体系中的唯一物质(即使咪唑鎓-组氨酸与组氨酸一起存在)。因此，对涉及“组氨酸缓冲物质”的重量或重量比的任何提及适合地指缓冲体系内组氨酸等同物的理论重量。因此，在通过将pH调节剂(例如氢氧化钠)加入到固定量的咪唑鎓组氨酸中，或实际上加入到固定量的组氨酸(其在溶解于稀释剂中时可适合地形成一些咪唑鎓-组氨酸)形成组合物的情况下，不管最终pH如何，组氨酸的原始重量可以被认为是“缓冲物质”的重量。供选择地，如果缓冲体系的浓度(即摩尔浓度)是已知的，则可以通过参考相关缓冲物质(例如组氨酸)的碱性最强形式的分子量将其转化为“缓冲物质”的重量，并忽略还存在咪唑鎓-组氨酸阳离子的事实。
本领域技术人员将理解，许多缓冲物质可以采用多种不同的形式。此外，酸，如磷酸，本身可以采用多种形式—统称为“磷酸”，并且本发明适合地包括这些形式的任一种。
除非另有说明，本文对“氨基酸”或“多种氨基酸”的提及，无论是具体的(例如，甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸)还是一般的(例如，任何氨基酸)，在其存在或以另外方式在组合物(尤其是本发明的局部液体组合物)内的情况下，涉及相应的游离氨基酸(多种游离氨基酸)(不论其/它们的质子化状态和/或盐形式如何，所有这些可以通过对“氨基酸(多种氨基酸)”的无论具体的或一般的单一提及被包括，但是为了一致，通过参考游离氨基酸本身适合地计算量)。这可以适合地包括天然和/或人工氨基酸。除非有相反说明，这些提及不旨在涉及作为较大的化合物的部分共价结合的氨基酸残基(多种氨基酸残基)(与包含多种化合物的组合物相反)，所述较大的化合物如肽或蛋白质(其中这样的氨基酸残基通过肽键连接)。举例来说，定义为“不含精氨酸”的组合物不包含任何游离精氨酸(或游离精氨酸盐，如精氨酸盐酸盐)，但其仍然可以包括自身包含精氨酸残基的一种或多种蛋白质。定义为包含“甲硫氨酸”的组合物含有游离的甲硫氨酸(或其盐)，不论是否存在一种或多种本身在其整体结构内包含甲硫氨酸残基的蛋白质。
除非另有说明，本文对任何一种或多种“氨基酸”的提及，无论是具体的还是一般的，适合地涉及L-立体异构体或其外消旋体，最适合地为L-氨基酸。
术语“基本上不含”当与组合物的给定组分关联使用时(例如，“基本上不含精氨酸的局部液体组合物”)，是指基本上没有添加任何所述组分的组合物。如上所解释的，这样的提及与蛋白质结构内的氨基酸残基(多种氨基酸残基)的存在无关。当组合物“基本上不含”给定组分时，所述组合物适合地包含不多于0.001重量％的所述组分，适合地不多于0.0001重量％的所述组分，适合地不多于其0.00001重量％，适合地不多于其0.000001重量％，适合地不多于其0.0000001重量％，最适合地不多于十亿分之0.0001份(按重量计)。
术语“完全不含”当与组合物的给定组分关联使用时(例如，“基本上不含精氨酸的局部液体组合物”)，是指不包含任何所述组分的组合物。如上所解释的，这样的提及与蛋白质结构内的氨基酸残基(多种氨基酸残基)的存在无关。
在本文中，在本申请文件的上下文中，“强酸”适合地为pKa为-1.0或更低的酸，而“弱酸”适合地为pKa为2.0或更高的酸。在本文中，在本申请文件的上下文中，“强碱”适合地为其共轭酸的pKa为12或更高(适合地为14或更高)的碱，而“弱碱”适合地为其共轭酸的pKa为10或更低的碱。
除非另有说明，本文中对“pKa”的提及应解释为在标准环境温度和压力(SATP)下水中的pKa值，适合地为相关物质的共轭酸。
在本文中，“非还原糖”通常是没有任何醛部分的糖或没有形成醛部分的能力(例如通过异构化)的糖。
在本文中，“张力调节剂”或“张力剂”是指这样的试剂，其包含在组合物内适宜地有助于(或升高)组合物的总体重量摩尔渗透压浓度(osmolality)和摩尔渗透压浓度(osmolarity)。适宜地，如本文使用的张力剂包括起到使溶液在渗透特性方面与生理流体相似的作用的试剂。
在本文中，对组合物的给定组分，尤其是缓冲剂、氨基酸、表面活性剂或张力剂的具体量的提及适宜地涉及有关组分的纯的无水形式(或使用所述量的纯的无水形式形成的组合物)的量，即使这样的组分当形成组合物时可以以非无水形式使用。任何相应的非无水形式(例如，一水合物、二水合物等)的量可以通过简单地使用适宜的乘数容易地计算。技术人员将容易地理解如何根据所用组分的形式合理地调整稀释剂/水的量，以便得出目标浓度。
在本文中，术语“局部组合物”是指活性物质(即褪黑素和/或其类似物)的制剂，其使活性成分的生物活性具有治疗有效性，但其不包含对意图被给予该制剂的受试者明显有毒性的其他成分。适合地，局部组合物在技术上是包含褪黑素和/或其类似物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的药物组合物(但适用于局部给予)。适合地，组合物及其所有组分部分是药学上可接受的。
在本文中，术语“稳定的”一般是指在保存/储存期间，组分，通常是活性物质或其组合物的物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物稳定性。
应当理解，对“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”的提及包括预防以及减轻病症的已经明确的症状(其中，在本发明的上下文中，病症适合地为“植入失败”)。因此，病情、障碍或病症的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括：(1)预防或延迟在可能患有或易患病情、障碍或病症，但尚未经历或显示病情、障碍或病症的临床或亚临床症状的人或哺乳动物中发展的病情、障碍或病症的临床症状的出现，(2)抑制病情、障碍或病症，即阻止、减少或延迟病症的发展或其复发(在维持治疗的情况下)或其至少一种临床或亚临床症状，或(3)缓解或减轻病症，即导致病情、障碍或病症或其临床或亚临床症状中的至少一种消退。特别地，本发明的治疗适合地涉及本文定义的局部液体组合物的局部给予，适合地给予到需要该治疗的哺乳动物的子宫和在需要该治疗的哺乳动物的子宫内给予。被治疗的病症适合地为辅助生殖过程中的胚胎植入失败。因此，本文定义的任何治疗方法(或本文定义的组合物的相应医学用途)可以是促进胚胎植入的方法、改善胚胎植入的方法、抑制和/或预防胚胎植入失败的方法、降低胚胎植入失败的概率的方法、促进辅助生殖的方法，提高子宫对胚胎植入的接受性的方法、治疗子宫的方法，以实现上述任一种。然而，治疗方法可以简单地是治疗不孕不育的方法或辅助生殖的方法。
在本发明的上下文中，组合物(或其活性物质)的“治疗有效量”或“有效量”是指当给予哺乳动物用于治疗病症时，在预防和治疗方面有效的量，并且组合物(或其活性物质)在治疗有关的疾病中有效。
“治疗有效量”将根据化合物、病症及其严重程度和待治疗的哺乳动物的年龄、体重等变化。
在本文中，针对组分和成分规定的量，无论是以“份”、ppm(百万分率)、百分比(％，例如重量％)或比例限定，均意图按重量计，除非另有说明。
在给定组合物的特定组分的量或浓度被指定为重量百分比(重量％或％w/w)的情况下，所述重量百分比是指所述组分按重量计相对于作为整体的组合物的总重量的百分比。本领域技术人员将理解，组合物的所有组分的重量百分比的总和(无论是否说明)将总计100重量％。然而，在未列出所有组分的情况下(例如，在组合物被称为“包含”一种或多种特定组分的情况下)，重量百分比余量可以任选地由未说明的成分(例如，稀释剂，如水或其他非必需但适合的添加剂)补足至100重量％。
在本文中，除非另有说明，术语“份”(例如，重量份，pbw)当与多种成分/组分关联使用时，是指所述多种成分/组分之间的相对比例。表示两种、三种或更多种组分的摩尔或重量比产生相同的效果(例如，x、y和z的摩尔比分别为x1:y1:z1，或x1-x2:y1-y2:z1-z2的范围)。虽然在许多实施方案中，组合物内的单个组分的量可以作为“重量％”值给出，但在供选择的实施方案中，任何或所有这样的重量％值可以被转化为重量份(或相对比例)以限定多组分组合物。这是因为在本发明的局部液体组合物中，组分之间的相对比例通常比其绝对浓度更重要。在仅以重量份来描述包含多种成分的组合物(即仅表示成分的相对比例)的情况下，不必规定所述成分(无论是全部或是单独的)的绝对量或浓度，因为本发明的优点可以源自各成分的相对比例而不是其绝对量或浓度。然而，在某些实施方案中，这样的组合物基本上由规定的成分和稀释剂(例如，水)组成，或由规定的成分和稀释剂(例如，水)组成。
在本文中，无论以多个单独组分的绝对重量的量(weight amount)、重量浓度还是其范围(例如，x-y重量％或以x-y重量/体积计的浓度，如x-ymg/mL)来限定组合物，这都可以被称为绝对组合物。无论何时在本文中限定绝对组合物，均得到以下组合物的相应的供选择的实施方案(即，其可以被称为相对组合物)，其包含完全相同的多个单独组分，但其各自的量、浓度或范围以重量份而不是绝对重量的量和浓度给出(例如，x-y重量份或pbw)。这样的相对组合物适合地限定各个单独组分的相对量或浓度，而不是绝对量或浓度。然而，在绝对组合物包含其量或浓度是通过参考除重量以外的其它单位(例如摩尔量或摩尔浓度，其通常关于缓冲液陈述)定义的特定组分的情况下，相应的相对组合物适合地包含该特定组分，但其量和/或浓度未给出，以与关于绝对组合物规定的相同的绝对量和/或浓度给出，或(在可能的情况下)其量和/或浓度可以被转化成按原始使用的无论任何测量值计的份(例如摩尔份)和以按原始使用的无论任何测量值计的份(例如摩尔份)给出。适合地，该具体成分的量和/或浓度未给出，或规定为与关于相应的绝对组合物规定的相同的绝对量和/或浓度。举例来说，包含以下的“绝对组合物”：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系；
-1-100mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5；
可以供选择地被定义为包含以下的“相对组合物”：
-2-200重量份褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-(任选地0.01-100mM)磷酸盐缓冲体系；
-1,000,000-100,000,000重量份张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5。
然而，由于上述绝对组合物可以具有作为绝对重量浓度(以磷酸当量计)给出的磷酸盐缓冲体系，如下：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系(0.098-9.8mg/mL磷酸当量)；
-1-100mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5；
相应的相对组合物可以作为以下给出
-2-200重量份褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-98,000-9,800,000磷酸盐缓冲体系(以磷酸当量计)；
-1,000,000-100,000,000重量份张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5。
因此，所有相对组合物都是借助绝对组合物公开的。
在据称组合物(任选地以规定量的浓度)包含多种规定的成分的情况下，所述组合物可以任选地包含除规定的那些以外的另外的成分。然而，在某些实施方案中，据称包含多种规定的成分的组合物事实上可以基本上由所有规定的成分组成，或由所有规定的成分组成。
在本文中，在组合物被称为“基本上由特定组分组成”的情况下，所述组合物适宜地包含至少85重量％的所述组分，适合地包含至少90重量％的所述组分，适宜地包含至少95重量％的所述组分，最适宜地包含至少99重量％的所述组分。适宜地，被称为“基本上由特定组分组成”的组合物由除了一种或多种痕量杂质以外的所述组分组成。
在本文中，术语“粒度”或“孔径”分别是指给定的颗粒或孔的最长尺寸的长度。两种尺寸均可以使用激光粒度分析仪和/或电子显微镜(例如，隧道电子显微镜，TEM，或扫描电子显微镜，SEM)测量。可以使用涉及亚可见(sub-visible)颗粒的颗粒计数的实施例中概述的方案和仪器获得(针对任何给定尺寸的)颗粒计数。
在本文中，除非另有说明，所有化学命名可以根据IUPAC定义来定义。
在本文中，术语“烃”在本领域中是众所周知的，并且指仅包含碳和氢的化合物。术语“烃基”通常是指任何脂族非环状或环状(包括芳基)烃基，适合地不含杂原子。这些化合物尤其包括烷烃、烯烃、炔烃、芳烃和它们的环状形式。术语“烃”蒽、萘、苯和/或其衍生物(例如甲苯)。
在本文中，术语“碳环基”、“碳环”或“碳环的”是指非芳族环状烃基，其在非芳族环体系中通常具有3至10个环碳原子(即(3-10C)碳环基)和0个杂原子。适合地，碳环基包括(3-nC)环烷基和(3-nC)环烯基。示例性的实施方案包括：环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚烯基，环庚二烯基、环庚三烯基、环辛基、环辛烯基、双环[2.2.1]庚基、双环[2.2.2]辛烷基等。
在本文中，术语“大环基(macrocyclyl)”、“大环”或“大环的”是指本领域众所周知的大环。这样的大环是适合的环状大分子或分子的大分子环状部分。适合地，大环在环内有九个或更多个原子。适合地，大环具有三个或更多个内部给电子对原子。大环适合地是能够与中心金属物质(例如Mg2+)配位的环状分子。实例包括卟啉。
在本文中，术语“碳水化合物”在本领域中是众所周知的，并且指仅含有碳、氢和氧的化合物。这些化合物包括酯、酮、醛、糖等。
在本说明书中，术语“烷基”包括直链和支链烷基。对单个烷基如“丙基”的提及仅特定于直链形式，并且对单个支链烷基，如“异丙基”的提及仅特定于支链形式。例如，“(1-6C)烷基”包括(1-4C)烷基、(1-3C)烷基、丙基、异丙基和叔丁基。类似的惯例适用于其它基团，例如“苯基(1-6C)烷基”包括苯基(1-4C)烷基、苄基、1-苯基乙基和2-苯基乙基。
单独使用或作为前缀使用的术语“(m-nC)”或“(m-nC)基团”是指具有m至n个碳原子的任何基团。
“亚烷基”、“亚烯基”或“亚炔基”基团是位于两个其它化学基团之间并用于连接两个其它化学基团的烷基、烯基或炔基。因此，“(1-6C)亚烷基”是指1至6个碳原子的直链饱和二价烃基或3至6个碳原子的支链饱和二价烃基，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基亚丙基、亚戊基等。
“(2-6C)亚烯基”是指含有至少一个双键的2至6个碳原子的直链二价烃基或3至6个碳原子的支链二价烃基，例如亚乙烯基、2,4-亚戊二烯基等。
“(2-6C)亚炔基”是指含有至少一个三键的2至6个碳原子的直链二价烃基或3至6个碳原子的支链二价烃基，例如亚乙炔基、亚丙炔基、亚丁炔基等。
“(3-8C)环烷基”是指含有3至8个碳原子的烃环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或双环[2.2.1]庚基。
“(3-8C)环烯基”是指含有至少一个双键的烃环，例如环丁烯基、环戊烯基、环己烯基或环庚烯基，如3-环己烯-1-基或环辛烯基。
“(3-8C)环烷基-(1-6C)亚烷基”是指共价连接到(1-6C)亚烷基上的(3-8C)环烷基，它们都在本文中定义。
