CN107198704A - 冰花愈伤组织萃取物于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、预防及治疗皮肤癌的用途 - Google Patents

冰花愈伤组织萃取物于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、预防及治疗皮肤癌的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN107198704A
CN107198704A CN201710159713.6A CN201710159713A CN107198704A CN 107198704 A CN107198704 A CN 107198704A CN 201710159713 A CN201710159713 A CN 201710159713A CN 107198704 A CN107198704 A CN 107198704A
Authority
CN
China
Prior art keywords
skin
frost flower
purposes
medicament
extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710159713.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107198704B (zh
Inventor
林咏翔
郭玮文
陈怡卉
陈怡君
施惠馨
蔡云卿
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BAIYUETE MEFU BIOTECHNOLOGY (SHANGHAI) Co.,Ltd.
Original Assignee
BAIYUETE BIOTECHNOLOGY (SHANGHAI) Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BAIYUETE BIOTECHNOLOGY (SHANGHAI) Co Ltd filed Critical BAIYUETE BIOTECHNOLOGY (SHANGHAI) Co Ltd
Publication of CN107198704A publication Critical patent/CN107198704A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107198704B publication Critical patent/CN107198704B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat

Abstract

一种使用冰花(Mesembryanthemum crystallinum L.)愈伤组织萃取物于制造药剂或护肤产品的用途，其中该药剂或护肤产品用于以下至少一种：推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、修补皮肤、治疗皮肤癌、及预防皮肤癌。

