CN107216412A - 猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术 - Google Patents

猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术 Download PDF

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    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
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    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
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Abstract

本发明涉及猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术，将新鲜猪大肠绞碎成浆液、浆液保温酶解、酶解液过滤收集滤液、对滤液进行离子交换吸附处理、树脂的洗涤与洗脱、肝素钠的沉淀、干燥得肝素钠粗品。本发明将新鲜猪大肠绞碎成浆液、浆液保温酶解、酶解液过滤收集滤液、对滤液进行离子交换吸附处理、树脂的洗涤与洗脱、肝素钠的沉淀、干燥得肝素钠粗品，本发明采用的酶解方法能更彻底全面地溶解猪大肠浆液，有效提高和稳定产品的质量以及肝素钠收率，同时获得的粗品杂质少、效价高。

Description

猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术
技术领域
本发明涉及一种利用动物脏器提取肝素钠的制备工艺，尤其是猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术。
背景技术
肝素钠是广泛存在于动物器官(如：牛、羊的小肠粘膜、肝、胰脏及肺组织等)的一种葡萄胺聚糖，和大多数粘多糖一样在体内作为蛋白质结合的复合物存在，这种复合物的抗凝活性随着蛋白质的去除而增加。肝素纳及其衍生物药品是经典的抗凝、抗血栓药物，在临床上广泛用于治疗肾脏病患者的渗血，急性心肌梗塞症，防止血栓形成，脑血管疾病，皮肤病，清除肾病形成的尿毒以及配合治疗暴发性流脑败血症，肾炎等，同时，肝素钠在降血脂和免疫等方面也有较好的作用，而且随着对其逐渐深入了解，其医疗用途日益扩大，市场供不应求。
目前，我国通常利用猪小肠，提取新鲜肠粘膜液，运用传统的盐解工艺生产肝素钠，这种制备方法由于生产周期长，水解不完全、不彻底，制得的肝素钠纯度低、收率低、效价低，很难进行规模性生产，且不能满足市场的大量需求。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种产品纯度高、杂质少、效价高的猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术，本工艺采用生物酶酶解法从原材料易得的猪大肠中提取肝素钠粗品。
本发明实现目的的技术方案如下：
猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术，步骤如下：
(1)破浆：将猪大肠绞碎再磨成浆状物，在充分搅拌下加入重量比1∶1-2的水，混匀得猪大肠浆液；
(2)酶解：猪大肠浆液调整浆液的PH值为8-10，加入猪大肠浆液重量的1-1.5％的肝素钠专用酶，搅拌均匀，升温至45-60℃，保温反应1.5-2.5小时后，保持反应液的PH值为8-10，加入酶解重量的4-5％氯化钠，搅拌均匀，保温0.5-1.5小时，继续升温到90-100℃，保持10-10分钟，冷却，得到猪大肠酶解液；
(3)过滤、吸附：过滤猪大肠酶解液，去除表面油脂层，滤液再升温到40-55℃，搅拌状态下加入滤液体积的2-4％的大孔吸附树脂，搅拌3-5小时后静置过滤，去除上层液，收集吸附有肝素钠的树脂；
(4)洗脱：树脂先用水冲洗滤干，再用盐水进行梯度洗脱，最后滤干树脂；合并梯度洗脱的滤液，得洗脱液；
(5)沉淀获得粗品：在洗脱液中加入等体积的95％乙醇沉淀过夜后，除去上层清液，沉淀物为肝素钠粗品，最后干燥储存。
而且，所述步骤(3)大孔吸附树脂为D-254树脂。
而且，所述步骤(3)过滤用60目尼龙布。
而且，所述梯度洗脱为：用树脂体积1-2倍盐度为4-5波美度氯化钠洗脱1小时，滤干；继续用树脂体积0.5-0.9倍盐度为4-5波美度氯化钠溶液搅拌洗脱45分钟～70分钟，滤干树脂；再用树脂体积2-3倍盐度为23-24波美度氯化钠溶液搅拌洗脱2-3小时；滤干树脂，继续用1-2倍盐度为23-24波美度氯化钠溶液洗脱3-4小时，滤干树脂。
而且，所述干燥储存步骤为：肝素钠粗品置于容器中抽干，然后放入干燥器内，定时置换干燥剂。
本发明的优点和有益效果为：
1、本发明将新鲜猪大肠绞碎成浆液、浆液保温酶解、酶解液过滤收集滤液、对滤液进行离子交换吸附处理、树脂的洗涤与洗脱、肝素钠的沉淀、干燥得肝素钠粗品，本发明采用的酶解方法能更彻底全面地溶解猪大肠浆液，有效提高和稳定产品的质量以及肝素钠收率，同时获得的粗品杂质少、效价高。
2、本发明制备工艺设计合理，无废气、废渣、废水排出污染环境，运营生产成本低，适合于工业化生产。
3、本发明工艺生产无毒、无害、生物环保，猪大肠原料来源易得，成本低，适合大规模工业化生产。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
本实施例中使用的肝素钠专用酶均采用南宁东恒华道生物科技有限责任公司生产的肝素钠提取专用酶。
猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术，步骤如下：
(1)破浆：首先将新鲜猪大肠用清水仔细清洗，除去内外污物和外部皮质脂肪后，将其绞碎再磨成浆状物，取1000g猪大肠浆状物，在充分搅拌下加入1000g水混匀得猪大肠浆液；
(2)酶解：猪大肠浆液在充分搅拌下，用氢氧化钠溶液调整浆液的PH值为8.5时，加入10g肝素钠专用酶，搅拌均匀，升温至53℃，保温反应2小时后，保持反应液的PH值为8.5，加入90g氯化钠，搅拌均匀，保温1小时，继续升温到98℃，保持15分钟，自然冷却，得到猪大肠酶解液；
(3)过滤、吸附：猪大肠酶解液自然冷却后，用60目尼龙布过滤，并撇去表面油脂层，滤液再升温到48℃，搅拌状态下加入60g D-254树脂，搅拌4小时后静置过滤，用虹吸管吸去上层液，收集吸附有肝素钠的树脂；
(4)洗脱：树脂先用水冲洗滤干，再用70g盐度为4.5波美度氯化钠洗脱1小时，滤干；继续用树脂体积0.7倍盐度为4.5波美度氯化钠溶液搅拌洗脱45分钟，滤干树脂；再用240g盐度为23波美度氯化钠溶液搅拌洗脱2小时；滤干树脂，继续用240g盐度为23-24波美度氯化钠溶液洗脱3小时，滤干树脂；合并上述滤液得洗脱液；
(5)沉淀获得粗品：在洗脱液中加入3000g的95％乙醇沉淀过夜后，用虹吸管除去上层清液，沉淀物为肝素钠粗品；
(6)干燥储存：抽滤至干的肝素钠沉淀物置于布氏漏斗中抽干，然后放入干燥器内，定时置换干燥剂如五氧化二磷不再吸水为止，捣碎成颗粒状，即得肝素钠粗品2.0g，其效价为每毫克90单位。