术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“杂环基”、“杂环的”或“杂环”是指非芳族饱和或部分饱和的单环、稠合、桥环或螺环双环杂环体系(或多个体系)。术语杂环基包括一价物质和二价物质。单环杂环在环中含有约3至12个(适合地3至7个)环原子，以及1至5个(适合地1、2或3个)选自氮、氧或硫的杂原子。双环杂环在环中含有7至17个成员原子(member atom)，适合地为7至12个成员原子。双环杂环包含约7至约17个环原子，适合地为7至12个环原子。双环杂环(多个双环杂环)可以是稠合、螺环或桥环体系。杂环基的实例包括环醚，如环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、二噁烷基，和取代环醚。含氮的杂环包括例如，氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢三嗪基、四氢吡唑基等。典型的含硫杂环包括四氢噻吩基、二氢-1,3-二硫醇、四氢-2H-噻喃和六氢噻吩。其他杂环包括二氢氧硫杂环戊二烯基(dihydro-oxathiolyl)、四氢噁唑基、四氢噁二唑基、四氢二噁唑基、四氢噁噻唑基(tetrahydro-oxathiazolyl)、六氢三嗪基、四氢噁嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢嘧啶基、二氧杂环戊烷基(dioxolinyl)、八氢苯并呋喃基、八氢苯并咪唑基和八氢苯并噻唑基。对于含硫的杂环，也包括含有SO或SO2基团的氧化硫杂环。实例包括四氢噻吩基和硫代吗啉基的亚砜和砜形式，如四氢噻吩1,1-二氧化物和硫代吗啉基1,1-二氧化物。带有1或2个氧代基(＝O)或硫代基(＝S)取代基的杂环基的适合的实例是例如，2-氧代吡咯烷基、2-硫代吡咯烷基、2-氧代咪唑烷基、2-硫代咪唑烷基、2-氧代哌啶基、2,5-二氧代吡咯烷基、2,5-二氧代咪唑烷基或2,6-二氧代哌啶基。具体的杂环基是含有1、2或3个选自氮、氧或硫的杂原子的饱和单环3至7元杂环基，例如氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、吗啉基，四氢噻吩基、四氢噻吩基1,1-二氧化物、硫代吗啉基、硫代吗啉基1,1-二氧化物、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基或高哌嗪基。如技术人员将理解的，任何杂环可以经由任何适合的原子，例如经由碳或氮原子与另一基团连接。然而，本文中对哌啶代或吗啉代的提及是指通过环氮连接的哌啶-1-基或吗啉-4-基环。
“桥环体系”是指其中两个环共享多于两个原子的环体系，参见例如AdvancedOrganic Chemistry，Jerry March，第4版，Wiley Interscience，第131-133页，1992。桥联杂环基环体系的实例包括氮杂-双环[2.2.1]庚烷、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷、氮杂-双环[2.2.2]辛烷、氮杂-双环[3.2.1]辛烷和奎宁环。
“杂环基(1-6C)烷基”是指共价连接到(1-6C)亚烷基上的杂环基，这两个都在本文中定义。
术语“杂芳基”或“杂芳族”是指引入一个或多个(例如1-4，特别是1、2或3个)选自氮、氧或硫的杂原子的芳族单环、双环或多环。术语杂芳基包括一价物质和二价物质。杂芳基的实例是含有5至12个环成员，和更通常5至10个环成员的单环和双环基团。杂芳基可以是例如5或6元单环或9或10元双环，例如由稠合的五元和六元环或两个稠合六元环形成的双环结构。每个环可含有最多约四个通常选自氮、硫和氧的杂原子。通常，杂芳基环将含有最多3个杂原子，更通常最多2个，例如单个杂原子。在一个实施方案中，杂芳基环含有至少一个环氮原子。杂芳基环中的氮原子可以是碱性的，如在咪唑或吡啶的情况下，或基本上非碱性的，如在吲哚或吡咯氮的情况下。通常，杂芳基(包括环的任何氨基取代基)中存在的碱性氮原子的数目将小于5。
杂芳基的实例包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三氮烯基、苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋咱基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、蝶啶基、萘啶基、咔唑基、吩嗪基、苯并异喹啉基、吡啶并吡嗪基、噻吩并[2,3-b]呋喃基、2H呋喃并[3,2-b]吡喃基、5H-吡啶并[2,3-d]-邻噁嗪基、1H吡唑并[4,3-d]噁唑基、4H咪唑并[4,5-d]噻唑基、吡嗪并[2,3-d]哒嗪基、咪唑并[2,1-b]噻唑基、咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基。“杂芳基”也涵盖部分芳族双环或多环体系，其中至少一个环是芳族环，并且其它环中的一个或多个是非芳族饱和或部分饱和的环，条件是至少一个环含有一个或多个选自氮、氧或硫的杂原子。部分芳族杂芳基的实例包括例如，四氢异喹啉基、四氢喹啉基、2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、2,3-二氢苯并[1,4]二氧杂环己烯基、苯并[1,3]二氧杂环戊烯基、2,2-二氧代-1,3-二氢-2-苯并噻吩基、4,5,6,7-四氢苯并呋喃基、二氢吲哚基、1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶基、1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3b]吡嗪基和3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪基。
五元杂芳基的实例包括但不限于，吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、呋咱基(furazanyl)、噁唑基、噁二唑基、噁三唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、三唑基和四唑基。
六元杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基和三嗪基。
双环杂芳基可以是例如选自以下的基团：
a)与包含1、2或3个环杂原子的5-或6-元环稠合的苯环；
b)与包含1、2或3个环杂原子的5-或6-元环稠合的吡啶环；
c)与包含1或2个环杂原子的5-或6-元环稠合的嘧啶环；
d)与包含1、2或3个环杂原子的5-或6-元环稠合的吡咯环；
e)与包含1或2个环杂原子的5-或6-元环稠合的吡唑环；
f)与包含1或2个环杂原子的5-或6-元环稠合的吡嗪环；
g)与包含1或2个环杂原子的5-或6-元环稠合的咪唑环；
h)与包含1或2个环杂原子的5-或6-元环稠合的噁唑环；
i)与包含1或2个环杂原子的5-或6-元环稠合的异噁唑环；
j)与包含1或2个环杂原子的5-或6-元环稠合的噻唑环；
k)与包含1或2个环杂原子的5-或6-元环稠合的异噻唑环；
l)与包含1、2或3个环杂原子的5-或6-元环稠合的噻吩环；
m)与包含1、2或3个环杂原子的5-或6-元环稠合的呋喃环；
n)与包含1、2或3个环杂原子的5-或6-元杂芳族环稠合的环己基环；和
o)与包含1、2或3个环杂原子的5-或6-元杂芳族环稠合的环戊基环。
包含与五元环稠合的六元环的双环杂芳基的具体实例包括但不限于苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、异苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、中氮茚基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、嘌呤基(例如，腺嘌呤基、鸟嘌呤基)、吲唑基、苯并二氧杂环戊烯基和吡唑并吡啶基。
含有两个稠合六元环的双环杂芳基的具体实例包括但不限于喹啉基、异喹啉基、苯并二氢吡喃基、硫代苯并二氢吡喃基、色烯基、异色烯基、苯并二氢吡喃基、异苯并二氢吡喃基、苯并二氧杂环己基、喹嗪基、苯并噁嗪基、苯并二嗪基、吡啶并吡啶基、喹喔啉基、喹唑啉基，噌啉基、酞嗪基、萘啶基和蝶啶基。
“杂芳基(1-6C)烷基”是指共价连接到(1-6C)亚烷基上的杂芳基，二者均在本文定义。杂芳烷基的实例包括吡啶-3-基甲基、3-(苯并呋喃-2-基)丙基等。
术语“芳基”是指具有5至12个碳原子的环状或多环芳环。术语芳基包括一价物质和二价物质两者。芳基的实例包括但不限于苯基、联苯基、萘基等。在具体实施方案中，芳基是苯基。
术语“芳基(1-6C)烷基”是指共价连接到(1-6C)亚烷基上的芳基，二者均在此定义。芳基-(1-6C)烷基的实例包括苄基、苯乙基等。
该说明书还使用几个复合术语来描述包含多于一个官能团的基团。这些术语将被本领域技术人员理解。例如杂环基(m-nC)烷基包括被杂环基取代的(m-nC)烷基。
无论何处公开了具有大碳链的基团(例如(1-12C)烷基、(1-8C)烯基等)，这些基团可以任选地被缩短，例如含有1至5个碳(例如(1-5C)烷基或(1-5C)烯基)，或含有1至3个碳原子(例如(1-3C)烷基或(1-3C)烯基，来代替(1-12C)烷基或(1-8C)烯基)。
术语“任选地取代的”是指被取代的基团、结构或分子和未被取代的基团、结构或分子。
在任选的取代基选自“一个或多个”基团的情况下，应当理解，该定义包括选自指定基团之一的所有取代基或选自指定基团中的两个或多个的取代基。
短语“本发明的化合物”是指通常和具体地在本文中公开的那些化合物。本发明化合物的适合的药学上可接受的盐是例如碱性足够强的本发明的化合物的酸加成盐，例如与例如无机或有机酸的酸加成盐，所述无机或有机酸为例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、甲酸、柠檬酸或马来酸。此外，酸性足够强的本发明的化合物的适合的药学上可接受的盐是碱金属盐，例如钠或钾盐，碱土金属盐，例如钙或镁盐，铵盐或与提供生理上可接受的阳离子的有机碱形成的盐，例如与甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三-(2-羟乙基)胺形成的盐。
其中Z是N+-Q的式I的化合物特别地是阳离子化合物，并且将与一种或多种抗衡阴离子有关。式I的化合物具有+1电荷。阴离子可以携带-1电荷，在这种情况下，阴离子:阳离子的摩尔比为1:1，或者供选择地，阴离子可以带有-2或-3电荷，在这种情况下阴离子:阳离子的摩尔比将分别是1:2或1:3。
在一个实施方案中，阴离子独立地衍生自一种或多种以下酸：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸、含磷乙酸(phosphorous acetic)、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸和戊酸。
具有相同分子式但其原子键合的性质或顺序或其原子在空间中的排列不同的化合物被称为“异构体”。在空间中其原子排列不同的异构体被称为“立体异构体”。彼此不为镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，并且彼此为不可重叠的镜像的那些被称为“对映异构体”。当化合物具有不对称中心时，例如，其键合到四个不同的基团时，一对对映异构体是可能的。对映异构体可以通过其不对称中心的绝对构型来表征，并且由Cahn和Prelog的R和S排序规则描述，或者通过分子旋转偏振光平面的方式表征，并被指定为右旋或左旋(即，分别为(+)或(-)异构体)。手性化合物可以作为单独的对映异构体或其混合物存在。含有相等比例的对映异构体的混合物称为“外消旋混合物”。
本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心；因此，这样的化合物可以作为单独的(R)-或(S)-立体异构体或作为其混合物来制备。除非另有说明，说明书和权利要求书中特定化合物的描述或命名旨在包括单独的对映异构体及其混合物二者，该混合物为外消旋混合物或其它混合物。用于确定立体化学和分离立体异构体的方法在本领域中是众所周知的(参见“Advanced Organic Chemistry”，第4版，J.March,John Wiley and Sons,NewYork,2001的第4章中的讨论)，例如通过从光学活性起始原料合成或通过拆分外消旋形式。本发明的一些化合物可具有几何异构中心(E和Z异构体)。应当理解，本发明包括具有端粒酶抑制活性的所有光学、非对映异构体和几何异构体及其混合物。
本发明还包括如本文定义的包含一种或多种同位素取代的本发明的化合物。例如，H可以呈任何同位素形式，包括1H、2H(D)和3H(T)；C可以呈任何同位素形式，包括12C、13C和14C；并且O可以呈任何同位素形式，包括16O和18O；等等。
还应当理解，某些式I化合物可能表现出多态性，并且本发明包括所有这些形式。
化合物可以以许多不同的互变异构形式存在，并且对化合物的提及包括所有这些形式。为了避免疑义，在化合物可以以几种互变异构形式之一存在，并且仅具体描述或显示一种形式的情况下，所有其它形式仍然被化合物的定义所包含。互变异构形式的实例包括酮、烯醇和烯醇盐形式，如在例如以下互变异构对中：酮/烯醇(如下所示)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇和硝基/酸硝基。
含有胺官能团的式I的化合物也可以形成N-氧化物。本文对包含胺官能团的式I的化合物的提及还包括N-氧化物。在化合物含有若干胺官能团的情况下，可以氧化一个或多于一个氮原子，以形成N-氧化物。N-氧化物的具体实例是叔胺或含氮杂环的氮原子的N-氧化物。N-氧化物可以通过用氧化剂如过氧化氢或过酸(例如过氧羧酸)处理相应的胺来形成，参见例如Advanced Organic Chemistry，Jerry March，第4版，Wiley Interscience，页。更具体地，N-氧化物可以通过L.W.Deady(Syn.Comm.1977,7,509-514)的程序制备，其中胺化合物与间氯过氧苯甲酸(MCPBA)反应，例如在惰性溶剂如二氯甲烷中反应。
式I的化合物可以以在人体或动物体内分解以释放本发明化合物的前药形式给予。可以使用前药来改变本发明的化合物的物理性质和/或药代动力学性质。当本发明的化合物包含可连接改变性质的基团的适合的基团或取代基时，可以形成前药。前药的实例包括可以在式I的化合物中的羧基或羟基处形成的体内可裂解的酯衍生物和可以在式I的化合物中的羧基或氨基处形成的体内可裂解的酰胺衍生物。
因此，本发明包括当通过有机合成可获得和当通过其前药的裂解在人或动物体内可获得时，如上文定义的式I的那些化合物。因此，本发明包括通过有机合成方法制备的那些式I的化合物，并且还包括通过前体化合物的代谢在人或动物体内产生的这样的化合物，也就是说，式I的化合物可以是合成产生的化合物或代谢产生的化合物。
式I化合物的适合的药学上可接受的前药是基于如适合于给予人或动物体而没有不期望的药理活性并且没有过度毒性的合理医学判断的前药。
已经描述了各种形式的前药，例如在以下文献中描述：
a)Methods in Enzymology,Vol.42,p.309-396,K.Widder等人编，(AcademicPress,1985)；
b)Design of Pro-drugs,H.Bundgaard编,(Elsevier,1985)；
c)A Textbook of Drug Design and Development,Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编,Chapter 5“Design and Application of Pro-drugs”,H.Bundgaardp.113-191(1991)；
d)H.Bundgaard,Advanced Drug Delivery Reviews,8,1-38(1992)；
e)H.Bundgaard等人,Journal of Pharmaceutical Sciences,77,285(1988)；
f)N.Kakeya等人,Chem.Pharm.Bull.,32,692(1984)；
g)T.Higuchi和V.Stella,“Pro-Drugs as Novel Delivery Systems”,A.C.S.Symposium Series,Volume 14；和
h)E.Roche(编者),“Bioreversible Carriers in Drug Design”,PergamonPress,1987。