Description

冰花愈伤组织萃取物于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、预防及 治疗皮肤癌的用途
技术领域
本发明关于冰花(Mesembryanthemum crystallinum L.)愈伤组织萃取物及其应用，尤其是关于使用冰花愈伤组织萃取物以推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、修补皮肤、治疗皮肤癌、及/或预防皮肤癌的应用。
背景技术
紫外线(UV)是造成皮肤老化及病变的主要因素之一，其依波长可分为长波紫外线(UVA)、中波紫外线(UVB)、及短波紫外线(UVC)。已知，日光中的紫外线有超过90％是UVA，其具有很强的穿透力，可穿透皮肤的真皮层而对皮肤造成伤害，经常暴露于UVA辐射f下将引起皮肤光老化(photoaging)、活性氧分子(ROS)生成、DNA破坏、胶原蛋白流失、皮肤松弛等，甚至可能造成皮肤癌。
光老化是指皮肤长期暴露于紫外线辐射下，使得皮肤细胞加速老化，导致皮肤发生角质增厚、皮肤干燥脱屑、产生细纹及斑点、皮肤松弛等现象。ROS的生成则会造成细胞中氧化压力升高、加速细胞老化，甚至造成细胞中细胞基质降解酵素的过度活化，进而导致胶原蛋白流失及皮肤松弛。此外，UVA也可能破坏细胞中的DNA、造成DNA受损，过多受损DNA的累积不仅造成细胞老化，还可能使细胞癌化进而导致皮肤癌。
在皮肤癌中，以黑色素细胞瘤的致死率为最高。目前，临床上主要是以手术切除的方式治疗黑色素细胞瘤，至于无法承受手术治疗的患者，则尚无有效的治疗或预防方法。
有鉴于上述问题，业界仍亟需可有效推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、修补皮肤、治疗皮肤癌及/或预防皮肤癌的方法。本申请发明人研究发现，冰花愈伤组织萃取物可有效降低紫外线对细胞所造成的伤害，具有降低皮肤纹理、毛孔、及经皮水分散失度的效果，且可有效诱发黑色素细胞瘤细胞的细胞凋亡，从而可用于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、修补皮肤、治疗皮肤癌及/或预防皮肤癌。
发明内容
本发明的一个目的，在于提供一种使用冰花愈伤组织萃取物于制造护肤产品的用途，其中该护肤产品用于以下至少一种：推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、及修补皮肤。较佳地，该护肤产品用于以下至少一种：抗光老化、抗氧化、及修复DNA，或用于以下至少一种：减缓胶原蛋白分解、减缓胶原蛋白流失、及减少肌肤纹理。
其中，该护肤产品是以精华液或美容饮品的形式提供。
较佳的，该护肤产品为精华液且该精华液中的冰花愈伤组织萃取物的浓度为0.01至10重量％。
较佳的，该护肤产品为美容饮品且该美容饮品中的冰花愈伤组织萃取物的浓度为1至1000ppm。
本发明的另一个目的，在于提供一种使用冰花愈伤组织萃取物于制造药剂的用途，其中该药剂用于以下至少一种：治疗皮肤癌、预防皮肤癌，该皮肤癌可以为黑色素细胞瘤。
其中，该药剂通过经皮或口服的方式施用。
本发明的另外一个目的，在于提供一种用于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、修补皮肤、治疗皮肤癌、及预防皮肤癌的至少一种方法，其包含对一个有需要的个体施用有效量的冰花愈伤组织萃取物。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1：以DCF-DA染剂测试人类皮肤纤维母细胞中ROS含量的结果；
图2：以qRT-PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction)检测人类皮肤纤维母细胞中CAT-1及SOD2-1基因表现量的结果；
图3A至3C：以qRT-PCR检测人类皮肤纤维母细胞中BER相关基因(包括UNG-1、OGG1-1、MPG-1、及APE1-1)、NER相关基因(包括ERCC1-1、ERCC6-1、及XPA-1)、及DSB相关基因(包括XRCC1-1及XRCC5-1)的表现量的结果；
图4A及4B：以单细胞电泳检测细胞的DNA受损情形的结果；
图5：以qRT-PCR检测人类皮肤纤维母细胞中TIMP1及COL1A1基因表现量的结果；
图6A及6B：以MTT检定法检测人类皮肤纤维母细胞的存活率的结果；
图7：以Skin analyzer TD肤质检测仪检测皮肤纹理的结果；以及
图8：以MTT检定法检测黑色素瘤细胞的存活率的结果。
具体实施方式
以下将描述根据本发明的部分具体实施例；但是，在不背离本发明精神下，本发明可以多种不同形式的实施例来实践，不应将本发明保护范围限于说明书所陈述的内容。此外，除非文中有另外说明，于本说明书中(尤其是在权利要求书中)所使用的“一”、“该”及类似用语应理解为包含单数及复数形式；所谓“有效量”，是指投予至个体时，可有效至少部分改善怀疑个体的病情的化合物数量；所谓“个体”是指人类或非人的哺乳动物；所谓“治疗”是包括预防特定疾病或症状、减轻特定的疾病或症状及/或防止或消除该病症。
冰花(Mesembryanthemum crystallinum L.)在分类学上属于番杏科、松叶菊属的双子叶一年生植物。本申请发明人研究发现，冰花植株在受伤后所产生的愈伤组织具有类似哺乳类全能干细胞的特性，该愈伤组织萃取物可有效抗光老化、抗氧化、修复DNA、减缓胶原蛋白分解、减缓胶原蛋白流失、及减少肌肤纹理。
