CN107201393A - 归纳总结酵母菌在wl培养基上的菌落形态 - Google Patents
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Abstract
利用WL培养基培养经鉴定过的酵母菌60株，根据酵母菌株在WL培养基的菌落形态不同对酵母菌株进行分类，归纳总结特定酵母菌在WL培养基上可能出现的一种或几种菌落形态，为利用WL培养基对酵母菌初步鉴定提供可靠、全面的依据。该方法将为规模化筛选、鉴定酵母菌提供了便利。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，并涉及酵母菌在WL培养基上菌落形态的归纳总结。
背景技术
WL营养培养基起初被设计用来监测饮料发酵过程中的微生物类群的，研究表明，葡萄酒自然发酵过程中出现的大多数典型的酵母菌种都可以用WL营养培养基进行区分，主要基于菌落颜色及形态(菌落大小、颜色、干燥程度、粘稠度、表面光滑度、边缘整齐度)。
随着科学技术的发展，酵母菌种鉴定由最初的常规鉴定方法，即以形态、生理、生化，有时还包括生态在内的特征为基础的鉴定发展到现在的分子生物技术鉴定方法。WL培养基可以用来简化后续分子鉴定的程序，同时可以避免生理生化分析带来的很大的工作量，可以作为酵母菌种鉴定的辅助手段。
本发明对已知酵母菌种进行WL培养基分类、形态描述，归纳总结特定酵母菌在WL培养基上可能出现的一种或几种菌落形态，为利用WL培养基对酵母菌初步鉴定提供可靠、全面的依据。
本发明的创新点：首次总结归纳同一种不同菌株的酵母菌在WL培养基上可能出现的一种或多种菌落形态。
发明内容
本发明的目的是归纳总结特定酵母菌在WL培养基上可能出现的一种或几种菌落形态，为利用WL培养基对酵母菌初步鉴定提供可靠、全面的依据。
本发明所用的60株酵母菌是从葡萄酒庄园分离得到的，经26S DNA D1/D2区扩增测序分析已鉴定到种的水平，菌株编号及菌种名称如下表：
本发明提供的方法，包括如下步骤：将酵母菌活化在YPDA培养基上，将处于同样生理状态的酵母菌划线在WL培养基上。
上述方法中，酵母菌活化条件为28℃，培养2d；WL培养基培养条件为28℃，培养5d。
上述方法中，YPDA培养基配方如下：葡萄糖2％，酵母浸膏1％，蛋白胨2％，琼脂2％，以双蒸水配制；WL培养基配方如下：酵母浸粉0.4％，胰蛋白胨0.5％，葡萄糖5％，磷酸二氢钾0.055％，氯化钾0.0425％，氯化钙0.0125％，硫酸镁0.0125％，氯化铁0.00025％，硫酸锰0.00025％，溴甲酚绿22mg/L，琼脂2％，pH6.5。配置方法：可先将盐类和溴甲酚绿配制成储备液，置于4℃冰箱。储液A：磷酸二氢钾5.5g，氯化钾4.25g，氯化钙1.25g，硫酸镁1.25g，使用双蒸水定容至400mL，高压灭菌后4℃保存。使用时按40mL/L加入。储液B：氯化铁0.25g，硫酸锰4.25g，双蒸水定容至100mL，高压灭菌后4℃保存。使用时按1mL/L加入。储液C：溴甲酚绿0.44g，溶解于100mL50％乙醇溶液中，使用时按1mL/L加入。配制培养基时按比例加入储液A和储液B以及剩余培养基组分，加入双蒸水至目标体积，调节pH至6.0-6.5。高压灭菌后冷却至65℃加入储液C，混匀制备平板。
上述方法中，将WL培养基上的酵母菌根据菌落形态和颜色进行分类。
本发明的实验证明，可以根据WL培养基上菌落的形态和颜色将酵母菌初步鉴定到种的水平，对酵母菌种鉴定具有重要的参考意义。
附图说明
图1～15分别为酵母菌株BL-4、SLY-1、SL-1、SX-7、DL-1、Z5L-1、Z5L-7、Z5X-1、MXY-18、XL-1、QL-1、LX-1、HX-1、HX-2、F1-21在WL培养基上的菌落形态图(15株酵母菌均为葡萄汁有孢汉逊酵母)。
图16～30分别为酵母菌株BXY-14、DT-17、ZXY-6、MXY-5、MLY-3、XXY-2、XLY-1、QLY-21、LT-4、HT-3、HT-13、F8-6、F8-15、F10-16、F4-17在WL培养基上的菌落形态图(15株酵母菌均为酿酒酵母)。
图31～40分别为酵母菌SL-3、H10X-7、Z5L-20、MX-13、ML-4、XX-2、QL-18、HLY-14、LL-6、F0-1在WL培养基上的菌落形态图(10株酵母菌均为美极梅奇式酵母)。
图41～50分别为酵母菌DXY-1、QXY-1、MXY-2、QT-20、ZLY-1、ZXY-1、XXY-1、BT-7、SXY-1、CXY-1株异常维克汉逊酵母菌在WL培养基上的菌落形态图(10株酵母菌均为异常维克汉逊酵母)。
图51～55分别为酵母菌BL-2、BX-14、LLY-13、LLY-17、CLY-7株浅白隐求酵母菌在WL培养基上的菌落形态图(5株酵母菌均为浅白隐球酵母)。
图56～60分别为季也蒙毕赤酵母菌、陆生伊萨酵母菌、乌兹别克斯坦隐球酵母菌、葡萄牙棒孢酵母菌、胶红酵母菌在WL培养基上的菌落形态图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均来自常规生化试剂商店。下面结合附图进一步详细说明本发明。
实施例1
葡萄汁有孢汉逊酵母菌在WL培养基上的菌落形态：按照说明书上述方法，结果表明，15株葡萄汁有孢汉逊酵母菌的WL菌落形态的共同点为：菌落深绿色、扁平、表面光滑不透明，背面中心绿色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为葡萄汁有孢汉逊酵母菌(图1～15)。