具有羧基的式I的化合物的适合的药学上可接受的前药是例如其体内可裂解的酯。含有羧基的式I的化合物的体内可裂解的酯是例如在人或动物体中裂解以产生母体酸的药学上可接受的酯。用于羧基的适合的药学上可接受的酯包括C1-6烷基酯如甲基、乙基和叔丁基酯，C1-6烷氧基甲基酯如甲氧基甲基酯，C1-6烷酰氧基甲基酯如新戊酰氧基甲基酯，3-酞基酯，C3-8环烷基羰基氧基-C1-6烷基酯如环戊基羰基氧基甲基和1-环己基羰基氧基乙基酯，2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯基甲基酯，如5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基甲基酯，和C1-6烷氧基羰基氧基-C1-6烷基酯，如甲氧基羰基氧基甲基酯和1-甲氧基羰基氧基乙基酯。
具有羟基的式I的化合物的适合的药学上可接受的前药是例如其体内可裂解的酯或醚。包含羟基的式I的化合物的体内可裂解的酯或醚是例如在人或动物体中裂解以产生母体羟基化合物的药学上可接受的酯或醚。用于羟基的适合的药学上可接受的酯形成基团包括无机酯如磷酸酯(包括磷酰胺酸环酯)。用于羟基的另外的适合的药学上可接受的酯形成基团包括C1-10烷酰基，如乙酰基、苯甲酰基、苯乙酰基和取代的苯甲酰基和苯乙酰基，C1-10烷氧基羰基，如乙氧基羰基，N,N-(C1-6)2氨基甲酰基，2-二烷基氨基乙酰基和2-羧基乙酰基。苯乙酰基和苯甲酰基上的环取代基的实例包括氨基甲基、N-烷基氨基甲基，N,N-二烷基氨基甲基、吗啉代甲基、哌嗪-1-基甲基和4-(C1-4烷基)哌嗪-1-基甲基。用于羟基的适合的药学上可接受的醚形成基团包括α-酰氧基烷基，如乙酰氧基甲基和新戊酰氧基甲基。
具有羧基的式I的化合物的适合的药学上可接受的前药是例如其体内可裂解的酰胺，例如与胺形成的酰胺，所述胺例如氨，C1-4烷基胺，如甲胺，(C1-4烷基)2胺，如二甲胺、N-乙基-N-甲胺或二乙胺，C1-4烷氧基-C2-4烷基胺，如2-甲氧基乙胺，苯基-C1-4烷基胺，如苄胺，和氨基酸如甘氨酸或其酯。
具有氨基的式I的化合物的适合的药学上可接受的前药是例如其体内可裂解的酰胺衍生物。来自氨基的适合的药学上可接受的酰胺包括例如与C1-10烷酰基形成的酰胺，所述C1-10烷酰基如乙酰基、苯甲酰基、苯乙酰基和取代的苯甲酰基和苯乙酰基。苯乙酰基和苯甲酰基上的环取代基的实例包括氨基甲基、N-烷基氨基甲基、N,N-二烷基氨基甲基、吗啉代甲基、哌嗪-1-基甲基和4-(C1-4烷基)哌嗪-1-基甲基。
可以部分地由给予式I的化合物之后在人或动物体内形成的一种或多种代谢物发挥式I的化合物的体内作用。如上所述，也可以通过前体化合物(前药)的代谢来发挥式I的化合物的体内作用。
还应当理解，式I的化合物也可以(在任何合适的位置)与其它基团共价连接，所述其它基团例如增溶部分(例如PEG聚合物)，使其能够结合到固体支持物的部分(例如，含生物素的部分)和靶向配体(如抗体或抗体片段)。
局部液体组合物
本发明提供了适合地如本文所定义的局部液体组合物。适合地，局部液体组合物是用于局部给予的液体药物组合物，适合地给予子宫，适合地给予受试者(适合地雌性受试者，适合地哺乳动物受试者，最适合地人类受试者)的子宫，适合地用于辅助生殖(其可以包括生育力降低的受试者或充当代孕者的受试者)。
局部液体组合物适合地包含(药学上可接受的)稀释剂。适合地，局部液体组合物是液体溶液，最适合地是水溶液，适合地是(基本上)不含微粒的溶液。
组合物适合地包含褪黑素和/或其类似物(无论何时被提及，其都适合地包括褪黑素和/或其类似物的任何药学上可接受的盐和/或溶剂化物)。
组合物适合地包含活性物质(适合地褪黑素和/或其类似物)，其促进胚胎植入(例如在辅助生殖治疗期间)或以其它方式抑制或阻止胚胎植入失败(例如在将一个或多个胚胎移植到子宫之后)。
该组合物适合地包含缓冲体系或缓冲剂。组合物适合地包含缓冲体系，并且组合物的pH为中性或碱性。适合地，当在子宫内时，缓冲体系将组合物保持在(基本上)恒定的pH下(适合地变化不超过+/-0.5pH单位，适合地不超过+/-0.2pH单位，适合地不超过+/-0.1pH单位)。这可以通过在用于子宫冲洗之前和之后测量组合物的pH来确定。
组合物适合地包含一种或多种氨基酸，适合地至少第一氨基酸。组合物适合地包含第二氨基酸。适合地，第二氨基酸是与任何第一氨基酸不同的氨基酸。该组合物适合地包含至少一种氨基酸，所述氨基酸包含硫原子，适合地是在所述氨基酸中显示2价的硫原子(例如硫醇或硫醚)。适合地，组合物包含至少一种不含任何硫原子的氨基酸。适合地，组合物包含(基本上)不超过两种氨基酸。
组合物适合地包含张力剂。张力剂适合地存在以提供具有期望的重量摩尔渗透压浓度或摩尔渗透压浓度的组合物，最适合地重量摩尔渗透压浓度在相关受试者的生理重量摩尔渗透压浓度(即血浆重量摩尔渗透压浓度)的20％以内的组合物。
组合物适合地包含表面活性剂。该组合物适合地包含促进活性物质(例如褪黑素)在组合物内的溶解和/或分散的表面活性剂。
组合物可以包含糖或糖醇。
组合物适合地是单相的(即单一液相)。适合地，组合物不含至少在一定程度上与水不混溶(例如形成双相混合物)的任何油相。适合地，组合物不是水包油或油包水组合物。
该组合物适合地(基本上)不含任何有机溶剂(多种有机溶剂)，并且适合地不含除水以外的任何溶剂(多种溶剂)。溶剂可以是在SATP下在液相中存在的任何适合的化合物，并且适合地在化合物的温度保持在40℃，适合地60℃，适合地70℃或以下时仍然为液体。组合物适合地(基本上)不含任何(有机)溶剂，其介电常数(或本领域技术人员容易测量的“相对介电常数”)可容易地测量为小于或等于70，适合地小于或等于60，适合地小于或等于40，适合地小于或等于30。组合物适合地(基本上)不含密度小于或等于0.7g/mL的任何(有机)溶剂，适合地密度小于或等于0.8g/mL的任何溶剂，适合地密度小于或等于0.9g/mL的任何溶剂。适合地，组合物(基本上)不含任何沸点在90℃以下的(有机)溶剂。该组合物适合地(基本上)不含醇溶剂如乙醇。
除了活性物质(多种活性物质)(例如，褪黑素)以外，组合物适合地(基本上)不含在水中的溶解度(在SATP下)小于或等于100mg/L，适合地小于或等于至1g/L，适合地小于或等于10g/L，适合地小于或等于20g/L，最适合地小于或等于25g/L的任何组分。
组合物适合地，尤其在使用前和尤其在储存期间，(基本上)不含任何培养基/介质，或者包含不超过1重量％的培养基/介质，适合地不超过0.1重量％的培养基/介质，适合地不超过0.001重量％的培养基/介质。适合地，可以在不将组合物预混合在任何培养基中的情况下使用组合物(例如用于冲洗)。
组合物适合地，尤其在使用前和尤其在储存期间，(基本上)不含任何蛋白质或蛋白质化合物，或者(总共)包含不超过1重量％的任何蛋白质或蛋白质化合物，适合地不超过0.1重量％的任何蛋白质或蛋白质化合物，适合地不超过0.001重量％的任何蛋白质或蛋白质化合物。该组合物适合地(基本上)不含任何血清白蛋白(SA)，或包含不多于上文关于蛋白质和蛋白质化合物给出的量的血清白蛋白(SA)。组合物适合地(基本上)不含任何人血清白蛋白(HSA)。
组合物适合地(基本上)不含聚合物。
组合物适合地(基本上)不含任何含硒化合物。
组合物可以适合地(基本上)不含任何亚烷基二醇(例如，丙二醇)化合物。
活性物质(多种活性物质)(例如，褪黑素)适合地显示抗氧化特性。
除了活性物质(多种活性物质)(例如褪黑素)以外，组合物适合地(基本上)不含任何带有取代的末端氨基的氨基酸(例如带有N-酰化或N-乙酰化的末端氨基)。适合地，组合物(基本上)不含N-乙酰半胱氨酸(或其任何盐和/或其衍生物，例如酯)。
组合物可以任选地以本文规定的任何量、浓度或形式适合地包含任何一种或多种本文关于局部液体组合物定义的另外的组分(例如，包括表面活性剂、张力剂等)；并且其中组合物任选地显示本文关于局部液体组合物给出的任何一个或多个参数或特性(例如，pH、重量摩尔渗透压浓度)。
有利地，本发明提供了局部液体组合物，其不仅充当在子宫内使用的优良和临床安全的冲洗/灌洗组合物(适合地为子宫接收胚胎作准备和促进胚胎在子宫内的植入—本发明的组合物确实表现出优异的植入成功率)，而且显示优异的稳定性特性(对于其生产、储存、运输和使用的所有阶段)。提供这样的稳定制剂代表了重大的进步，因为这些高性能制剂现在变得实用，尤其是考虑到储存和运输时。以最低的成本和最低的技术复杂性来提供这样的制剂。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-磷酸盐缓冲体系。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-磷酸盐缓冲体系；和
-至少一种氨基酸(适合地为天然氨基酸，适合地选自甲硫氨酸、半胱氨酸、精氨酸和甘氨酸，或前面提及的任何或所有的组合)。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-磷酸盐缓冲体系；和
-至少两种氨基酸(适合地为天然氨基酸，适合地选自甲硫氨酸、半胱氨酸、精氨酸和甘氨酸，或前面提及的任何或所有的组合)。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-磷酸盐缓冲体系；和
-第一氨基酸(适合地为天然氨基酸，适合地选自甲硫氨酸或半胱氨酸)，适合地如本文所定义；和
-第二氨基酸(适合地为天然氨基酸，适合地选自精氨酸或甘氨酸，但最适合地为精氨酸)，适合地如本文所定义。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-磷酸盐缓冲体系；和
-第一氨基酸，其适合地为包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的氨基酸，最适合地为甲硫氨酸或半胱氨酸(但这些中的任何一种可以以盐形式提供)。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-磷酸盐缓冲体系；和
-张力剂，适合地为足以使组合物的重量摩尔渗透压浓度为250-350mOsm/kg的类型和量。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-磷酸盐缓冲体系；和
-第一氨基酸，其适合地为包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的氨基酸，最适合地为甲硫氨酸或半胱氨酸(但是这些中的任一种可以以盐形式提供)；和
-张力剂，适合地为足以使组合物的重量摩尔渗透压浓度为250-350mOsm/kg的类型和量。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-磷酸盐缓冲体系；
-表面活性剂，最适合地为非离子表面活性剂；和
-第一氨基酸和/或第二氨基酸中的任一种或两种，其中适合地，第一氨基酸为包含至少一个硫原子的氨基酸；并且第二氨基酸适合地不含任何硫原子。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-磷酸盐缓冲体系；
-张力剂，适合地为足以使组合物的重量摩尔渗透压浓度为250-350mOsm/kg的类型和量；和
-任选地表面活性剂，最适合地为非离子表面活性剂，其中所述表面活性剂以与第一氨基酸和/或第二氨基酸中的任一种或两种的组合存在，其中适合地，第一氨基酸为包含至少一个硫原子的氨基酸；和第二氨基酸适合地不含任何硫原子。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-1-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-缓冲体系(适合地为磷酸盐缓冲体系，适合地为浓度为1-100mM的缓冲体系，适合地为浓度以磷酸当量计为0.098-9.8mg/mL的磷酸盐缓冲体系)；
其中组合物具有7.0至8.5的pH。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-1-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-缓冲体系(适合地为磷酸盐缓冲体系，适合地为浓度为1-100mM的缓冲体系，适合地为浓度以磷酸当量计为0.098-9.8mg/mL的磷酸盐缓冲体系)；
其中组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
褪黑素和/或类似物
局部液体组合物适合地包含活性成分，适合地是能够显示实施本文定义的治疗方法之一所需的特性的活性成分。适合地，活性成分是褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
可以在局部液体组合物中使用提供期望的性质的任何适合的褪黑素的类似物。褪黑素和/或其类似物适合地是具有褪黑素受体(结合褪黑素的G蛋白偶联受体(GPCR))亲和力的化合物。适合地，褪黑素和/或其类似物是褪黑素受体激动剂。适合地，褪黑素和/或其类似物是MT1(或Mel1A或MTNR1A)和/或MT2(或Mel1B或MTNR1B)受体激动剂。
许多褪黑素类似物是本领域已知的。褪黑素本身具有下式：
在实施方案中，活性成分(褪黑素和/或其类似物)由式I或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物定义：
其中：
R1选自氢或RHET基团；
R2选自氢、卤素、三氟甲基、氰基、异氰基、硝基、羟基、巯基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脲基或RC基团；
R3选自氢或RC基团；
R4选自氢、RC基团，或R4与R5连接，使得它们与R4和R5连接的碳原子一起形成碳环、杂环、芳基或杂芳基环体系；
R5选自RC基团，或R5与R4连接，使得它们与R4和R5连接的碳原子一起形成碳环、杂环、芳基或杂芳基环体系；
R6选自氢、卤素、三氟甲基、氰基、异氰基、硝基、羟基、巯基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脲基或RC基团；
R7选自氢或RC基团；
Rβ选自氢、卤素、三氟甲基、氰基、异氰基、硝基、羟基、巯基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脲基或RC基团；
其中任何R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、Rβ基团，或由连接在一起的任意上述基团形成的任何环体系，(在其在结构上可能的程度—例如，其任何CH、CH2或CH3基团)任选地独立地被一个或多个Rsub基团取代。
R1适合地为氢或(1-3C)烷基，任选地如本文所定义地被取代。适合地，R1为氢。
R2适合地选自氢、卤素或RC基团，任选地如本文所定义地被取代。R2适合地选自氢、溴、碘或芳基，任选地如本文所定义地被取代。R2适合地选自氢、溴、碘或苯基，任选地如本文所定义地被取代。R2适合地为氢。
R3适合地为RC基团，任选地如本文所定义地被取代。R3适合地为(1-6C)烷基，任选地如本文所定义地被取代，最适合地，R3为甲基。
R4适合地选自氢，或R4与R5连接，使得它们与R4和R5连接的碳原子一起形成杂环或杂芳基环体系，任选地如本文所定义地被取代。R4适合地选自氢，或R4与R5连接，使得它们与R4和R5连接的碳原子一起形成杂环环体系，任选地如本文所定义地被取代。R4适合地选自氢，或R4与R5连接，使得它们与R4和R5连接的碳原子一起形成包含单个内部氧原子(其适合地直接连接于R5直接连接的碳)的5-元杂环环体系，任选地如本文所定义地被取代。
R5适合地选自RC基团，或R5与R4连接，使得它们与R4和R5连接的碳原子一起形成杂环或杂芳基环体系，任选地如本文所定义地被取代。R5适合地选自RC基团，或R5与R4连接，使得它们与R4和R5连接的碳原子一起形成杂环环体系，任选地如本文所定义地被取代。R5适合地选自RC基团，任选地如本文所定义地被取代。R5适合地选自包含氧原子的RC基团，所述氧原子直接连接于R5直接连接的碳。最适合地，RC为(1-3C)烷氧基，最适合地为甲氧基。
R6适合地选自氢、卤素或RC基团，任选地如本文所定义地被取代。R6适合地选自氢、卤素或包含氧原子的RC基团，所述氧原子直接连接于R6直接连接的碳。R6适合地选自氢、卤素或(1-6C)烷酰氧基，任选地如本文所定义地被取代。R6适合地为氢。
R7适合地为氢。
Rβ适合地选自氢、卤素或RC基团，任选地如本文所定义地被取代。Rβ适合地选自氢、卤素或(1-3C)烷基，任选地如本文所定义地被取代。Rβ适合地为氢。