因此，本发明提供一种使用冰花愈伤组织萃取物于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、修补皮肤、预防皮肤癌、及/或治疗皮肤癌的应用。前述应用包括：使用冰花愈伤组织萃取物制造一种推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、及/或修补皮肤的护肤产品；使用冰花愈伤组织萃取物制造一种治疗皮肤癌及/或预防皮肤癌的药剂；以及使用冰花愈伤组织萃取物以对有需要的个体提供推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、修补皮肤、治疗皮肤癌、及预防皮肤癌的至少一种的方法。
本发明所采用的冰花愈伤组织萃取物，可通过以溶剂萃取冰花愈伤组织而提供。其中，所采用的溶剂可以为极性溶剂，例如醇、水、或其组合。较佳地，该溶剂选自C1-4醇、水、及其组合。举例言之，可以乙醇进行该萃取操作。视需要地，可于超音波震荡操作下进行萃取，以提升萃取效果。较佳地，可以在进行萃取之前，先进行干燥处理。
于本发明的部分实施例中，于进行萃取之前，先冷冻干燥冰花愈伤组织。举例言之，可以100：1(水：经冷冻干燥的冰花愈伤组织)的重量比混合水与经冷冻干燥的冰花愈伤组织，并于70℃下对所得到的混合物进行超音波震荡，历时45分钟以完成萃取。或者，可以10：1的重量比混合70％的乙醇与经冷冻干燥冰花愈伤组织，并在70℃下对所得到的该混合物进行超音波震荡，历时30分钟以完成萃取。
该冰花愈伤组织可通过包含如下步骤的操作提供：
I.以6％次氯酸钠溶液冲洗冰花植株，其后以灭菌水冲洗冰花植株，视需要地，可重复前述冲洗操作；
II.在冰花植株的表面上切出伤口，以诱导产生愈伤组织(历时1至3个月)；
III.在25℃、50％至60％的湿度下，以MS培养基(Murashige and Skoog BasalMedium，购自Sigma公司，产品编号：M5519)培养步骤II所得的愈伤组织(历时1至1.5个月)。
于本发明中，冰花愈伤组织萃取物可以萃取所得的萃取原液直接使用，或视需要对该萃取原液进行例如过滤、灭菌、浓缩、稀释等一个或多个步骤，以提升萃取液的使用便利性。举例言之，通过例如浓缩干固、喷雾干燥、或冷冻干燥等操作，可由萃取液得到方便携带或方便储存的粉末产物。
根据本发明所提供的护肤产品可呈任何合适的形式，并无特殊的限制，视所需要的用途而呈对应的合适形态。举例言之，但不以此为限，该护肤产品可呈供直接外用的乳液、乳霜、凝胶(例如水凝胶)、膏状物(例如分散膏、软膏)、喷雾剂、或溶液(例如洗液、悬浮液)等形式。或者，可将本发明的护肤产品制备成可供吞食或饮用的食品形式，例如健康食品、美容饮品等。此外，也可将本发明护肤产品以皮下注射的针剂形式提供。
类似地，根据本发明所提供的药剂可呈任何合适的形式，并无特殊限制，视所需要的用途而呈对应的合适形态。举例言之，但不以此为限，该药剂可以口服或不经口服(例如：经皮、皮下、静脉内、肌肉、腹腔、或鼻腔)的方式施用至有需要的个体上。其中，视使用形式及用途而定，可选用合适的载剂以提供该医药组合物或药物，其中，该载剂包括赋形剂、稀释剂、辅助剂、安定剂、吸收延迟剂、崩散剂、增溶剂、乳化剂、抗氧化剂、黏合剂、结合剂、增黏剂、分散剂、悬浮化剂、润滑剂、吸湿剂等。
以适于口服的药剂形式为例，该药剂中可含有任何不会不利影响冰花愈伤组织萃取物及/或其活性成分的所需效果的医药上可接受的载剂，例如：水、食盐水、葡萄糖(dextrose)、甘油、乙醇或其类似物、纤维素、淀粉、糖膨润土(sugar bentonite)、及前述的组合。可利用任何合适的方法，以适于口服的剂型提供该药剂，例如：锭剂(例如糖衣锭)、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、流浸膏剂、溶液剂、糖浆剂、悬液剂、酊剂等。
至于适于皮下静脉内、肌肉、或腹腔注射的针剂或点滴剂型，则可于该药剂中含有一种或多种例如等张溶液、盐类缓冲液(如磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液)、增溶剂、乳化剂、5％糖溶液、以及其他载剂等成分，以静脉输注液、乳剂静脉输注液、干粉注射剂、悬液注射剂、或干粉悬液注射剂等剂型提供该药剂。或者，将该药剂制备成一种注射前固体，以可溶于其他溶液或悬浮液中的剂型、或可乳化的剂型提供该注射前固体，并于施用至有需要的个体之前，将该注射前固体溶于其他溶液或悬浮液中或将其乳化，提供所需要的注射剂。
视需要地，可于根据本发明所提供的护肤产品或药剂中另外含有合适用量的添加剂，例如可提高该护肤产品或药剂于服用时的口适感及视觉感受的调味剂、调色剂、着色剂等，以及可改善该护肤产品或药剂的稳定性及储存性的缓冲剂、保存剂、防腐剂、抗菌剂、抗真菌剂等。此外，该护肤产品或药剂可根据需要另外含一种或多种其他活性成分(例如，玻尿酸、杏仁酸、熊果素、胶原蛋白、弹性蛋白等)，或者与含该一种或多种其他活性成分的护肤产品或药物并用，以进一步加强该护肤产品或药剂的功效或增加制剂配方的运用灵活性与调配度。原则上，只要所添加的其它成分或添加剂不会对本发明护肤产品或药剂的需要功效产生不利的影响即可。
根据本发明的应用所提供的护肤产品或药剂可以一日一次、一日多次、或多日一次等不同频率施用，视服用个体的需求、年龄、体重、健康况状、及施用目的而不同。
当施用根据本发明所提供的护肤产品于皮肤表面以推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、及/或修补皮肤时，可根据产品形态而含有不同浓度的冰花愈伤组织萃取物。举例言之，当以精华液的形式提供本发明冰花愈伤组织萃取物时，该精华液中的冰花愈伤组织萃取物的浓度可以为0.01-10重量％(如：1重量％)。而当以美容饮品的形式提供本发明冰花愈伤组织萃取物时，该饮品中的冰花愈伤组织萃取物的浓度则可以为1-1000ppm(如：100ppm)。