Claims (5)

1.猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术，其特征在于：步骤如下：
(1)破浆：将猪大肠绞碎再磨成浆状物，在充分搅拌下加入重量比1∶1-2的水，混匀得猪大肠浆液；
(2)酶解：猪大肠浆液调整浆液的PH值为8一10，加入猪大肠浆液重量的1-1.5％的肝素钠专用酶，搅拌均匀，升温至45-60℃，保温反应1.5-2.5小时后，保持反应液的PH值为8-10，加入酶解重量的4-5％氯化钠，搅拌均匀，保温0.5-1.5小时，继续升温到90-100℃，保持10-10分钟，冷却，得到猪大肠酶解液；
(3)过滤、吸附：过滤猪大肠酶解液，去除表面油脂层，滤液再升温到40-55℃，搅拌状态下加入滤液体积的2-4％的大孔吸附树脂，搅拌3-5小时后静置过滤，去除上层液，收集吸附有肝素钠的树脂；
(4)洗脱：树脂先用水冲洗滤干，再用盐水进行梯度洗脱，最后滤干树脂；合并梯度洗脱的滤液，得洗脱液；
(5)沉淀获得粗品：在洗脱液中加入等体积的95％乙醇沉淀过夜后，除去上层清液，沉淀物为肝素钠粗品，最后干燥储存。
2.根据权利要求1所述的猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术，其特征在于：所述步骤(3)大孔吸附树脂为D-254树脂。
3.根据权利要求1所述的猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术，其特征在于：所述步骤(3)过滤用60目尼龙布。
4.根据权利要求1所述的猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术，其特征在于：所述梯度洗脱为：用树脂体积1-2倍盐度为4-5波美度氯化钠洗脱1小时，滤干；继续用树脂体积0.5-0.9倍盐度为4-5波美度氯化钠溶液搅拌洗脱45分钟～70分钟，滤干树脂；再用树脂体积2-3倍盐度为23-24波美度氯化钠溶液搅拌洗脱2-3小时；滤干树脂，继续用1-2倍盐度为23-24波美度氯化钠溶液洗脱3-4小时，滤干树脂。
5.根据权利要求1所述的猪肠粘膜中肝素钠的提取精制技术，其特征在于：所述干燥储存步骤为：肝素钠粗品置于容器中抽干，然后放入干燥器内，定时置换干燥剂。
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