在实施方案中，褪黑素及其类似物(多种类似物)由式II或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物定义：
其中R1、R3和R5具有上述定义中的任一种。
每个RHET基团独立地选自三氟甲基、羧基、氨基甲酰基、脲基、(1-12C)烃基、(1-12C)烷酰基、(3-10C)碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、(3-10C)碳环基-(1-12C)烃基、杂环基-(1-12C)烃基、芳基-(1-12C)烃基、杂芳基-(1-12C)烃基或由下式定义的基团：
L1-X1
其中L1为直接键或选自[C(R1a)(R1b)]n、SO、SO2、CO、CH(OR1a)、CON(R1a)、SO2N(R1a)，其中n为1至4的整数，并且R1a和R1b各自独立地选自氢或(1-8C)烷基；和
X1选自氢、三氟甲基、羧基、氨基甲酰基、脲基、(1-12C)烃基、(1-12C)烷酰基、(3-10C)碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、(3-10C)碳环基-(1-12C)烃基、杂环基-(1-12C)烃基、芳基-(1-12C)烃基和杂芳基-(1-12C)烃基；
其中每个RHET独立地任选地被一个或多个独立地选自Rsub的基团取代。
每个RC基团独立地选自三氟甲基、(1-12C)烃基、(3-10C)碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、(3-10C)碳环基-(1-12C)烃基、杂环基-(1-12C)烃基、芳基-(1-12C)烃基、杂芳基-(1-12C)烃基，或由下式定义的基团：
L2-X2
其中L2为直接键或选自[C(R2a)(R2b)]n、O、S、N(R2a)、CH(OR2a)、N(R2a)CO、N(R2a)CON(R2b)、N(R2a)SO2、OC(R2a)2、SC(R2a)2和N(R2a)C(R2b)2，其中n为1至4的整数，并且其中R2a和R2b独立地选自氢或(1-8C)烷基；和
X2选自氢、三氟甲基、羧基、氨基甲酰基、脲基、(1-12C)烃基、(1-12C)烷酰基、(3-10C)碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、(3-10C)碳环基-(1-12C)烃基、杂环基-(1-12C)烃基、芳基-(1-12C)烃基和杂芳基-(1-12C)烃基；
其中每个RC独立地任选地被一个或多个独立地选自Rsub的基团取代。
每个Rsub基团独立地选自卤素、三氟甲基、氰基、异氰基、硝基、羟基、巯基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脲基、(1-12C)烃基、(3-10C)碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、(3-10C)碳环基-(1-12C)烃基、杂环基-(1-12C)烃基、芳基-(1-12C)烃基、杂芳基-(1-12C)烃基，或由下式定义的基团：
L3-X3
其中L3为直接键或选自[C(R3a)(R3b)]n、O、S、N(R3a)、CH(OR3a)、N(R3a)CO、N(R3a)CON(R3b)、N(R3a)SO2、OC(R3a)2、SC(R3a)2和N(R3a)C(R3b)2，其中n为1至4的整数，并且其中R3a和R3b独立地选自氢或(1-8C)烷基；和
X3选自氢、三氟甲基、羧基、氨基甲酰基、脲基、(1-12C)烃基、(1-12C)烷酰基、(3-10C)碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、(3-10C)碳环基-(1-12C)烃基、杂环基-(1-12C)烃基、芳基-(1-12C)烃基和杂芳基-(1-12C)烃基；
其中每个Rsub本身独立地任选地被一个或多个独立地选自Rsub的基团取代。
适合地：
R1为氢或(1-3C)烷基，最适合地为氢；
R2为氢或(1-3C)烷氧基，最适合地为(1-3C)烷氧基，最适合地为甲氧基；和
R3为氢或(1-6C)烷基，最适合地为(1-3C)烷基，最适合地为甲基。
在具体实施方案中，式I的化合物是褪黑素或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物。
在实施方案中，褪黑素或褪黑素类似物(多种类似物)可以选自褪黑素、雷美替胺、阿戈美拉汀、他司美琼和LY-156735(TIK-301)或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物。
本发明的化合物的适合的药学上可接受的盐是例如碱性足够强的本发明的化合物的酸加成盐，例如与例如无机或有机酸的酸加成盐，所述无机或有机酸为例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、甲酸、柠檬酸或马来酸。此外，酸性足够强的本发明的化合物的适合的药学上可接受的盐是碱金属盐，例如钠或钾盐，碱土金属盐，例如钙或镁盐，铵盐或与提供生理上可接受的阳离子的有机碱形成的盐，例如与甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三-(2-羟乙基)胺形成的盐。
还应当理解，某些式I的化合物可以以溶剂化的形式以及非溶剂化形式，例如水合形式存在。
在实施方案中，局部液体组合物包含浓度为约2至约200ng/ml(纳克/毫升)，适合地约5至约30ng/mL，更适合地约15to 25ng/mL，最适合地约20ng/mL的活性成分(褪黑素和/或褪黑素类似物)。然而，在某些实施方案中，局部液体组合物是浓缩的局部液体组合物，其中活性成分可以以上述浓度范围的五倍的浓度存在，但适合地，存在于(浓缩的)局部液体组合物内的任何其他组分也以相对于标准局部液体组合物规定的浓度的五倍存在。因此，局部液体组合物可以包含浓度为约10至约1000ng/ml的活性成分(褪黑素和/或褪黑素类似物)，其中上述范围中的任一种相应地用五倍乘数计算。
缓冲体系和pH
适合地，局部液体组合物是缓冲溶液，其pH通过适合地与缓冲剂的酸/碱共轭物组合的所述缓冲剂(或缓冲体系)稳定。因此，局部液体组合物适合地包含如本文定义的缓冲剂(或至少一种缓冲剂)。优选地，局部液体组合物另外包含酸/碱共轭物，其中所述酸/碱共轭物分别根据缓冲剂本身是碱或酸，对应于缓冲剂的共轭酸或共轭碱。总的来说，缓冲剂及其酸/碱共轭物(其在一些情况下可以是多种，如包含多种缓冲物质的磷酸盐缓冲体系)可以被认为是“缓冲体系”。因此，局部液体组合物适合地包含“缓冲体系”(适合地包含缓冲剂(多种缓冲剂)及其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物))，并且关于缓冲体系规定的任何浓度一般地涉及缓冲剂(多种缓冲剂)和其任何酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)的组合浓度。任何“缓冲体系”适合地包含弱酸和弱碱(参见以上定义)。
适合地，缓冲剂为磷酸盐缓冲剂。适合地，磷酸盐缓冲剂为磷酸盐(或磷酸氢盐)，适合地包含阴离子磷酸盐物质和一种或多种药学上可接受的抗衡阳离子。适合的磷酸盐可以包括金属磷酸盐(例如，碱金属磷酸盐或碱土金属磷酸盐，其可以包括各种磷酸氢盐中的一种或多种)，或非金属磷酸盐(例如，磷酸铵、磷酸三乙基铵，其可以包括各种磷酸氢盐中的一种或多种)。在具体实施方案中，缓冲剂(和磷酸盐)包含磷酸钠(多种磷酸钠)(其可以包括磷酸氢钠和/或磷酸二氢钠，以及任选地包括磷酸三钠)。
适合地，局部液体组合物包含缓冲剂(多种缓冲剂)的酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)，最适合地包含作为磷酸盐的共轭酸的磷酸(或磷酸氢盐)。缓冲剂(多种缓冲剂)及其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)的组合构成缓冲体系。适合地，局部液体组合物包含缓冲剂(多种缓冲剂)及其相应的酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)，适合地使得缓冲剂(多种缓冲剂)及其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)以足以为组合物提供期望的pH的水平(即绝对量或浓度)和以足以为组合物提供希望的pH的相对量(或浓度)一起存在。在可以存在多种缓冲物质的情况下，尤其是在涉及磷酸盐缓冲体系的情况下，缓冲体系可以以多种方式形成。缓冲体系可以通过简单地使缓冲剂(多种缓冲剂)与其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)混合形成，或可以供选择地通过使酸或碱与缓冲剂(多种缓冲剂)或其酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)混合以原位形成缓冲剂(多种缓冲剂)和酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)的期望的混合物来形成。例如，缓冲体系可以通过适合地以适于提供期望的pH的比例，简单地使磷酸盐缓冲剂(例如，磷酸钠和/或相关的磷酸氢盐(多种磷酸氢盐))与其酸/碱共轭物(即磷酸)或实际上与强酸(例如，盐酸)混合来形成。供选择地，缓冲体系可以通过适合地以适于提供期望的pH和缓冲剂(例如，磷酸钠(多种磷酸钠))和相应的酸/碱共轭物(多种酸/碱共轭物)(即磷酸)的混合物的量，将碱(例如，氢氧化钠)添加到磷酸盐缓冲剂的酸/碱共轭物(即磷酸和/或相关的磷酸氢盐(多种磷酸氢盐))来形成。供选择地，可以采用形成缓冲体系的任一种方法，并且可以通过添加另外的酸(适合地为强酸，如HCl)或另外的碱(适合地为强碱，如氢氧化钠)合理调节pH。
最适合地，缓冲体系为磷酸盐缓冲体系或至少包含磷酸盐缓冲体系，适合地包含一种或多种磷酸盐(适合地选自磷酸盐、磷酸氢盐或磷酸二氢盐)和/或磷酸的混合物。
在一些实施方案中，缓冲体系包括两种或更多种缓冲体系，例如磷酸盐缓冲体系和组氨酸缓冲体系。关于磷酸盐缓冲体系，缓冲剂和缓冲物质可以如上所述。适合地，组氨酸缓冲液的缓冲剂是组氨酸缓冲剂。适合地，组氨酸缓冲剂是组氨酸(或其盐)，最适合地为游离组氨酸(例如两性离子组氨酸)。组氨酸缓冲液不如许多其他常见的磷酸盐或羧酸盐缓冲体系直接，因为组氨酸的咪唑部分意味着组氨酸在pH6-7的pH下通常作为质子化(咪唑鎓)和去质子化(游离咪唑)形式的平衡混合物存在于水溶液中。组氨酸的质子化(咪唑鎓)形式可以与一种或多种药学上可接受的阴离子相关—包括阴离子例如氢氧根或氯离子—但咪唑鎓形式可以另外地或供选择地作为溶剂化的阳离子存在于稀释剂(例如水)中。因此，组氨酸的质子化(咪唑鎓)形式可以被认为是组氨酸的酸/碱共轭物，因为它代表组氨酸的共轭酸。组氨酸的共轭酸适合地具有氨基和质子化的咪唑基团二者，但具有去质子化的羧酸根基团—这产生了+1的净正电荷。缓冲剂与其酸/碱共轭物的组合构成缓冲体系。可以按照与磷酸盐缓冲体系相同或相似的原理形成组氨酸缓冲体系，并且其中磷酸盐和组氨酸缓冲体系共同存在于局部液体组合物内，适合地，建立具有期望的pH的缓冲体系，并且在必要的情况下添加强酸或强碱以进行精细的pH调节。
然而，在许多实施方案中，仅有单一缓冲体系，最适合地是磷酸盐缓冲体系。
适合地，局部液体组合物包含至多一种缓冲体系，其最适合地为磷酸盐缓冲体系。
适合地，局部液体组合物的pH大于或等于pH 6.5，适合地大于或等于pH 7.0，更适合地大于或等于pH 7.5，最适合地大于或等于pH 7.6。
适合地，局部液体组合物的pH小于或等于pH 9.0，适合地小于或等于pH 8.5，更适合地小于或等于pH 7.9，更适合地小于或等于pH 7.8。
最适合地，局部液体组合物的pH为pH 7.0至8.5，更适合地为7.5至7.9，最适合地为7.6至7.8。在这些pH范围内，存在于磷酸盐缓冲体系内的主要缓冲物质是磷酸一氢盐和磷酸二氢盐。
适合地，局部液体组合物包含浓度为约0.01至100mM，适合地约1至50mM，更适合地约5至15mM，最适合地约10mM的缓冲体系(适合地磷酸盐缓冲体系，适合地包含磷酸盐缓冲剂)。适合地，局部液体组合物包含磷酸盐缓冲体系，所述磷酸盐缓冲体系包含两种或更多种选自磷酸、磷酸二氢盐、磷酸一氢盐和磷酸盐(和/或其衍生物—例如，正磷酸)的缓冲物质，适合地具有任何磷酸盐物质的钠抗衡离子，总浓度为约0.01至100mM，适合地约1至50mM，更适合地约5至15mM，最适合地约10mM。在优选的实施方案中，主要的磷酸盐缓冲物质是磷酸一氢盐和磷酸二氢盐。适合地，在存在多于一种缓冲体系(例如组氨酸缓冲体系以及磷酸盐缓冲体系)的情况下，第一和第二缓冲体系中的每一个都以上述浓度存在(例如，使得缓冲体系的总浓度可以加倍)。
适合地，局部液体组合物包含磷酸盐缓冲体系，其中磷酸盐缓冲物质以约0.98μg/mL至9.8mg/mL(即，0.98μg/mL至9.8mg/mL磷酸当量)，适合地约0.098mg/mL至约4.9mg/mL，适合地约0.49mg/mL至约1.47mg/mL，最适合地约0.98mg/mL的浓度(参考磷酸当量定义，即假设所有缓冲物质为磷酸形式，MW＝98)存在于组合物内。
适合地，局部液体组合物内的磷酸盐缓冲物质(以磷酸当量计)与褪黑素和/或褪黑素类似物的重量比为1,000,000:1至500:1，适合地500,000:1至5,000:1，适合地25,000:1至75,000:1，适合地约50,000:1。
氨基酸
局部液体组合物适合地包含一种或多种氨基酸，适合地两种氨基酸。每种、一些或所有这样的氨基酸适合地为天然氨基酸。这样的氨基酸(多种氨基酸)可以适合地以两性离子形式或盐形式(例如，精氨酸盐酸盐和/或半胱氨酸盐酸盐)提供。适合地，除非另有说明，本文中关于氨基酸给出的任何量或浓度(无论绝对还是相对)适合地是指相应的游离两性离子氨基酸的量或浓度，尽管所述氨基酸可以以不同形式提供或者甚至可以在占优势的(prevailing)pH下以不同形式存在于局部液体组合物内。
局部液体组合物适合地包含第一氨基酸，其适合地为天然氨基酸。第一氨基酸适合地包含至少一个硫原子，并且适合地包含至多一个硫原子。适合地，讨论的硫原子是二价硫原子(适合地不包括磺酸等，并且适合地不包括氨基酸如牛磺酸)。适合地，二价硫原子与硫醇或硫酯部分相关。因此，第一氨基酸适合地包含硫醇(-SH，巯基基团)或硫酯(-SR，有机硫烷基基团)。适合地，硫酯为选自以下的基团：(1-12C)烷基硫烷基、(3-8C)环烷基硫烷基、芳基硫烷基、芳基-(1-3C)烷基硫烷基、杂芳基硫烷基、杂芳基-(1-3C)烷基硫烷基，任选地被如本文所定义的一个或多个Rsub基团取代。更适合地，硫酯为选自以下的基团：(1-3C)烷基硫烷基或芳基硫烷基，更适合地为(1-3C)烷基硫烷基，最适合地为甲基硫烷基。在具体实施方案中，第一氨基酸选自甲硫氨酸和半胱氨酸。在优选的实施方案中，第一氨基酸为甲硫氨酸。
适合地，局部液体组合物包含浓度为约1x10-6至5mg/mL，适合地约0.001-1.0mg/mL，约0.005-0.015mg/mL，最适合地约0.01mg/mL的第一氨基酸(适合地选自甲硫氨酸或半胱氨酸、最适合地甲硫氨酸)。
适合地，局部液体组合物包含浓度为约6.7nM至33.5mM，适合地约0.0067至6.7mM，更适合地约0.0335至0.1mM，最适合地约0.067mM的第一氨基酸(适合地选自甲硫氨酸或半胱氨酸)。
局部液体组合物适合地包含第二氨基酸，其适合地为天然氨基酸，适合地但是不一定是除了第一氨基酸(适合地为如本文所定义的第一氨基酸)以外的氨基酸。适合地，在还存在第一氨基酸的情况下，第一和第二氨基酸是不同的。第二氨基酸适合地不含任何硫原子，适合地不含任何硫醇或硫酯基团，尤其是本文关于第一氨基酸限定的那些。第二氨基酸适合地为碱性氨基酸，适合地为碱性天然氨基酸(即，选自精氨酸、赖氨酸或组氨酸中的一种)。然而，在局部液体组合物包含组氨酸的情况下，该组氨酸适合地起到缓冲体系的作用或由缓冲体系组成。在优选的实施方案中，第二氨基酸选自甘氨酸或精氨酸，最适合地为精氨酸。适合地，第二氨基酸作为其酸式盐(即，而不是标准中性两性离子物质)提供，例如其盐酸盐。然而，适合地，任何量或浓度涉及第二氨基酸的游离两性离子形式，不论其在局部液体组合物内提供或存在的盐形式如何。