本发明也提供一种用于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、修补皮肤、治疗皮肤癌、及预防皮肤癌的至少一种的方法，其包含对一个有需要的个体施用有效量的冰花愈伤组织萃取物。其中，有关该冰花愈伤组织萃取物的施用途径、施用形式、适用剂量、以及相关治疗或预防的应用，均如上述说明。
兹以下列实施例进一步说明本发明。其中这些实施例仅提供作为说明，而非用以限制本发明的保护范围。本发明保护范围如权利要求书所示。
实施例1：萃取物的制备
将购自中国台湾蔬菜之家园艺资材行的冰花种子(商品代码：00K20)培育成冰花植株，并将该植株分成A、B两批。其中，对A批施以如下处理，以提供冰花愈伤组织：
I.以6％次氯酸钠溶液冲洗冰花植株，其后以灭菌水冲洗冰花植株，视需要地，可重复前述冲洗操作；
II.在冰花植株的表面上切出伤口，以诱导产生愈伤组织(历时1至3个月)；
III.在25℃、50％至60％湿度下，以MS培养基(Murashige and Skoog BasalMedium，购自Sigma公司，产品编号：M5519)培养步骤II所得的愈伤组织(历时1至1.5个月)。
分别以下列步骤处理上述B批的冰花植株以及由A批冰花植株所得的冰花愈伤组织，以制备冰花植株(IP)萃取物及冰花愈伤组织(IPC)萃取物：
(1)冰花植株(或冰花愈伤组织)置于-22℃下进行冷冻干燥，历时12小时；以及
(2)粉碎步骤(1)的经干燥的冰花植株(或冰花愈伤组织)，以提供冰花植株粉末(或冰花愈伤组织粉末)。
(3)将70％的乙醇与步骤(2)的冰花植株粉末(或冰花愈伤组织粉末)以10：1(乙醇：粉末)的重量比混合；
(4)在70℃下，对步骤(3)所获得的混合物进行超音波震荡，历时30分钟；
(5)以滤膜过滤步骤(4)所得的混合物，以提供一种滤液；
(6)加热由步骤(5)所获得的滤液至95℃，并维持20分钟，以进行灭菌；
(7)待步骤(6)的滤液冷却后，将其冷藏保存以供后续实验使用。
实施例2：冰花愈伤组织(IPC)萃取物的抗氧化功效
于MEM培养基(购自Gibco，产品编号：61100-061)中培养人类皮肤纤维母细胞(CCD-966SK；购自ATCC)，历时24小时，其后，将细胞分为四组，并进行以下处理：
(1)控制组：将细胞置于MEM培养基中培养2小时(即，将细胞培养于不含IP萃取物及IPC萃取物的培养液中)。
(2)H2O2组：将细胞置于MEM培养基中培养1小时(即，将细胞培养于不含IP萃取物及IPC萃取物的培养液中)，接着，加入H2O2(使其于培养基中的最终浓度达到1毫莫耳浓度)进行处理，历时1小时。
(3)H2O2+IP组：将细胞置于含有2毫克/毫升得自实施例1的冰花植株(IP)萃取物的MEM培养基中培养1小时，接着，加入H2O2(使其于培养基中的最终浓度达到1毫莫耳浓度)进行处理，历时1小时。
(4)H2O2+IPC组：将细胞置于含有2毫克/毫升得自实施例1的冰花愈伤组织(IPC)萃取物的MEM培养基中培养1小时，接着，加入H2O2(使其于培养基中的最终浓度达到1毫莫耳浓度)进行处理，历时1小时。
接着，以DCF-DA染剂(购自Sigma公司，产品型号：D6883)处理上述各组细胞，历时15分钟，其后以流式细胞仪检测各组的荧光强度，其中，由于ROS可将DCF-DA(不具荧光)转变为DCF(具有荧光)，故所测得的荧光强度可代表细胞中的ROS含量，荧光强度越高代表细胞中的ROS含量越高。最后，以控制组的结果为基准，计算其他各组的相对荧光强度。结果示于图1(*表示与H2O2组有显著差异，p<0.05；**表示与H2O2组有显著差异，p<0.01；#表示与H2O2+IP组有显著差异，p<0.05)。
由图1可知，相较于控制组，H2O2组的荧光强度显著上升。然而，相较于H2O2组，H2O2+IP组与H2O2+IPC组的荧光强度皆明显下降。此外，相较于H2O2+IP组，H2O2+IPC组的荧光强度明显更低。前述结果显示，冰花愈伤组织(IPC)萃取物可有效抵抗H2O2氧化压力、降低细胞中的ROS含量，可用于抗氧化，而且所提供的效果明显优于冰花植株(IP)萃取物。
实施例3：冰花愈伤组织萃取物于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、及修补皮肤的效果
(3-1)人类皮肤纤维母细胞的处理
于MEM培养基中培养人类皮肤纤维母细胞(CCD-966SK；购自ATCC)，历时24小时，其后，将细胞分为四组，并进行以下处理：
(1)控制组：将细胞置于MEM培养基中培养48小时(即，将细胞培养于不含冰花愈伤组织萃取物的培养液中)。
(2)UVA+6hr组、UVA+24hr组、UVA+48hr组：分别将细胞置于含有2毫克/毫升得自实施例1的冰花愈伤组织萃取物的MEM培养基中培养6小时、24小时、及48小时。
(3)接着，以UVA照射上述各组细胞，历时1小时。
(3-2)抗光老化及抗氧化
为进一步了解本发明冰花愈伤组织萃取物于抗光老化及抗氧化的效果，于完成实施例3-1之后，进行qRT-PCR，以检测各组细胞中CAT-1及SOD2-1等抗氧化基因的表现量，并以控制组的结果为基准，计算其他组的相对基因表现量。结果示于图2。
由图2可知，相较于控制组(未经冰花愈伤组织萃取物处理)，经冰花愈伤组织萃取物处理的组别(包括UVA+6hr组UVA+24hr组、及UVA+48hr组)的抗氧化基因(即，CAT-1及SOD2-1)表现量皆明显提升。此结果显示，冰花愈伤组织萃取物可提供抗光老化及抗氧化的效果，故可用于推迟皮肤细胞老化。
(3-3)修复DNA
生物体中具有碱基切除修复(base excision repair，BER)、核苷酸切除修复(nucleotide excision repair，NER)、双股断裂末端接合(double-strand break endjoint，DSB)等DNA修复机制，故可避免因为DNA突变或断裂所造成的伤害。