实施例2
酿酒酵母菌的鉴定在WL培养基上的菌落形态：按照说明书上述方法，结果表明，酿酒酵母在WL培养基上共出现3种类型：(1)除了F4-17和F10-16外，其余菌株菌落乳白色或中央带浅绿色，凸起，表面光滑不透明，背面白色；(2)F10-16，中央奶油色，边缘绿色，较高的突面，边缘有紧密的皱褶，背面中央奶油色，边缘绿色；(3)F4-17，菌落中央奶油色，边缘绿色，球形突起，表面光滑不透明，边缘整齐，背面中央奶油色，边缘绿色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为酿酒酵母菌(图16～30)。
实施例3
美极梅奇式酵母菌在WL培养基上的菌落形态：按照说明书上述方法，结果表明，10株美极梅奇式酵母菌的WL菌落形态的共同点为：菌落棕红色(奶油色带红色)，凸起，表面光滑不透明，背面红色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为美极梅奇式酵母菌(图31～40)。
实施例4
异常维克汉逊酵母菌在WL培养基上的菌落形态：按照说明书上述方法，结果表明，10株异常维克汉逊酵母菌的WL菌落形态的共同点为：菌落绿色、较高的突面，表面不光滑，边缘不整齐，背面中心绿色，边缘白色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为异常维克汉逊酵母菌(图41～50)。
实施例5
浅白隐球酵母菌在WL培养基上的菌落形态：按照说明书上述方法，结果表明，5株异常维克汉逊酵母菌的WL菌落形态的共同点为：菌落奶油色到灰色、菌落小，球形突起表面光滑不透明，边缘整齐，背面中心绿色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为浅白隐球酵母菌(图51～55)。
实施例6
季也蒙毕赤酵母在WL培养基上的菌落形态，按照说明书上述方法，结果表明，季也蒙毕赤酵母在WL上的菌落形态为：菌落奶油色略带蓝色、扁平、表面光滑不透明、边缘整齐，背面白色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为季也蒙毕赤酵母(图56)。
实施例7
陆生伊萨酵母菌的在WL培养基上的菌落形态：按照说明书上述方法，结果表明，陆生伊萨酵母菌在WL上的菌落形态为：菌落中央淡绿色，边缘白色，扁平、表面不光滑不透明、边缘不整齐、有皱褶，背面白色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为陆生伊萨酵母菌(图57)。
实施例8
利乌兹别克斯坦隐球酵母菌在WL培养基上的菌落形态：按照说明书上述方法，结果表明，乌兹别克斯坦隐球酵母菌在WL上的菌落形态为：菌落灰色，菌落小，球形突起表面光滑不透明，边缘整齐，背面中心绿色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为乌兹别克斯坦隐球酵母菌(图58)。
实施例9
葡萄牙棒孢酵母菌在WL培养基上的菌落形态，按照说明书上述方法，结果表明，葡萄牙棒孢酵母菌在WL上的菌落形态为：菌落奶油色带淡蓝色，球形突起，表面光滑不透明，边缘整齐，背面白色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为葡萄牙棒孢酵母菌(图59)。
实施例10
胶红酵母菌在WL培养基上的菌落形态，按照说明书上述方法，结果表明，胶红酵母菌在WL上的菌落形态为：菌落橘红色，球形突起，表面光滑不透明，边缘整齐，背面红色。反之，若酵母菌在WL培养基上的形态如上所述即可以初步判定为胶红酵母菌(图60)。
Claims (6)
1.15株葡萄汁有孢汉逊酵母(BL-4、SLY-1、SL-1、SX-7、DL-1、Z5L-1、Z5L-7、Z5X-1、MXY-18、XL-1、QL-1、LX-1、HX-1、HX-2、F1-21)在WL营养琼脂培养基的菌落形态描述及形态图(图1～图15)。
2.15酿酒酵母(BXY-14、DT-17、ZXY-6、MXY-5、MLY-3、XXY-2、XLY-1、QLY-21、LT-4、HT-3、HT-13、F8-6、F8-15、F10-16、F4-17)在WL营养琼脂培养基的菌落形态描述及形态图(图16～图30)。
3.10美极梅奇式酵母(SL-3、H10X-7、Z5L-20、MX-13、ML-4、XX-2、QL-18、HLY-14、LL-6、F0-1)在WL营养琼脂培养基的菌落形态描述及形态图(图31～图40)。
4.10株异常维克汉逊酵母(DXY-1、QXY-1、MXY-2、QT-20、ZLY-1、ZXY-1、XXY-1、BT-7、SXY-1、CXY-1)在WL营养琼脂培养基的菌落形态描述及形态图(图41～图50)。
5.5株异常维克汉逊酵母(BL-2、BX-14、LLY-13、LLY-17、CLY-7)在WL营养琼脂培养基的菌落形态描述及形态图(图51～图55)。
6.季也蒙毕赤酵母菌、陆生伊萨酵母菌、乌兹别克斯坦隐球酵母菌、葡萄牙棒孢酵母菌、胶红酵母菌在WL营养琼脂培养基的菌落形态描述及形态图(图56～图60)。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20170926 |