适合地，局部液体组合物包含第二氨基酸(适合地选自精氨酸或甘氨酸、最适合地精氨酸)，其浓度为约0.0008-8mg/mL(适合地作为约0.001-10mg/mL精氨酸盐酸盐提供)，适合地约0.008-0.8mg/mL(适合地作为约0.01-1.0mg/mL精氨酸盐酸盐提供)，约0.04-0.4mg/mL(适合地作为约0.05-0.5mg/mL精氨酸盐酸盐提供)，最适合地约0.082-0.084mg/mL(适合地作为0.1mg/mL精氨酸盐酸盐提供)。
适合地，局部液体组合物包含浓度为约0.00475至47.5mM，适合地约0.0475至4.75mM，更适合地约0.238至2.38mM，最适合地约0.475mM的第二氨基酸(适合地精氨酸)。
适合地，组合物可以(基本上)不含除规定的那些以外的另外的氨基酸，或包含不超过0.1mM的任何个别的另外的氨基酸，适合地不超过0.01mM的任何个别的另外的氨基酸、适合地不超过0.001mM的任何个别的另外的氨基酸。
在具体实施方案中，组合物包含一种含硫氨基酸和一种不含硫氨基酸二者，并且(基本上)不含任何另外的氨基酸，或以不超过0.1mM，适合地不超过0.01mM，适合地不超过0.001mM的个别浓度(关于每种氨基酸)包含任何另外的氨基酸。在这样的实施方案中，最适合地，含硫氨基酸是甲硫氨酸，并且不含硫氨基酸是精氨酸。
张力剂和重量摩尔渗透压浓度
组合物适合地包含张力剂。适合地存在张力剂以提供具有期望重量摩尔渗透压浓度或摩尔渗透压浓度的局部液体组合物，最适合地，重量摩尔渗透压浓度在相关受试者的生理重量摩尔渗透压浓度(即，血浆重量摩尔渗透压浓度)的20％内。适合地，张力剂以足以使组合物与体液(基本上)等渗的量或浓度存在于组合物内。适合地，张力剂以足以使组合物的摩尔渗透压浓度或重量摩尔渗透压浓度在本文定义的范围内的量或浓度存在于组合物内。
可以使用任何适合的张力剂。然而，适合地，张力剂选自：水溶性金属盐(例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙)、水溶性张力糖(tonicifying sugar)/糖醇(例如，葡萄糖、蔗糖、甘露醇)和/或其他水溶性多元醇。适合地，张力剂(多种张力剂)是非缓冲的(即产生很少或不产生缓冲作用)。因此，任何金属盐张力剂适合地不是缓冲剂。
局部液体组合物可以包含一种或多种张力剂，但是优选地仅存在单一“张力剂”本身(尽管由意图起到如本文定义的另一功能的组分赋予组合物的任何张力作用)。
最优选地，张力剂为金属盐或包含金属盐(优选地为非缓冲性水溶性金属盐)。适合地，所述金属盐为金属卤化物或包含金属卤化物，适合地为碱金属卤化物或碱土金属卤化物，适合地为碱金属氯化物。
在具体实施方案中，张力剂为氯化钠或包括氯化钠。在具体实施方案中，张力剂为氯化钠。氯化钠是与磷酸盐和/或组氨酸缓冲体系在液体褪黑素制剂中一起使用的特别有利的稳定剂。
适合地，局部液体组合物以以下浓度包含张力剂(多种张力剂)(最适合地为氯化钠)：约1mg/mL至约100mg/mL，更适合地约2mg/mL至约30mg/mL，更适合地约5mg/mL至约12mg/mL。在实施方案中，张力剂(多种张力剂)以约9mg/mL的浓度存在。
适合地，局部液体组合物以以下浓度包含张力剂(多种张力剂)(最适合地为氯化钠)：约17至约1,711mM，更适合地约34至约513mM，更适合地约85.5至约205mM。在实施方案中，氯化钠以约154mM的浓度存在。
本发明的局部液体组合物适合地具有150-400mOsm/kg，适合地250-350mOsm/kg，适合地280-330mOsm/kg，适合地295-320mOsm/kg，适合地300-315mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
表面活性剂
本发明的局部液体组合物可以包含表面活性剂或一种或多种表面活性剂，所述表面活性剂或一种或多种表面活性剂适合地如本文所定义。
可使用任何适合的表面活性剂。然而，适合地，表面活性剂是非离子表面活性剂，最适合地是聚山梨酯(聚氧乙二醇脱水山梨醇烷基酯)或司盘(脱水山梨醇烷基酯)表面活性剂，但供选择地，非离子表面活性剂可以是亚烷基二醇(例如丙二醇)或聚亚烷基二醇(例如二甘醇)。
尽管一种或多种表面活性剂可以包含在本发明的局部液体组合物中，但是最适合地仅存在单一表面活性剂，最适合地为单一非离子表面活性剂(适合地如本文所定义)。
表面活性剂(多种表面活性剂)适合地选自聚山梨酯20(聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单月桂酸酯)、聚山梨酯40(聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单棕榈酸酯)、聚山梨酯60(聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单硬脂酸酯)、聚山梨酯80(聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯)、脱水山梨醇单月桂酸酯、脱水山梨醇单棕榈酸酯、脱水山梨醇单硬脂酸酯、脱水山梨醇三硬脂酸酯和/或脱水山梨醇单油酸酯。
在具体实施方案中，表面活性剂(多种表面活性剂)选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60和/或聚山梨酯80。在具体实施方案中，局部液体组合物包含选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60和聚山梨酯80的单一表面活性剂。
在具体实施方案中，表面活性剂为聚山梨酯20。
适合地，局部液体组合物以约0.001mg/mL至约10mg/mL，更适合地约0.01mg/mL至约1mg/mL，更适合地约0.025mg/mL至约0.075mg/mL的浓度包含表面活性剂(多种表面活性剂)(最适合地聚山梨酯20)。在实施方案中，表面活性剂(多种表面活性剂)以约0.05mg/mL的浓度存在。在具体实施方案中，聚山梨酯20以约0.05mg/mL的浓度存在。
适合地，局部液体组合物以约0.0008至约8mM(即，0.1μM-5mM)，更适合地约0.008至约0.8mM，更适合地约0.02至约0.06mM的浓度包含表面活性剂(多种表面活性剂)(最适合地聚山梨酯20)。在实施方案中，表面活性剂(多种表面活性剂)以约0.04mM的浓度存在。在实施方案中，聚山梨酯20以0.04mM的浓度存在。
在表面活性剂(多种表面活性剂)为或包含亚烷基二醇或聚亚烷基二醇(尤其是丙二醇)的情况下，表面活性剂(多种表面活性剂)(最适合地为丙二醇)浓度为约0.06mg/mL至约60mg/mL，更适合地约0.6mg/mL至约30mg/mL，更适合地约4mg/mL至约8mg/mL。在实施方案中，表面活性剂(多种表面活性剂)以约6mg/mL的浓度存在。在具体实施方案中，丙二醇以约6mg/mL的浓度存在。表面活性剂的这些值可以适合地替代本文关于表面活性剂给出的任何值(例如在其它实施方案中)，并且这些值，特别是与丙二醇有关的值可以替代与聚山梨酯20相关的对应值。
在一些实施方案中，局部液体组合物(基本上或完全)不含表面活性剂(多种表面活性剂)。
糖
局部液体组合物可以包含糖或糖醇。在具体实施方案中，糖是葡萄糖和/或蔗糖或包含葡萄糖和/或蔗糖。糖可以代替张力剂存在(例如，蔗糖基本上可以充当张力剂)。糖可以代替氨基酸存在(例如，葡萄糖基本上可以充当稳定剂)。
适合地，局部液体组合物可以以约0.01mg/mL至约200mg/mL，更适合地约1mg/mL至约100mg/mL，更适合地约10mg/mL至约60mg/mL的浓度包含糖或糖醇(最适合地为葡萄糖或蔗糖)。在实施方案中，糖或糖醇(尤其是其为葡萄糖的情况下)以约20mg/mL的浓度存在。在实施方案中，糖或糖醇(尤其是其为蔗糖的情况下)以约50mg/mL的浓度存在。
稀释剂
本发明的局部液体组合物可以包含任何一种或多种药学上可接受的稀释剂或其混合物。然而，最适合地，局部液体组合物为含水局部液体组合物。最适合地，稀释剂为水，并且适合地仅为水。水适合地为注射用水(WFI)。
适合地，稀释剂可以构成任何局部液体组合物中的成分的余量，例如，以使重量百分比总计100％。适合地，本文给出的关于局部液体组合物的任何组分的任何浓度表示与任何其他组分混合的稀释剂中的(和适合地溶于与任何其他组分混合的稀释剂中的)所述组分的浓度。
本发明的局部液体组合物适合地为溶液，并且适合地(基本上或完全)不含微粒或沉淀物。局部液体组合物适合地(基本上或完全)不含粒径大于或等于10μm的微粒，适合地不含粒径大于或等于1μm的微粒，适合地不含粒径大于或等于0.25μm的微粒。
稳定性特征
本发明的局部液体组合物在标准温度和压力(SATP，即25℃)、低温(例如2-8℃)以及升高的温度(例如40℃)下在相对长的时期内显示优异的稳定性。
在25℃下储存20周后，和适合地在25℃下储存33周后，局部液体组合物内的活性成分(例如，褪黑素)的浓度适合地(基本上)保持恒定，或变化非常小。适合地，活性成分的浓度在该期间变化(或降低)不超过20％，适合地不超过10％，适合地不超过5％。
在40℃下储存1、3、4、14和/或33周后，局部液体组合物内的活性成分(例如，褪黑素)的浓度适合地(基本上)保持恒定，或变化非常小。适合地，活性成分的浓度在该期间变化(或降低)不超过20％，适合地不超过10％，适合地不超过5％。
在2-8℃下储存33周后，局部液体组合物内的活性成分(例如，褪黑素)的浓度适合地(基本上)保持恒定，或变化非常小。适合地，活性成分的浓度在该期间变化(或降低)不超过10％，适合地不超过5％，适合地不超过1％。
在25℃下储存20周后，和适合地在25℃下储存33周后，局部液体组合物的pH适合地(基本上)保持恒定，或变化非常小。适合地，pH在该期间变化不超过5％，适合地不超过2％，适合地不超过1.5％，适合地不超过1.3％。
在40℃下储存1、3、4、14和/或33周后，局部液体组合物的pH适合地(基本上)保持恒定，或变化非常小。适合地，pH在该期间变化不超过5％，适合地不超过2％，适合地不超过1.5％，适合地不超过1.3％。
在2-8℃下储存33周后，局部液体组合物的pH适合地(基本上)保持恒定，或变化非常小。适合地，pH在该期间变化不超过5％，适合地不超过2％，适合地不超过1.5％，适合地不超过1.3％。
在25℃下储存20周后，和适合地在25℃下储存33周后，局部液体组合物的重量摩尔渗透压浓度适合地(基本上)保持恒定，或变化非常小。适合地，重量摩尔渗透压浓度在该期间变化不超过10％，适合地不超过5％，适合地不超过3％，适合地不超过2.5％。
在40℃下储存4和/或33周后，局部液体组合物的重量摩尔渗透压浓度适合地(基本上)保持恒定，或变化非常小。适合地，重量摩尔渗透压浓度在该期间变化不超过10％，适合地不超过5％，适合地不超过4％，适合地不超过3.5％。
在2-8℃下储存33周后，局部液体组合物的重量摩尔渗透压浓度适合地(基本上)保持恒定，或变化非常小。适合地，重量摩尔渗透压浓度在该期间变化不超过10％，适合地不超过5％，适合地不超过4％，适合地不超过3.5％。
具体实施方案
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；缓冲体系；和精氨酸和甲硫氨酸二者的组合。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.00098-9.8mg/mL)
-一种或多种另外的选自以下的组分：
○包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸，适合地选自甲硫氨酸和半胱氨酸；
○不含任何硫原子的第二氨基酸；
○张力剂；和/或
○非离子表面活性剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5，并且组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.098-4.9mg/mL)；
-一种或多种另外的选自以下的组分：
○包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸，适合地选自甲硫氨酸和半胱氨酸；
○不含任何硫原子的第二氨基酸；
○张力剂；和/或
○非离子表面活性剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9，并且组合物具有280-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.49-1.47mg/mL)；
-一种或多种另外的选自以下的组分：
○包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸，适合地选自甲硫氨酸和半胱氨酸；
○不含任何硫原子的第二氨基酸；
○张力剂；和/或
○非离子表面活性剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-315mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.00098-9.8mg/mL)；
-一种或多种另外的选自以下的组分：
○1x10-6至5mg/mL甲硫氨酸或半胱氨酸；
○0.0008-8mg/mL精氨酸(适合地作为约0.001-10mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
○1-100mg/mL氯化钠；
○0.001-10mg/mL聚山梨酯20或供选择地0.1-100mg/mL丙二醇；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5，并且组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.098-4.9mg/mL)；
-一种或多种另外的选自以下的组分：
○0.001-1.0mg/mL甲硫氨酸或半胱氨酸；
○0.008-0.8mg/mL精氨酸(适合地作为约0.01-1.0mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
○2-30mg/mL氯化钠；和/或
○0.01-1.0mg/mL聚山梨酯20或供选择地1-10mg/mL丙二醇；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9，并且组合物具有280-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.49-1.47mg/mL)；
-一种或多种另外的选自以下的组分：
○0.005-0.015mg/mL甲硫氨酸或半胱氨酸；
○0.04-0.4mg/mL精氨酸(适合地作为约0.05-0.5mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
○5-12mg/mL氯化钠；和/或
○0.025-0.075mg/mL聚山梨酯20或供选择地4-8mg/mL丙二醇；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-315mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.00098-9.8mg/mL)；
-1-100mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.00098-9.8mg/mL)；
-0.01-100mM组氨酸缓冲体系；
-1-100mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.098-4.9mg/mL)；
-2-30mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.098-4.9mg/mL)；
-1-50mM组氨酸缓冲体系；
-2-30mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.49-1.47mg/mL)；