为了解本发明冰花愈伤组织萃取物是否可修复DNA，于完成实施例3-1之后所进行的qRT-PCR中，除检测各组细胞中CAT-1及SOD2-1等抗氧化基因的表现量以外，并检测细胞中有关BER、NER、及DSB等机制的基因表现量，后者的结果示于图3A至3C(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001)。
由图3A至3C可知，相较于控制组，经冰花愈伤组织萃取物处理的组别(包括UVA+6hr组UVA+24hr组、及UVA+48hr组)的BER相关基因(包括UNG-1、OGG1-1、MPG-1、及APE1-1)、NER相关基因(包括ERCC1-1、ERCC6-1、及XPA-1)、及DSB相关基因(包括XRCC1-1及XRCC5-1)表现量皆明显提升。前述结果显示，冰花愈伤组织萃取物可有效修复DNA，并借此达到推迟皮肤细胞老化的效果。
(3-4)保护DNA
已知，在单细胞电泳检测中，DNA受损的细胞会出现拖尾的现象，因此，可通过计算有拖尾现象的细胞的比例来评估DNA受损程度。
为进一步了解本发明冰花愈伤组织萃取物是否可保护细胞的DNA，对实施例2的控制组、H2O2组、及H2O2+IPC组三组细胞进行单细胞电泳检测。结果示于图4A及4B(**p<0.01)。
由图4A及4B可知，相较于控制组，H2O2组中有拖尾现象(即，DNA受损)的细胞比例明显较高。然而，相较于H2O2组，H2O2+IPC组中有拖尾现象的细胞比例则明显较低。前述结果显示，冰花愈伤组织萃取物可有效保护细胞DNA，并借此达到推迟皮肤细胞老化的效果。
(3-5)减缓胶原蛋白分解及流失
胶原蛋白分解及流失会加速皮肤老化，其中，已知TIMP1的基因表现量上升代表胶原蛋白的分解被抑制，COL1A1表现上升，代表胶原蛋白表现量增加。为了解本发明冰花愈伤组织萃取物是否可减缓皮肤的胶原蛋白分解及流失，于完成实施例3-1之后所进行的qRT-PCR中，也检测控制组及UVA+24hr组细胞中TIMP1及COL1A1的表现量，并以控制组作为基准计算UVA+24hr组的相对基因表现量。结果示于图5(*p<0.05、**p<0.01)。
由图5可知，相较于控制组，UVA+24hr组的TIMP1及COL1A1表现量皆明显提升。此结果显示，冰花愈伤组织萃取物可有效降低胶原蛋白分解及提升胶原蛋白合成，故可用于减缓胶原蛋白分解及/或流失，达到调理皮肤、及修补皮肤的效果。
(3-6)提高人类皮肤纤维母细胞存活率
于人类皮肤纤维母细胞稳定培养24小时后，将其分为六组，并进行以下处理：
(1)控制组：将细胞置于MEM培养基中培养24小时(即，将细胞培养于不含冰花愈伤组织萃取物的培养液中)。
(2)UVA组：将细胞置于MEM培养基中培养24小时(即，将细胞培养于不含冰花愈伤组织萃取物的培养液中)，接着，以UVA照射细胞，历时1小时。
(3)UVA+0.75组、UVA+1组、UVA+1.5组、及UVA+2组：分别将细胞置于含有0.75、1、1.5、及2毫克/毫升由实施例1获得的冰花愈伤组织萃取物的MEM培养基中培养24小时，接着，以UVA照射细胞，历时1小时。
其后，以MTT检定法检测各组细胞的存活率。结果示于图6A及6B(**p<0.01)。由图6A可知，相较于控制组，UVA组的细胞存活率明显较低。然而，由图6B可知，相较于UVA组，经冰花愈伤组织萃取物处理的组别(包括UVA+0.75组、UVA+1组、UVA+1.5组、及UVA+2组)的细胞存活率皆显著回升，且冰花愈伤组织萃取物的使用浓度与细胞存活率成正比。前述结果显示，冰花愈伤组织萃取物可有效降低UVA对细胞的伤害，且在试验浓度范围内对正常人类皮肤纤维母细胞不具毒性。
(3-7)减少肌肤纹理
本实验采取自身对照方式进行，10位自愿受试者在第0周时，以Skin analyzer TD肤质检测仪及Combo超音波肤质分析仪测试并记录自身的皮肤纹理、毛孔、及经皮水分散失度；接着，每位受试者早晚各一次以精华液(含有1重量％的由实施例1获得的冰花愈伤组织萃取物)涂抹半脸，并以安慰剂(即，成分皆与精华液相同，但不含本发明的冰花愈伤组织萃取物)涂抹另半脸，持续6周；其后，测试并记录使用精华液(含有本发明的冰花愈伤组织萃取物)或安慰剂6周后的皮肤纹理(即，细纹)、毛孔、及经皮水分散失度。结果示于表1及图7。
表1
如表1所示，在使用含有本发明冰花愈伤组织萃取物的精华液6周后，受试者的皮肤纹理明显减少、毛孔明显缩小，且经皮水分散失度明显降低。此外，如图7显示，相较于涂抹安慰剂，受试者在涂抹精华液(含有本发明的冰花愈伤组织萃取物)6周后，眼部周围的细纹明显改善。前述结果显示，本发明的冰花愈伤组织萃取物确实具有调理皮肤及修补皮肤的效果。
实施例4：冰花愈伤组织萃取物于治疗及预防黑色素细胞瘤的效果
于黑色素瘤细胞(购自ATCC，产品编号：CRL-6475)稳定培养24小时后，将其分为六组，其中一组继续培养于不含冰花愈伤组织萃取物的DMEM培养基(购自Gibco，产品编号：12100-046)中，历时48小时(此为“控制组”)，其余五组则分别培养于含有由实施例1获得的冰花愈伤组织萃取物的DMEM培养基中(冰花愈伤组织萃取物于培养基中的最终浓度分别为0.25、0.5、1、2及4毫克/毫升)，历时48小时。接着，以MTT检定法检测各组的存活率，并以控制组的结果为基准，计算其他各组的相对细胞存活率。结果示于图8(**p<0.01)。
如图8所示，当冰花愈伤组织萃取物的浓度高于0.5毫克/毫升时，黑色素瘤细胞的存活率与冰花愈伤组织萃取物的使用浓度呈反比。此结果显示，冰花愈伤组织萃取物可有效毒杀黑色素瘤细胞，故可用于治疗及/或预防皮肤癌。

Claims (10)

1.一种使用冰花(Mesembryanthemum crystallinum L.)愈伤组织萃取物于制造护肤产品的用途，其特征在于，该护肤产品用于以下至少一种：推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、及修补皮肤。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，该护肤产品用于以下至少一种：抗光老化、抗氧化、及修复DNA。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，该护肤产品用于以下至少一种：减缓胶原蛋白分解、减缓胶原蛋白流失、及减少肌肤纹理。
4.如权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于，该护肤产品是以精华液或美容饮品的形式提供。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，该护肤产品为精华液且该精华液中的冰花愈伤组织萃取物的浓度为0.01至10重量％。
6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，该护肤产品为美容饮品且该美容饮品中的冰花愈伤组织萃取物的浓度为1至1000ppm。
7.一种使用冰花愈伤组织萃取物于制造药剂的用途，其特征在于，该药剂用于治疗皮肤癌。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，该药剂通过经皮或口服的方式施用。
9.一种使用冰花愈伤组织萃取物于制造药剂的用途，其特征在于，该药剂用于预防皮肤癌。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，该药剂通过经皮或口服的方式施用。
CN201710159713.6A 2016-03-18 2017-03-17 冰花愈伤组织萃取物于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、预防及治疗皮肤癌的用途 Active CN107198704B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662310412P 2016-03-18 2016-03-18
US62/310,412 2016-03-18