-5-12mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.49-1.47mg/mL)；
-5-15mM组氨酸缓冲体系；
-5-12mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM缓冲体系(适合地，浓度为以共轭酸当量计0.00098-9.8mg/mL)；
-1x10-6至5mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5，并且组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM缓冲体系(适合地，浓度为以共轭酸当量计0.098-4.9mg/mL)；
-0.001-1.0mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9，并且组合物具有280-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM缓冲体系(适合地，浓度为以共轭酸当量计0.49-1.47mg/mL)；
-0.005-0.015mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-320mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.00098-9.8mg/mL)；
-1x10-6至5mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸，适合地选自甲硫氨酸和/或半胱氨酸；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5，并且组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.098-4.9mg/mL)；
-0.001-1.0mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸，适合地选自甲硫氨酸和/或半胱氨酸；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9，并且组合物具有280-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.00098-9.8mg/mL)；
-0.01-100mM组氨酸缓冲体系；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5，并且组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.49-1.47mg/mL)；
-0.005-0.015mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸，适合地选自甲硫氨酸和/或半胱氨酸；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-315mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM磷酸盐缓冲体系(适合地，浓度为以磷酸当量计0.49-1.47mg/mL)；
-5-15mM组氨酸缓冲体系；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-315mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM缓冲体系(适合地，浓度为以共轭酸当量计0.00098-9.8mg/mL)；
-1x10-6至5mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-1-100mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5，并且组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM缓冲体系(适合地，浓度为以共轭酸当量计0.098-4.9mg/mL)；
-0.001-1.0mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-2-30mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9，并且组合物具有280-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM缓冲体系(适合地，浓度为以共轭酸当量计0.49-1.47mg/mL)；
-0.005-0.015mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-5-12mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-315mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-20ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-10mM缓冲体系(适合地，浓度为以共轭酸当量计0.98mg/mL)；
-0.01mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-9mg/mL张力剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.7。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM缓冲体系；
-1x10-6至5mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-0.0008-8mg/mL不含任何硫原子的第二氨基酸；
-1-100mg/mL张力剂；
-0.001-10mg/mL非离子表面活性剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5，并且组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM缓冲体系；
-0.001-1.0mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-0.008-0.8mg/mL不含任何硫原子的第二氨基酸；
-2-30mg/mL张力剂；
-0.01-1.0mg/mL非离子表面活性剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9，并且组合物具有280-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM缓冲体系；
-0.005-0.015mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-0.04-0.4mg/mL不含任何硫原子的第二氨基酸；
-5-12mg/mL张力剂；
-0.025-0.075mg/mL非离子表面活性剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-320mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-20ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-10mM缓冲体系；
-0.01mg/mL包含至少一个硫原子(适合地为二价硫原子，如硫醇或硫酯)的第一氨基酸；
-0.082-0.084mg/mL不含任何硫原子的第二氨基酸；
-9mg/mL张力剂；
-0.05mg/mL非离子表面活性剂；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.7。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系；
-1x10-6至5mg/mL甲硫氨酸；
-0.0008-8mg/mL精氨酸(适合地作为约0.001-10mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
-1-100mg/mL氯化钠；
-0.001-10mg/mL聚山梨酯20；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5，并且组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-2-200ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-0.01-100mM磷酸盐缓冲体系；
-0.01-100mM组氨酸缓冲体系；
-0.0008-8mg/mL精氨酸(适合地作为约0.001-10mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
-1-100mg/mL氯化钠；
-0.001-10mg/mL聚山梨酯20；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7-8.5，并且组合物具有250-350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM磷酸盐缓冲体系；
-0.001-1.0mg/mL甲硫氨酸；
-0.008-0.8mg/mL精氨酸(适合地作为约0.01-1.0mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
-2-30mg/mL氯化钠；
-0.01-1.0mg/mL聚山梨酯20；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9，并且组合物具有280-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-5-30ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-1-50mM磷酸盐缓冲体系；
-1-50mM组氨酸缓冲体系；
-0.008-0.8mg/mL精氨酸(适合地作为约0.01-1.0mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
-2-30mg/mL氯化钠；
-0.01-1.0mg/mL聚山梨酯20；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.5-7.9，并且组合物具有280-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM磷酸盐缓冲体系；
-0.005-0.015mg/mL甲硫氨酸；
-0.04-0.4mg/mL精氨酸(适合地作为约0.05-0.5mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
-5-12mg/mL氯化钠；
-0.025-0.075mg/mL聚山梨酯20；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-320mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM磷酸盐缓冲体系；
-5-15mM组氨酸缓冲体系；
-0.04-0.4mg/mL精氨酸(适合地作为约0.05-0.5mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
-5-12mg/mL氯化钠；
-0.025-0.075mg/mL聚山梨酯20；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-320mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-20ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-10mM磷酸盐缓冲体系；
-0.01mg/mL甲硫氨酸；
-0.082-0.084mg/mL精氨酸(适合地作为0.1mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
-9mg/mL氯化钠；
-0.05mg/mL聚山梨酯20；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.7。
在具体实施方案中，局部液体组合物包含：
-20ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)和/或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-10mM磷酸盐缓冲体系；
-10mM组氨酸缓冲体系；
-0.082-0.084mg/mL精氨酸(适合地作为0.1mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
-9mg/mL氯化钠；
-0.05mg/mL聚山梨酯20；
-水(适合地作为按重量计的剩余余量)；
其中组合物的pH为pH 7.7。
上述实施方案中的任一个或本文任何地方定义的任何实施方案可以包含组氨酸缓冲体系，任选地供选择地或除另外的缓冲液(如磷酸盐缓冲液)以外，但最适合地，任何组氨酸缓冲液是除磷酸盐缓冲液以外的。上述实施方案可以包含组氨酸缓冲液，适当地以上文中关于缓冲体系规定的量中的任一种，但适合地，组氨酸缓冲液的这种量是除了另一种缓冲体系(例如磷酸盐缓冲液)的规定量以外的量，使得缓冲体系的总量是组氨酸缓冲体系和另一种缓冲体系(例如磷酸盐缓冲体系)的组合的总量。例如，在实施方案中，组合物包含10mM磷酸盐缓冲体系和10mM组氨酸缓冲体系，所以缓冲体系的总量为20mM。
所有上述实施方案可以作为相对组合物而不是绝对组合物给出。因此，关于多种成分的重量浓度值可以由相对重量浓度值(例如重量份，pbw)代替。这是合理的，因为局部液体组合物可以期望地以较高浓度被储存和/或运输，并在使用前适当稀释。
局部液体组合物的制备
本发明提供了制备适合地如本文所定义的局部液体组合物的方法。该方法适合地包括以被认为适宜的任何特定顺序将用以形成如本文所定义的局部液体组合物所需的任何相关的组分混合在一起。技术人员可以参考本领域熟知的用于形成局部液体组合物的实施例或技术。不同的实施方案将适合地需要可能以不同的量被混合的组分的不同组合。技术人员可以通过参考与该局部液体组合物相关的前述公开内容容易地推断出这样的组合和量。
适合地，该方法涉及适合地将相关组分一起混合在稀释剂(例如，水)中，适合地以使所有组分(基本上或完全)溶于稀释剂中。
该方法可以涉及首先配制每种、一些或所有组分(任选地与稀释剂中的一些或所有一起)的一种或多种预混合物(或预溶液(pre-solution)，然后随后将所述预混合物(多种预混合物)或预溶液(多种预溶液)任选地连同未在稀释剂中作为预混合物或预溶液提供的任何组分混合在一起，以最终形成局部液体组合物或局部液体前体组合物(其随后可以经受进一步处理以制备局部液体组合物)。
适合地，该方法涉及形成缓冲体系，适合地包含如本文所定义的缓冲剂的缓冲体系。缓冲体系适合地在与一种或多种其它组分混合之前在预混合物中形成，但是缓冲体系可以任选地在其它组分中的一种或多种的存在下形成。缓冲体系可以如本文之前所定义形成，但是缓冲体系一旦与所有其它组分混合(这可以代表局部液体前体组合物)，随后就可以将pH调节或微调至适宜的pH值(例如，通过添加强酸和/或强碱)。
在某些实施方案中，缓冲剂和/或缓冲体系作为单独的混合物预先形成，并且缓冲体系通过缓冲液交换(例如，使用渗滤直到达到相关浓度或重量摩尔渗透压浓度)被转移到局部液体前体组合物(包含除缓冲剂和/或缓冲体系以外的一些或所有组分)。如果需要，之后可以添加另外的赋形剂，以制备最终的局部液体组合物。可以在所有组分存在时或存在之前调节pH。