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107198704A true CN107198704A (zh) 2017-09-26
CN107198704B CN107198704B (zh) 2020-08-07

Family

ID=59896318

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710159713.6A Active CN107198704B (zh) 2016-03-18 2017-03-17 冰花愈伤组织萃取物于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、预防及治疗皮肤癌的用途

Country Status (4)

Country Link
US (1) US10653735B2 (zh)
KR (1) KR20200067973A (zh)
CN (1) CN107198704B (zh)
TW (1) TWI621447B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108330156A (zh) * 2018-03-26 2018-07-27 上海数儒生物科技有限公司 一种大白兰花生长点萃取物安全性检测方法
CN109512810A (zh) * 2016-09-23 2019-03-26 大江生医股份有限公司 使用一活性成分于制造治疗黑色素瘤的药剂的用途
CN110432152A (zh) * 2019-09-12 2019-11-12 云南农业大学 一种冰菜组织快速繁育的方法

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102559716B1 (ko) 2021-04-16 2023-07-26 박주현 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 피부노화 개선용 화장료 조성물

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201503907A (zh) * 2013-07-26 2015-02-01 Yupintang Traditional Chinese Medicine Foundation 一種含有水晶冰花萃取物或ｄ－松醇之組合物可應用於皮膚美白

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5595756A (en) * 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
US6271001B1 (en) * 1995-03-23 2001-08-07 Bio Polymers Pty. Ltd. Cultured plant cell gums for food, pharmaceutical, cosmetic and industrial applications

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201503907A (zh) * 2013-07-26 2015-02-01 Yupintang Traditional Chinese Medicine Foundation 一種含有水晶冰花萃取物或ｄ－松醇之組合物可應用於皮膚美白

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
I.BOUFTIRA,等: "Characterization of cosmetic cream with Mesembryanthemum crystallinum plant extract: influence of formulation composition on physical stability and anti-oxidant activity", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF COSMETIC SCIENCE》 *
荣格工业资源网: "冰花干细胞萃取物Cell Young®", 《HTTP://WWW.INDUSTRYSOURCING.CN/ARTICLE/320871》 *
雷万军，等: "《皮肤美容学基础与应用》", 31 December 2013, 中国中医药出版社 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109512810A (zh) * 2016-09-23 2019-03-26 大江生医股份有限公司 使用一活性成分于制造治疗黑色素瘤的药剂的用途
CN109512810B (zh) * 2016-09-23 2020-12-25 大江生医股份有限公司 使用一活性成分于制造治疗黑色素瘤的药剂的用途
CN108330156A (zh) * 2018-03-26 2018-07-27 上海数儒生物科技有限公司 一种大白兰花生长点萃取物安全性检测方法
CN110432152A (zh) * 2019-09-12 2019-11-12 云南农业大学 一种冰菜组织快速繁育的方法

Also Published As

Publication number Publication date
TW201733565A (zh) 2017-10-01
KR20200067973A (ko) 2020-06-15
US20170274029A1 (en) 2017-09-28
CN107198704B (zh) 2020-08-07
US10653735B2 (en) 2020-05-19
TWI621447B (zh) 2018-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104922171B (zh) 红藜萃取物用于制备促进胶原蛋白生成及抗皮肤老化的组合物的用途
CN107198704A (zh) 冰花愈伤组织萃取物于推迟皮肤细胞老化、调理皮肤、预防及治疗皮肤癌的用途
WO2017161600A1 (zh) 一种富含sod果蔬汁及其加工方法
CN108685808B (zh) 使用兰花愈伤组织萃取物于制备一护肤组合物的用途
US10973755B2 (en) Method for treating skin aging and photodamage by using Camellia sinensis callus extract
JP4672269B2 (ja) 抗老化剤、血小板凝集抑制剤、抗酸化剤、抗アレルギー剤、皮膚化粧料及び飲食品
KR101988295B1 (ko) 한약재 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 주름 개선용 조성물
KR100883773B1 (ko) 유자 또는 지실의 염장 발효 추출물을 유효 성분으로 하는화장료 조성물
CN102099049A (zh) 3-脱氧葡糖醛酮的天然产物抑制剂
KR20090132285A (ko) 과실 식초를 함유하는 화장료 조성물
WO2020203933A1 (ja) 抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、及び美白剤、並びに、化粧料
JP2013126980A (ja) 韓薬材混合エキスを含有する抗酸化用又は美白用の化粧料組成物
CN108785156B (zh) 一种欧李果汁的新用途
KR101147922B1 (ko) 화장료 조성물 및 피부 미용 식품
KR101190201B1 (ko) 소나무 뿌리 추출물을 함유하는 화장료 조성물
KR101749330B1 (ko) 목이버섯이 배양된 황칠나무의 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물
KR20210071199A (ko) 코르크참나무 추출물을 포함하는 여드름 피부 개선용 화장료 조성물
KR102163015B1 (ko) 오미자 발효추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부주름 방지 또는 개선용 화장료 조성물
TWI645861B (zh) 具美白功效之台灣紫芝菌絲體萃取物及其製備方法
KR102114647B1 (ko) 흑호두나무, 회화나무 및 소나무 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 항노화 또는 항염용 화장료 조성물
JP2015199715A (ja) 特定の波長域を有する光を照射して栽培したチコリの抽出物を含有する皮膚外用剤や内用剤
US8481095B2 (en) Method for anti-oxidation, inhibiting activity and/or expression of matrix metalloproteinase, and/or inhibiting phosporylation of mitogen-activated protein kinase using flemingia macrophylla extract
KR20220125508A (ko) 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증 또는 피부 주름개선용 조성물 및 이의 제조방법
KR20130056592A (ko) 참다래 추출물을 함유한 각질제거 효과 조성물
KR20200005784A (ko) 붉은인삼열매 또는 황금인삼열매 숙성액 및 이의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210303

Address after: 201501 No.9, Lane 285, Tiangong Road, Jinshan Industrial Zone, Jinshan District, Shanghai

Patentee after: BAIYUETE MEFU BIOTECHNOLOGY (SHANGHAI) Co.,Ltd.

Address before: 200070 8th floor, intercontinental business center, 100 yutongdao, Zhabei District, Shanghai

Patentee before: Baiyuete Biotechnology (Shanghai) Co.,Ltd.