任何、一些或所有组分可以在与其他组分混合之前用稀释剂预溶解或与稀释剂预混合。
可以过滤最终的局部液体组合物，适合地以去除颗粒物质。适合地，通过尺寸为1μm或在1μm以下，适合地为0.22μm的过滤器过滤。适合地，通过PES过滤器或PVDF过滤器，适合地使用0.22μm PES过滤器过滤。
本发明还提供了局部液体组合物，其可通过如本文描述的制备方法获得，通过如本文描述的制备方法获得，或通过如本文描述的制备方法直接获得。
套件或医疗装置
本发明的局部液体组合物可以加入到套件或医疗装置中，例如诸如WO2013/178587(MAXIA等人)中公开的医疗装置。由于子宫冲洗是相对非侵入性的做法，其允许通过机械去除分泌物来恢复子宫生理状态，这可能改变植入条件，本发明的另一个目的是一种用于子宫冲洗的医疗装置，其包括预填充或待填充如本文定义的组合物的无菌容器。因此，本发明提供一种套件或医疗装置，包括预填充或配置成用于填充如本文所定义的局部液体组合物的无菌容器。
无菌容器适合地选自注射器、分配器、药筒或自注射笔。
本发明的局部液体组合物可以配制成适用于子宫给予的凝胶，更精确地用于在子宫腔中原位给予，优选地使用是宫内“T形”装置的医疗装置。也可以预见用于粘膜给予的控释凝胶制剂。
在一些实施方案中，装置或套件可以在与局部液体组合物一起使用之前立即进行填充。在一些实施方案中，局部液体组合物可以在装置或套件内形成。然而，本发明的制剂的优点在于它们足够稳定以允许使用在其最终使用之前数周填充的装置或套件。
在本发明的一些实施方案中，套件或医疗装置还可以包括导管(适当地是无菌柔性导管)，优选地具有单个末端孔。导管可以适合地用于将局部液体组合物递送至局部给予的部位(例如子宫)。
多部件试剂盒
本发明提供了多部件试剂盒，其包括医疗装置(其中没有加入局部液体组合物)、如本文所定义的局部液体组合物(任选地包含在分开的套件或容器中)和任选地一组具有关于局部液体组合物的(例如，局部)给予的指导的说明书。然后，使用者可以在给予之前使用局部液体组合物(其可以以小瓶或安瓿等提供)填充医疗装置。
药物液体组合物的用途和治疗方法
本发明提供了用于治疗的如本文所定义的局部液体组合物。所讨论的治疗适合地是生育治疗(或不孕不育的治疗)。因此，局部液体组合物可以用于辅助生殖治疗，例如体外受精治疗。
特别地，本发明的局部液体组合物可用于治疗、抑制或预防胚胎植入失败(特别是在辅助生殖治疗期间)。因此，本发明的局部液体组合物可用于促进胚胎植入、改善胚胎植入、抑制和/或预防胚胎植入失败、降低胚胎植入失败的概率、促进辅助生殖、提高子宫对胚胎植入的接受性以及/或治疗子宫。
本发明的局部液体组合物通常用于冲洗和/或灌洗子宫和/或子宫内膜的方法(适合地使子宫/子宫内膜为胚胎移植作准备，以提高植入或以另外的方式抑制植入失败)，所述方法涉及将如本文所定义的局部液体组合物局部给予子宫和/或子宫内膜。这样的冲洗/灌洗方法通过作为包括以下的方法的部分适合地促进胚胎在子宫内植入：
(i)使用如本文所定义的局部液体组合物冲洗和/或灌洗子宫和/或子宫内膜；
(ii)将胚胎(例如，通过IVF的一种形式)移植到子宫(适合地在步骤(i)之后，适合地在步骤(i)之后一天或多天)；和
(iii)允许胚胎植入子宫内(和之后任选地监测植入和/或怀孕的进展)。
引入本文作为参考的WO2013/178587(MAXIA等人)描述了该方法，并且更详细地描述了其变型。
适合地，本文定义的组合物、套件和医疗装置用于辅助生殖，特别是用于抑制和/或预防进入到子宫中的胚胎植入失败。这样的组合物、套件和医疗装置适用于医学或兽医学领域。适合地，这样的组合物、套件和医疗装置用于局部给予，适合地局部给予到子宫中。组合物、套件和医疗装置适合地用于在哺乳动物受试者中辅助生殖(适合地雌性哺乳动物受试者)，适合地用于需要这样的治疗的受试者，最适合地用于在人类受试者中辅助生殖。适合地，组合物、套件和医疗装置的局部给予涉及(治疗)有效量的组合物的局部给予。
在具体实施方案中，辅助生殖包括体外受精(IVF)和胚胎移植(例如，FIVET)。这样的治疗方法一般涉及：
(i)获得互补配子(例如，适合地获得来自雌性的一个或多个卵子，和来自雄性的多个精子)；
(ii)在适合的培养基内共同孵育互补配子以促进受精从而产生一个或多个合子；
(iii)在适合的生长培养基内培养一个或多个合子以形成一个或多个胚胎；
(iv)任选地在胚胎培养基中培养一个或多个胚胎，直到分裂期或胚泡期；
(v)任选地选择一个或多个胚胎中的一个或多个；
(vi)将(任选地选择的)胚胎中的一个或多个移植到受试者(或患者)的子宫(适当地通过穿过其阴道和子宫颈的薄塑料导管)；
(vii)允许胚胎植入发生，和接着发生怀孕。
可以用本发明的局部液体组合物预先适合地冲洗或灌洗在步骤(vi)中待移植胚胎(多个胚胎)的子宫和/或子宫内膜。这样的冲洗(优选借助导管进行)，特别是在胚胎移植前2-5天，优选胚胎移植前三天进行的冲洗，促进胚胎植入和/或抑制胚胎植入失败。在一些实施方案中，本发明的局部液体组合物可在子宫冲洗/灌洗期间与另一组合物(包括另一种冲洗组合物)联合使用。在一些实施方案中，这样的其它组合物可以在其同时局部给予之前与本发明的局部液体组合物预混合。供选择地，可以顺序给予各组合物。WO2013/178587(MAXIA等人)描述了使用的各种组合，包括与培养基一起使用的局部液体组合物。然而，最终使用本发明的局部液体组合物，局部液体组合物本身在其稳定性方面非常有利，意味着它们可以如本文所定义地提供并在适合的治疗方法的晚得多的阶段使用。
实施例
现在通过以下非限制性实施例详细描述本发明。
材料和设备
以下褪黑素溶液用于随后的实施例中：
·褪黑素本体溶液：
○包装在玻璃瓶中；
○包装在塑料袋中。
·包含不同赋形剂/抗氧化剂的褪黑素20ng/ml溶液，包装在玻璃小瓶中(对于组合物的详述，参见表1)；
·包含不同赋形剂/抗氧化剂的浓缩褪黑素(“5x”)溶液(100ng/ml)，包装在玻璃小瓶中(对于组合物的详述，参见表2)。
将上述溶液中的每种的样品在2-8℃、25℃和40℃下储存不同的时期，并根据下面详细描述的实验装置进行以下测试。
·褪黑素含量的HPLC测定；
·重量摩尔渗透压浓度
·pH
表1.褪黑素20ng/ml溶液(候选0–9)
表2.褪黑素“5x”溶液(候选0–9“5x”)
褪黑素溶液的制备
除了将过滤的溶液分成两部分并分别包装到i)琥珀色玻璃瓶；和ii)MilliporeMobius Silver 5L袋以外，根据以下实施例1制备本体褪黑素溶液及其样品。
根据实施例0至9中所述的程序制备候选溶液0-9。对未过滤的样品进行另外的分析。
还根据实施例0至9中所述的程序制备浓缩的(5x)候选溶液0-9，除了还包含L-甲硫氨酸的候选3(5x)以外，将终浓度调至标称样品的最终浓度的5x以上。
样品储存和分析
本体褪黑素溶液在室温下避光保存，并根据表3进行取样。
表3.本体溶液的取样点
将候选溶液0-9都储存在2-8℃、25℃和40℃下的人工气候室中。根据表4、表5和表6进行取样。
表4. 2-8℃下的候选溶液的取样点
表5. 25℃下的候选溶液的取样点
表6. 40℃下的候选溶液的取样点
将浓缩的(x5)候选溶液0-9储存在40℃下的人工气候室中，并根据表7取样。
表7. 5x候选溶液的取样点
分析测试和方案
研究期间使用的分析方法总结在表8中。
表8.研究期间使用的分析方法。
用于测定候选制剂以及玻璃瓶和塑料袋中的褪黑素本体溶液中的褪黑素的HPLC- FL方法
开发了HPLC-FL方法以提供测定各种样品中褪黑素浓度的方法。
开发的色谱条件如下：
○(FM)流动相：乙腈:水H3PO4 0.25％(20:80)
○定量环：50μl
○检测器：激发224nm；发射：348nm
○流速：1.5ml/min
○采集时间：15min
○柱温：室温
○柱：Phenomenex Luna C18 150x 4.6mm,5μm
如下制备分析样品：
·褪黑素储备溶液1mg/ml(SM)：
○精确称量100mg褪黑素标准品，用乙腈在100ml容量瓶中补足到刻度体积。
·褪黑素工作20ng/ml标准品(WS)：
○用已校准的玻璃移液管取出1毫升SM，在刻度瓶中用FM补足到500毫升。用校准的玻璃移液管从所得溶液中取出1ml，并在刻度瓶中调至100ml。
·按原样进样。
通过确认满足以下条件来测试系统适用性：
○FM溶液的色谱图在褪黑素的保留时间没有峰；
○WS溶液3次进样的相对标准偏差≤2.5％。
使用以下公式计算样品中褪黑素的含量：
褪黑素(ng/mL)＝(Ac.Cs)/As
其中：
Cs＝WS溶液的浓度，以ng/ml计
Ac＝样品面积
As＝标准品面积
Cs计算如下：
Cs＝(m.T.100)/D
其中：
m＝SM褪黑素溶液的重量，以mg计；
T＝褪黑素的纯度％，以根据褪黑素的分析证明的百分比计；
D＝SM溶液的稀释因子。
已经在与褪黑素的杂质和降解产物相比以及与制剂的制备中使用的赋形剂相比的特异性方面对分析方法进行了验证。已经验证了线性、精密度、准确度，并且也已经估算了检测限和定量限。
实施例0–候选物0的制备
按照以下配方制备候选物0：
物质 量
褪黑素 20ng/ml
磷酸盐缓冲液 10mM
注射用水(WFI) 适量
在制备候选物0期间使用以下主要容器：
然后根据以下程序制备候选物0：
1.溶液的制备：
a.通过以下制备磷酸盐缓冲液(10x PB)0.1M，pH7.5-7.8：称量27.6g的磷酸氢二钠十二水合物和3.5g磷酸二氢钠二水合物；并转移到1000ml烧瓶中，然后使用1000ml量筒加入约700ml的WFI。然后将混合物置于磁力搅拌下直到完全溶解。使用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)使溶液的pH值达到7.5-8.8，然后用WFI补足到所需体积。然后重新检查溶液以确保pH为7.5-7.8，如果需要，最终用正磷酸或氢氧化钠(以适宜浓度稀释)调节。
b.通过以下制备褪黑素溶液(4μg/ml)：在1000ml容量瓶中称量100.0mg褪黑素，并加入约750ml的WFI，之后放置在磁力搅拌下至少30分钟。完全溶解发生后，用WFI将体积调至所需水平(溶液A)。使用校准的移液管取出10ml溶液A，转移到50ml容量瓶中，并用WFI调至所需体积(溶液B)。使用校准的移液管取出10ml溶液B，转移到50ml容量瓶中，并再次用WFI调至所需体积，溶液C为4μg/ml。最终的溶液在使用前避光保存。
2.配混
a.将约500ml的WFI加入1000ml容量瓶中。
b.将100ml磷酸盐缓冲液(10×PB)加入该1000mL容量瓶中。
c.加入5ml褪黑素溶液4μg/ml，并搅拌混合物5分钟。
d.然后用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)将混合物的pH值调至pH 7.5至7.8。
e.然后用WFI将体积调至所需体积，和最终用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)将pH调节至7.5-7.8。
f.取出约10ml溶液，并置于HPLC分析中以测定褪黑素含量。
3.无菌过滤：
a.然后将所获得的混合物通过过滤灭菌，在层流罩下使用Millipak 20过滤器(Millipore，代码：MPGL02GH2)操作，然后将滤液转移到具有螺旋盖的1000ml瓶中。
b.在过滤前，使约1000ml以1:10稀释的0.1M磷酸盐缓冲液从过滤器中流出；
c.Millipak 20过滤器在使用前必须用100ml制剂预流。按原样去除过滤的溶液。
d.取出约10ml溶液，并置于HPLC分析下以测定褪黑素含量。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
实施例1–候选物1的制备
按照以下配方制备候选物1：
然后使用与实施例0中详述的相同的设备，根据以下程序制备候选物1：
1.溶液的制备：
a.以与实施例0中的磷酸盐缓冲液相同的方式制备磷酸盐缓冲液盐水(10x PBS)，除了另外将90.0g氯化钠混合到缓冲液中以制备磷酸盐缓冲液盐水。
b.以与实施例0中所述的褪黑素溶液相同的方式制备褪黑素溶液(4μg/ml)。
c.通过在50ml容量瓶中称量500.0mg聚山梨酯20，并使用WFI调至体积制备聚山梨酯20(10mg/ml)。
2.配混：以与实施例0相同的方式制备混合物，除了，另外：
a.将100.0mg的L-精氨酸盐酸盐添加到1000ml容量瓶中，并在磁力搅拌下溶于100mL磷酸盐缓冲液盐水(10x PBS)和500mL的WFI；和
b.使用5ml校准的移液管加入聚山梨酯20溶液(10mg/ml)，同时仍然搅拌混合物；
c.之后最后加入褪黑素溶液4μg/ml并按照实施例0的程序继续。
3.无菌过滤：根据实施例0进行。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
实施例2–候选物2的制备
按照以下配方制备候选物2：
物质 量
L-精氨酸盐酸盐 0.1mg/ml
L-甲硫氨酸 0.01mg/ml
褪黑素 20ng/ml
聚山梨酯20 0.05mg/ml
磷酸盐缓冲液 10mM
氯化钠 9mg/ml
注射用水(WFI) 适量
然后使用与实施例0中详述的相同的设备，根据以下程序制备候选物2：
1.溶液的制备：
a.以与实施例1中的磷酸盐缓冲液相同的方式制备磷酸盐缓冲液盐水(10x PBS)。
b.以与实施例0中所述的褪黑素溶液相同的方式制备褪黑素溶液(4μg/ml)。
c.以与实施例1中的聚山梨酯20相同的方式制备聚山梨酯20(10mg/ml)。
d.通过在1000ml容量瓶中称量100.0mg的L-甲硫氨酸，并使用WFI水调至体积来制备L-甲硫氨酸(0.1mg/ml)溶液。
2.配混：以与实施例1相同的方式制备混合物，除了，另外：
a.将100.0ml的L-甲硫氨酸(0.1mg/ml)与磷酸盐缓冲液盐水和WFI一起加入，以在磁力搅拌下溶解L-精氨酸盐酸盐。
3.无菌过滤：根据实施例1进行。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
实施例3–候选物3的制备
按照以下配方制备候选物3：
然后使用与实施例0中详述的相同的设备，根据以下程序制备候选物3：
1.溶液的制备：
a.以与实施例0中所述的褪黑素溶液相同的方式制备褪黑素溶液(4μg/ml)。
b.以与实施例中的聚山梨酯20相同的方式制备聚山梨酯20(10mg/ml)。
2.配混：
a.在容器中称量1.555g的L-组氨酸，并将其转移到1000ml容量瓶中，用WFI水冲洗容器并将洗涤水添加到该同一容量瓶中；
b.在容器中称量9g的NaCl，并在点6.2.a)处将其转移到1000ml容量瓶中，用WFI水冲洗容器并将洗涤水添加到该同一容量瓶中；
c.在容器中称量100.0mg的L-精氨酸盐酸盐，并在点6.2.a)处将其转移到1000ml容量瓶，用WFI水冲洗容器并将洗涤水添加到该同一容量瓶中；
d.添加约500ml的WFI并置于磁力搅拌下，直到完全溶解；
e.将其保持在搅拌条件下，通过使用校准的移液管加入5ml的聚山梨酯20溶液(10mg/ml)；
f.加入5ml褪黑素4μg/ml溶液，并继续搅拌5分钟；
g.用盐酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)使pH值为7.5-7.8；
h.用WFI调至体积，和最后用盐酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调节pH至7.5-7.8。取出约10ml溶液并置于HPLC分析中，以测定标题褪黑素(title in Melatonin)。
3.无菌过滤：根据实施例2进行。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
实施例4–候选物4的制备
按照以下配方制备候选物4：
物质 量
L-精氨酸盐酸盐 0.1mg/ml
L-甲硫氨酸 13ng/ml
褪黑素 20ng/ml
聚山梨酯20 0.05mg/ml
磷酸盐缓冲液 10mM
氯化钠 9mg/ml
注射用水(WFI) 适量
然后使用与实施例0中详述的相同的设备，根据以下程序制备候选物4：
1.溶液的制备：
a.以与实施例1中的磷酸盐缓冲液相同的方式制备磷酸盐缓冲液盐水(10x PBS)。
b.以与实施例0中所述的褪黑素溶液相同的方式制备褪黑素溶液(4μg/ml)。
c.以与实施例1中的聚山梨酯20相同的方式制备聚山梨酯20(10mg/ml)。
d.通过首先在1000ml容量瓶中称量130.0mg的L-甲硫氨酸，并使用WFI水调至体积来制备L-甲硫氨酸(2.6μg/ml)溶液。然后在50ml容量瓶中取出10ml的L-甲硫氨酸0.13mg/ml，并用WFI水调至体积。最后，在50ml容量瓶中取出5ml的L-甲硫氨酸26μg/m，并用WFI水调至体积。
2.配混：
a.称量100.0mg的L-精氨酸盐酸盐并将其转移至1000ml容量瓶中；
b.添加5ml的L-甲硫氨酸2.6μg/ml并将其转移至烧瓶中；
c.使用容量瓶添加100ml的磷酸盐缓冲液盐水(10×PBS)；
d.添加约500ml的WFI，并置于磁力搅拌下，直到完全溶解；
e.保持在搅拌下的同时，使用5ml校准的移液管添加聚山梨酯20溶液(10mg/mL)；
f.添加5ml的褪黑素4μg/ml溶液，并继续搅拌5分钟；
g.用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)使pH值为7.5-7.8；
h.用WFI调至体积，和最后用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调节pH至7.5-7.8。
i.取出约10ml溶液并置于HPLC分析中，以测定标题褪黑素。
3.无菌过滤：根据实施例1进行，除了在过滤前吹扫氮气30分钟以置换来自溶液的氧。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
实施例5–候选物5的制备
按照以下配方制备候选物5：
物质 量
L-精氨酸盐酸盐 0.1mg/ml
L-半胱氨酸盐酸盐xH2O 0.01mg/ml
褪黑素 20ng/ml
聚山梨酯20 0.05mg/ml
磷酸盐缓冲液 10mM
氯化钠 9mg/ml
注射用水(WFI) 适量
然后使用与实施例0中详述的相同的设备，根据以下程序制备候选物5：
1.溶液的制备：
a.以与实施例1中的磷酸盐缓冲液相同的方式制备磷酸盐缓冲液盐水(10x PBS)。
b.以与实施例0中所述的褪黑素溶液相同的方式制备褪黑素溶液(4μg/ml)。
c.以与实施例1中的聚山梨酯20相同的方式制备聚山梨酯20(10mg/ml)。
d.通过在1000ml容量瓶中称量100.0mg的L-半胱氨酸盐酸盐xH2O，并使用WFI水调至体积来制备L-半胱氨酸盐酸盐xH2O(0.1mg/ml)。
2.配混：根据实施例4制备混合物，除了添加5ml的L-甲硫氨酸2.6μg/ml被用100ml容量瓶添加100.0ml的L-半胱氨酸盐酸盐xH2O 0.1mg/ml替代。
4.无菌过滤：根据实施例1进行。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
实施例6–候选物6的制备
按照以下配方制备候选物6：
物质 量
L-精氨酸盐酸盐 0.1mg/ml
L-甲硫氨酸 0.01mg/ml
褪黑素 20ng/ml
丙二醇 6mg/ml
磷酸盐缓冲液 10mM
氯化钠 7mg/ml
注射用水(WFI) 适量
然后使用与实施例0中详述的相同的设备，根据以下程序制备候选物6：
1.溶液的制备：
a.以与实施例0中的磷酸盐缓冲液相同的方式制备磷酸盐缓冲液。
b.以与实施例0中所述的褪黑素溶液相同的方式制备褪黑素溶液(4μg/ml)。
c.根据实施例2制备L-甲硫氨酸(0.1mg/ml)溶液。
2.配混：
a.称量100.0mg的L-精氨酸盐酸盐并将其转移至1000ml容量瓶中；
b.在容器中称量7g的NaCl并将其转移至1000ml容量瓶中，使用WFI水冲洗容器并将洗涤液添加到该同一容量瓶中；
c.使用容量瓶添加100ml磷酸盐缓冲液(10×PB)；
d.使用100ml容量瓶添加100.0ml的L-甲硫氨酸0.1mg/ml；
e.添加约500ml的WFI并置于磁力搅拌下，直到完全溶解；
f.称量6.0g丙二醇并将其转移至1000ml容量瓶中；
g.添加5ml的褪黑素4μg/ml溶液，并继续搅拌5分钟；
h.用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调至pH 7.5–7.8；
i.用WFI调至体积，和最后用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调节pH至7.5-7.8。
j.取出约10ml溶液并置于HPLC分析中，以测定标题褪黑素。
5.无菌过滤：根据实施例1进行。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
实施例7–候选物7的制备
按照以下配方制备候选物7：
物质 量
L-甘氨酸 8mg/ml
L-甲硫氨酸 0.01mg/mL
褪黑素 20ng/ml
磷酸盐缓冲液 10mM
氯化钠 6mg/ml
注射用水(WFI) 适量
然后使用与实施例0中详述的相同的设备，根据以下程序制备候选物7：
1.溶液的制备：
a.以与实施例0中的磷酸盐缓冲液相同的方式制备磷酸盐缓冲液。
b.以与实施例0中所述的褪黑素溶液相同的方式制备褪黑素溶液(4μg/ml)。
c.根据实施例2制备L-甲硫氨酸(0.1mg/ml)溶液。
2.混合物的制备(溶液的混合)：
a.在容器中称量8.0mg的L-甘氨酸并将其转移至1000ml容量瓶中，用WFI水冲洗容器并将洗涤液添加到该同一容量瓶中；
b.在容器中称量6g的NaCl并将其转移至1000ml容量瓶中，使用WFI水冲洗容器并将洗涤液添加到该同一容量瓶中；
c.使用100ml容量瓶添加100.0ml的L-甲硫氨酸0.1mg/ml；
d.使用容量瓶添加100ml磷酸盐缓冲液(10×PB)；
e.添加约500ml的WFI并置于磁力搅拌下，直到完全溶解；
f.添加5ml的褪黑素4μg/ml溶液，并继续搅拌5分钟；
g.用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调至pH 7.5–7.8；
h.用WFI调至体积，和最后用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调节pH至7.5-7.8。
i.取出约10ml溶液并置于HPLC分析中，以测定标题褪黑素。
6.无菌过滤：根据实施例1进行。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
实施例8–候选物8的制备
按照以下配方制备候选物8：
物质 量
褪黑素 20ng/ml
葡萄糖 20mg/ml
磷酸盐缓冲液 10mM
氯化钠 6mg/ml
注射用水(WFI) 适量
然后使用与实施例0中详述的相同的设备，根据以下程序制备候选物8：
1.溶液的制备：
a.以与实施例0中的磷酸盐缓冲液相同的方式制备磷酸盐缓冲液。
b.以与实施例0中所述的褪黑素溶液相同的方式制备褪黑素溶液(4μg/ml)。
2.配混：
a.在容器中称量20.0g葡萄糖并将其转移至1000ml容量瓶中，用WFI水冲洗容器并将洗涤液添加到该同一容量瓶中；
b.在容器中称量6g的NaCl并将其转移至1000ml容量瓶中，使用WFI水冲洗容器并将洗涤液添加到该同一容量瓶中；
c.使用容量瓶添加100ml磷酸盐缓冲液(10×PB)；
d.添加约500ml的WFI并置于磁力搅拌下，直到完全溶解；
e.添加5ml的褪黑素4μg/ml溶液，并继续搅拌5分钟；
f.用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调至pH 7.5–7.8；
g.用WFI调至体积，和最后用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调节pH至7.5-7.8。
h.取出约10ml溶液并置于HPLC分析中，以测定标题褪黑素。
7.无菌过滤：根据实施例1进行。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
实施例9–候选物9的制备
按照以下配方制备候选物9：
物质 量
蔗糖 50mg/ml
L-甲硫氨酸 0.01mg/ml
褪黑素 20ng/ml
聚山梨酯20 0.05mg/ml
磷酸盐缓冲液 10mM
注射用水(WFI) 适量
然后使用与实施例0中详述的相同的设备，根据以下程序制备候选物9：
1.溶液的制备：
a.以与实施例0中的磷酸盐缓冲液相同的方式制备磷酸盐缓冲液。
b.以与实施例0中所述的褪黑素溶液相同的方式制备褪黑素溶液(4μg/ml)。
c.以与实施例1中的聚山梨酯20相同的方式制备聚山梨酯20(10mg/ml)。
d.以与在实施例2中相同的方式制备L-甲硫氨酸(0.1mg/ml)溶液。
2.配混：
a.称量50.0g蔗糖并将其转移至1000ml容量瓶中；
b.使用容量瓶添加100ml磷酸盐缓冲液(10×PB)；
c.使用100ml容量瓶添加100.0ml的L-甲硫氨酸0.1mg/ml；
d.保持在搅拌条件下，通过使用5ml校准的移液管添加聚山梨酯20溶液(10mg/ml)；
e.添加约500ml的WFI，并置于磁力搅拌下，直到完全溶解；
f.添加5ml的褪黑素4μg/ml溶液，并继续搅拌5分钟；
g.用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调至pH 7.5-7.8；
h.用WFI调至体积，和最后用正磷酸或氢氧化钠(以适宜的浓度稀释)调节pH至7.5-7.8。
i.取出约10ml溶液并置于HPLC分析中，以测定标题褪黑素。
8.无菌过滤：根据实施例1进行。
将得到的无菌溶液通过以下方式分配到玻璃小瓶中：在层流罩下操作，将预先灭菌的分配器装配在容纳溶液的瓶中；在分配器上将分配体积设置在2.5毫升；填充、封闭200个具有溶液的小瓶；和最后测量溶液的重量摩尔渗透压浓度。
结果1–本体溶液随时间推移的分析
根据褪黑素含量、重量摩尔渗透压浓度和pH值，随时间推移分析上述本体溶液(瓶装和袋装)。结果如下表9A和9B所示。
表9A–瓶装的褪黑素的本体溶液的分析测试结果(室温下储存最多42天)
表9B–塑料袋中的的褪黑素的本体溶液的分析测试结果(室温下储存最多42天)
结果2–在不同储存条件下的浓缩的(5x)候选溶液的分析
在不同的储存条件下，随着时间的推移分析浓缩的(5x)候选溶液0至9(100ng/mL褪黑素)(褪黑素含量和pH)。结果如下表10A和10B所示。
表10A–浓缩的x5候选物0-9的褪黑素含量测试结果(在40℃下储存12周后)
表10B–浓缩的x5候选物0-9的pH测试结果(在40℃下储存12周后)
结果3–在不同储存条件下的候选溶液(20ng/mL)的分析
在不同的储存条件下，随时间推移分析候选溶液0至9(20ng/mL褪黑素)(褪黑素含量、pH、重量摩尔渗透压浓度)。结果示于表11A-C、12A-C和13A-C中。
表11A–候选物0-9的褪黑素含量测试结果(在25℃下储存0、20和33周后)
表11B–候选物0-9的pH测试结果(在25℃下储存0、20和33周后)
表11C–候选物0-9的重量摩尔渗透压浓度测试结果(在25℃下储存0、20和33周后)
表12A–候选物0-9的褪黑素含量测试结果(在40℃下储存0-4、14和33周后)
表12B–候选物0-9的pH测试结果(在40℃下储存0-4、14和33周后)
表12C–候选物0-9的重量摩尔渗透压浓度测试结果(在40℃下储存0-4、14和33周 后)
表13A-候选物0-9的褪黑素含量测试结果(在2-8℃下储存0和33周后)
表13B-候选物0-9的pH测试结果(在2-8℃下储存0和33周后)
表13C–候选物0-9的重量摩尔渗透压浓度测试结果(在2-8℃下储存0和33周后)
结论
结果证实了本发明的制剂的令人印象深刻的储存稳定性，所述制剂全部含有众所周知在溶液中不稳定的褪黑素(或其类似物之一)。特别有利的制剂是以下那些制剂，其包含含硫氨基酸，特别是甲硫氨酸，特别是在甲硫氨酸与精氨酸组合存在的情况下。

Claims (18)

1.一种用于子宫内冲洗的局部液体组合物，所述组合物包含：
褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；
缓冲体系；和
包含至少一个硫原子的第一氨基酸。
2.如权利要求1所述的局部液体组合物，其中所述缓冲体系为磷酸盐缓冲体系或包括磷酸盐缓冲体系。
3.如前述权利要求中任一项所述的局部液体组合物，其中所述第一氨基酸为甲硫氨酸。
4.如前述权利要求中任一项所述的局部液体组合物，其中所述组合物还包含第二氨基酸。
5.如权利要求4所述的局部液体组合物，其中所述第二氨基酸为精氨酸。
6.如前述权利要求中任一项所述的局部液体组合物，其中所述组合物还包含表面活性剂。
7.如权利要求6所述的局部液体组合物，其中所述表面活性剂为聚山梨酯20。
8.如前述权利要求中任一项所述的局部液体组合物，其中所述组合物(基本上)不含任何蛋白质或蛋白质化合物，或包含不超过0.1重量％的任何蛋白质或蛋白质化合物。
9.如前述权利要求中任一项所述的局部液体组合物，其中所述组合物(基本上)不含除了规定的那些以外的另外的氨基酸，或包含不超过0.1mM的任何个别的另外的氨基酸。
10.如前述权利要求中任一项所述的局部液体组合物，其中所述组合物还包含张力剂。
11.如权利要求10所述的局部液体组合物，其中所述张力剂是氯化钠。
12.如前述权利要求中任一项所述的局部液体组合物，其中所述组合物具有280-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
13.如前述权利要求中任一项所述的局部液体组合物，其中所述组合物具有7.6至7.8的pH。
14.如权利要求1所述的局部液体组合物，其中所述组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM缓冲体系；
-0.005-0.015mg/mL包含至少一个硫原子的第一氨基酸；
-0.04-0.4mg/mL不含任何硫原子的第二氨基酸；
-5-12mg/mL张力剂；
-0.025-0.075mg/mL非离子表面活性剂；
-水；
其中组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且组合物具有295-320mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
15.如权利要求1所述的局部液体组合物，其中所述组合物包含：
-0.015-0.025重量份的褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-490-1470重量份的磷酸盐缓冲体系(以磷酸当量计)；
-5-15重量份的包含至少一个硫原子的第一氨基酸；
-40-400重量份的不含任何硫原子的第二氨基酸；
-5000-12000重量份的张力剂；
-25-75重量份的非离子表面活性剂；
-水；
其中所述组合物的pH为pH 7.5-7.9，并且所述组合物具有285-330mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
16.如权利要求1所述的局部液体组合物，其中所述组合物包含：
-15-25ng/mL褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)或其类似物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
-5-15mM磷酸盐缓冲体系；
-0.005-0.015mg/mL甲硫氨酸；
-0.04-0.4mg/mL精氨酸(适合地作为约0.05-0.5mg/mL精氨酸盐酸盐提供)；
-5-12mg/mL氯化钠；
-0.025-0.075mg/mL聚山梨酯20；
-水(作为按重量计的剩余余量)；
其中所述组合物的pH为pH 7.6-7.8，并且所述组合物具有295-320mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度。
17.一种套件或医疗装置，其包括预填充或配置用于填充前述任一项权利要求所述的局部液体组合物的无菌容器。
18.如权利要求1至16中任一项所述的局部液体组合物，其用于抑制和/或预防在辅助生殖治疗期间的胚胎植入失败。
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